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一種測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201410258532.5

申請日:

2014.06.12

公開號:

CN103983731A

公開日:

2014.08.13

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):G01N 30/88申請日:20140612|||公開
IPC分類號: G01N30/88 主分類號: G01N30/88
申請人: 福建中煙工業有限責任公司
發明人: 蘇明亮; 鄧其馨; 賴煒揚; 吳清輝; 黃華發; 蔡國華; 黃惠貞; 許寒春
地址: 361012 福建省廈門市思明區蓮岳路118號中煙工業大廈
優先權:
專利代理機構: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038 代理人: 蘇紅梅
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410258532.5

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2015.09.30|||2014.09.10|||2014.08.13

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,包括內標溶液的制備、標準工作溶液的制備、樣品溶液的制備、氣相色譜質譜分析和標準曲線繪制及結果計算。該方法采用內標法進行定量,操作簡單準確,有效地減少因樣品前處理和儀器精密度等帶來的誤差,所采用的色譜條件使得目標物和內標物的色譜峰都分離較好,并且具有較好的線性相關性,檢出限為0.143mg/kg,定量限為0.478mg/kg,平均相對標準偏差為小于5%,加標回收率在92.3%~104.6%之間,說明本方法的靈敏度高、重復性好,回收率高。

權利要求書

權利要求書
1.  一種測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,其特征在于:包括以下步驟:
(1)內標溶液的配制:以萘為內標物,用二氯甲烷作溶劑,制備內標溶液;
(2)標準工作溶液的配制:以鄰氨基苯甲酸肉桂酯為標準品,用二氯甲烷作溶劑,經逐級稀釋配置成混合標準溶液,然后分別加入一定量的內標溶液配置成標準工作溶液;
(3)樣品溶液的制備:稱取香精香料樣品,準確加入一定量的內標溶液以及萃取溶劑,超聲提取,將萃取液過有機濾膜,得樣品溶液;
(4)氣相色譜質譜分析:利用氣相色譜質譜儀分別對標準工作溶液和樣品溶液進行檢測分析;
(5)標準曲線繪制及結果計算。

2.  根據權利要求1所述的測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,其特征在于:步驟(1)中,所述的內標溶液的配制是準確稱取內標物萘20mg,置于500mL容量瓶中,以二氯甲烷溶解和定容,得內標液濃度為0.04mg/mL。

3.  根據權利要求1所述的測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,其特征在于:步驟(2)中,所述標準工作溶液的配制是準確稱取鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準品50mg,置于500mL棕色容量瓶中,以二氯甲烷溶解和定容,得鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準液(100μg/mL)。分別準確吸取鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL于10mL棕色容量瓶中,再準確加入1.0mL內標液,以二氯甲烷稀釋至刻度。得到鄰氨基苯甲酸肉桂酯濃度分別為1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的標準溶液系列。

4.  根據權利要求1所述的測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,其特征在于:步驟(3)中,所述的萃取溶液為二氯甲烷。

5.  根據權利要求1所述的測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的 方法,其特征在于:步驟(3)中,所述樣品溶液的制備方法具體包括稱取0.3g左右試樣,置于10mL棕色容量瓶中;加入6mL二氯甲烷,超聲提取30min,然后準確加入1.0mL內標液,以二氯甲烷定容,手持振蕩1min;再加入0.6g或足量無水硫酸鈉吸收水分,立刻手持振蕩1min,靜置,澄清后,取上清液經0.45μm有機濾膜過濾后,得到樣品溶液。

6.  根據權利要求1所述的測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,其特征在于:步驟(4)中,所述的色譜分析條件為色譜柱采用Elite-XLB(30m×0.25mm×0.25μm)彈性熔融石英毛細管柱,進樣口溫度為220~260℃(優選240℃);載氣為氦氣;流速為0.8~1.2mL/min(優選1.0mL/min);進樣量為0.8~1.2μL(優選1.0μL);分流比為10:1;升溫程序:初始溫度100℃,保持0.5~1.5min(優選1min),以5℃/min速率升至150℃,保持8~12min(優選10min),以5℃/min速率升至200℃,保持4~6min(優選5min),再以10℃/min速率升至240℃,保持4~6min(優選5min);色譜與質譜接口溫度為220~260℃(優選240℃)。

7.  根據權利要求1所述的測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,其特征在于:步驟(4)中,所述的質譜分析條件為:離子源溫度為220~240℃(優選230℃);四級桿溫度為140~160℃(優選150℃);電離方式為電子轟擊源EI;電離能量為70eV;掃描方式為選擇離子掃描(SIM);其中鄰氨基苯甲酸肉桂酯以特征離子m/z117、115、253作為定性離子,以m/z117作為定量離子,內標選擇m/z128、102作為定性離子,以m/z128作為定量離子,對每個離子的監測時間為50ms。

8.  根據權利要求1所述的測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,其特征在于:步驟(5)中,所述的標準曲線繪制及結果計算方法如下:首先以標準工作溶液中鄰氨基苯甲酸肉桂酯和內標的濃度比為橫坐標,鄰氨基苯甲酸肉桂酯和內標的色譜峰面積比為縱坐標,進行回歸分析,得到標準曲線;將相同條件下測得的樣品溶液中鄰氨基苯甲酸肉桂酯與內標的色譜峰面積比,代入工作曲線,求得樣品中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的含量。

說明書

說明書一種測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法
技術領域
本發明屬于香精香料檢測技術領域,具體涉及一種測定香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法。
背景技術
鄰氨基苯甲酸肉桂酯具香脂膏香、水果香氣,是一種略帶棕色的粉狀體,有似葡萄糖的果香和膏香。鄰氨基苯甲酸肉桂酯是一種人工合成產品,常作為食品添加劑。一些研究表明鄰氨基苯甲酸肉桂酯具有致癌性,能引發肝臟惡性腫瘤,對人體具有較大的危害,因此在多個國家被禁止使用。英國國家癌癥研究院研究發現高濃度地將鄰氨基苯甲酸肉桂酯添加于食品中導致雜交小鼠體內肝細胞發生癌變,英國食品專家委員會因此而將其禁止應用于食品工業。隨后,美國食品和藥物管理局也將鄰氨基苯甲酸肉桂酯列為食品中禁止使用的添加劑。
為確保產品質量安全,需對可能添加的香精香料質量安全進行密切關注和監控,對管理法規中明確要求禁用的物質,甚至可能對人體健康有危害的物質也應予以高度關注。鑒于鄰氨基苯甲酸肉桂酯是一種常見的人造產品,極有可能會作為添加劑在煙用香精的生產過程中用到。因此探索一種簡單、準確的鄰氨基苯甲酸肉桂酯的測試方法,對煙用香精香料中的鄰氨基苯甲酸肉桂酯進行有效控制,保障煙用香精和料液的使用安全性,是非常迫切和必要的。
目前,國內外鄰氨基苯甲酸肉桂酯的分析研究均使用高效液相色譜法。Demers等人曾用高效液相色譜熒光檢測法測定了香水及花露水中的鄰氨基苯甲酸肉桂酯。Keyhanfar等同樣用高效液相色譜熒光檢測法測定了小鼠體內的鄰氨基苯甲酸肉桂酯及其代謝物。浙江中煙工業有限責任公司蔣健等公開了一種高效液相色譜測定香精香料中鄰氨基苯甲 酸肉桂酯的方法(CN102169110B)。但對于香精香料等復雜體系,高效液相色譜法存在“假陽性”問題,且多使用的是外標法定量,不利于目標化合物的準確定性確認及定量分析。
發明內容
本發明的目的在于提供一種香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯含量的測定方法,以實現對香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯含量的快速、準確測定。
本發明的目的是通過以下技術方案來實現的:
香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯含量的測定方法,包括以下步驟:
(1)內標溶液的配制:以萘為內標物,用二氯甲烷作溶劑,制備內標溶液;
(2)標準工作溶液的配制:以鄰氨基苯甲酸肉桂酯為標準品,用二氯甲烷作溶劑,經逐級稀釋配置成混合標準溶液,然后分別加入一定量步驟(1)配制的內標溶液配置成標準工作溶液;
(3)樣品溶液的制備:稱取香精香料樣品,準確加入一定量步驟(1)配制的內標溶液以及萃取溶劑,超聲提取,將萃取液過有機濾膜,得樣品溶液;
(4)氣相色譜質譜分析:利用氣相色譜質譜儀分別對標準工作溶液和樣品溶液進行檢測分析;
(5)標準曲線繪制及結果計算。
在一個優選的實施例中,本發明所述的測定方法的步驟(1)中,所述的內標溶液的配制是準確稱取內標物萘20mg,置于500mL容量瓶中,以二氯甲烷溶解和定容,得內標液濃度為0.04mg/mL。
在一個優選的實施例中,本發明所述的測定方法的步驟(2)中,所述標準工作溶液的配制是準確稱取鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準品50mg,置于500mL棕色容量瓶中,以二氯甲烷溶解和定容,得鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準液(100μg/mL)。分別準確吸取鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL于10mL棕色容量瓶中,再 準確加入1.0mL內標液,以二氯甲烷稀釋至刻度。得到鄰氨基苯甲酸肉桂酯濃度分別為1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的標準溶液系列。
在一個優選的實施例中,本發明所述的測定方法的步驟(3)中,所述的萃取溶劑為二氯甲烷。所述樣品溶液的制備方法具體包括稱取0.3g左右試樣,置于10mL棕色容量瓶中;加入6mL二氯甲烷,超聲提取30min,然后準確加入1.0mL內標液,以二氯甲烷定容,手持振蕩1min;再加入0.6g或足量無水硫酸鈉(預先于馬弗爐中600℃干燥5小時后,儲存于干燥器內備用)吸收水分,立刻手持振蕩1min,靜置,澄清后,取上清液經0.45μm有機濾膜過濾后,得到樣品溶液。
在一個優選的實施例中,本發明所述的測定方法的步驟(4)中,所述的色譜分析條件為色譜柱采用Elite-XLB(30m×0.25mm×0.25μm)彈性熔融石英毛細管柱,進樣口溫度為220~260℃(優選240℃);載氣為氦氣;流速為0.8~1.2mL/min(優選1.0mL/min);進樣量為0.8~1.2μL(優選1.0μL);分流比為10:1;升溫程序:初始溫度100℃,保持0.5~1.5min(優選1min),以5℃/min速率升至150℃,保持8~12min(優選10min),以5℃/min速率升至200℃,保持4~6min(優選5min),再以10℃/min速率升至240℃,保持4~6min(優選5min);色譜與質譜接口溫度為220~260℃(優選240℃)。所述的質譜分析條件為:離子源溫度為220~240℃(優選230℃);四級桿溫度為140~160℃(優選150℃);電離方式為電子轟擊源EI;電離能量為70eV;掃描方式為選擇離子掃描(SIM);其中鄰氨基苯甲酸肉桂酯以特征離子m/z117、115、253作為定性離子,以m/z117作為定量離子。內標選擇m/z128、102作為定性離子,以m/z128作為定量離子,對每個離子的監測時間為50ms。溶劑延遲為4.0min。
在一個優選的實施例中,本發明所述的測定方法的步驟(5)中,所述的標準曲線繪制及結果計算方法如下:首先以標準工作溶液中鄰氨基苯甲酸肉桂酯和內標的濃度比為橫坐標,鄰氨基苯甲酸肉桂酯和內標的色譜峰面積比為縱坐標,進行回歸分析,得到標準曲線;將相同條件 下測得的樣品溶液中鄰氨基苯甲酸肉桂酯與內標的色譜峰面積比,代入工作曲線,求得樣品中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的含量。
發明的有益效果
與現有技術相比,本發明的測定煙用香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的方法,具有如下優良效果:
(1)對于鄰氨基苯甲酸肉桂酯的測定,現有技術多以外標法定量,對于香精香料的復雜基質背景體系,目標物的定量測定難免有干擾。而本發明方法利用內標法定量,可以減少由前處理方法重現性和儀器精密度問題帶來的誤差,大大提高了定量的準確性
(2)本發明方法選擇了峰形和分離效果最好的Elite-XLB柱為分離柱,并采用能同時給出定性和定量信息的GC/MS-SIM作為檢測模式,提高了響應信號的靈敏度,保證了檢測的準確性。
(3)本發明方法所采用的色譜條件使得目標物和內標物的色譜峰都分離較好,并且具有較好的線性相關性,檢出限為0.143mg/kg,定量限為0.478mg/kg;
(4)本發明方法的平均相對標準偏差為5%,加標回收率在92.3%~104.6%之間,說明本方法的重復性好,回收率高。
附圖說明
圖1為標準工作溶液的色譜圖;
圖2為樣品溶液的色譜圖;
圖3為鄰氨基苯甲酸肉桂酯的全掃描質譜圖。
具體實施方式
下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述,但是本領域技術人員將會理解,下列實施例僅用于說明本發明,而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體條件者,按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者,均為可以通過市購獲得的常規產品。
實施例1
本實施例對香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯含量的檢測方法如下:
(1)內標溶液的配制
稱取內標物萘20mg,置于500mL容量瓶中,以二氯甲烷溶解和定容,得內標液濃度為0.04mg/mL。內標溶液避光4℃保存,取用時放置于常溫下,達到常溫后方可使用,有效期為3個月。
(2)標準工作溶液的配制
準確稱取鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準品50mg,置于500mL棕色容量瓶中,以二氯甲烷溶解和定容,得鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準液(100μg/mL)。分別準確吸取鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL于10mL棕色容量瓶中,再準確加入1.0mL步驟(1)配制的內標液,以二氯甲烷稀釋至刻度。得到鄰氨基苯甲酸肉桂酯濃度分別為1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的標準溶液系列。標準溶液避光4℃保存,取用時放置于常溫下,達到常溫后方可使用。每周做一次標線。
(3)樣品溶液的制備
稱取0.3g左右試樣,置于10mL棕色容量瓶中;加入6mL二氯甲烷,超聲提取30min,然后準確加入1.0mL步驟(1)配制的內標液,以二氯甲烷定容,手持振蕩1min;再加入0.6g或足量無水硫酸鈉(預先于馬弗爐中600℃干燥5小時后,儲存于干燥器內備用)吸收水分,立刻手持振蕩1min,靜置,澄清后,取上清液經0.45μm有機濾膜過濾,得到樣品溶液。
(4)色譜質譜分析
色譜分析條件為采用Elite-XLB彈性熔融石英毛細管色譜柱,進樣口溫度為240℃;載氣為氦氣;流速為1.0mL/min;進樣量為1.0μL;分流比為10:1;升溫程序:初始溫度100℃,保持1min,以5℃/min速率升至150℃,保持10min,以5℃/min速率升至200℃,保持5min,再以10℃/min速率升至240℃,保持5min;色譜與質譜接口溫度為240℃。
質譜分析條件為離子源溫度:230℃;四級桿溫度:150℃;電離 方式:電子轟擊源EI;電離能量:70eV;掃描方式:選擇離子掃描(SIM)。標準溶液的色譜分析結果見圖1;樣品溶液的色譜分析結果見圖2;鄰氨基苯甲酸肉桂酯的全掃描質譜圖見圖3,以特征離子m/z117、115、253作為定性離子,以m/z117作為定量離子。內標選擇m/z128、102作為定性離子,以m/z128作為定量離子,對每個離子的監測時間為50ms。溶劑延遲為4.0min。
(5)標準曲線繪制及結果計算
首先以標準工作溶液中鄰氨基苯甲酸肉桂酯與內標的量之比為橫坐標,以色譜圖中鄰氨基苯甲酸肉桂酯與內標的峰面積之比為縱坐標,進行回歸分析,得到標準曲線,取最低濃度的標準工作溶液,做10次平行檢測分析,計算其標準偏差,以3倍的標準偏差對應的濃度為檢出限。與標準工作曲線相對應的回歸方程、相關系數等數據如下:
鄰氨基苯甲酸肉桂酯標準工作曲線相對應的回歸方程為Y=0.0908X-0.0584,相關系數為0.9997,線性范圍1~50mg/L,檢出限為0.143mg/kg,定量限為0.478mg/kg。
然后將相同條件下測得的樣品溶液中鄰氨基苯甲酸肉桂酯與內標的色譜峰面積比,代入標準工作曲線,由此計算香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的含量,計算公式如下:
m=(A×S)/n
式中:
m—每克香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的含量,單位為微克每克(mg/kg);
A—樣品中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的濃度(mg/L);
S—溶液體積(L);
n—稱取樣品的質量(kg)。
(6)樣品測定
采用上述方法,以選取的5個香精香料樣品進行檢測,有一個樣品檢出鄰氨基苯甲酸肉桂酯。結果實測值為17.68mg/kg。
實施例2
精密度和加標回收率的檢測
分別在檢出鄰氨基苯甲酸肉桂酯的香精香料樣品中加入10mg/kg,20mg/kg,50mg/kg三個不同濃度的標準溶液進行加標回收率試驗,每個樣品分別測定6次,色譜質譜分析的條件同實施例1,根據分析結果計算本方法香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的加標回收率,結果如表1所示;
表1 香精香料中鄰氨基苯甲酸肉桂酯的回收率和重復性(n=6)

由表1可以看出,在3個加標水平上,利用此方法檢測煙用香精香料中芝麻酚的回收率在92.3%~104.6%之間,樣品測試結果的相對標準偏差小于5%,說明本法的回收率較高,重復性較好。

關 鍵 詞:
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