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一種具有解酒功效的中藥材及活性因子的高通量篩選方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201410255847.4

申請日:

2014.06.11

公開號:

CN103983598A

公開日:

2014.08.13

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):G01N 21/33申請日:20140611|||公開
IPC分類號: G01N21/33 主分類號: G01N21/33
申請人: 勁牌有限公司
發明人: 劉源才; 賴富麗; 熊瑜; 馮聲寶
地址: 435100 湖北省黃石市大冶市大冶大道169號
優先權:
專利代理機構: 黃石市三益專利商標事務所 42109 代理人: 瞿暉
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410255847.4

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2016.03.09|||2014.09.10|||2014.08.13

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種具有解酒功效的中藥材及活性因子的高通量篩選方法,是先將待篩選的若干種中藥材分別粉碎,再分別用有機溶劑提取40-60分鐘,離心分離,得若干上清液;此上清液即作為待測樣本溶液;再在微孔板中加入反應體系;將空白對照樣品和待測樣品一起置于酶標儀中震蕩孵育30min后,迅速在每孔中加入0.04~0.2mmol/L的乙醛溶液15μL,搖勻后立即開始測定各樣品在340nm處的吸光值;利用酶標儀自帶軟件記錄吸光度值并繪制出空白對應樣品及待測樣品吸光度值變化曲線;得出樣品曲線凈面積NetAUC值;本發明方法一次可篩選上百種甚至幾百種中藥材,快速、準確率高,操作方便。

權利要求書

權利要求書
1.  一種具有解酒功效的中藥材及活性因子的高通量篩選方法,其特征在于包括下述步驟:
  a.將待篩選的若干種中藥材分別粉碎至20~100目,分別用30%~90%乙醇、甲醇或丙酮中的一種,提取40-60分鐘,離心分離,得若干上清液;或將待篩選的若干活性因子分別用30%~90%乙醇、甲醇或丙酮中的一種,提取40-60分鐘,離心分離,得若干上清液;此上清液即作為待測樣本溶液;
  b.在微孔板中的每個微孔中加入下述反應體系:50-200mmol/L、pH7.8-8.5的磷酸鉀緩沖液75-90μL,0.1~0.5mmol/L的二硫蘇糖醇10-15μL,0.1~2mg/ml乙醛脫氫酶20-25μL,0.0625~20mmol/L  NAD+溶液30μL;
   c.再在上述其中一個微孔中加入90 mmol/L、pH8.5的磷酸鉀緩沖溶液25μL作為空白對照樣品,余下微孔中一一加入步驟a.所制備的待測樣本溶液25μL,作為待測樣品并編號;然后一起置于酶標儀中震蕩孵育30min后,迅速在每孔中加入0.04~0.2 mmol/L的乙醛溶液15μL,搖勻后立即開始測定各樣品在340nm處的吸光值;
   d.利用酶標儀自帶軟件記錄吸光度值并繪制出空白對照樣品及待測樣品吸光度值變化曲線;將所得到的待測樣品曲線的積分面積減去空白對照樣品的曲線積分面積,得出待測樣品曲線凈面積Net AUC值,此值即為激活率;激活率為正數時證明該樣品中所加入的中藥材或活性因子具有激活乙醛脫氫酶的能力,也說明該藥材或活性因子具有解酒的功效;反之,激活率為負數時,說明該樣品中所加入的中藥材或活性因子不具備激活或具有抑制乙醛脫氫酶的能力,也說明該藥材或活性因子不具有解酒的功效。

2.  根據權利要求1所述的一種具有解酒功效的中藥材及活性因子的高通量篩選方法,其特征在于包括下述步驟:
  a.將待篩選的若干種中藥材分別粉碎至100目,分別用70%乙醇提取60分鐘,離心分離,得若干上清液;或將待篩選的若干活性因子分別用70%乙醇溶解,離心分離,得若干上清液;上述所得的上清液即作為待測樣本溶液;
   b.在微孔板中的每個微孔中加入下述反應體系:100mmol/L、pH8.5的磷酸鉀緩沖液90μL, 0.5mmol/L的二硫蘇糖醇10μL,1mg/ml乙醛脫氫酶25μL,10mmol/L  NAD+溶液30μL;
   c.再在上述其中一個微孔中加入90 mmol/L、pH8.5的磷酸鉀緩沖溶液25μL作為空白對照樣品,余下微孔中一一加入步驟a.所制得的待測樣本溶液25μL,作為待測樣品并編號;然后一起置于酶標儀中震蕩孵育30min后,迅速在每孔中加入0.1mmol/L的乙醛溶液15μL,搖勻后立即開始測定各樣品在340nm處的吸光值;
   d.利用酶標儀自帶軟件記錄吸光度值并繪制出空白對照樣品及待測樣品吸光度值變化曲線;將所得到的待測樣品曲線的積分面積減去空白對照樣品的曲線積分面積,得出待測樣品曲線凈面積Net AUC值,此值即為激活率;激活率為正數時證明該樣品中所加入的中藥材或活性因子具有激活乙醛脫氫酶的能力,也說明該藥材或活性因子具有解酒的功效;反之,激活率為負數時,說明該樣品中所加入的中藥材或活性因子不具備激活或具有抑制乙醛脫氫酶的能力,也說明該藥材或活性因子不具有解酒的功效。

3.  根據權利要求1或2所述的一種具有解酒功效的中藥材及活性因子的高通量篩選方法,其特征在于:所述的活性因子是單體化合物或復合物。

關 鍵 詞:
一種 具有 解酒 功效 中藥材 活性 因子 通量 篩選 方法
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