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渦蟲染色體標本的制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201410257817.7

申請日:

2014.06.12

公開號:

CN103983497A

公開日:

2014.08.13

當前法律狀態:

終止

有效性:

無權

法律詳情: 未繳年費專利權終止IPC(主分類):G01N 1/30申請日:20140612授權公告日:20160420終止日期:20170612|||授權|||實質審查的生效IPC(主分類):G01N 1/30申請日:20140612|||公開
IPC分類號: G01N1/30 主分類號: G01N1/30
申請人: 周口師范學院
發明人: 馬克世; 盛東峰; 武安泉; 王永立; 楊同文; 陳龍
地址: 466001 河南省周口市川匯區文昌大道東段
優先權:
專利代理機構: 河南科技通律師事務所 41123 代理人: 樊羿
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410257817.7

授權公告號:

|||||||||

法律狀態公告日:

2018.07.10|||2016.04.20|||2014.09.10|||2014.08.13

法律狀態類型:

專利權的終止|||授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及一種渦蟲染色體標本的制備方法。本發明渦蟲染色體標本制備方法包括以下步驟:取材、預處理、再生組織培養、組織破碎、離心懸漿、秋水仙素阻斷、KC1低滲處理、離心懸漿滴片、染色以及烤干封片。本發明制備方法使再生組織和中期細胞得到充分固定處理,染色體制片背景清晰、細胞分散良好、中期分裂相多,利于核型分析。

權利要求書

權利要求書
1.   一種渦蟲染色體標本的制備方法,其特征在于,包括以下步驟: 
(1)取材及預處理:選取體長3~5cm活潑健康渦蟲,置于去氯自來水中,饑餓1~2周,至無代謝廢物排出;
(2)再生組織培養:將經步驟(1)處理過的渦蟲置于載玻片上,待其完全伸展時,用消毒過的刀片將渦蟲切成3~5段,再置于無菌水中后放入10~15℃的恒溫培養箱培養3~5天,至斷面有白色再生組織長出;
(3)組織破碎及秋水仙素處理:將步驟(2)得到的渦蟲再生組織分離取下,置于離心管中破碎,然后加入濃度為0.2~0.25g/L的秋水仙素水溶液0.5~1.0mL,于10~15℃下靜置2.5~3.5小時,然后放入離心機中以800~1000rpm的轉速離心5~6分鐘,棄去上清液;
(4)KC1低滲處理:步驟(3)處理后,加入濃度為0.1~0.2g/L的 KCl低滲液0.5~0.8mL,進行低滲處理1.5~2.5小時,然后放入離心機中以800~1000rpm的轉速離心5~6分鐘,棄去上清液;
(5)組織固定及滴片:加入固定液I 1~1.5mL,使再生組織與固定液充分接觸后,靜置18~25分鐘,以700~800rpm的轉速離心5~6分鐘,棄去上清;加入固定液II 1~1.5mL,使再生組織與固定液充分接觸后,靜置18~25分鐘,以700~800rpm的轉速離心5~6分鐘,棄去上清;加入固定液Ⅲ 1~1.5mL,使再生組織與固定液充分接觸后,靜置18~25分鐘,再以700~800rpm的轉速離心5~6分鐘,棄去大部分上清,留下0.1~0.2mL液體,輕微震蕩得到組織混懸液,吸取上述混懸液,從5~6cm高度懸滴于載玻片上,均勻涂滿載玻片后,烘干或自然晾干;
(6)染色:將步驟(5)所得制片滴加Giemsa染色液1~2mL,至其能布滿載玻片,平放于通風櫥中靜置8~12分鐘后,用蒸餾水輕柔洗去染液,再置于酒精燈火焰上方2~3cm高度處均勻烤干,即得到染色體片;
(7)封片:在顯微鏡下初步觀察所得染色體片,標記后封片保存,即得;
所述固定液I由乙醇和冰乙酸以體積比4:1組成,固定液II由乙醇和冰乙酸以體積比2:1組成,固定液III由乙醇和冰乙酸以體積比1:4組成。

2.  根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(2)所述刀片經乙醇消毒。

3.  根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(3)所述離心管為1.5~2mL離心管。

4.  根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(5)所述再生組織與固定液充分接觸的方式為搖動或超聲波震蕩。

5.  根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述Giemsa染色液為甘油含量為10~20wt%的Giemsa染色液。

關 鍵 詞:
染色體 標本 制備 方法
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