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重組豬ΒSUB2/SUB腎上腺素能受體蛋白的制備及應用.pdf

摘要
申請專利號:

CN201410258292.9

申請日:

2014.06.11

公開號:

CN103980359A

公開日:

2014.08.13

當前法律狀態:

駁回

有效性:

無權

法律詳情: 發明專利申請公布后的駁回IPC(主分類):C07K 14/72申請公布日:20140813|||實質審查的生效IPC(主分類):C07K 14/72申請日:20140611|||公開
IPC分類號: C07K14/72; C12N15/12; C12N15/85; C12N5/10; G01N33/68 主分類號: C07K14/72
申請人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
發明人: 王靜; 王健; 王淼; 金茂俊; 佘永新; 杜欣蔚; 劉媛; 金芬; 邵華; 王珊珊
地址: 100080 北京市海淀區中關村南大街12號
優先權:
專利代理機構: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 代理人: 吳開磊
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410258292.9

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2018.03.20|||2014.09.10|||2014.08.13

法律狀態類型:

發明專利申請公布后的駁回|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明屬于生物工程領域,特別是涉及一種重組豬β2腎上腺素能受體蛋白的制備方法,及其在β2激動劑類藥物快速檢測中的應用。經分離純化的該一種重組豬β2腎上腺素能受體蛋白,其具有β2激動劑結合活性,SDS-PAGE電泳顯示重組蛋白分子量約為48kDa,純度達到80%以上。該重組蛋白可特異性吸附β2激動劑類藥物,經競爭性ELISA方法檢測,不同濃度的三種β2激動劑類藥物標品對反應均有抑制。本發明通過分子生物學手段高效表達與β2類激動劑能夠特異結合的β2AR受體,可代替傳統抗體用于β2類激動劑藥物的快速篩查,實現對該類藥物的多殘留檢測和未知物篩查,具有很好的應用前景。

權利要求書

權利要求書
1.  經分離純化的一種重組豬β2腎上腺素能受體蛋白,其特征在于,其具有β2激動劑結合活性,SDS-PAGE電泳顯示重組蛋白分子量約為48kDa,純度達到80%以上。

2.  重組豬β2腎上腺素能受體蛋白,其特征在于,其具有以下條件之一:
1)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列;
2)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列經一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有相同活性的由SEQ ID No.1衍生的蛋白質。

3.  編碼權利要求1所述的重組豬β2腎上腺素能受體蛋白的基因。

4.  如權利要求3所述的基因,其特征在于,其具有以下條件之一:
1)SEQ ID No.2所示的核苷酸序列;
2)SEQ ID No.2所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或添加一個或幾個核苷酸,編碼相同活性蛋白質的核苷酸序列。

5.  含有權利要求3或4任意一項所述基因的質粒。

6.  含有權利要求5所述質粒的宿主細胞。

7.  根據權利要求6所述的質粒,其特征在于,所述質粒為pTriEx-1.1 Hygro-Ssβ2AR。

8.  權利要求7所述的質粒在大腸桿菌、昆蟲細胞和哺乳動物細胞中表達的重組蛋白。

9.  根據權利要求8所述的質粒在HEK293細胞中表達制備重組蛋白的方法,其特征在于,包括以下步驟:
將核苷酸序列為SEQ ID No.2的基因片段定向克隆到pTriEx-1.1Hygro表達載體中;將該重組表達質粒瞬時轉染HEK293細胞,37℃、5% CO2的培養箱中培養48h~96h,表達重組蛋白;將表達后的蛋白經初步分離、純化后制得重組蛋白。

10.  重組豬β2腎上腺素能受體蛋白或其編碼基因在動物飼料和食品中β2激動劑類藥物快速檢測中的應用。

關 鍵 詞:
重組 SUB2 SUB 腎上腺素 受體 蛋白 制備 應用
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本文標題:重組豬ΒSUB2/SUB腎上腺素能受體蛋白的制備及應用.pdf
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