鬼佬大哥大
  • / 8
  • 下載費用:30 金幣  

基于適體技術金納米化學發光放大檢測腺苷的方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201410138208.X

申請日:

2014.04.09

公開號:

CN103954611A

公開日:

2014.07.30

當前法律狀態:

駁回

有效性:

無權

法律詳情: 發明專利申請公布后的駁回IPC(主分類):G01N 21/76申請公布日:20140730|||實質審查的生效IPC(主分類):G01N 21/76申請日:20140409|||公開
IPC分類號: G01N21/76 主分類號: G01N21/76
申請人: 南昌大學
發明人: 嚴喜鸞; 凌云; 鄒宏
地址: 330031 江西省南昌市紅谷灘新區學府大道999號
優先權:
專利代理機構: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115 代理人: 施秀瑾
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201410138208.X

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2017.06.23|||2014.08.27|||2014.07.30

法律狀態類型:

發明專利申請公布后的駁回|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種基于核酸適體技術的金納米標記化學發光檢測腺苷并在此基礎上發展羥胺放大檢測的方法,它是利用羧基修飾的磁性微球作為分離載體,通過氨羧反應將腺苷適體連接于磁性微球,通過腺苷和生物素修飾的適體報告序列與腺苷適體競爭結合,導致連接于磁性微球的鏈霉親和素金納米量的差異,實現腺苷的化學發光間接檢測。并利用羥胺放大金納米的特性極大提高了化學發光檢測靈敏度。本方法優點在于靈敏度高,特異性強,測定范圍寬,設備簡單,操作簡便,適合測定腺苷的血、尿試樣,為臨床診斷疾病提供有利分析數據。

權利要求書

權利要求書
1.  一種基于適體技術金納米化學發光放大檢測腺苷的方法,其特征在于包含以下步驟:(1)鏈霉親和素金納米制備:取100mL 0.01%HAuCl4120℃加熱至沸騰,迅速加入4mL 2%Na3C6H5O7再沸10min后自然冷卻,再加入10 mL0.022mol/L鏈霉親和素,反應10min,加入500μL 1%BSA穩定劑,6000r/min離心1h,棄去上清液,沉淀再用1%BSA洗滌3次,最后用pH7.0的0.1mol/L PBS緩沖液定容至100mL,置4℃下保存備用; (2)傳感器檢測腺苷:取40 μg羧基修飾的磁性微球,置于1.5mL離心管中,通過磁性分離器分離,棄去上清液,用100μL咪唑緩沖液洗滌磁性微球三次,加入100μL含1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺即EDC的0.1M pH6.0咪唑緩沖液懸浮磁性微球,置37℃ 的恒溫振蕩器中活化20min(振蕩速度170r/min);然后加入30pmol氨基修飾的腺苷適體,37℃ 的恒溫振蕩器中,反應lh; 磁性分離器分離,棄去上清液,用100μL WB (即7mM pH8.0 Tris–HCl、 0.17 M NaCl、0.05% Tween 20溶液) 溶液洗滌,進行三次;加入10%BSA溶液,37℃下封閉反應lh,WB溶液洗滌三次;加入10pmol生物素修飾的腺苷適體互補序列的BA(20 mM pH 8.0Tris–HCl、0.5 M NaCl溶液)溶液100μL, 37℃的恒溫振蕩器中反應lh,平行處理多份;分別加入一系列不同濃度的目標物腺苷及待測樣品溶液,每管總體積為100μL,37℃的恒溫振蕩器中反應lh,磁性分離器分離,WB溶液洗滌三次;再分別加入50μL鏈霉親和素金納米SA-Au的PBS緩沖液, 37℃下恒溫振蕩器中反應1h;隨后,最后用含有2%BSA的WB洗滌液通過磁性分離器洗滌磁性微球復合物3次;(3)檢測方法:將磁性微球復合物用0.1M PBS定容50μL;加入4℃溴飽和水溶液50μL,常溫下反應10min,60℃反應20min,從中取該溶液90μL與100μL10-5mol/L魯米諾溶液迅速混合后立即置化學發光儀中測定;以加入腺苷的濃度為橫坐標,以發光強度為縱坐標,繪制標準曲線;根據標準曲線計算待測樣品中腺苷濃度。

2.  根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟(1)中溶液加入鏈霉親和素之前,用0.1mol/LK2CO3調pH至6.8~7.0。

關 鍵 詞:
基于 技術 納米 化學 發光 放大 檢測 腺苷 方法
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:基于適體技術金納米化學發光放大檢測腺苷的方法.pdf
鏈接地址:http://www.wwszu.club/p-6140767.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
鬼佬大哥大