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一種增強免疫力及改善睡眠的保健食品及其二步發酵制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201410136604.9

申請日:

2014.04.04

公開號:

CN103948023A

公開日:

2014.07.30

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A23L 1/29申請日:20140404|||公開
IPC分類號: A23L1/29; A23L1/28; A01G1/04; A61K36/074; A61P37/04; A61P25/20; A61K35/74(2006.01)N; A61K31/197(2006.01)N 主分類號: A23L1/29
申請人: 浙江省醫學科學院
發明人: 徐娟; 吳學謙; 李青青; 熊科輝; 許海順; 黨亞麗; 俞盈
地址: 310013 浙江省杭州市天目山路182號
優先權:
專利代理機構: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 代理人: 胡紅娟
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410136604.9

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2016.01.20|||2014.08.27|||2014.07.30

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種增強免疫力及改善睡眠的保健食品及其二步發酵制備方法,該方法包括:靈芝固體發酵:以含有增強免疫力功能的天然組分為藥性培養基質,接種靈芝液體菌種進行雙向固體發酵制備具有增強免疫力功能的藥性菌質;乳酸菌液體深層發酵;以藥性菌質為原料,粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發酵培養基,接種乳酸菌進行液體深層發酵生產促進睡眠的γ-氨基丁酸,制備同時具有增強免疫力和改善睡眠功能的發酵液;采用發酵液,制備成不同劑型的增強免疫力和改善睡眠的保健食品。本發明制備的保健食品同時具有增強免疫力和改善睡眠的功能,市場前景廣闊,該制備方法穩定,適合大規模生產。

權利要求書

權利要求書
1.  一種增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)靈芝固體發酵:以含有增強免疫力功能的天然組分為藥性培養基質,接種靈芝液體菌種進行雙向固體發酵制備具有增強免疫力功能的藥性菌質;
(2)乳酸菌液體深層發酵;以步驟(1)的藥性菌質為原料,粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發酵培養基,接種乳酸菌進行液體深層發酵生產促進睡眠的γ-氨基丁酸,制備同時具有增強免疫力和改善睡眠功能的發酵液;
(3)采用步驟(2)的發酵液,制備成不同劑型的增強免疫力和改善睡眠的保健食品。

2.  根據權利要求1所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,步驟(1)中,所述的靈芝液體菌種的接種量為2%-10%。

3.  根據權利要求1所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,步驟(1)中,所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、山藥10%-20%、黃芪2%-3%、鐵皮楓斗1%-2%、西洋參1%-2%、杜仲1%-2%、淫羊藿1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%,將各組分混合、粉碎,然后加水至水分含量為60%-65%,116℃-126℃滅菌0.5h-1.5h。

4.  根據權利要求3所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,步驟(1)中,所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、山藥13%、黃芪3%、鐵皮楓斗2%、西洋參2%、杜仲2%、淫羊藿2%、石膏粉1%;將各組分混合、粉碎,然后加水至水分含量為60%-65%,121℃滅菌1h。

5.  根據權利要求1所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,步驟(1)中,所述的雙向固體發酵的條件為:發酵溫度在25-28℃,發酵時間在20-25天。

6.  根據權利要求1所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步 發酵制備方法,其特征在于,步驟(2)中,所述的發酵培養基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份,將藥性菌質、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水,添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液,116℃-126℃滅菌20min-40min。

7.  根據權利要求1所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,步驟(2)中,所述的乳酸菌的接種量為1%-5%。

8.  根據權利要求1所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,步驟(2)中,所述的液體深層發酵的條件為:發酵溫度在28-32℃,發酵時間在48-72h。

9.  根據權利要求1所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,其特征在于,步驟(3)中,所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品為片劑或膠囊。

10.  根據權利要求1~9任一項所述的制備方法制備的增強免疫力和改善睡眠的保健食品。

說明書

說明書一種增強免疫力及改善睡眠的保健食品及其二步發酵制備方法
技術領域
本發明涉及生物保健食品及其制備領域,具體涉及一種增強免疫力及改善睡眠的保健食品及采用靈芝、乳酸菌固液二步發酵制備該保健食品的方法。
背景技術
隨著老年人口的不斷增長,中國已邁入老齡化社會,老年化進程在不斷加速,據統計到2013年老年人口數量達到2.02億,老齡化水平達到14.8%,提高老年人的健康和生活質量已成為社會焦點。免疫力低下和睡眠障礙是影響老年人健康和生活質量的重大問題,因此增強免疫力和改善睡眠的保健食品有巨大的市場前景。
靈芝味甘、性平,具有扶正固本的功效,被《神農本草經》列為上品,現代醫學研究證明靈芝是最佳的免疫功能調節劑和激活劑,可顯著提高機體的免疫功能。目前已商業化生產的靈芝產品很多,根據國家藥監局網站數據統計已批準的增強免疫力和改善睡眠的靈芝保健食品有16款,這些產品大多以靈芝孢子粉、靈芝或靈芝提取物為原料,存在成本高、周期長、林木資源消耗量大等問題。以生物發酵的靈芝菌絲體為原料則可解決這些問題,如專利200910186521.X《復方發酵靈芝膠囊及其制備方法》以發酵靈芝菌粉和硒元素配方制成具有增強免疫力、改善睡眠的復方產品,專利96109095.2《中國靈芝保健飲料》以靈芝液體深層發酵制備靈芝保健飲料。
除傳統的靈芝固體發酵和液體發酵外,近年來有學者提出靈芝新型固體發酵技術—雙向發酵技術,即利用中藥等含生物活性成分的藥性基質和靈芝進行發酵,此過程中藥性基質對靈芝菌絲體生長產生影響,靈芝真菌酶系對藥性基質改造產生1+1>2的生理效果,目前已有大量靈芝與中藥雙向發酵的報道,如靈芝-黃芪、靈芝-丹參、靈芝-川穹、靈芝-草烏、靈芝-銀杏、靈芝-雷公藤等、靈芝-巴豆等的雙向發酵,證明經過雙向發酵靈芝活性成分顯著提高,同時靈芝發酵對藥性基質也具有增效減毒的作用。目 前靈芝雙向發酵僅限于靈芝與單一藥材的發酵,并無靈芝與具有同一功效的多種藥材間的雙向發酵。
靈芝除了具有增強免疫力功效外,還具有改善睡眠的功效,但是它起效慢,需要長期服用才能起效。γ-氨基丁酸是一種重要的抑制性神經遞質,現代研究證明它可起到快速促進睡眠的作用,是一種速效助眠因子。γ-氨基丁酸和靈芝復方可起到速效和長效改善睡眠的效果,目前并無γ-氨基丁酸和靈芝復方產品的報道。
衛生部2009年第12號公告批準乳酸菌發酵法制備的γ-氨基丁酸為新資源食品。從傳統發酵食品中篩選的乳酸菌安全性高,可用于γ-氨基丁酸的生產,如專利200780006225.6《能夠生產γ-氨基丁酸的乳酸菌》從未精制的醬油中分離到的乳酸菌凝乳酶乳酸桿菌,專利200910183478.1《一株高效轉化L-谷氨酸為γ-氨基丁酸乳酸菌的選育》從自制酸菜中篩選的植物乳桿菌。但是乳酸菌只能利用單糖、二糖等小分子碳源,不能直接利用含淀粉以及纖維質的天然基質,而靈芝具有降解淀粉和纖維質的酶系,可將淀粉質、纖維質分解為可供乳酸菌利用的小分子碳源,將靈芝發酵與乳酸菌發酵相耦合進行分步發酵不僅可解決這一問題,乳酸菌還可對靈芝菌質進行進一步分解和轉化,更易吸收和利用。
發明內容
針對目前并無靈芝和γ-氨基丁酸復方產品,本發明提供一種以功能強化的靈芝藥性菌質和γ-氨基丁酸配方,同時具有增強免疫力和改善睡眠功能的保健食品,同時提供該保健食品利用靈芝、乳酸菌二步發酵的制備方法。
一種增強免疫力和改善睡眠的保健食品的二步發酵制備方法,包括如下步驟:
(1)靈芝固體發酵:以含有增強免疫力功能的天然組分為藥性培養基質,接種靈芝液體菌種進行雙向固體發酵制備具有增強免疫力功能的藥性菌質;
(2)乳酸菌液體深層發酵;以步驟(1)的藥性菌質為原料,粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發酵培養基,接種乳酸菌進行液體深層發酵生產促進睡眠的γ-氨基丁酸,制備同時具有增強免疫力和改善睡眠功 能的發酵液;
(3)采用步驟(2)的發酵液,制備成不同劑型的增強免疫力和改善睡眠的保健食品。
本發明第一步以含有增強免疫力功能的天然組分作為藥性培養基質,接種靈芝進行雙向固體發酵,通過藥性培養基質對靈芝菌絲體生長代謝過程的影響和靈芝真菌酶系對藥性培養基質改造在內的雙向性固體發酵后,得到兼具藥性基質和靈芝增強免疫力功能的藥性菌質;第二步以靈芝降解后含有小分子碳源等營養物質的藥性菌質為原料,添加酵母粉以及谷氨酸鈉制作液體培養基,接種可產生γ-氨基丁酸的乳酸菌進行發酵,制備具有增強免疫力和改善睡眠功能的發酵液;最后,發酵液經過過濾、濃縮、噴霧干燥、造粒、裝囊、壓片等工藝制備成保健食品。
步驟(1)中,所述的靈芝菌種可采用現有技術,靈芝液體菌種采用現有的常規工藝制得,靈芝菌種為靈芝ACCC50621,即中國農業微生物菌種保藏管理中心(ACCC)保藏的菌種。
步驟(1)中,所述的靈芝液體菌種的接種量為2%-10%,即所述的靈芝液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的2%-10%(mL/g),以100g藥性培養基質為基準,加入2-10mL的靈芝液體菌種。
步驟(1)中,所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、山藥10%-20%、黃芪2%-3%、鐵皮楓斗1%-2%、西洋參1%-2%、杜仲1%-2%、淫羊藿1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%,將各組分混合、粉碎,然后加水至水分含量為60%-65%,116℃-126℃滅菌0.5h-1.5h。優選的,所述的藥性培養基質的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、山藥13%、黃芪3%、鐵皮楓斗2%、西洋參2%、杜仲2%、淫羊藿2%、石膏粉1%;將各組分混合、粉碎,然后加水至水分含量為60%-65%,121℃滅菌1h。
步驟(1)中,所述的雙向固體發酵的條件為:發酵溫度在25-28℃,發酵時間在20-25天,以該靈芝固體發酵條件為宜。
步驟(2)中,所述的乳酸菌為植物乳酸菌,優選的為從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106(保藏編號為:CGMCC NO.5655),即采用中國普通微生物菌種保藏管理中心CGMCC保藏的菌種,植物乳酸菌液體菌種采用MRS培養基28℃靜置培養48h獲得。
步驟(2)中,所述的發酵培養基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份,將藥性菌質、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水,添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液,116℃-126℃滅菌20min-40min。作為優選,所述的發酵培養基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質50重量份、酵母粉7.5重量份、谷氨酸鈉20重量份,將藥性菌質、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水,添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液,121℃滅菌30min。
步驟(2)中,所述的乳酸菌的接種量為1%-5%,即所述的乳酸菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%-5%。
步驟(2)中,所述的液體深層發酵的條件為:發酵溫度在28-32℃,發酵時間在48-72h,以該發酵條件為宜。
步驟(2)中,所述的發酵液中γ-氨基丁酸的含量為9-12g/L。
步驟(3)中,所述的發酵液,通過過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒、裝囊、壓片等工藝制備成不同劑型的保健食品。
所述的增強免疫力和改善睡眠的保健食品的劑型為口服劑型,優選為片劑或膠囊,發酵液經過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒、壓片后得到片劑,發酵液經過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒、裝囊后得到膠囊。具體地,發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末,粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒,顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒,整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒的重量0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒的重量0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘灌膠囊或壓成片劑,每粒膠囊/片劑0.35g。
通過上述二步發酵制備方法制備的增強免疫力和改善睡眠的保健食品,具有同時增強免疫力和改善睡眠的保健功效。
靈芝與增強免疫力的藥性培養基質雙向發酵可制備增強免疫力功能顯著的藥性菌質,而藥性培養基質通過靈芝的降解作用,可為乳酸菌發酵產γ-氨基丁酸提供營養和碳源,同時通過乳酸菌的降解轉化,藥性培養基質更易吸收和利用,因此采用靈芝和乳酸菌二步發酵可制備可同時增強免疫力和改善睡眠的保健食品。
與現有技術相比,本發明具有如下有益效果:
(1)本發明根據靈芝具有增強免疫力和改善睡眠功能,γ-氨基丁酸 具有快速改善睡眠功能,二者配伍具有顯著增強免疫力和改善睡眠的功能,提供了一種以功能強化的靈芝藥性菌質和γ-氨基丁酸配伍的可同時增強免疫力和改善睡眠的保健食品及其制備方法,該方法采用二步發酵法將食用菌發酵與乳酸菌發酵有機結合,其中第一步利用靈芝和具備增強免疫力功能藥性培養基質的雙向固體發酵制備兼具靈芝和藥性基質增強免疫力功能的藥性菌質,該過程不僅能產生1+1>2的生理功效,還可將藥性培養基質中的大分子碳源降解為乳酸菌易于利用的小分子碳源,為第二步乳酸菌液體深層發酵產生改善睡眠的γ-氨基丁酸提供必要的營養和碳源,同時通過乳酸菌的降解和轉化藥性菌質也更易吸收、利用。
(2)本發明制備的保健食品經實驗證明具有增強免疫力和改善睡眠化功能。
(3)本發明采用的制備方法,不僅原料成本低,整個生產過程都采用低溫發酵,條件溫和,沒有毒害物質的攝入,產品安全性、附加值高,可實現規模化生產,市場前景廣闊。
(4)本發明制備的保健食品采用片劑、膠囊劑型,方便攜帶及服用。
附圖說明
圖1為本發明增強免疫力及改善睡眠保健食品的二步發酵制備方法流程圖。
具體實施方式
以下按照圖1工藝流程對本發明進行進一步描述,但本發明的保護范圍并不僅限于此。以下沒有特別說明的情況下,百分數均是指重量百分數。
實施例1
1、靈芝固體發酵:
①藥性培養基質的制作
配方:全粒大麥80%、山藥13.5%、黃芪2%、鐵皮楓斗1%、西洋參1%、杜仲1%、淫羊藿1%、石膏粉0.5%;
配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎,加水至水分重量含量為65%;121℃滅菌1h,得到藥性培養基質;
②接種發酵
將靈芝ACCC50621的液體菌種(常規工藝制備)按3%體積質量比接種到①中藥性培養基質,即靈芝ACCC50621液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的3%(mL/g),25℃培養25天制備具有增強免疫力功能的藥性菌質;
2、乳酸菌液體深層發酵:
①發酵培養基制作
配方:藥性菌質40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水1L(即1000g);
配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水,添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液,121℃滅菌30min,得到發酵培養基;
②接種發酵
將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106(保藏編號為:CGMCCNO.5655)液體菌種(MRS培養基28℃靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基,即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%,28℃靜置培養72h制備具有增強免疫力和改善睡眠功能的發酵液;
3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末,粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒,顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒,整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘壓成片劑,每片0.35g。
實施例2
1、靈芝固體發酵:
①藥性培養基質的制作
配方:全粒大麥80%、山藥13.5%、黃芪2%、鐵皮楓斗1%、西洋參1%、杜仲1%、淫羊藿1%、石膏粉0.5%;
配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎,加水至水分重量含量為60%;121℃滅菌1h,得到藥性培養基質;
②接種發酵
將靈芝ACCC50621的液體菌種(常規工藝制備)按3%體積質量比 接種到①中藥性培養基質,即靈芝ACCC50621液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的3%(mL/g),25℃培養25天制備具有增強免疫力功能的藥性菌質;
2、乳酸菌液體深層發酵:
①發酵培養基制作
配方:藥性菌質40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水1L(即1000g);
配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水,添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液,121℃滅菌30min,得到發酵培養基;
②接種發酵
將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106(保藏編號為:CGMCCNO.5655)液體菌種(MRS培養基28℃靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基,即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%,28℃靜置培養72h制備具有增強免疫力和改善睡眠功能的發酵液;
3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末,粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒,顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒,整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘裝成膠囊,每粒0.35g。
實施例3
1、靈芝固體發酵:
①藥性培養基質的制作
配方:全粒大麥75%、山藥13%、黃芪3%、鐵皮楓斗2%、西洋參2%、杜仲2%、淫羊藿2%、石膏粉1%;
配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎,加水至水分重量含量為63%;121℃滅菌1h,得到藥性培養基質;
②接種發酵
將靈芝ACCC50621的液體菌種(常規工藝制備)按5%體積質量比接種到①中藥性培養基質,即靈芝ACCC50621液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的5%(mL/g),28℃培養20天制備 具有增強免疫力功能的藥性菌質;
2、乳酸菌液體深層發酵:
①發酵培養基制作
配方:藥性菌質50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水1L(即1000g);
配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水,添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液,121℃滅菌30min,得到發酵培養基;
②接種發酵
將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106(保藏編號為:CGMCCNO.5655)液體菌種(MRS培養基28℃靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基,即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%,32℃靜置培養48h制備具有增強免疫力和改善睡眠功能的發酵液;
3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末,粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒,顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒,整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘壓成片劑,每片0.35g。
實施例4
1、靈芝固體發酵:
①藥性培養基質的制作
配方:全粒大麥75%、山藥13%、黃芪3%、鐵皮楓斗2%、西洋參2%、杜仲2%、淫羊藿2%、石膏粉1%;
配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎,加水至水分重量含量為62%;121℃滅菌1h,得到藥性培養基質;
②接種發酵
將靈芝ACCC50621的液體菌種(常規工藝制備)按5%體積質量比接種到①中藥性培養基質,即靈芝ACCC50621液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養基質的質量(g)的5%(mL/g),28℃培養20天制備具有增強免疫力功能的藥性菌質;
2、乳酸菌液體深層發酵:
①發酵培養基制作
配方:藥性菌質50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水1L(即1000g);
配制方法:按配方比例將藥性菌質、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水,添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液,121℃滅菌30min,得到發酵培養基;
②接種發酵
將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106(保藏編號為:CGMCCNO.5655)液體菌種(MRS培養基28℃靜置培養48h)按1%比例接種到①中發酵培養基,即植物乳桿菌的加入的體積量為發酵培養基體積的1%,32℃靜置培養48h制備具有增強免疫力和改善睡眠功能的發酵液;
3、第2步制備的發酵液首先經過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末,粉末過篩后經沸騰制粒得干燥顆粒,顆粒用顆粒整粒機以20目篩進行整粒,整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘裝成膠囊,每粒0.35g。
試驗例1
毒理試驗:
試驗目的:檢驗產品是否具有毒性
試驗材料:實施例4制得的膠囊。
樣品:人體口服推薦攝入量為每日兩次,每次兩粒,每粒0.35g/粒(體重按60kg計),0.03g/kg·bw,取膠囊內容物進行試驗。
實驗動物:清潔級ICR小鼠、SD大鼠及飼料。
飼養條件:溫度20-25℃、相對濕度40%-70%的屏障系統。
試驗方法:
小鼠急性經口毒性試驗:取實施例4制得的膠囊內容物,用無菌水配制成0.500g/mL,按最大灌胃量20mL/kg·bw一日內二次性灌胃給養,受試物給予劑量為20.0g/kg·bw。
Ames試驗:取實施例4制得的膠囊內容物,用無菌水配制成0.500g/mL,為5000ug/皿的劑量,試驗設5個劑量,1000、200、40、8ug/皿4個劑量用無菌水按一定倍比逐級稀釋配制成10、2、0.4、0.08mg/mL, 加樣量均為0.1mL/皿,加入0.1mL/皿,同時設陽性、陰性及溶劑對照,計數每皿回變菌落數。
小鼠骨髓細胞微核試驗:以40mg/kg·bw劑量的環磷酰胺為陽性對照,無菌水為陰性對照,試驗組3個劑量分別為10.0g/kg·bw、5.0g/kg·bw、2.5g/kg·bw,取實施例4制得的膠囊內容物用無菌水配制成0.5、0.25、0.125g/mL,以20mL/kg·bw灌胃2次,采用30h給受試物法,兩次給樣間隔24h,第二次給樣6h后處死動物,取胸骨常規制片、鏡檢、每鼠計數1000個骨髓嗜多染紅細胞,觀察含微核的嗜多染紅細胞并觀察微核發生率。
小鼠精子畸形試驗:以40mg/kg·bw劑量的環磷酰胺為陽性對照,無菌水為陰性對照,試驗組3個劑量分別為10.0g/kg·bw、5.0g/kg·bw、2.5g/kg·bw,取實施例4制得的膠囊內容物用無菌水配制成0.5、0.25、0.125g/mL,以20mL/kg·bw灌胃,每天1次,連續5d。于首次給樣后的第35天處死動物,取兩側附睪精子濾液按常規制片、鏡檢,每鼠計數1000個完整的精子,計算精子畸形發生率。
30天喂養試驗:實施例4制得的膠囊人體推薦量1.4g/人/天,按人體推薦量的30、65、100倍設0.70g/kg·bw/d、1.52g/kg·bw/d、2.33g/kg·bw/d設三個劑量組,另設一個空白對照組0g/kg·bw,受試樣品摻入基礎飼料中飼喂大鼠,連續喂養30天,每周稱1次體重和2次食物攝入量,計算每周及總的食物利用率,每天觀察有無中毒變現和死亡,試驗結束觀察血液學、血液生化、臟器系數指標,并進行病理學檢查。
試驗結果:
1、急性經口毒性試驗結果:受試樣品對雌雄性小鼠急性經口的最大耐受量(MTD)均大于20.0g/kg·bw,屬無毒級。
2、三項遺傳毒性試驗結果:Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗結果均為陰性。
3、30天喂養試驗結果:實驗期間,動物生長發育良好,各劑量組體重、食物利用率、臟器重量、臟器系數均無異常改變,血液學指標與生化各項指標均在正常范圍,各臟器病理學檢查均未見與受試品相關的病理改變、給予人體推薦量100倍的受試物未觀察到有害作用。
試驗例2
增強免疫力功能試驗:
試驗目的:檢驗產品是否具有增強免疫力的功能
試驗材料:實施例4制得的膠囊。
樣品:人體口服推薦攝入量為每日兩次,每次兩粒,每粒0.35g/粒(體重按60kg計),0.03g/kg·bw,取膠囊內容物進行試驗。
實驗動物:清潔級ICR小鼠及飼料。
飼養條件:溫度20-25℃、相對濕度40%-70%的屏障系統。
試驗方法:按照《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003版)評價標準進行動物實驗,設低、中、高3個劑量和陰性對照組(無菌水),低、中、高3個劑量組分別相當于人用最大推薦劑量的5倍、10倍、30倍,即0.15g/kg·bw/d,0.30g/kg·bw/d,0.90g/kg·bw/d,低、中、高3個劑量配制濃度分別為15、30、90mg/mL。經口每日一次給予小鼠相應劑量的受試物,小鼠灌胃量為10mL/kg·bw,連續灌胃一個月后測定各增強免疫力功能指標。
實驗結果如表1、2和3所示,經口給小鼠0.15g/kg·bw/d,0.30g/kg·bw/d,0.90g/kg·bw/d低、中、高3個劑量的受試樣品,中、高劑量組能顯著提高小鼠脾淋巴細胞轉化、提高小鼠抗體生成細胞,P<0.05,高劑量組能提高小鼠NK細胞活性,P<0.01。受試物對小鼠體重、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、遲發型變態反應、血清溶血素以及單核巨噬細胞功能未見明顯影響(P>0.05),說明該樣品具有增強免疫力的功能。
具體實驗結果數據如下:
表1對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞的增殖能力的影響(n=10,x±s)
組別光密度差值ΔOD570nmP值陰性對照組0.106±0.032 低劑量組0.112±0.0430.354中劑量組0.294±0.0270.031*高劑量組0.376±0.0380.019*
注:*P<0.05,**P<0.01
表2對小鼠抗體生成細胞的影響(n=10,x±s)
組別溶血空斑數(個/106脾細胞)P值陰性對照組61±26 低劑量組67±280.854
中劑量組89±170.029*高劑量組92±200.018*
注:*P<0.05,**P<0.01
表3對小鼠NK細胞活性的影響(n=10,x±s)
組別NK細胞活性(%)P值陰性對照組31.6±3.9 低劑量組34.4±8.30.956中劑量組27.9±7.50.735高劑量組43.9±5.30.004**
注:*P<0.05,**P<0.01
試驗例3
改善睡眠功能試驗:
試驗目的:檢驗產品是否具有改善睡眠的功能
試驗材料:實施例4制得的膠囊。
人體口服推薦攝入量為每日兩次,每次兩粒,每粒0.35g/粒(體重按60kg計),0.03g/kg·bw,取膠囊內容物進行試驗。
實驗動物:清潔級ICR小鼠及飼料。
飼養條件:溫度20-25℃、相對濕度40%-70%的屏障系統。
試驗方法:按照《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003版)評價標準進行直接催眠實驗、延長巴比妥鈉睡眠時間實驗、巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗,設低、中、高3個劑量和陰性對照組(無菌水),低、中、高3個劑量組分別相當于人用最大推薦劑量的5倍、10倍、30倍,即0.15g/kg·bw/d,0.30g/kg·bw/d,0.90g/kg·bw/d,低、中、高3個劑量配制濃度分別為15、30、90mg/mL。經口每日一次給予小鼠相應劑量的受試物,小鼠灌胃量為10mL/kg·bw,連續灌胃30d后測定各睡眠指標。
實驗結果如表4、表5和表6所示:經口給小鼠0.15g/kg·bw/d,0.30g/kg·bw/d,0.90g/kg·bw/d低、中、高3個劑量的受試樣品,低、中、高3個劑量組均能明顯縮短巴比妥鈉誘導睡眠潛伏期(P<0.05,0.01,0.01),均能明顯提高閾下劑量巴比妥鈉誘導小鼠睡眠的發生率(P<0.05,0.05,0.01),中高劑量組能明顯延長巴比妥鈉誘導的睡眠時間(P<0.05,0.01),說明實施例4制得的膠囊有改善睡眠的作用,且改善睡眠的作用成劑量效應關系。 具體實驗結果數據如下:
表4對巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間的影響(n=15,x±s)
組別睡眠時間(min)P值陰性對照組19.5±9.7 低劑量組26.8±5.90.823中劑量組36.5±8.30.034*高劑量組45.2±11.30.007**
注:*P<0.05,**P<0.01
表5對閾下劑量巴比妥鈉誘導小鼠睡眠發生率的影響(n=15,x±s)
組別睡眠發生率(%)P值陰性對照組20 低劑量組66.40.021*中劑量組800.012*高劑量組900.003**
注:*P<0.05,**P<0.01
表6對巴比妥鈉誘導小鼠睡眠潛伏期的影響(n=15,x±s)
組別睡眠時間(min)P值陰性對照組35.8±10.5 低劑量組29.3±5.90.048*中劑量組25.4±8.10.009**高劑量組20.2±9.30.006**

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一種 增強 免疫力 改善 睡眠 保健食品 其二 發酵 制備 方法
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