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一種水產養殖水體中亞甲基藍的高效液相色譜檢測方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201410080408.4

申請日:

2014.03.07

公開號:

CN103983703A

公開日:

2014.08.13

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):G01N 30/02申請日:20140307|||公開
IPC分類號: G01N30/02 主分類號: G01N30/02
申請人: 浙江省海洋水產研究所
發明人: 龍舉; 龍位; 張小軍; 李佩佩; 嚴忠雍; 何依娜
地址: 316100 浙江省舟山市普陀區沈家門小西湖弄25號
優先權:
專利代理機構: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109 代理人: 尉偉敏
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410080408.4

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2016.04.06|||2014.09.10|||2014.08.13

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種水產養殖水體中亞甲基藍的高效液相色譜檢測方法,將水體經預處理后利用二氯甲烷萃取經旋轉蒸發儀抽真空濃縮凈化,液相色譜-紫外檢測器檢測,外標法進行定量分析。本發明方法操作方便,重現性較好,定性準確且回收率較高,能夠快速分析水產養殖水體環境中的亞甲基藍含量。

權利要求書

權利要求書
1.  一種水產養殖水體中亞甲基藍的高效液相色譜檢測方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)水樣預處理:采集水樣,然后用微孔濾膜進行抽濾處理,抽濾后所得濾液轉移至樣品瓶中;
(2)萃取及凈化:向濾液中加入色譜純二氯甲烷萃取,振蕩1-2min后靜置分層,把下層二氯甲烷轉移到旋蒸瓶中,40-45 ℃下旋轉蒸發儀抽真空濃縮至蒸干,取下旋蒸瓶之后往旋蒸瓶中準確加入1.0 mL甲醇溶解殘留物,并用膠頭吸管伸入旋蒸瓶中利用加入的甲醇清洗旋蒸瓶內壁,靜置旋蒸瓶待內壁上的液體完全流下,用注射器將旋蒸瓶中液體取出,經微孔濾膜過濾后得待檢測液;
(3)液相色譜-紫外檢測器檢測:待檢測液經微孔濾膜過濾到樣品瓶中,在已設定的液相色譜-紫外檢測條件下進行定性定量分析。

2.  根據權利要求1所述的高效液相色譜檢測方法,其特征在于:步驟(2)中濾液:二氯甲烷的體積比為=2.5-5:1。

3.  根據權利要求1或2所述的高效液相色譜檢測方法,其特征在于:步驟(3)中液相色譜-紫外檢測條件為:色譜條件:SunFireTM C18柱,5μm,250 mm ×4.6 mm;柱溫:30-40 ℃;流動相:0.1%甲酸水溶液-乙腈(62:38,V/V);流速:1.0 mL/min;進樣量:50 μL;紫外檢測波長:650-655nm。繪制標準工作曲線,以外標法定量計算亞甲基藍的含量。

4.  根據權利要求1或2所述的高效液相色譜檢測方法,其特征在于:所述微孔濾膜的孔徑在0.22-0.45μm。

說明書

說明書一種水產養殖水體中亞甲基藍的高效液相色譜檢測方法
技術領域
本發明涉及環境質量安全檢測技術領域,特別涉及一種水產養殖水體中亞甲基藍的高效液相色譜檢測方法。
背景技術
亞甲基藍屬于一種化學指示劑、工業染料、生物染色劑和藥物,其毒性比孔雀石綠低,近年來作為孔雀石綠、硝基呋喃等禁藥的替代品在水產品養殖中得到了廣泛應用,它可防治真菌引起的鏈壺菌病、水霉病和寄生蟲病等在水產養殖中經常用來治療水霉病以及給養殖水體環境消毒等。亞甲基藍的大量使用或濫用對養殖水生物會產生一定的毒副作用,實際生產中很難掌握用藥濃度, 導致在水生生物體中積累一定量的殘留物,對食品安全和人類健康構成新的隱患。亞甲基藍對人的眼睛以及皮膚都有著嚴重的傷害,誤食亞甲基藍或體內攝入亞甲基藍過量對人體有害。此外,有研究表明亞甲基藍有致畸作用,大量使用或濫用對養殖生物會產生毒副作用,所以日本和美國都不允許將其用于水產養殖中。
控制養殖水體環境中的亞甲基藍可以直接減少水生生物體對亞甲基藍的生物富集作用,能有效控制養殖水產品體內亞甲基藍的攝入量。目前水產品及養殖水體環境中的亞甲基藍的含量已經引起了相關部門的高度重視,并已開始研究制定水產品中亞甲基藍含量的檢測標準。監測水產養殖水體環境中亞甲基藍含量水平對了解養殖環境安全狀況、控制養殖水生物過多攝入亞甲基藍和水產品質量安全監管工作具有積極意義。而對于水產養殖水體環境中亞甲基藍含量的檢測,目前還沒有相關的檢測方法。根據亞甲基藍的化學性質選擇適合的前處理方法,優化儀器分析條件,采用液相色譜法進行測定。建立一種回收率高、重現性好和精確度高的產養殖水體環境中亞甲基藍含量的檢測方法。通過簡化實驗步驟,提高了前處理效率,適用于各級各類質檢機構對水產養殖水體環境中亞甲基藍的實際檢測,對環境質量安全監測工作具有重要意義。
已發布的有關水產品中亞甲基藍的檢測方法有中國藥典1990 年版( 二部) 規定的間接碘量法和分光光度法,但該方法不適用于檢測養殖水體中的亞甲基藍。而更好的控制水產養殖水體環境中的亞甲基藍含量以降低養殖水生物對亞甲基藍的生物富集是目前亟需解決的問題,因此,亟需建立一種有效的檢測水產養殖水體環境中的亞甲基藍含量的方法。
發明內容
本發明的目的在于提供一種水產養殖水體中亞甲基藍的高效液相色譜檢測方法,具有較高的靈敏度和精確度,操作簡單易行,重現性較好,定性準確且回收率較高,檢測成本低廉,能夠快速分析水產養殖水體環境中的亞甲基藍含量,對及時掌握養殖水體環境質量狀況具有重要意義。
本發明解決其技術問題所采用的技術方案是: 
一種水產養殖水體中亞甲基藍的高效液相色譜檢測方法,包括如下步驟:
(1)水樣預處理:采集水樣,然后用微孔濾膜進行抽濾處理,抽濾后所得濾液轉移至樣品瓶中;
(2)萃取及凈化:向濾液中加入色譜純二氯甲烷萃取,振蕩1-2min后靜置分層,把下層二氯甲烷轉移到旋蒸瓶中,40-45 ℃下旋轉蒸發儀抽真空濃縮至蒸干,取下旋蒸瓶之后往旋蒸瓶中準確加入1.0 mL甲醇溶解殘留物,并用膠頭吸管伸入旋蒸瓶中利用加入的甲醇清洗旋蒸瓶內壁,靜置旋蒸瓶待內壁上的液體完全流下,用注射器將旋蒸瓶中液體取出,經微孔濾膜過濾后得待檢測液;
(3)液相色譜-紫外檢測器檢測:待檢測液經微孔濾膜過濾到樣品瓶中,在已設定的液相色譜-紫外檢測條件下進行定性定量分析。
作為優選,步驟(2)中濾液:二氯甲烷的體積比為=2.5-5:1。
作為優選,步驟(3)中液相色譜-紫外檢測條件為:色譜條件:SunFireTM C18柱,5μm,250 mm ×4.6 mm;柱溫:30-40 ℃;流動相:0.1%甲酸水溶液-乙腈(62:38,V/V);流速:1.0 mL/min;進樣量:50 μL;紫外檢測波長:650-655nm。繪制標準工作曲線,以外標法定量計算亞甲基藍的含量。
作為優選,所述微孔濾膜的孔徑在0.22-0.45μm。
本發明的有益效果是:
1、本發明首次建立了水產養殖水體環境中亞甲基藍的檢測方法,采用液液萃取旋蒸濃縮凈化,凈化效果好,測定過程中基本上不會受到雜質的干擾。
2、采用液相色譜-紫外檢測法進行檢測,具有較高的靈敏度和精確度。
3、本發明在可對水體中的亞甲基藍同時進行定性及定量測定,操作簡單易行,重現性較好,定性準確且回收率較高,檢測成本低廉,能夠快速分析水產養殖水體環境中的亞甲基藍含量。
4、對及時掌握養殖水體環境質量狀況具有重要意義。
附圖說明
圖1是1.00mg/L的亞甲基藍標準品溶液色譜圖;
圖2是亞甲基藍標準曲線圖。
具體實施方式
下面通過具體實施例,并結合附圖,對本發明的技術方案作進一步的具體說明。
本發明中,若非特指,所采用的原料和設備等均可從市場購得或是本領域常用的。下述實施例中的方法,如無特別說明,均為本領域的常規方法。
本發明的高效液相色譜儀為:美國Waters高效液相色譜儀型號:Waters 2695。
本發明的紫外檢測器型號:Waters2489。
實施例1 
⑴水樣預處理:采集水樣500 mL到實驗室后立即用0.45μm濾膜進行抽濾處理,抽濾所得濾液轉移至樣品瓶中。
⑵萃取及凈化:選擇250 mL分液漏斗檢漏后放置在漏斗架上,準確量取濾液100 mL轉移到250 mL分液漏斗中,加入40 mL色譜純二氯甲烷萃取,振蕩1 min后靜置20 min,待分液漏斗中液體穩定且出現明顯分層后,把下層二氯甲烷轉移到100 mL旋蒸瓶中,在40 ℃下旋轉蒸發儀抽真空濃縮至蒸干。取下旋蒸瓶之后往旋蒸瓶中準確加入1.0 mL甲醇溶解殘留物,并用膠頭吸管伸入瓶中利用加入的甲醇清洗旋蒸瓶內壁。靜置旋蒸瓶待內壁上的液體完全流下,用注射器將瓶中液體取出,過0.22μm有機相微孔濾膜過濾后得待檢測液。
⑶液相色譜-紫外檢測器檢測:待檢測液經0.22μm有機相微孔濾膜過濾到樣品小瓶中,在已設定的液相色譜-紫外檢測條件下進行定性定量分析。色譜條件:SunFireTM C18柱,5 μm,250 mm ×4.6 mm;柱溫:30 ℃;流動相:0.1%甲酸水溶液-乙腈(62:38,V/V);流速:1.0 mL/min;進樣量:50 μL;紫外檢測波長:650 nm。繪制標準工作曲線,以外標法(現有常規方法)定量計算亞甲基藍的含量。
⑷標準曲線繪制
用色譜甲醇配制濃度分別為0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L的亞甲基藍標準溶液(1.00mg/L的亞甲基藍標準品溶液色譜圖見圖1),然后按照上述步驟⑶的要求進行操作,根據外標法要求繪制標準曲線(見圖2)。
⑸方法回收率的測定
分別按0.06mg/L、0.10mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L和0.80mg/L的濃度在養殖水樣中添加亞甲基藍標準溶液,每個添加水平分別做6個平行樣;按照步驟⑴-⑷進行檢測,并與上述得到的標準曲線比較,通過換算最終得到待測水體中亞甲基藍的濃度。方法回收率在72-94 %,RSD<12 %。
 
實施例2
⑴水樣預處理:采集水樣1000 mL到實驗室后立即用0.45μm濾膜進行抽濾處理,抽濾所得濾液轉移至樣品瓶中。
⑵萃取及凈化:選擇500 mL分液漏斗檢漏后放置在漏斗架上,準確量取濾液250 mL轉移到500 mL分液漏斗中,加入50 mL色譜純二氯甲烷萃取,振蕩2min后靜置30 min,待分液漏斗中液體穩定且出現明顯分層后,把下層二氯甲烷轉移到100 mL旋蒸瓶中,在45 ℃下旋轉蒸發儀抽真空濃縮至蒸干。取下旋蒸瓶之后往旋蒸瓶中準確加入1.0 mL甲醇溶解殘留物,并用膠頭吸管伸入瓶中利用加入的甲醇清洗旋蒸瓶內壁。靜置旋蒸瓶待內壁上的液體完全流下,用注射器將瓶中液體取出,過0.45μm有機相微孔濾膜過濾后得待檢測液。
⑶液相色譜-紫外檢測器檢測:待檢測液經0.45μm有機相微孔濾膜過濾到樣品小瓶中,在已設定的液相色譜-紫外檢測條件下進行定性定量分析。色譜條件:SunFireTM C18柱,5 μm,250 mm ×4.6 mm;柱溫:40 ℃;流動相:0.1%甲酸水溶液-乙腈(62:38,V/V);流速:1.0 mL/min;進樣量:50 μL;紫外檢測波長:655 nm。繪制標準工作曲線,以外標法定量計算亞甲基藍的含量。
⑷標準曲線繪制
用色譜甲醇配制濃度分別為0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L的亞甲基藍標準溶液,然后按照上述步驟⑶的要求進行操作,根據外標法要求繪制標準曲線。
⑸方法回收率的測定
分別按0.06mg/L、0.10mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L和0.80mg/L的濃度在養殖水樣中添加亞甲基藍標準溶液,每個添加水平分別做6個平行樣;按照步驟⑴-⑷進行液相色譜-紫外檢測器檢測,并與上述得到的標準曲線比較,通過換算最終得到待測水體中亞甲基藍的濃度。方法回收率在70~102 %,RSD<15 %。
 
實施例3
⑴水樣預處理:采集水樣1000 mL到實驗室后立即用0.45μm濾膜進行抽濾處理,抽濾所得濾液轉移至樣品瓶中。
⑵萃取及凈化:選擇500 mL分液漏斗檢漏后放置在漏斗架上,準確量取濾液250 mL轉移到500 mL分液漏斗中,加入60 mL色譜純二氯甲烷萃取,振蕩1 min后靜置20 min,待分液漏斗中液體穩定且出現明顯分層后,把下層二氯甲烷轉移到100 mL旋蒸瓶中,在40 ℃下旋轉蒸發儀抽真空濃縮至蒸干。取下旋蒸瓶之后往旋蒸瓶中準確加入1.0 mL甲醇溶解殘留物,并用膠頭吸管伸入瓶中利用加入的甲醇清洗旋蒸瓶內壁。靜置旋蒸瓶待內壁上的液體完全流下,用注射器將瓶中液體取出,過0.22μm有機相微孔濾膜過濾后得待檢測液。
⑶液相色譜-紫外檢測器檢測:待檢測液經0.22μm有機相微孔濾膜過濾到樣品小瓶中,在已設定的液相色譜-紫外檢測條件下進行定性定量分析。色譜條件:SunFireTM C18柱,5 μm,250 mm ×4.6 mm;柱溫:30 ℃;流動相:0.1%甲酸水溶液-乙腈(62:38,V/V);流速:1.0 mL/min;進樣量:50 μL;紫外檢測波長:650 nm。繪制標準工作曲線,以外標法定量計算亞甲基藍的含量。
⑷標準曲線繪制
用色譜甲醇配制濃度分別為0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L的亞甲基藍標準溶液,然后按照上述步驟⑶的要求進行操作,根據外標法要求繪制標準曲線。
⑸方法回收率的測定
分別按0.06mg/L、0.10mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L和0.80mg/L的濃度在養殖水樣中添加亞甲基藍標準溶液,每個添加水平分別做6個平行樣;按照步驟⑴-⑷進行液相色譜-紫外檢測器檢測,并與上述得到的標準曲線比較,通過換算最終得到待測水體中亞甲基藍的濃度。方法回收率在78-96 %,RSD<15 %。
 
實際樣品檢測:
在舟山市某海水養殖廠采集水樣,按照本發明的方法進行檢測,最終得到水體中亞甲基藍的濃度平均值為0.21mg/L。
以上所述的實施例只是本發明的一種較佳的方案,并非對本發明作任何形式上的限制,在不超出權利要求所記載的技術方案的前提下還有其它的變體及改型。

關 鍵 詞:
一種 水產 養殖 水體 中亞 甲基 高效 色譜 檢測 方法
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