鬼佬大哥大
  • / 55
  • 下載費用:30 金幣  

作為NEP中性內肽酶抑制劑的取代的聯苯丁酰膦酸衍生物.pdf

摘要
申請專利號:

CN201480008610.4

申請日:

2014.02.12

公開號:

CN105073762A

公開日:

2015.11.18

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):C07F 9/38申請日:20140212|||公開
IPC分類號: C07F9/38; A61K31/66; A61P25/00; A61P9/00 主分類號: C07F9/38
申請人: 諾華股份有限公司
發明人: D·W·巴恩斯; S·L·科恩; D·F·里格爾
地址: 瑞士巴塞爾
優先權: 61/764,679 2013.02.14 US
專利代理機構: 北京市中咨律師事務所11247 代理人: 沈曉書; 黃革生
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201480008610.4

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2017.03.08|||2016.02.03|||2015.11.18

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明提供了式I化合物或其可藥用鹽,其中R1、R2和R3是說明書所定義的。本發明還涉及用于制備本發明化合物的方法,以及其治療用途。本發明進一步提供了本發明化合物的藥物組合物,以及藥理活性劑和本發明化合物的組合。

權利要求書

1.式(I)化合物:

其中:
R1是H;-C1-7烷基或C6-10芳基;其中烷基任選被一個或多個獨立地
選自下列的取代基取代:-O-C(O)-O-C3-7環烷基、-O-C(O)-C3-7環烷基、
-O-C(O)-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C1-7烷基、
-O-C(O)-C1-7烷基、雜芳基、雜環基、-C(O)-雜環基、-C(O)NH2、
-C(O)NH-C1-7烷基和-C(O)N(C1-7烷基)2;
R2是Cl、CH3或F;
R3是H、F、Cl、CH3或OCH3,或
其可藥用鹽。
2.根據權利要求1的化合物,其具有式II:

其中:
R1是H;-C1-7烷基或C6-10芳基;其中烷基任選被一個或多個獨立地
選自下列的取代基取代:-O-C(O)-O-C3-7環烷基、-O-C(O)-C3-7環烷基、
-O-C(O)-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C1-7烷基、
-O-C(O)-C1-7烷基、雜芳基、雜環基、-C(O)-雜環基、-C(O)NH2、
-C(O)NH-C1-7烷基和-C(O)N(C1-7烷基)2;
R2是Cl、CH3或F;
R3是H、F、Cl、CH3或OCH3,或
其可藥用鹽。
3.根據權利要求1或2的化合物,其中R2是Cl,并且R3是F;或其
可藥用鹽。
4.根據權利要求1、2或3的化合物,其具有式III:

或其可藥用鹽。
5.根據權利要求1至4任一項的化合物,其具有式IV:

或其可藥用鹽。
6.根據權利要求1、2或3的化合物,其中R1是-C1-7烷基或C6-10芳
基;其中烷基任選被一個或多個獨立地選自下列的取代基取代:
-O-C(O)-O-C3-7環烷基、-O-C(O)-C3-7環烷基、-O-C(O)-C6-10芳基、
-O-C(O)-O-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C1-7烷基、-O-C(O)-C1-7烷基、雜芳基、
雜環基、-C(O)-雜環基、-C(O)NH2、-C(O)NH-C1-7烷基和-C(O)N(C1-7烷基)2;
或其可藥用鹽。
7.根據權利要求1、2或3的化合物,其中R1是-C1-4烷基,或R1選
自下列基團:

其中Ra、Rc、Rd和Re獨立地選自H和C1-4烷基,并且Rb是C1-4烷
基;或其可藥用鹽。
8.根據權利要求1、2或3的化合物,其中R1是Me、Et或選自下式
的基團:

其中Re是H或C1-4烷基,并且Rb是C1-4烷基;或其可藥用鹽。
9.根據權利要求1、2或3的化合物,其中R1是Me、Et或選自下式
的基團:

或其可藥用鹽。
10.藥物組合物,該藥物組合物包含根據權利要求1至9任一項的化
合物或其可藥用鹽,以及一種或多種可藥用載體。
11.組合產品,其包含:根據權利要求1至9任一項的化合物或其可
藥用鹽以及一種或多種選自下列的治療活性劑:HMG-Co-A還原酶抑制
劑、血管緊張素受體阻斷劑、血管緊張素轉化酶抑制劑、鈣通道阻斷劑、
內皮素拮抗劑、腎素抑制劑、利尿劑、ApoA-I模擬物、抗糖尿病劑、減肥
劑、醛固酮受體阻斷劑、內皮素受體阻斷劑、醛固酮合成酶抑制劑、CETP
抑制劑或磷酸二酯酶5型(PDE5)抑制劑。
12.在需要的個體中抑制中性內肽酶活性的方法,該方法包括:給個
體施用治療有效量的根據權利要求1至9任一項的化合物或其可藥用鹽。
13.在需要的個體中治療與中性內肽酶活性相關的障礙或疾病的方
法,該方法包括:給個體施用治療有效量的根據權利要求1至9任一項的
化合物或其可藥用鹽。
14.根據權利要求13的方法,其中障礙或疾病選自高血壓、頑固性高
血壓、肺性高血壓、肺動脈高壓、單純收縮期高血壓、外周血管疾病、心
力衰竭、充血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全、腎衰竭、
糖尿病性腎病、非糖尿病性腎病、造影劑誘導的腎病、腎病綜合征、腎小
球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、原發性腎病的蛋白尿、腎血管性高血壓、
糖尿病性視網膜病變和終末期腎病(ESRD)、內皮功能障礙、舒張期功能障
礙、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心房纖維
性顫動(AF)、心臟纖維化、心房撲動、有害的血管重塑、斑塊穩定、心肌
梗死(MI)、腎纖維化、多囊腎病(PKD)、腎衰竭、周期性水腫、Menière
病、醛固酮增多癥、高鈣尿癥、腹水、青光眼、月經障礙、早產難產、先
兆子癇、子宮內膜異位癥和生殖障礙、哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫停、炎癥、
白血病、疼痛、癲癇、情感障礙、抑郁、精神病性病癥、癡呆、老年意識
混亂、肥胖、胃腸障礙、創傷愈合、膿毒性休克、胃酸分泌功能障礙、高
腎素血癥、囊性纖維化、再狹窄、2型糖尿病、代謝綜合征、糖尿病并發
癥、動脈粥樣硬化以及男性和女性的性功能障礙。
15.根據權利要求13或14的方法,其中障礙或疾病選自高血壓、肺
性高血壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、充血性心
力衰竭或肺動脈高壓。
16.根據權利要求1至9任一項的化合物或其可藥用鹽,其用作藥物。
17.根據權利要求1至9任一項的化合物或其可藥用鹽在需要此類治
療的個體中治療與中性內肽酶活性相關的障礙或疾病中的用途。
18.權利要求17的用途,其中障礙或疾病選自高血壓、頑固性高血壓、
肺性高血壓、肺動脈高壓、單純收縮期高血壓、外周血管疾病、心力衰竭、
充血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全、腎衰竭、糖尿病性
腎病、非糖尿病性腎病、造影劑誘導的腎病、腎病綜合征、腎小球腎炎、
硬皮病、腎小球硬化、原發性腎病的蛋白尿、腎血管性高血壓、糖尿病性
視網膜病變和終末期腎病(ESRD)、內皮功能障礙、舒張期功能障礙、肥厚
性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心房纖維性顫動(AF)、
心臟纖維化、心房撲動、有害的血管重塑、斑塊穩定、心肌梗死(MI)、腎
纖維化、多囊腎病(PKD)、腎衰竭、周期性水腫、Menière病、醛固酮增多
癥、高鈣尿癥、腹水、青光眼、月經障礙、早產難產、先兆子癇、子宮內
膜異位癥和生殖障礙、哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫停、炎癥、白血病、疼痛、
癲癇、情感障礙、抑郁、精神病性病癥、癡呆、老年意識混亂、肥胖、胃
腸障礙、創傷愈合、膿毒性休克、胃酸分泌功能障礙、高腎素血癥、囊性
纖維化、再狹窄、2型糖尿病、代謝綜合征、糖尿病并發癥、動脈粥樣硬
化以及男性和女性的性功能障礙。
19.權利要求17或18的用途,其中障礙或疾病選自高血壓、肺性高
血壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、充血性心力衰
竭或肺動脈高壓。

說明書

作為NEP(中性內肽酶)抑制劑的取代的聯苯丁酰膦酸衍生物

發明領域

本發明提供了中性內肽酶(EC3.4.24.11)(NEP)抑制劑化合物,其用于
抑制外周NEP的用途以及使用其治療疾病的方法。

背景

內源性心房鈉尿肽(ANP),也稱為心房鈉尿因子(ANF),具有在哺乳動
物中利尿、促尿鈉排泄和血管舒張功能。天然的ANF肽被代謝滅活,特別
是通過已經認識到對應于酶中性內肽酶EC3.4.24.11的降解酶,還負責例
如腦啡肽的代謝失活。

中性內肽酶(又稱NEP,內肽酶24.11,EC3.4.24.11;中性溶媒,腦啡
肽酶;atriopeptidase;成纖維細胞金屬彈性蛋白酶,腎刷狀緣中性肽酶,
膜金屬肽酶A,MMEg.p.(homosapiens),常見的急性淋巴細胞白血病抗
原(CALLA)或CD抗原(CD10))是在許多器官和組織,包括腦、腎、肺、胃
腸道、心臟和外周脈管中發現的含鋅金屬蛋白酶。NEP裂解多種疏水殘基
的氨基側鏈上的肽底物[參見PharmacolRev,第45卷,第87頁(1993)]。
用于這種酶的底物包括但不限于心房鈉尿肽、腦鈉尿肽(BNP)、蛋氨酸腦
啡肽和亮氨酸腦啡肽、緩激肽、神經激肽A、內皮素-1、血管緊張素、腎
上腺髓質素、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素、胰島素B鏈、β淀粉樣蛋白
和P物質。其中的一些肽具有潛在的舒血管和神經激素功能,利尿和促尿
鈉排泄活性或調節行為作用。ANP是潛在的血管舒張和促尿鈉排泄劑[參
見JHypertens,第19卷,第1923頁(2001)]。對正常個體輸注ANP會產
生可重復的、顯著的尿鈉增多和利尿,包括鈉排泄分數、尿流速率和腎小
球濾過率的增加[參見JClinPharmacol,第27卷,第927頁(1987)]。然而,
ANP具有短的循環半衰期,并且腎皮質膜內的NEP已顯示是負責降解該
肽的主要酶[參見Peptides,第9卷,第173頁(1988)]。因此,中性內肽酶
抑制劑應會增加ANP的血漿水平,從而有望誘導促尿鈉排泄和利尿作用。

此外,NEP酶在血壓穩態和心血管健康中發揮重要作用。

中性溶媒和其它蛋白酶例如胰島素降解酶(IDE)、內皮素轉化酶(ECE)
和NEP-2是中樞神經系統(CNS)中淀粉樣-β肽(Aβ)的重要降解酶(BartDe
Strooper等人,2010,Physiol.Rev.90:465-494;NobuhisaIwata等人,2001,
Science,第292卷,1550-1552,JulieA.Carson等人,2002,Journalof
Neurochemistry.2002,81,1-8)。CNSA清除率的降低已被建議與神經變
性例如阿爾茨海默氏病的發展相關(KwasiG.Mawuenyega等人,2010,
Science,第330卷,1774)。因此,進入關鍵CNS區域的NEP抑制劑化合
物可以抑制CNSNEP并且增加CNSAβ肽的水平。

雖然藥理學上NEP對人類CNSAβ水平抑制的影響和認知是未知的,
并且沒有抑制NEP將與認知損傷相關的臨床適應證,但是NEP抑制劑顯
示出有益的外周抑制作用,具有最小化的CNS抑制作用可能是有利的,并
且有可能提供更高的安全水平。

發明概述

本發明的目的是提供具有有益的外周抑制作用和最小化抑制CNS作
用的新的NEP抑制劑化合物。本發明的NEP抑制劑具有受限的CNS通過,
因此,在外周治療劑量或暴露范圍內不會引起或很少地增加CNS內的Aβ
肽濃度。此外,本發明的NEP抑制劑化合物與WO2010/136493的化合物
相比不會引起或很少地增加CNS內的Aβ肽濃度。

本發明涉及如本文所述的化合物、藥物組合物及其使用方法。本發明
化合物的實例包括根據式I至IV中任一種的化合物,或者其可藥用鹽以及
實施例化合物。

因此,在實施方案1中,本發明提供了式(I)化合物:


其中:

R1是H;-C1-7烷基或C6-10芳基;其中烷基任選被一個或多個獨立地
選自下列的取代基取代:-O-C(O)-O-C3-7環烷基、-O-C(O)-C3-7環烷基、
-O-C(O)-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C1-7烷基、
-O-C(O)-C1-7烷基、雜芳基、雜環基、-C(O)-雜環基、-C(O)NH2、
-C(O)NH-C1-7烷基和-C(O)N(C1-7烷基)2;

R2是Cl、CH3或F;

R3是H、F、Cl、CH3或OCH3,或

其可藥用鹽。

本發明化合物通過抑制中性內肽酶,能增強生物活性肽的生物學作用。
因此,特別的是,該化合物可用于治療多種障礙,包括高血壓、肺性高血
壓、肺動脈高壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、心
力衰竭、充血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全(糖尿病性或
非糖尿病性)、腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖尿病性腎
病、造影劑誘導的腎病、腎病綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、
原發性腎病的蛋白尿、腎血管性高血壓、糖尿病性視網膜病變和終末期腎
病(ESRD)、內皮功能障礙、舒張期功能障礙、肥厚性心肌病、糖尿病性心
肌病、室上性和室性心律失常、心房纖維性顫動(AF)、心臟纖維化、心房
撲動、有害的血管重塑、斑塊穩定、心肌梗死(MI)、腎纖維化、多囊腎病
(PKD)、腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、周期性水腫、Menière病、醛固酮增
多癥(原發性和繼發性)、高鈣尿癥和腹水。此外,由于它們能增強ANP作
用,這些化合物可用于治療青光眼。作為其抑制中性內肽酶EC3.4.24.11
能力的進一步結果,本發明化合物在其它治療領域具有活性,包括例如治
療月經障礙、早產難產(pretermlabour)、先兆子癇、子宮內膜異位癥和生
殖障礙(特別是男性和女性不育、多囊卵巢綜合征、植入失敗)。另外,本
發明化合物可以治療哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫停、炎癥、白血病、疼痛、
癲癇、情感障礙例如抑郁和精神病性病癥,例如癡呆和老年意識混亂、肥
胖和胃腸障礙(特別是腹瀉和腸易激惹綜合征)、創傷愈合(特別是糖尿病性
和靜脈潰瘍和褥瘡)、膿毒性休克、胃酸分泌功能障礙、高腎素血癥、囊性
纖維化、再狹窄、2型糖尿病、代謝綜合征、糖尿病并發癥、動脈粥樣硬
化以及男性和女性的性功能障礙。

在優選的實施方案中,本發明化合物可用于治療心血管障礙。

在另一個實施方案中,本發明涉及在需要此類治療的個體中治療對中
性內肽酶抑制有響應的障礙或疾病的方法,該方法包括:給個體施用有效
量的根據式I-IV任一種的化合物或其可藥用鹽,使得個體中對中性內肽酶
抑制有響應的障礙或疾病得到治療。

在另一個實施方案中,本發明涉及藥物組合物,其包含根據式I-IV任
一種的化合物或其可藥用鹽,以及一種或多種可藥用載體。

在又一個實施方案中,本發明涉及包含根據式I-IV任一種的化合物或
其可藥用鹽的組合產品,以及一種或多種治療活性劑的藥物組合產品。

在另一個實施方案中,本發明涉及在需要該治療的個體中抑制中性內
肽酶的方法,該方法包括:給個體施用治療有效量的根據式I-IV任一種的
化合物或其可藥用鹽,使得中性內肽酶被抑制。

附圖簡述:

圖1.顯示了實施例1的X-射線粉末衍射圖譜。

圖2.顯示了實施例1的差示掃描量熱法(DSC)和熱重分析(TGA)。

發明詳述:

定義:

為了解釋本說明書的目的,將應用下列的定義,除非另有規定,并且
在適當的時候,以單數使用的術語也包括復數,反之亦然。

本文所用的術語“烷基”是指完全飽和的支鏈或無支鏈的(或直鏈或線
性)烴部分,其包含1至7個碳原子。優選地,烷基包含1至4個碳原子。
烷基的代表性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、
異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-
二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基。術語“C1-7烷基”是指具有1至7
個碳原子的烴。類似地,術語“C1-4烷基”是指具有1至4個碳原子的烴。

術語“芳基”是指在環部分具有6-10個碳原子的單環或二環芳族烴基。
術語“芳基”還指以下基團,其中芳族環被稠合到環烷基環,其中連接基
團在芳族環上或在稠合的環烷基環上。芳基的代表性實例是苯基、萘基、
六氫吲哚基、茚滿基或四氫萘基。術語“C6-10芳基”是指在環部分具有6
至10個碳原子的芳族烴基團。術語芳基是指取代和未取代的芳基。取代基
的實例是鹵素、C1-7烷基、鹵代-C1-7烷基、C1-7烷氧基。

本文所用的術語“環烷基”是指具有3-12個碳原子、優選3-8或3-7
個碳原子的飽和或不飽和但非芳族的單環、二環或三環烴基。對于二環和
三環環烷基系統,所有的環都是非芳族的。示例性的單環烴基包括環丙基、
環丁基、環戊基、環戊烯基,環己基和環己烯。示例性的二環烴基包括冰
片基、十氫萘基、二環[2.1.1]己基、二環[2.2.1]庚基、二環[2.2.1]庚烯基、
二環[2.2.2]辛基。示例性的三環烴基包括金剛烷基。術語“C3-7環烷基”是
指具有3至7個碳原子的環狀烴基。

本文所用的術語“烷氧基”是指烷基-O-,其中烷基如上文所定義。烷
氧基的代表性實例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁
氧基、叔丁氧基、戊基氧基、己基氧基、環丙基氧基-、環己基氧基-等。
優選地,烷氧基具有約1-6、更優選約1-4個碳。術語“C1-7烷氧基”是指
具有1至7個碳原子的烷氧基。

術語“雜芳基”包括單環或二環雜芳基,含有選自碳原子和1至5個
雜原子的5-10個環成員,并且每個雜原子獨立地選自O、N或S,其中S
和N可以被氧化成多種氧化態。對于二環雜芳基系統,該系統是全芳族的
(即所有的環都是芳族的)。術語雜芳基是指取代和未取代的雜芳基。取代
基的實例是鹵素、C1-7烷基、鹵代-C1-7烷基、C1-7烷氧基。

本文所用的術語“雜環基”或“雜環”是指任選取代的飽和或不飽和
的非芳族(部分不飽和的)環,其是4-、5-、6-或7-元單環,并且含有至少一
個選自O、S和N的雜原子,其中N和S還可以任選被氧化為多種氧化態。
對于二環和三環雜環基環系,非芳族環系被定義為非完全或部分不飽和的
環系。因此,二環和三環雜環基環系可以包括雜環基環系,其中稠環中的
一個是芳族的,但其它的是非芳族的。在一個實施方案中,雜環基部分代
表飽和的單環,含有5-7個環原子并且任選含有另外的選自O、S或N的
雜原子。該雜環基團可以在雜原子或碳原子上連接。該雜環基可以包括稠
環或橋環以及螺環。雜環的實例包括二氫呋喃基、二氧戊環基、二烷基、
二硫雜環己基、哌嗪基、吡咯烷、二氫吡喃基、氧雜硫雜環戊烷基、二硫
戊環、氧雜硫雜環己基、硫代嗎啉代、環氧乙烷基、氮丙啶基、氧雜環丁
烷基、氧雜環庚烷基、氮雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯烷
基、四氫吡喃基、哌啶基、嗎啉代、哌嗪基、氮雜基、氧雜基、氧雜
氮雜環庚烷基、氧雜硫雜環己基、硫雜環庚烷基、氮雜環庚烷基、二氧雜
環庚烷基和二氮雜環庚烷基。術語雜環基是指取代和未取代的雜環基。雜
環基上取代基的實例是鹵素、C1-7烷基、鹵代-C1-7烷基,C1-7烷氧基或氧
代。

術語“雜原子”包括除碳或氫以外的任何元素的原子。優選的雜原子
是氮、氧、硫和磷。在另一個實施方案中,雜原子是氮、氧或硫。

本發明化合物:

本文描述了本發明的多種實施方案。應當認識到,每個實施方案中所
述的特征可以與其它描述的特征組合,以提供進一步的實施方案。

在實施方案2中,某些式I化合物具有(R)立體化學,并且用式II化合
物表示:


其中:

R1是H;-C1-7烷基或C6-10芳基;其中烷基任選被一個或多個獨立地
選自下列的取代基取代:-O-C(O)-O-C3-7環烷基、-O-C(O)-C3-7環烷基、
-O-C(O)-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C1-7烷基、
-O-C(O)-C1-7烷基、雜芳基、雜環基、-C(O)-雜環基、-C(O)NH2、
-C(O)NH-C1-7烷基和-C(O)N(C1-7烷基)2;

R2是Cl、CH3或F;

R3是H、F、Cl、CH3或OCH3,或

其可藥用鹽.

在實施方案3中,本發明涉及根據實施方案1或2的化合物,其中R2
是Cl并且R3是F;或其可藥用鹽。

在實施方案4中,本發明涉及實施方案1、2或3的化合物,具有式
III:


或其可藥用鹽。

在實施方案5中,本發明涉及根據實施方案1至4任一個的化合物,
具有式IV:


或其可藥用鹽.

在實施方案6中,本發明涉及式III或IV化合物的前藥,即根據實施
方案1、2或3的式I或II化合物,其中R1是-C1-7烷基或C6-10芳基;其
中烷基任選被一個或多個獨立地選自下列的取代基取代:-O-C(O)-O-C3-7
環烷基、-O-C(O)-C3-7環烷基、-O-C(O)-C6-10芳基、-O-C(O)-O-C6-10芳基、
-O-C(O)-O-C1-7烷基、-O-C(O)-C1-7烷基、雜芳基、雜環基、-C(O)-雜環基、
-C(O)NH2、-C(O)NH-C1-7烷基和-C(O)N(C1-7烷基)2;或其可藥用鹽。

在實施方案7中,本發明涉及式III或IV化合物的前藥,即根據實施
方案1、2或3的式I或II化合物,其中R1是C1-4烷基或選自下式:


其中Ra、Rc、Rd和Re獨立地選自H或C1-4烷基,并且Rb是C1-4烷
基;或其可藥用鹽。

在實施方案8中,本發明涉及式III或IV化合物的前藥,即根據實施
方案1、2或3的式I或II化合物,其中R1是Me、Et或選自下式:


其中Re是H或C1-4烷基,并且Rb是C1-4烷基;或其可藥用鹽。

在實施方案9中,本發明涉及式III或IV化合物的前藥,即根據實施
方案1、2或3的式I或II化合物,其中R1是Me、Et或選自下式:


或其可藥用鹽。

在另一個實施方案中,根據本發明的個體化合物是列于下面實施例部
分的那些或其可藥用鹽。

在實施方案10中,本發明是實施例1的結晶形式A。

在實施方案11中,本發明是實施例1的結晶游離酸形式A,其特征在
于X-射線粉末衍射圖包含4個或更多個2θ值(CuKαλ=1.5418),選自
16.5±0.2°、17.5±0.2°、17.8±0.2°、18.7±0.2°、20.2±0.2°、20.7±0.2°、21.7±0.2°、
21.9±0.2°、24.1±0.2°、24.6±0.2°、25.0±0.2°、25.5±0.2°和27.4±0.2°,在約
22℃的溫度測定,并且X-射線的波長λ為1.5418

在實施方案12中,本發明是實施例1的結晶游離酸形式A,其特征在
于X-射線粉末衍射圖包含4個或更多個2θ值(CuKαλ=1.5418),選自
16.5±0.2°、17.5±0.2°、17.8±0.2°、18.7±0.2°、20.2±0.2°、20.7±0.2°、21.7±0.2°、
21.9±0.2°、24.1±0.2°、24.6±0.2°、25.0±0.2°、25.5±0.2°和27.4±0.2°,在約
22℃的溫度測定,并且X-射線的波長λ為1.5418

在實施方案13,本發明是實施例1的結晶游離酸形式A,其X-射線粉
末衍射圖與圖1所示的X-射線粉末衍射圖基本上相同。

術語“基本上相同”參照X-射線衍射峰位置,表示典型的峰位置和強
度的變異性都考慮在內。例如,本領域的技術人員將理解的是,峰位置(2θ)
會顯示一些裝置間變異性,典型地高達0.2°。偶爾,變異性可能高于0.2°,
這取決于裝置校準的差異。此外,本領域技術人員將理解的是,相對峰強
度將顯示裝置間變異性以及由于結晶度、優選的取向、制備的樣品表面和
其它本領域技術人員已知的因素的變異性,并且應該僅作為定性測量。

在實施方案14,本發明是實施例1的結晶游離酸形式A,其差示掃描
量熱(DSC)熱分析圖與圖2所示的基本上相同。

在實施方案15中,本發明是實施例1的結晶游離酸形式A,其熱重分
析(TGA)圖與圖2所示的基本上相同。

應當指出的是,本發明化合物的某些結構包含不對稱的碳原子。因此,
應當理解的是,由這種不對稱產生的異構體(例如所有對映異構體和非對映
異構體)都包括在本發明的范圍之內,除非另有說明。這些異構體可以通過
經典分離技術和通過立體化學控制的合成來獲得基本上純的形式。此外,
在本申請中討論的結構和其它化合物和部分也包括其所有的互變異構體。

本文所用的術語“異構體”指具有相同分子式但是在原子的排列和構
型上有差異的不同化合物。另外,本文所用的術語“旋光異構體”或“立
體異構體”指本發明給定化合物可能存在的多種立體異構構型的任一種,
并且包括幾何異構體。應當理解的是,取代基可以連接在碳原子的手性中
心。因此,本發明包括化合物的對映異構體、非對映異構體或外消旋體。
“對映異構體”是彼此為非相互重疊的鏡像的立體異構體對。對映異構體
對的1:1混合物是“外消旋”混合物。適當時,該術語用于指定外消旋混
合物。“非對映異構體”和“非對映體”可以互換使用并且是具有至少兩
個不對稱原子但不互為鏡像的立體異構體。根據Cahn-lngold-PrelogR-S
系統指定絕對立體化學。當化合物是純對映異構體時,可以通過R或S來
指定每個手性碳的立體化學。絕對構型未知的被拆分的化合物可以被標明
為(+)或(-),這取決于它們在鈉D線的波長處使平面偏振光旋轉的方向(右
旋或左旋)。一些本文描述的化合物含有一個或多個不對稱中心或軸,從而
可能產生對映異構體、非對映異構體和其它就絕對立體化學而言可被定義
為(R)-或(S)-的立體異構形式。本發明旨在包括所有可能的異構體,包括外
消旋混合物、旋光純形式和中間體混合物。旋光活性(R)-和(S)-異構體可以
使用手性合成子或手性試劑制備,或使用傳統技術拆分。如果該化合物含
有雙鍵,則取代基可以為E或Z構型。如果化合物含有雙取代的環烷基,
則該環烷基取代基可以具有順式或反式構型。還意欲包括所有互變異構形
式。

本發明化合物的任何不對稱原子(例如碳等)可以以外消旋的或對映異
構體富集的形式、例如以(R)-、(S)-或(R,S)-構型存在。在一些實施方案中,
在(R)-或(S)-構型中不對稱原子各自具有至少50%對映異構過量、至少60%
對映異構過量、至少70%對映異構過量、至少80%對映異構過量、至少
90%對映異構過量、至少95%對映異構過量或至少99%對映異構過量。如
果可能的話,在具有不飽和鍵的原子處的取代基可以以順式-(Z)-或反式
-(E)-形式存在。

因此,如本文所用的本發明的化合物可以是可能的異構體、旋轉異構
體、阻轉異構體、互變異構體之一或其混合物的形式,例如作為基本上純
的幾何(順式或反式)異構體、非對映異構體、旋光異構體(對映體)、外消旋
體或其混合物。

可以根據組分的物理化學差異、例如通過色譜法和/或分級結晶將任意
的所得異構體混合物分離為純的或基本上純的幾何或旋光異構體、非對映
異構體、外消旋體。

可以通過已知方法將任意的所得終產物或中間體的外消旋體拆分為旋
光對映體,例如通過分離用具有旋光活性的酸或堿得到的其非對映異構的
鹽并且釋放具有旋光活性的酸性或堿性化合物來進行。特別是堿性部分可
以由此用于將本發明的化合物拆分為其旋光對映體,例如通過將用具有旋
光活性的酸所形成的鹽進行分級結晶而進行拆分,所述的具有旋光活性的
酸例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O’-對甲苯酰
基酒石酸、扁桃酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸。還可以通過手性色譜法、例
如使用手性吸附劑進行的高壓液相色譜法(HPLC)來拆分外消旋產物。

本文所用的術語“可藥用鹽”指保留本發明的化合物的生物學有效性
和性能并且通常不是生物學或其它方面不希望的鹽。在很多情況下,本發
明的化合物由于存在氨基和/或羧基或與其類似的基團而能夠形成酸和/或
堿鹽。

可以與無機酸和有機酸形成可藥用的酸加成鹽,例如乙酸鹽、天冬氨
酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫
鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯茶堿鹽(chlortheophyllonate)、
檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽(ethandisulfonate)、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、葡糖酸
鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳
糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、
甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八烷
酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二
氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、磺基水楊酸鹽、
酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽和三氟乙酸鹽。

可以由其衍生鹽的無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸
等。

可以由其衍生鹽的有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來
酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺
酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸等。可藥用堿加成鹽可以與無機堿和
有機堿形成。

可由其衍生鹽的無機堿包括例如銨鹽以及周期表I至XII的金屬。在
一些實施方案中,鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅和銅,特別
適合的鹽包括銨、鉀、鈉、鈣和鎂鹽。

可由其衍生鹽的有機堿包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天
然存在的取代的胺、環胺、堿性離子交換樹脂等。一些有機胺包括異丙胺、
二芐乙二胺(benzathine)、膽堿鹽、二乙醇胺、二乙胺、賴氨酸、葡甲胺、
哌嗪和氨丁三醇。

本發明的可藥用鹽可以通過常規化學方法由母體化合物、堿性或酸性
部分合成。通常,這類鹽可以如下制備:使這些化合物的游離酸形式與化
學計算量的適當的堿(例如Na、Ca、Mg或K的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸
氫鹽等)反應,或者使這些化合物的游離堿形式與化學計算量的適當的酸反
應。這類反應通常在水或有機溶劑或兩者的混合物中進行。通常,在可行
的情況下,使用非水介質例如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是可取
的。另外適合的鹽的列表可見于例如“Remington'sPharmaceutical
Sciences”,第20版,MackPublishingCompany,Easton,Pa.(1985);和
Stahl和Wermuth的“HandbookofPharmaceuticalSalts:Properties,
Selection,andUse”(Wiley-VCH,Weinheim,德國,2002)。

本文給出的任意結構式還旨在表示該化合物的未標記形式以及同位素
標記形式。例如,在本文任何結構式中由“H”表示的任何氫旨在表示氫
的所有同位素形式(如1H、2H或D、3H);本文任何結構式中由“C”表示
的任何碳旨在表示碳的所有同位素形式(例如11C、13C、14C);任何用“N”
表示的氮旨在表示氮的所有同位素形式(例如14N、15N)。包括在本發明中
的同位素的其它實例包括氧、硫、磷、氟、碘和氯的同位素,例如18F、31P、
32P、35S、36Cl、125I。本發明包括本文定義的多種同位素標記的化合物,例
如其中存在放射性同位素例如3H、13C和14C的那些。在一個實施方案中,
本文結構式中的原子以其天然豐度存在。在另一個實施方案中,一個或多
個氫原子可以富含2H;或/和一個或多個碳原子可以富含11C,13C或14C;
或/和一個或多個氮可以富含14N。這類同位素標記的化合物可用于代謝研
究(用14C)、反應動力學研究(用例如2H或3H)、檢測或成像技術(例如正電
子放射斷層造影術(PET)或單光子放射計算機斷層成像術(SPECT),包括藥
物或底物組織分布測定)或用于患者的放射性治療中。特別是,18F或標記
的化合物對于PET或SPECT研究可以是特別理想的。同位素標記的本發
明的化合物及其前藥通常可以通過執行下述流程或實施例和制備例中所公
開的方法、通過用容易獲得的同位素標記試劑代替非同位素標記試劑而制
備。

而且,用較重同位素、特別是氘(即2H或D)富集可以提供一些治療優
勢,這是由于更高的代謝穩定性所致,例如體內半衰期增加或劑量需求減
少或治療指數改善。應當理解的是,上下文中的氘被視為式I至IV化合物
的取代基。該較重同位素、特別是氘的濃度可以通過同位素富集因子來定
義。本文所用的術語“同位素富集因子”表示指定同位素的同位素豐度與
天然豐度之間的比值。如果本發明化合物中的取代基是指定的氘,則該化
合物對各指定氘原子而言具有的同位素富集因子為至少3500(在各指定氘
原子上52.5%氘摻入)、至少4000(60%氘摻入)、至少4500(67.5%氘摻入)、
至少5000(75%氘摻入)、至少5500(82.5%氘摻入)、至少6000(90%氘摻
入)、至少6333.3(95%氘摻入)、至少6466.7(97%氘摻入)、至少6600(99%
氘摻入)或至少6633.3(99.5%氘摻入)。

同位素富集的式I至IV化合物通常可以通過本領域技術人員已知的常
規技術或者通過與所附實施例和制備例類似的方法、采用適當的同位素富
集的試劑代替之前使用的未富集的試劑來制備。

本發明的可藥用溶劑化物包括其中結晶溶劑可以被同位素取代的那
些,例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。

含有能夠作為氫鍵供體和/或受體的基團的本發明化合物、即式I至IV
化合物能夠與適合的共結晶形成劑形成共結晶。這些共結晶可以由式I至
IV化合物通過已知的共結晶形成方法來制備。這類方法包括研磨、加熱、
共升華、共熔融或在溶液中在結晶條件下使式(I)化合物與共結晶形成劑接
觸并且分離由此形成的共結晶。適合的共結晶形成劑包括WO2004/078163
中所述的那些。因此,本發明進一步提供了包含式I至IV化合物或其可藥
用鹽的共結晶。

本文所用的術語“可藥用載體”包括任何和所有溶劑、分散介質、包
衣劑、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌劑、抗真菌劑)、等張
劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩定劑、粘合劑、賦形劑、崩
解劑、潤滑劑、甜味劑、矯味劑、染料等及其組合,如本領域普通技術人
員已知的(例如參見:Remington’sPharmaceuticalSciences,第18版,Mack
PrintingCompany,1990,第1289-1329頁)。除了在任何常規載體與活性成
分不相容的情況下,可關注其在治療性或藥物組合物中的用途。

術語本發明的化合物的“治療有效量”指將引起個體的生物學或醫學
響應、例如降低或抑制酶或蛋白質活性或者改善癥狀、減輕病癥、減慢或
延緩疾病進程或者預防疾病等的本發明的化合物的量。在一個非限制性的
實施方案中,術語“治療有效量”指如下定義的本發明的化合物的量:當
施用于個體時,可有效地:(1)至少部分減輕、抑制、阻止和/或改善病癥、
障礙或疾病或其癥狀,所述的病癥、障礙或疾病或其癥狀(i)通過抑制中性
內肽酶改善,或(ii)與中性內肽酶活性相關,或(iii)特征在于中性內肽酶活
性異常;或(2)降低或抑制中性內肽酶的活性;或(3)降低或抑制中性內肽酶
的表達。在另外的非限制性的實施方案中,術語“治療有效量”指如下定
義的本發明的化合物的量:當施用于細胞或組織或非細胞生物材料或介質
時,可有效地至少部分降低或抑制中性內肽酶的活性;或至少部分降低或
抑制中性內肽酶的表達。

本文所用的術語“個體”指動物。通常,動物是哺乳動物。個體還指
例如靈長類動物(例如人)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小
鼠、魚、鳥等。在一些實施方案中,個體是靈長類動物。在另外的實施方
案中,個體是人。

本文所用的術語“抑制”指減輕或抑制所指定的病癥、癥狀或者障礙
或疾病,或者生物學活性或過程的基線活性顯著下降。

在一個實施方案中,本文所用的術語任意疾病或障礙的“治療”指改
善疾病或障礙(即減緩或停止或減輕疾病或其臨床癥狀中的至少一種的發
展)。在另外的實施方案中,“治療”指緩解或改善至少一種身體參數、包
括不能被患者辨別的那些。在另外的實施方案中,“治療”指調節身體方
面(例如穩定可辨別的癥狀)或生理方面(例如穩定身體參數)或此兩個方面
的疾病或障礙。在另外的實施方案中,“治療”指阻止或延緩疾病或障礙
的發作或發展或進程。

如本文所用的那樣,如果個體將在生物學上、醫學上或生活質量上受
益于這類治療,則該個體“需要”該治療。

如本文所用的那樣,本發明的上下文(特別是權利要求的上下文)中所
用的術語“一個”、“一種”、“該”和類似術語被視為覆蓋單數和復數,
本文另有指示或上下文清楚地矛盾除外。

本文所述的所有方法可以以任意適宜的順序進行,本文另有指示或上
下文清楚地矛盾除外。本文提供的任何和所有實例或示例性語言(例如“例
如”)的使用僅意欲更好地說明本發明,而不是對另外要求保護的本發明的
范圍構成限定。

本發明化合物可以以游離形式、作為其鹽或作為其前藥衍生物獲得。

當堿性基團和酸性基團都存在于同一分子中時,本發明化合物還可以
形成內鹽,例如兩性分子。

本發明還提供了本發明化合物的前藥,其在體內轉化為本發明化合物。
前藥是在將前藥施用于個體后通過體內生理作用例如水解、代謝等被化學
修飾為本發明化合物的有活性或無活性的化合物。涉及制備和使用前藥的
適宜性和技術是本領域技術人員熟知的。前藥可以在概念上被分成非專有
的兩類:生物前體前藥和載體前藥。參見ThePracticeofMedicinal
Chemistry,第31-32章(Wermuth編輯,AcademicPress,圣地亞哥,加利
福尼亞洲,2001)。通常,生物前體前藥是無活性或者與相應的活性藥物化
合物相比具有低活性的化合物,其含有一個或多個保護基并且通過代謝或
溶劑解被轉化為活性形式。活性藥物形式和任何被釋放的代謝產物均應具
有可接受的低毒性。載體前藥是含有例如改善攝取和/或定位遞送到作用部
位的轉運部分的藥物化合物。期望的是,對于這類載體前藥,藥物部分與
轉運部分之間的連接是共價鍵,前藥是無活性的或者比藥物化合物的活性
低,并且任何所釋放的轉運部分是可接受地無毒的。對于其中轉運部分用
于促進攝取的前藥而言,通常轉運部分的釋放應該是迅速的。在其它情況
下,希望采用可提供緩慢釋放的部分,例如某些聚合物或其它部分例如環
糊精。載體前藥可以例如用于改善一種或多種以下性質:增加親脂性、增
加藥理作用的持續時間、增加部位特異性、降低毒性和不良反應和/或改善
藥物配制性(例如穩定性、水溶性、抑制不希望的感官或生理化學性質)。
例如,可以通過(a)羥基與親脂性羧酸(例如具有至少一個親脂部分的羧酸)
的酯化或者(b)羧酸基團與親脂性醇(例如具有至少一個親脂部分的醇,例如
脂肪族醇)的酯化來增加親脂性。

示例性的前藥例如游離羧酸的酯以及硫醇的S-酰基衍生物和醇或酚的
O-酰基衍生物,其中酰基具有如本文定義的含義。適合的前藥通常是可在
生理條件下通過溶劑解而轉化為母體羧酸的可藥用的酯衍生物,例如低級
烷基酯、環烷基酯、低級鏈烯基酯、芐基酯、單或二取代的低級烷基酯,
例如ω-(氨基、單或二-低級烷基氨基、羧基、低級烷氧基羰基)-低級烷基
酯、α-(低級烷酰基氧基、低級烷氧基羰基或二-低級烷基氨基羰基)-低級烷
基酯例如新戊酰基氧基甲基酯等,它們是本領域中常規使用的。此外,胺
已經被掩蔽為芳基羰基氧基甲基取代的衍生物,其在體內被酯酶裂解,釋
放出游離藥物和甲醛(Bundgaard,J.Med.Chem.2503(1989))。而且,含有
酸性NH基團例如咪唑、二酰亞胺、吲哚等的藥物已經被N-酰基氧基甲基
所掩蔽(Bundgaard,DesignofProdrugs,Elsevier(1985))。羥基已經被掩蔽
為酯和醚。EP039,051(Sloan和Little)公開了曼尼西堿異羥肟酸前藥、它
們的制備和用途。

此外,本發明化合物,包括它們的鹽,也可以以它們的水合物的形式
獲得,或者包括用于它們的結晶的其它溶劑。

通用合成方案:

本發明化合物可以使用下列流程圖、實施例中描述的方法,以及通過
使用本領域已知的技術合成。本文描述的所有化合物都包括在本發明中作
為化合物。本發明化合物可以根據下列流程圖中描述的至少一種方法合成。

在本文的范圍內,只有這樣的基團才稱為“保護基”:其可容易地除
去,并且不是本發明化合物的特別預期終產物的組成,上下文另有說明除
外。由這類保護基保護官能團、保護基本身及其裂解反應例如在標準參考
著作中有描述,這些著作例如有:J.F.W.McOmie,“ProtectiveGroupsin
OrganicChemistry”,PlenumPress,倫敦和紐約1973;T.W.Greene和P.
G.M.Wuts,“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis”,第3版,Wiley,紐
約1999。

具有至少一個成鹽基團的本發明化合物的鹽可以以本身已知的方法來
制備。例如,具有酸性基團的本發明化合物的鹽可以例如通過如下方法而
形成:將化合物用金屬化合物、例如適合的有機羧酸的堿金屬鹽例如2-乙
基己酸的鈉鹽、用有機堿金屬或堿土金屬化合物、例如相應的氫氧化物、
碳酸鹽或碳酸氫鹽例如氫氧化鈉或鉀、碳酸鈉或鉀或者碳酸氫鈉或鉀、用
相應的鈣化合物或者用氨或適合的有機胺進行處理,優選使用化學計算量
或僅略微過量的成鹽劑。本發明化合物的酸加成鹽以常規方法、例如通過
將化合物用酸或適合的陰離子交換試劑進行處理而得到。含有酸性和堿性
成鹽基團、例如游離羧基和游離氨基的本發明化合物的內鹽可以例如通過
將鹽例如酸加成鹽例如用弱堿中和至等電點或者通過用離子交換劑進行處
理而形成。

鹽可以以常規方法轉化為游離化合物;金屬和銨鹽可以例如通過用適
合的酸處理而轉化,并且酸加成鹽例如通過用適合的堿性試劑處理而轉化。

可根據本發明得到的異構體的混合物可以以本身已知的方式被分離成
單獨的異構體;非對映異構體可以例如通過在多相溶劑混合物之間分配、
重結晶和/或色譜分離、例如經硅膠或通過例如中壓液相色譜法經反相柱進
行分離,并且外消旋體可以例如通過與旋光純的成鹽試劑形成鹽以及分離
可如此得到的非對映異構體的混合物、例如通過分級結晶或通過色譜法經
旋光活性的柱材料進行分離。

可以按照標準方法、例如使用色譜法、分配法、(重)結晶等將中間體
和終產物進行后處理和/或純化。

以下內容通常應用于上下文所提到的所有方法。

所有以上提到的方法步驟可以在如下條件下進行:在本身已知的反應
條件、包括具體提到的那些條件下,在沒有或通常有溶劑或稀釋劑、例如
包括對所用試劑惰性并且使其溶解的溶劑或稀釋劑的存在下,在有或無催
化劑、縮合劑或中和劑、例如離子交換劑、例如陽離子交換劑例如H+形式
的陽離子交換劑的存在下,這取決于反應和/或反應物的性質,于降低溫度、
常溫或升高溫度,例如在約-100℃至約190℃、例如包括約-80℃至約150
℃的溫度范圍內,例如于-80至-60℃、于室溫、于-20至40℃或在回流溫
度,在大氣壓下或在封閉容器中,適合時在壓力下,和/或在惰性氣氛中、
例如在氬氣或氮氣氣氛下。

在反應的所有階段,所形成的異構體的混合物可以被分離成單獨的異
構體、例如非對映異構體或對映異構體,或者被分離成異構體的任意預期
混合物、例如外消旋體或非對映異構體混合物,例如類似于“另外方法步
驟”中所述的方法。

可以從中選擇適于任意特定反應的那些溶劑的溶劑包括具體提到的那
些,或者例如水;酯,例如低級鏈烷酸低級烷基酯,例如乙酸乙酯;醚,
例如脂肪族醚例如乙醚或者環狀醚例如四氫呋喃或二烷;液體芳族烴,
例如苯或甲苯;醇,例如甲醇、乙醇或者1-或2-丙醇;腈,例如乙腈;鹵
代烴,例如二氯甲烷或氯仿;酰胺,例如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺;
堿,例如雜環氮堿,例如吡啶或N-甲基吡咯烷-2-酮;羧酸酐,例如低級鏈
烷酸酐,例如乙酸酐;環狀、直鏈或支鏈烴,例如環己烷、己烷或異戊烷、
甲基環己烷;或者那些溶劑的混合物,例如水性溶液,在方法描述中另有
說明除外。這類溶劑混合物還可用于后處理、例如通過色譜法或分配進行
的后處理。

化合物、包括它們的鹽還可以以水合物的形式而得到,或者它們的晶
體可以例如包括用于結晶的溶劑。可以存在不同的結晶形式。

本發明還涉及如下的那些方法形式:其中將可在方法的任意階段作為
中間體得到的化合物用作原料并且進行其余的方法步驟,或者,其中原料
在反應條件下形成或者以衍生物的形式、例如以保護的形式或以鹽的形式
進行使用,或者可通過本發明的方法得到的化合物在方法條件下被制備并
且在原位被進一步加工。

用于合成本發明的化合物的所有原料、結構單元、試劑、酸、堿、脫
水劑、溶劑和催化劑是可商購獲得的或者可以通過本領域普通技術人員已
知的有機合成方法來制備(Houben-Weyl,第4版,1952,Methodsof
OrganicSynthesis,Thieme,第21卷)。

通常,式I、II、III或IV化合物可以根據下文所提供的流程圖制備。


其中R1、R2、R3如上面的權利要求1定義,并且P1是氨基保護基(例
如叔丁氧基羰基)。

在步驟(2a)中,可以使用用于Suzuki偶聯反應的標準方法,例如使用
鈀(或鎳)類[例如Pd(PPh3)4、PdCl2(dppf)、Pd(OAc)2/膦(例如PPh3、dppf、
PCy3、P(tBu)3、XPhos)、Pd/C、Pd2(dba)3/膦(例如PPh3、dppf、PCy3、
P(tBu)3、XPhos)、Ni(COD)2/膦(或dppe、dppb、PCy3)、Ni(dppf)Cl2]、堿
(例如KF、CsF、K3PO4、Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、NaOH、KOH、NaO-t-Bu、
KO-t-Bu)和(R2)n-PhB(OH)2[或(R2)n-PhBF3K]。

在步驟(2b)中,可以使用烷基化羧酸的標準方法,例如使用R-LG/堿(其
中LG是離去基團,選自但不限于Cl、Br、I、OMs、OTs或OTf)(例如
K2CO3、NaHCO3、Cs2CO3或K3PO4),亞硫酰氯(或草酰氯)/R1-OH,DCC(或
EDCI)/DMAP/R1-OH,BOP/R1OK(或R1ONa),(R1O)2CHNMe2、
CDI/DBU/R1-OH,其中R1如上定義。

在步驟(2c)中,可以使用用于除去P1保護基的標準方法,例如使用TFA
或HCl的酸誘導裂解。

在步驟(2d)中,可以使用用于酰胺偶聯的標準方法連接3-膦酰基丙酸,
例如但不限于二異丙基乙基胺。

本發明進一步包括本發明的方法的任何變通實施方案,其中將在其任
何階段可獲得的中間體產物用作原料并且進行剩余的步驟,或者其中原料
在反應條件下原位形成,或者其中反應組分以它們的鹽或旋光純的對映體
形式使用。

本發明化合物和中間體還可以按照本領域技術人員通常已知的方法相
互轉化。

在另一方面,本發明提供了包含本發明化合物或其可藥用鹽和一種或
多種可藥用載體的藥物組合物。藥物組合物可以被配制用于特別的施用途
徑,例如口服施用、非腸道施用和直腸施用等。此外,本發明的藥物組合
物還可以被制備成固體形式(包括但不限于膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、
散劑或栓劑)或液體形式(包括但不限于溶液劑、混懸劑或乳劑)。藥物組合
物可以進行常規的藥物操作例如滅菌和/或可以含有常規的惰性稀釋劑、潤
滑劑或緩沖劑以及輔助劑例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑和緩沖劑
等。

通常,藥物組合物是片劑或明膠膠囊劑,其包含活性成分以及:

a)稀釋劑,例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/
或甘氨酸;

b)潤滑劑,例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙
二醇;對于片劑還有

c)粘合劑,例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、
羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮;如果需要的話,還有

d)崩解劑,例如淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或者泡騰混合物;和/

e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。

可以根據本領域已知的方法對片劑進行膜包衣或腸溶包衣。

適于口服施用的組合物包括如下形式的有效量的本發明化合物:片劑、
錠劑、水性或油性混懸劑、可分散的粉末或顆粒、乳劑、硬或軟膠囊劑或
者糖漿劑或酏劑。用于口服使用的組合物根據本領域已知用于制備藥物組
合物的任何方法來制備,并且這類組合物可以含有一種或多種選自甜味劑、
矯味劑、著色劑和防腐劑的試劑以提供藥學上美觀和可口的制劑。片劑可
以含有活性成分以及適于制備片劑的無毒的可藥用賦形劑。這些賦形劑例
如有:惰性稀釋劑,例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉;制粒
劑和崩解劑,例如玉米淀粉或海藻酸;粘合劑,例如淀粉、明膠或阿拉伯
膠;以及潤滑劑,例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。片劑是未包衣的或者
通過已知技術包衣以延緩在胃腸道中的崩解和吸收并且由此提供歷經更長
時間的持續作用。例如,可以采用延時材料例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂
酸甘油酯。用于口服使用的制劑可以作為其中活性成分與惰性固體稀釋劑
例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬明膠膠囊劑存在,或者作為其中活
性成分與水或油介質例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的軟明膠膠囊劑
存在。

一些可注射的組合物是水性等張溶液劑或混懸劑,并且栓劑可有利地
由脂肪乳劑或混懸劑來制備。所述組合物可以被滅菌和/或含有輔助劑例如
防腐劑、穩定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進劑、調節滲透壓的鹽和/或緩
沖劑。此外,它們還可以含有其它治療上有價值的物質。所述組合物分別
根據常規的混合、制粒或包衣方法制備,并且含有約0.1-75%或含有約
1-50%的活性成分。

適于透皮應用的組合物包括有效量的本發明的化合物和適合的載體。
適于透皮遞送的載體包括可吸收的藥理學上可接受的溶劑以幫助穿過宿主
的皮膚。例如,透皮裝置是繃帶劑的形式,其包含背襯膜、含有化合物和
任選的載體的貯庫、任選的速率控制屏障(歷經延長了的時間以受控和預定
的速率遞送化合物至宿主皮膚)和確保該裝置在皮膚上的工具。

適于局部應用、例如應用于皮膚和眼的組合物包括水性溶液劑、混懸
劑、軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑或可噴霧制劑,例如用于通過氣霧劑等進行
遞送。這類局部遞送系統可特別適于皮膚應用。因此,它們特別適合用于
局部,包括本領域眾所周知的美容化妝制劑。這類制劑可以含有增溶劑、
穩定劑、張力增強劑、緩沖劑和防腐劑。

如本文所用的局部應用還可以涉及吸入或經鼻應用。它們可以方便地
以干粉末的形式(單獨或作為混合物、例如與乳糖的干混合物或混合的組分
顆粒、例如與磷脂混合)由干粉末吸入器遞送或以氣霧噴霧形式由加壓容
器、泵、噴霧器、霧化器或噴散器在使用或不使用適合的拋射劑的情況下
遞送。

本發明進一步提供了包含本發明的化合物作為活性成分的無水藥物組
合物和劑型,因為水可以促進一些化合物的降解。

本發明的無水藥物組合物和劑型可以使用無水或低含水量的成分以及
低含水量或低濕度的條件來制備。可以制備無水藥物組合物并且儲存以便
保持其無水性質。因此,使用已知阻止暴露于水的材料來包裝無水組合物,
以便它們可以被包括在適合的配方藥盒中。適合包裝的實例包括但不限于
密封箔、塑料、單位劑量容器(例如小瓶)、泡罩包裝和窄條包裝。

本發明還提供了包含一種或多種使作為活性成分的本發明的化合物的
降解速率降低的物質的藥物組合物和劑型。這類物質在本文中稱為“穩定
劑”,其包括但不限于抗氧化劑例如抗壞血酸、pH緩沖劑或鹽緩沖劑等。

游離形式或可藥用鹽形式的根據式I至IV任意一個的化合物或其可藥
用鹽表現出有價值的藥理學性質,例如中性內肽酶調節性質,例如在下面
部分提供的體外和體內試驗顯示的,并且因此表明可用于治療。

本發明化合物或其可藥用鹽可用于治療選自下列的適應證:高血壓、
肺性高血壓、肺動脈高壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管
疾病、心力衰竭、充血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全(糖
尿病性或非糖尿病性)、腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖
尿病性腎病、造影劑誘導的腎病、腎病綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、腎
小球硬化、原發性腎病的蛋白尿、腎血管性高血壓、糖尿病性視網膜病變
和終末期腎病(ESRD)、內皮功能障礙、舒張期功能障礙、肥厚性心肌病、
糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、心房纖維性顫動(AF)、心臟纖
維化、心房撲動、有害的血管重塑、斑塊穩定、心肌梗死(MI)、腎纖維化、
多囊腎病(PKD)、腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、周期性水腫、Menière病、
醛固酮增多癥(原發性和繼發性)、高鈣尿癥、腹水、青光眼、月經障礙、
早產難產(pretermlabour)、先兆子癇、子宮內膜異位癥和生殖障礙(特別是
男性和女性不育、多囊卵巢綜合征、植入失敗)、哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫
停、炎癥、白血病、疼痛、癲癇、情感障礙例如抑郁和精神病性病癥,例
如癡呆和老年意識混亂、肥胖和胃腸障礙(特別是腹瀉和腸易激惹綜合征)、
創傷愈合(特別是糖尿病性和靜脈潰瘍和褥瘡)、膿毒性休克、胃酸分泌功
能障礙、高腎素血癥、囊性纖維化、再狹窄、2型糖尿病、代謝綜合征、
糖尿病并發癥、動脈粥樣硬化以及男性和女性的性功能障礙。因此,作為
進一步的實施方案,本發明提供了根據式I至IV任一個的化合物或其可藥
用鹽的用途。在進一步的實施方案,該治療選擇與中性內肽酶活性相關的
疾病。在另一個實施方案中,所述疾病選自上述列出的,適合的是高血壓、
肺性高血壓、肺動脈高壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管
疾病、心力衰竭、充血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全、
腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖尿病性腎病、造影劑誘
導的腎病、2型糖尿病和糖尿病并發癥,并且最適合的是心血管障礙,例
如高血壓、腎功能不全包括水腫和充血性心力衰竭。

因此,作為進一步的實施方案,本發明提供了根據式I至IV任一個化
合物或其可藥用鹽的治療用途。在進一步的實施方案中,該治療選自可通
過抑制中性內肽酶活性被治療的疾病。

在另一個實施方案中,本發明提供了治療與中性內肽酶活性相關的疾
病的方法,該方法包括施用治療上可接受量的根據式I至IV任一個的化合
物或其可藥用鹽。在進一步的實施方案中,所述疾病選自上述列出的,適
合的是高血壓、肺性高血壓、肺動脈高壓、單純收縮期高血壓、頑固性高
血壓、外周血管疾病、心力衰竭、充血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、
腎功能不全、腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖尿病性腎
病、造影劑誘導的腎病、2型糖尿病和糖尿病并發癥,并且最適合的是心
血管障礙,例如高血壓、腎功能不全包括水腫和充血性心力衰竭。

對于約50-70kg的個體而言,本發明的藥物組合物或組合產品可以是
約1-1000mg活性成分或者約1-500mg或約1-250mg或約1-150mg或約
0.5-100mg或約1-50mg活性成分的單位劑量。化合物、其藥物組合物或
組合產品的治療有效劑量取決于個體的種屬、體重、年齡和個體情況、所
治療的障礙或疾病或其嚴重性。具有普通技術的醫師、臨床醫師或獸醫可
以容易地確定各活性成分預防、治療或抑制障礙或疾病進程所需的有效量。

以上引用的劑量性質可在體外和體內試驗中有利地使用哺乳動物例如
小鼠、大鼠、狗、猴或其離體器官、組織和制備物來證明。本發明化合物
可以在體外以溶液、例如水性溶液的形式以及在體內經腸內、非腸道、有
利地經靜脈內、例如作為混懸液或在水性溶液中應用。體外劑量的范圍可
以在約10-3摩爾至10-9摩爾濃度之間。體內治療有效量的范圍可以根據施
用途徑為約0.1-500mg/kg或約1-100mg/kg。

本發明化合物的活性可以通過下列的體外和體內方法,和/或通過在下
列現有技術中詳細記載的體外和體內方法進行評價。參見DoeringK,
MederG,HinnenbergerM,WoelckeJ,MayrLM,HassiepenU,(2009)
“Afluorescencelifetime-basedassayforproteaseinhibitorprofilingon
humankallikrein7”,BiomolScreen,Jan;14(1):1-9。

特別地,重組人中性內肽酶的體外抑制可以測定如下:

將重組人中性內肽酶(在昆蟲細胞中表達,并且使用標準方法純化,最
終濃度為7pM)與多種濃度的試驗化合物在室溫、含150mMNaCl和0.05
%(w/v)CHAPS的pH7.4的10mM磷酸鈉緩沖液中預溫育1小時。酶反
應通過加入合成肽底物Cys(PT14)-Arg-Arg-Leu-Trp-OH至終濃度為0.7
μM來啟動。底物水解導致PT14的熒光壽命(FLT)增加,通過上文引用的
Doering等人(2009)描述的FLT讀數器來測定。在室溫溫育1小時(t=60分
鐘)后,測定化合物對酶活性的作用。IC50值(相應于顯示不存在抑制劑時
測定的FLT值的50%減少的抑制劑濃度),由抑制百分比對抑制劑濃度作
圖使用線性回歸分析軟件來計算。

使用試驗分析(如上所述)本發明化合物顯示的抑制效力對應表1,提供
如下。

表1化合物的抑制活性

化合物:實施例#
人NEP IC50(nM)
實施例2
0.11

NEP抑制劑的相對CNS和外周治療活性在兩種非臨床的動物模型中
進行評價。化合物或它們的載體通過口服施用于有意識的大鼠,并且測定
腦脊髓液中Aβ(1-40)肽濃度(CSF;“Aβ模型”)的增加,或者NEP底物血
漿水平的增加,心房鈉尿肽(ANP;“ANP增強模型”)。因此,在給定的
血漿ANP增加下,NEP抑制劑不引起或引起CSFAβ很小的增加將比引
發Aβ很大的增加更有利。

我們評估了使用如下描述的ANP增強模型時,NEP抑制劑的效力和
外周作用。

ANP增強模型

鈉尿肽通過兩種主要途徑從機體清除:1)結合到鈉尿肽清除受體上,
然后通過內吞作用和溶酶體水解;和2)通過膜結合的鋅金屬蛋白酶NEP
水解,其已被確定在多種組織中,例如腎、肺、腸、腦和嗜中性粒細胞(Maack
T(2006)Thebroadhomeostaticroleofnatriureticpeptides.ArqBras
EndocrinolMetab;50:198-207;OkolicanyJ,McEnroeGA,KohGY等人
(1992)Clearancereceptorandneutralendopeptidase-mediated
metabolismofatrialnatriureticfactor.AmJPhysiol;263:F546-53)。在正
常動物中,清除受體主導著鈉尿肽的降解(Maack2006,參考上文)。與此
相反,在清除受體被高循環水平的鈉尿肽飽和的情況下(例如充血性心力衰
竭),NEP在滅活鈉尿肽中的作用變得顯著(Maack2006,參考上文,
Okolicany等人,1992,參考上文)。

后者觀察被用來評價NEP抑制劑的外周作用。通過輸注外源性的ANP
來飽和清除受體,NEP的ANP-代謝作用在正常有意識的大鼠中被暴露(Gu,
Jessie等人(2010),“PharmacokineticsandpharmacodynamicsofLCZ696,
anoveldual-actingangiotensinreceptor-neprilysininhibitor(ARNi)”,
JournalofClinicalPharmacology,50(4),401-414;Okolicany等人,1992
參考上文,TrapaniAJ,BeilME,BruseoCW等人(2004)CGS35601andits
orallyactiveprodrugCGS37808astripleinhibitorsof
endothelin-convertingenzyme-1,neutralendopeptidase24.11,and
angiotensin-convertingenzyme.JCardiovascPharmacol;44(Suppl
1):S211-5)。因此,血漿ANP的增強被用作口服施用化合物的外周NEP抑
制程度和持續時間的指數。

成年雄性WistarHan(WH)大鼠(體重:483±58g,平均值±SD;年齡:
9-10.5月)購自CharlesRiver實驗室。將它們飼養在12小時光/黑暗周期
(光:早晨6點至下午6點),溫度和相對濕度分別被設置為72°F和55%。
除了在試驗前和試驗間部分禁食外,對大鼠隨意提供正常的食物(Harlan
Teklad8604)和水。在這種情況下,試驗前的晚上(~下午5點)僅保留兩次
大鼠的食物。在試驗的早晨,取走任何剩余的食物。但是,在大多數情況
下,兩次的飼料丸在晚上都被消耗。在試驗結束后恢復食物。

將大鼠經手術插管以允許收集動脈血樣并且靜脈內(i.v.)施用ANP。對
大鼠麻醉,并且用異氟烷(100%氧氣中含2%)保持在麻醉的手術平面。向
每只眼應用眼用潤滑劑,以防止角膜刺激。施用美洛昔康(0.2mg/kg皮下
注射)用于鎮痛。如有必要對疼痛進行管理,在手術后第一天第二次施用美
洛昔康注射。此外,預操作地施用一劑量青霉素G(50,000U/kg肌內注射),
以防止感染。

在無菌手術條件下,分離股動脈和靜脈并且插入導管。導管由~55-cm
長的Tygon(PVC)微孔管(0.020”,0.060”O.D.)鍵合環己酮到4.5-cm長的
聚氨酯(0.012”I.D.,0.025”O.D.,Micro-Renathane型MRE-025,Braintree
Scientific,Inc.,Braintree,MA)管上組成。將導管皮下插管并且外置于
中胸背/腹部區域。將導管通過皮下進入錨定繩/轉環系統出來,其允許動物
在專業的具有穿孔固體平臺的Plexiglas籠中無束縛地運動。導管用無菌
0.9%的生理鹽水沖洗,并且在手術完成后用在無菌0.9%生理鹽水中的200
U/mL肝素鎖定。

在研究前,允許大鼠恢復至少一周,同時有意識并且不受限制。給大
鼠靜脈輸注(450ng/kg/分鐘)大鼠ANP(ANP(1-28),Product#14-5-41,
AmericanPeptideCompany,Inc.,Sunnyvale,CA)。在輸注ANP1小時
后,通過口服管飼用1mL/kg載體(0.5%甲基纖維素+0.1%吐溫80)或選擇
劑量的NEP抑制劑來處理大鼠。ANP輸注繼續進行額外的8小時。在多
個時間點(基線或時間0,0.25,0.5,1,2,4,6和8小時),從股動脈插
管抽取動脈血樣(0.20mL)到含有0.004mLEDTA/蛋白酶抑制劑(PI)混合
物的收集管中。將血樣在4℃和20Kg離心分離血漿。將血漿樣品分等份
并且冷凍(-70℃),用于之后分析血漿ANP和化合物水平。

血液收集混合物由廣譜絲氨酸和半胱氨酸PIs和EDTA組成。該組合
被確定(全血中體外ANP-峰(spiking)試驗)用來防止所得血漿在37℃溫育時
損失ANP。其還抗血液凝固。

下列成分被用于制備EDTA/PI混合物:

1.不含EDTA的完整PI混合物片(RocheCatalog#11873580001)

2.來自Vacutainer采血管的K3EDTA(Product#366450;Lavender
常規封閉;~抽取體積:7mL;液體添加:K3EDTA15%溶液,0.081mL,
12.15mg)

混合物制備如下:

1.將2片全尺寸的PI片溶解于0.94mL微孔水中(最終體積為1.0mL
=100×濃度溶液)。片劑經渦旋將在~1分鐘溶解。

2.向上述PI溶液中添加1.0mLEDTA。渦旋至混合充分。溶液應澄
清。

3.將混合物分成等份并且在-70℃冷凍(當冷凍時至少12周穩定)。

在試驗當天,將一管EDTA/PI混合物解凍,并且在試驗期間在冰上保
存使用。同樣,將含該混合物的采血管在冰上保存直至采血的時間,以盡
量減少PI的分解。

用商購的酶免疫測定試劑盒測定血漿ANP濃度(心房鈉尿因子
(1-28)(人)EIA試劑盒,S-1131;Peninsula實驗室,Inc.,SanCarlos,CA)。
將冷凍的血漿樣品在冰上解凍,并且將10μL血漿1:10稀釋在補充有試劑
盒的1×試驗緩沖液中。然后,測定10μL稀釋后的樣品。按照制造商的
說明用于測定方案(每孔的總體積用1×試驗緩沖液擴大到50μL)。用來外
推樣品ANP濃度的標準曲線的線性范圍在8至500pg/孔之間。用于標準
曲線的IC50是24.5±3.6pg/孔(平均值±SD)。

在不同的大鼠模型(“Aβ模型”)中評價NEP抑制劑的CNS作用。在
該研究中,我們已經測定了作為CNSAβ濃度敏感指示劑的腦脊髓液(CSF)
Aβ水平(KwasiG.Mawuenyega,2010,Science,第330卷,1774)。

Aβ模型:

試驗在購自CharlesRiver實驗室未經訓練的成年雄性WH大鼠(體重:
495±53g,平均值±SD;年齡:8.5-12個月)上進行,該大鼠被如上所述的
安置并且飼喂。大鼠通過口服管飼1mL/kg的載體(0.5%甲基纖維素+0.1%
吐溫80)或選擇劑量的NEP抑制劑在上午7:30至10:00之間處理。5小時
后,將大鼠用異氟烷麻醉,進行剖腹術,并且在EDTA上獲得腹主動脈血
樣。血樣在4℃和20Kg下離心以分離血漿。將血漿樣品分成等分并且冷
凍(-70℃),用于之后的血漿化合物水平分析。對大鼠放血后,縮回覆蓋在
小腦延髓池上的皮膚和肌肉。通過暴露的硬腦脊膜直接穿刺至小腦延髓池
收集CSF樣品。使用低結合pipette頭(VWR目錄號#37001-164)盡可能快
地將CSF轉移至預冷(在冰上)的低結合管(ProteinLoBind管,1.5mL,訂
單號022431081,Eppendorf)中,以使Aβ聚集和粘附到設備上最小化。冷
凍CSF樣品(-70℃),用于之后的Aβ水平分析。

使用MesoScaleDiscovery(MSD,Gaithersburg,MD)96-孔多陣列人
/嚙齒動物(4G8)Aβ40超靈敏試劑盒(K110FTE-2)對CSF中的Aβ40定量。

除了標準曲線和樣品制備外,根據制造商的說明進行試驗。將10μL
等份的每個CSF樣品與190μL1%BSA/1×Tris溶液(來自試劑盒的
“BlockerA”)混合,用于1:20的CSF稀釋。將合成的Aβ1-40肽(來自試
劑盒)系列稀釋在1%BSA/1×Tris溶液,以獲得用于8點標準曲線的
10,000-10pg/mL標準品。

在吸取150μL/孔1%BSA/1×Tris溶液后,將來自試劑盒的MSD
MULTI-SPOTAβ40肽板溫育1小時。將板用400μL1×Tris洗滌緩沖液
(來自試劑盒)應用BioTekEL406自動洗板機(Winooski,VT)洗滌3次。對
于CSF樣品和標準品,將25μL1×SULFO-TAG4G8檢測抗體/1×
“BlockerG”/1%BSA/1×Tris溶液(“檢測抗體溶液”,來自試劑盒)吸入
板中。以25μL/孔將CSF樣品和標準品吸入到板中,然后立即添加檢測抗
體溶液。將板溫育2小時,并且用400μL1×Tris洗滌緩沖液應用EL406
自動洗板機洗滌3次。將“讀數緩沖液T”(來自試劑盒)以1×150μL/孔
吸取到板中。在MSDSECTORImager6000讀數器上立即讀取MSD板。

將標準品一式三份測定。CSF樣品一式兩份測定。使用MSD
DISCOVERYWORKBENCH數據分析工具3.0軟件進行曲線擬合、反計
算、%回收率并且插入樣品濃度。使用具有1/y2加權函數的4-參數邏輯曲
線擬合選項對標準品產生的信號繪圖并且擬合。由擬合曲線插入樣品的
pg/mL濃度。定量的測定下限(LLOQ)是10pg/mL,并且定量的上限(ULOQ)
是10,000pg/mL。LLOQ和ULOQ的定義是回收率±20%并且CV<20%。
基于4329.8g/mol的分子量,將樣品的pg/mL濃度轉換成pmol/mL。

血漿化合物濃度

使用LC-MS/MS方法檢測血漿中的NEP抑制劑(本發明實施例1的前
藥及其活性藥物:本發明的實施例2,實施例1-2(WO2010/136493)及其活
性藥物:實施例11-1(WO2010/136493),實施例1-17(WO2010/136493)及
其活性藥物:實施例11-39(WO2010/136493)。將用本發明實施例1、實施
例1-2(WO2010/136493)或實施例1-17(WO2010/136493)處理的等份(25
μL)大鼠血漿使用150μL含100ng/mL內標(格列本脲)的乙腈進行蛋白質
沉淀。將樣品簡單渦旋混合,并且在40000rpm離心至多10分鐘。然后,
將上清液(125μL)轉移到1-mL96-孔板中,然后加入50μL水。通過使用
HPLC分離偶聯質譜檢測來進行分析。

將帶有SIL-20AC自動進樣器的ShimadzuLC-20AC二元HPLC泵
(ShimadzuCorporation,Kyoto,Japan)用于所有的LC分離。分析物的色
譜分離在來自MAC-MODAnalytical,Inc.(ChaddsFord,PA)的
C18柱(MacMod,ChaddsFord,PA)(3μm,2.1×30mm)上進行,聯合快
速梯度條件和流動相A(含0.1%甲酸的水)和B(含0.1%甲酸的乙腈)。將
配備TurboIonspray界面(SciexAPI4000;AppliedBiosystems,
Framingham,MA)的三重四級桿(MS/MS)質譜儀用于檢測。該儀器在正
(Pos)或負(Neg)離子多反應監測(MRM)模式操作,采用氮氣作為碰撞氣體。
監測下面兩種前藥和活性藥物的MRM轉變:對于本發明的實施例1(Neg)
為m/z613.28→425.12;對于本發明的實施例2(Neg)為m/z442.33→133.89;
對于實施例1-2(WO2010/136493)(Pos)為m/z418.42→231.12;對于實施例
11-1(WO2010/136493)(Pos)為m/z390.75→256.14;對于實施例1-17
(WO2010/136493)(Pos)為m/z436.4→248.0;對于實施例11.39
(WO2010/136493)(Pos)為m/z408.10→248.03;以及對于格列本脲(ISTD)
為m/z494.2→169.2(Pos)或492.13→169.84(Neg)。數據由SciexAnalyst
1.4.2軟件獲得并且處理。

使用由ThermoFisherScientific公司(Philadelphia,PA)購買的
ThermoWatson7.3軟件進行未知濃度的標準回歸和反計算。母體化合物
的定量基于由至少5個點組成的校準曲線。對于本發明的實施例1和實施
例2,WO2010/136493的實施例1-2和實施例11-1,校準標準曲線范圍設
定為1ng/mL(LLOQ)至10,000ng/mL(ULOQ);對于WO2010/136493的
實施例1-17是0.1ng/mL(LLOQ)至5,000ng/mL(ULOQ),以及對于
WO2010/136493的實施例11-39是至10,000ng/mL(ULOQ)。所有校正標
準和質量控制樣品的偏差都在接受標準的±30%。

對于本文的所有實施例和試驗,前藥對活性藥物的轉化>97%。

我們已經測定了本發明NEP抑制劑的相對外周和CNS抑制作用,并
且將這些抑制作用與WO2010/136493中公開的實施例1-17和1-2的化合
物進行了比較。


WO2010/136493

結果:

基線處的血漿ANP濃度是10.7±2.8ng/mL(平均值±SD)(后-ANP,預
處理)。化合物迅速(0.5-1小時)處理(WO2010/136493的實施例1-2:0.03-3
mg/kg口服;WO2010/136493的實施例1-17:0.01-3mg/kg口服;本發明
的實施例1:0.3-3mg/kg口服),并且劑量依賴性增加的血漿ANP濃度達
到穩態水平,其在試驗過程中保持升高。給藥后4至6小時之間的平均血
漿化合物和ANP濃度被用于產生暴露-響應關系。

在給予載體后,CSFAβ的濃度是~0.6pmol/mL。化合物以下列劑量
施用:WO2010/136493的實施例1-2(0.1-30mg/kg口服),WO2010/136493
的實施例1-17(1-30mg/kg口服)和本發明的實施例1(3-30mg/kg口服)。
給藥后5小時的血漿化合物和CSFA濃度被用于產生暴露-響應關系。

線性回歸被應用于血漿化合物暴露對血漿ANP(%基線ANP)或CSF
Aβ(%Aβ載體對照)響應關系。對應于血漿ANP的血漿化合物濃度增加接
近暴露-響應關系頂點(基線的200至240%)來自每種化合物。然后,將這
些化合物濃度應用于暴露-Aβ線性回歸關系,以評估對應于每個ANPs(%
基線)的Aβ(%載體對照)值。如表所示,實施例1在所有的血漿ANP增加
時顯示出Aβ的增加最小。相比之下,對于WO2010/136493的實施例1-17
和1-2的化合物,分別觀察到CSFAβ升高了4倍和5-9倍的%增加。

表2:與WO2010/136493實施例1-2和1-17的化合物比較,本發明
的實施例1化合物對應多種血漿ANP濃度增加的CSFAβ(%載體對照)。


在一個實施方案中,本發明化合物在暴露誘導200%ANP增強時,引
起CSFAβ的增加小于25%,或小于20%,或小于15%。

本發明化合物可以與一種或多種其它治療劑同時、在其之前或之后施
用。本發明化合物可以通過相同或不同施用途徑單獨施用或者與其它活性
劑在同一藥物組合物中一起施用。

在一個實施方案中,本發明提供了包含根據式I至IV任一種的化合物
或其可藥用鹽和至少一種其它治療劑作為組合制劑的產品,用于在治療中
同時、分別或依次使用。在一個實施方案中,該治療是治療與中性內肽酶
活性相關的疾病或病癥。

作為組合制劑提供的產品包括在同一藥物組合物中的根據式I至IV任
一種的化合物或其可藥用鹽和其它治療劑的組合物,或者包含分開的形式、
例如藥盒形式的根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽和其它治療劑
的組合物。

在一個實施方案中,本發明提供了藥物組合物,其包含根據式I至IV
任一種的化合物或其可藥用鹽,和另外的治療劑。任選地,藥物組合物可
以包含如上所述的可藥用賦形劑。

在一個實施方案中,本發明提供了藥盒,其包含兩種或多種分開的藥
物組合物,其中至少一種含有根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽。
在一個實施方案中,藥盒包含單獨容納所述組合物的裝置,例如容器、分
隔瓶或分隔箔袋。這類藥盒的實例是例如通常用于包裝片劑、膠囊劑等的
泡罩包裝。

本發明的藥盒可以用于施用不同的劑量形式,例如口服和非腸道形式,
用于在不同的劑量間隔施用單獨的組合物或者相對于一種單獨組合物逐漸
增加另一種單獨組合物。為了增加便利性,本發明的藥盒通常含有施用指
導。

在本發明的組合治療中,本發明化合物和其它治療劑可以通過相同或
不同的制造商來制備和/或配制。而且,本發明化合物和其它治療劑可以(i)
在將組合產品發放給醫師之前(例如當藥盒包含本發明的化合物和其它治
療劑時);(ii)通過醫生自己(或在醫師的指導下)在臨施用前;(iii)由患者自
己、例如在依次施用本發明化合物和其它治療劑期間被帶入組合治療中。

因此,本發明提供了根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽用于
治療與中性內肽酶活性相關的疾病或病癥的用途,其中藥物被制備用于與
另外的治療劑一起施用。本發明還提供了另外的治療劑用于治療與中性內
肽酶活性相關的疾病或病癥的用途,其中藥物與根據式I至IV任一種的化
合物或其可藥用鹽一起施用。

本發明還提供了用在治療與中性內肽酶活性相關的疾病或病癥的方法
中的根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽,其中根據式I至IV任
一種的化合物或其可藥用鹽被制備用于與另外的治療劑一起施用。本發明
還提供了用在治療與中性內肽酶活性相關的疾病或病癥的方法中的另外的
治療劑,其中另外的治療劑被制備用于與根據式I至IV任一種的化合物或
其可藥用鹽一起施用。本發明還提供了用在治療與中性內肽酶活性相關的
疾病或病癥的方法中的根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽,其中
根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽與另外的治療劑一起施用。本
發明還提供了用在治療與中性內肽酶活性相關的疾病或病癥的方法中的另
外的治療劑,其中另外的治療劑與根據式I至IV任一種的化合物或其可藥
用鹽一起施用。

本發明還提供了根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽用于治療
與中性內肽酶活性相關的疾病或病癥的用途,其中患者之前(例如在24小
時內)已經用另外的治療劑進行了治療。本發明還提供了另外的治療劑用于
治療與中性內肽酶活性相關的疾病或病癥的用途,其中患者之前(例如在24
小時內)已經用根據式I至IV任一種的化合物或其可藥用鹽進行了治療。

在一個實施方案中,其它治療劑選自:HMG-Co-A還原酶抑制劑、血
管緊張素受體阻斷劑(ARBs、血管緊張素II受體拮抗劑)、血管緊張素轉化
酶(ACE)抑制劑、鈣通道阻斷劑(CCB)、內皮素拮抗劑、腎素抑制劑、利尿
劑、ApoA-I模擬物、抗糖尿病劑、減肥劑、醛固酮受體阻斷劑、內皮素受
體阻斷劑、醛固酮合成酶抑制(ASI)、CETP抑制劑和磷酸二酯酶5型(PDE5)
抑制劑。

術語與第二種活性劑或治療“組合”包括共同施用本發明化合物(例如
根據式I-IV任一種的化合物或本文描述的其它化合物)和第二種活性劑或
治療,先施用本發明化合物,然后施用第二種活性劑或治療,以及先施用
第二種活性劑或治療,然后施用本發明化合物。

術語“第二種活性劑”包括本領域已知用于治療、預防或減少本文所
述疾病或障礙的癥狀的任何活性劑,所述的疾病或障礙例如對中性內肽酶
抑制有響應的障礙或疾病,例如高血壓、肺性高血壓、肺動脈高壓、單純
收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、心力衰竭、充血性心力衰
竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全(糖尿病性或非糖尿病性)、腎衰竭(包
括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖尿病性腎病、造影劑誘導的腎病、
腎病綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、原發性腎疾病的蛋白尿、
腎血管性高血壓、糖尿病性視網膜病變和終末期腎疾病(ESRD)、內皮功能
障礙、舒張功能障礙、肥厚型心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心
律失常、心房纖維性顫動(AF)、心臟纖維化、心房撲動、有害的血管重塑、
斑塊穩定、心肌梗死(MI)、腎纖維化、多囊腎病(PKD)、腎衰竭(包括水腫
和鹽潴留)、周期性水腫、Menière病、醛固酮增多癥(原發性和繼發性)、
高鈣尿、腹水、青光眼、月經障礙、早產難產、先兆子癇、子宮內膜異位
癥、生殖障礙(特別是男性和女性不育、多囊卵巢綜合征、植入失敗)、哮
喘、阻塞性睡眠呼吸暫停、炎癥、白血病、疼痛、癲癇、情感障礙例如抑
郁和精神病性病癥例如癡呆和老年意識混亂、肥胖和胃腸障礙(特別是腹瀉
和腸易激惹綜合征)、創傷愈合(特別是糖尿病性和靜脈性潰瘍以及褥瘡)、
膿毒性休克、胃酸分泌調節、高腎素血癥的治療、囊性纖維化、再狹窄、2
型糖尿病、代謝綜合征、糖尿病并發癥、動脈粥樣硬化以及男性和女性的
性功能障礙。

第二種治療劑的實例包括HMG-Co-A還原酶抑制劑、血管緊張素II
受體拮抗劑、血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑、鈣通道阻斷劑(CCB)、內皮
素拮抗劑、腎素抑制劑、利尿劑、ApoA-I模擬物、抗糖尿病劑、減肥劑、
醛固酮受體阻斷劑、內皮素受體阻斷劑、醛固酮合成酶抑制劑(ASI)、磷酸
二酯酶5型(PDE5)抑制劑和CETP抑制劑。

術語“HMG-Co-A還原酶抑制劑”(也稱為β-羥基-β-甲基戊二酰基-
輔酶A還原酶抑制劑)包括可用于降低脂質水平,包括血膽固醇的活性劑。
實例包括阿伐他汀、西立伐他汀、康帕丁、達伐他汀、二氫康帕丁、
fluindostatin、氟伐他汀、洛伐他汀、匹伐他汀、美伐他汀、普伐他汀、利
伐他汀、辛伐他汀和velostatin,或其可藥用鹽。

術語“ACE抑制劑”(也稱為血管緊張素轉化酶抑制劑)包括中斷血管
緊張素酶I向血管緊張素II酶降解的分子。此類化合物可用于血壓調節和
充血性心力衰竭的治療。實例包括阿拉普利、貝那普利、貝那普利拉、卡
托普利、西羅普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、enaprilat、福辛普
利、咪達普利、賴諾普利、莫維普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、
螺普利、替莫普利和群多普利,或其可藥用鹽。

術語“內皮素拮抗劑”包括波生坦(參見EP526708A)、替唑生坦(WO
96/19459),或其可藥用鹽。

術語“腎素抑制劑”包括地替吉侖(化學名:
[1S-[1R*,2R*,4R*(1R*,2R*)]]-1-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-L-脯氨酰基L-
苯丙氨酰基-N-[2-羥基-5-甲基-1-(2-甲基丙基)-4-[[[2-甲基-1-[[(2-吡啶基甲
基)氨基]羰基]丁基]氨基]羰基]己基]-N-α-甲基-L-組氨酰胺);特拉吉侖(化
學名:[R-(R*,S*)]-N-(4-嗎啉基羰基)-L-苯丙氨酰基-N-[1-(環己基甲基)-2-
羥基-3-(1-甲基乙氧基)-3-氧代丙基]-S-甲基-L-半胱氨酰胺);阿利吉侖(化學
名:(2S,4S,5S,7S)-5-氨基-N-(2-氨基甲酰基-2,2-二甲基乙基)-4-羥基-7-{[4-
甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]甲基}-8-甲基-2-(丙-2-基)壬酰胺)和占吉侖
(化學名:[1S-[1R*[R*(R*)],2S*,3R*]]-N-[1-(環己基甲基)-2,3-二羥基-5-甲
基己基]-α-[[2-[[(4-甲基-1-哌嗪基)磺酰基]甲基]-1-氧代-3-苯基丙基]-氨
基]-4-噻唑丙酰胺),或其鹽酸鹽,或者由Speedel開發的SPP630、SPP635
和SPP800,或者式(A)和(B)的RO66-1132和RO66-1168:


或其可藥用鹽。

術語“阿利吉侖”,如果沒有特別定義,應當理解為既作為游離堿又
作為其鹽,特別是其可藥用鹽,最優選其半富馬酸鹽。

血管緊張素II受體拮抗劑或其可藥用鹽應理解為,結合到血管緊張素
II受體的AT1-受體亞型但不會導致在該受體活化的活性成分。作為抑制
AT1受體的結果,這些拮抗劑可以是例如用作抗高血壓劑或用于治療充血
性心力衰竭。

AT1受體拮抗劑的種類包括具有不同結構特征的化合物,基本上優選
的是非肽的。例如,可提及的化合物選自纈沙坦、氯沙坦、坎地沙坦、依
普羅沙坦、厄貝沙坦、沙普立沙坦、他索沙坦、替米沙坦,具有下式的命
名為E-1477的化合物


具有下式的命名為SC-52458的化合物


具有下式的命名為ZD-8731的化合物


或者,在每種情形中,其可藥用鹽。

優選的AT1-受體拮抗劑是那些已上市的活性劑,最優選的是纈沙坦或
其可藥用鹽。

術語“鈣通道阻斷劑(CCB)”包括二氫吡啶(DHP)和非DHP(例如地爾
硫卓型和維拉帕米型CCB)。實例包括氨氯地平、非洛地平、ryosidine、
伊拉地平、拉西地平、尼卡地平、硝苯地平、尼古地平、尼魯地平、尼莫
地平、尼索地平、尼群地平和尼伐地平,并且優選非-DHP代表選自氟桂
利嗪、普尼拉明、地爾硫卓、苯乙二苯丙胺、戈洛帕米、米貝拉地爾、阿
尼帕米、噻帕米和維拉帕米,或其可藥用鹽。CCB可以被用作抗高血壓、
抗心絞痛或抗心律失常藥物。

術語“利尿劑”包括噻嗪衍生物(例如氯噻嗪、氫氯噻嗪、甲基氯噻嗪
和氯噻酮。

術語“ApoA-I模擬物”包括D4F肽(例如式
D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F)。

術語“抗糖尿病劑”包括促進胰島素從胰腺β細胞分泌的胰島素分泌
增強劑。實例包括雙胍衍生物(例如二甲雙胍),磺酰脲(SU)(例如甲苯磺丁
脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋酸己脲、4-氯-N-[(1-吡咯烷基氨基)羰基]苯磺
酰胺(吡喃葡糖苷)、格列本脲(格列本脲)、格列齊特、1-丁基-3-間氨基苯磺
酰脲、氨磺丁脲、格列波脲、格列吡嗪、格列喹酮、格列派特、格列噻唑、
格列丁唑、格列己脲、格列嘧啶、格列平脲、苯磺丁脲和甲苯基環拉酰胺),
或其可藥用鹽。進一步的實例包括下式的苯丙氨酸衍生物(例如那格列奈
[N-(反式-4-異丙基環己基羰基)-D-苯丙氨酸](參見EP196222和EP526171):


瑞格列奈[(S)-2-乙氧基-4-{2-[[3-甲基-1-[2-(1-哌啶基)苯基]丁基]氨基]-2-氧
代乙基}苯甲酸](參見EP589874、EP147850A2,特別是第61頁實施例
11,和EP207331A1);(2S)-2-芐基-3-(順式-六氫-2-異二氫吲哚基羰基)-丙
酸鈣二水合物(例如米格列奈(參見EP507534));和格列美脲(參見EP
31058)。進一步的實例包括DPP-IV抑制劑、GLP-1和GLP-1激動劑。

DPP-IV負責GLP-1失活。更特別地,DPP-IV產生GLP-1受體拮抗
劑,并且由此縮短對GLP-1的生理學響應。GLP-1是主要的胰腺胰島素分
泌刺激物,并且它對葡萄糖處置具有直接的有益作用。

DPP-IV抑制劑可以是肽或優選非肽的。在每種情況中,DPP-IV抑制
劑一般和特別地例如在WO98/19998、DE19616486A1、WO00/34241
和WO95/15309中公開,特別是在每種情況中,在化合物權利要求和工作
實施例的終產物中公開,終產物、藥物制劑和權利要求的主題在此引入本
申請作為這些公開內容的參考。優選的是分別在WO98/19998的實施例3
和WO00/34241的實施例1中具體公開的那些化合物。市售的DPP-IV抑
制劑的其它實例是沙克列汀、西他列汀、維達列汀和利拉利汀。

GLP-1是促胰島素的蛋白質,它例如由W.E.Schmidt等人在
Diabetologia,28,1985,704-707中和在US5,705,483中進行了描述。

術語“GLP-1激動劑”包括GLP-1(7-36)NH2的變體和類似物,它們
特別在US5,120,712、US5,118666、US5,512,549、WO91/11457中和由
C.Orskov等人在J.Biol.Chem.264(1989)12826中被公開。進一步的實例
包括其中Arg36的羧基末端酰胺官能團在GLP-1(7-36)NH2分子的第37位
上被Gly代替的GLP-1(7-37)及其變體和類似物,包括GLN9-GLP-1(7-37)、
D-GLN9-GLP-1(7-37)、乙酰基LYS9-GLP-1(7-37)、LYS18-GLP-1(7-37)并
且特別是GLP-1(7-37)OH、VAL8-GLP-1(7-37)、GLY8-GLP-1(7-37)、
THR8-GLP-1(7-37)、MET8-GLP-1(7-37)和4-咪唑并丙酰基-GLP-1。還特
別優選由Greig等人在Diabetologia1999,42,45-50中描述的GLP激動劑
類似物艾塞那肽-4(exendin-4)。

“抗糖尿病劑”定義中還包括胰島素敏感性增強劑,其可恢復受損的
胰島素受體功能以降低胰島素抗性并且因此增強胰島素敏感性。實例包括
降血糖的噻唑烷二酮衍生物(例如格列酮(glitazone)、(S)-((3,4-二氫-2-(苯基
-甲基)-2H-1-苯并吡喃-6-基)甲基-噻唑烷-2,4-二酮(恩格列酮)、5-{[4-(3-(5-
甲基-2-苯基-4-唑基)-1-氧代丙基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2,4-二酮(達格列
酮)、5-{[4-(1-甲基-環己基)甲氧基)-苯基]甲基}-噻唑烷-2,4-二酮(環格列酮)、
5-{[4-(2-(1-吲哚基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2,4-二酮(DRF2189)、
5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-唑基)-乙氧基)]芐基}-噻唑烷-2,4-二酮
(BM-13.1246)、5-(2-萘基磺酰基)-噻唑烷-2,4-二酮(AY-31637)、雙{4-[(2,4-
二氧代-5-噻唑烷基)甲基]苯基}甲烷(YM268)、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-
唑基)-2-羥基乙氧基]芐基}-噻唑烷-2,4-二酮(AD-5075)、5-[4-(1-苯基-1-環丙
烷羰基氨基)-芐基]-噻唑烷-2,4-二酮(DN-108)、5-{[4-(2-(2,3-二氫吲哚-1-基)
乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2,4-二酮、5-[3-(4-氯-苯基])-2-丙炔基]-5-苯基磺
酰基)噻唑烷-2,4-二酮、5-[3-(4-氯苯基])-2-丙炔基]-5-(4-氟苯基-磺酰基)噻唑
烷-2,4-二酮、5-{[4-(2-(甲基-2-吡啶基-氨基)-乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2,4-
二酮(羅西格列酮)、5-{[4-(2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基)苯基]-甲基}噻唑烷
-2,4-二酮(吡格列酮)、5-{[4-((3,4-二氫-6-羥基-2,5,7,8-四甲基-2H-1-苯并吡喃
-2-基)甲氧基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2,4-二酮(曲格列酮)、5-[6-(2-氟-芐基氧
基)萘-2-基甲基]-噻唑烷-2,4-二酮(MCC555)、5-{[2-(2-萘基)-苯并唑-5-
基]-甲基}噻唑烷-2,4-二酮(T-174)和5-(2,4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-2-甲氧
基-N-(4-三氟甲基-芐基)苯甲酰胺(KRP297))。

進一步的抗糖尿病劑包括胰島素信號傳導途徑調節劑例如蛋白酪氨酸
磷酸酶(PTP酶)抑制劑、抗糖尿病的非小分子模擬化合物和谷氨酰胺-果糖
-6-磷酸酰胺轉移酶(GFAT)抑制劑;影響失調的肝葡萄糖生成的化合物例
如葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)抑制劑、果糖-1,6-二磷酸酶(F-1,6-Bpase)抑制
劑、糖原磷酸化酶(GP)抑制劑、胰高血糖素受體拮抗劑和烯醇丙酮酸磷酸
羧激酶(PEPCK)抑制劑;丙酮酸脫氫酶激酶(PDHK)抑制劑;胃排空抑制
劑;胰島素;GSK-3抑制劑;類視色素X受體(RXR)激動劑;β-3AR激動
劑;解偶聯蛋白質(UCPs)激動劑;非格列酮型PPARγ激動劑;雙重
PPARα/PPARγ激動劑;抗糖尿病的含釩化合物;腸降血糖素激素例如胰
高血糖素樣肽-1(GLP-1)和GLP-1激動劑;β-細胞咪唑啉受體拮抗劑;米
格列醇;α2-腎上腺素能拮抗劑;及其可藥用鹽。

術語“減肥劑”包括脂酶抑制劑(例如奧利司他)和食欲抑制劑(例如西
布曲明和芬特明)。

醛固酮合成酶抑制劑或其可藥用鹽被理解為是具有抑制醛固酮產生的
性質的活性成分。醛固酮合成酶(CYP11B2)是催化腎上腺皮質中醛固酮產
生的最后步驟、即11-脫氧皮質酮向醛固酮轉化的線粒體細胞色素P450酶。
用所謂的醛固酮合成酶抑制劑抑制醛固酮產生已知是成功治療低鉀血、高
血壓、充血性心力衰竭、心房纖維性顫動或腎衰竭的變通方式。這種醛固
酮合成酶抑制活性可以由本領域技術人員按照標準分析法(例如US
2007/0049616)來容易地測定。

醛固酮合成酶抑制劑的類別包括甾體和非甾體醛固酮合成酶抑制劑,
后者是最優選的。

優選可商購獲得的醛固酮合成酶抑制劑或已經被衛生當局批準的那些
醛固酮合成酶抑制劑。

醛固酮合成酶抑制劑的類別包括具有不同結構特征的化合物。例如可
以提及的有選自非甾體芳香酶抑制劑阿那曲唑、法倔唑(包括其(+)-對映異
構體)以及甾體芳香酶抑制劑依西美坦的化合物或者如果適當的話其每種
情況的可藥用鹽。

最優選的非甾體醛固酮合成酶抑制劑是下式的法倔唑鹽酸鹽的(+)-對
映異構體(US專利4617307和4889861)


或者如果適當的話其可藥用鹽。

優選的甾體醛固酮拮抗劑是下式的依普利酮(參考EP122232A)


或螺內酯;或者如果適當的話其每種情況的可藥用鹽。

可用于所述組合的醛固酮合成酶抑制劑有例如US2007/0049616中、特
別是化合物權利要求和工作實施例的終產物中一般和具體公開的化合物和
類似物,終產物、藥物制劑和權利要求的主題在此引入本申請作為該公開
的參考。適用于本發明的優選的醛固酮合成酶抑制劑包括但不限于4-(6,7-
二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-3-甲基芐腈;5-(2-氯-4-氰基苯基)-6,7-二
氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸(4-甲氧基芐基)甲基酰胺;4’-氟-6-(6,7,8,9-
四氫-5H-咪唑并[1,5-a]氮雜-5-基)聯苯-3-腈;5-(4-氰基-2-甲氧基苯
基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸丁酯;4-(6,7-二氫-5H-吡咯并
[1,2-c]咪唑-5-基)-2-甲氧基芐腈;5-(2-氯-4-氰基苯基)-6,7-二氫-5H-吡咯并
[1,2-c]咪唑-5-甲酸4-氟芐基酯;5-(4-氰基-2-三氟甲氧基苯基)-6,7-二氫-5H-
吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸甲酯;5-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-6,7-二氫-5H-吡咯
并[1,2-c]咪唑-5-甲酸2-異丙氧基乙基酯;4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑
-5-基)-2-甲基芐腈;4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-3-氟芐腈;
4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-2-甲氧基芐腈;3-氟-4-(7-亞甲基
-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)芐腈;順式-3-氟-4-[7-(4-氟-芐
基)-5,6,7,8-四氫-咪唑并[1,5-a]吡啶-5-基]芐腈;4’-氟-6-(9-甲基-6,7,8,9-四氫
-5H-咪唑并[1,5-a]氮雜-5-基)聯苯-3-腈;4’-氟-6-(9-甲基-6,7,8,9-四氫-5H-
咪唑并[1,5-a]氮雜-5-基)聯苯-3-腈或者在每種情況中其(R)或(S)對映異構
體;或者如果適當的話其可藥用鹽。

術語醛固酮合成酶抑制劑還包括在WO2008/076860、
WO2008/076336、WO2008/076862、WO2008/027284、WO2004/046145、
WO2004/014914、WO2001/076574中公開的化合物和類似物。

此外,醛固酮合成酶抑制劑還包括如下文獻中公開的化合物和類似物:
美國專利申請US2007/0225232、US2007/0208035、US2008/0318978、
US2008/0076794、US2009/0012068、US20090048241和PCT申請
WO2006/005726、WO2006/128853、WO2006128851、WO2006/128852、
WO2007065942、WO2007/116099、WO2007/116908、WO2008/119744和
歐洲專利申請EP1886695。適用于本發明的優選的醛固酮合成酶抑制劑包
括但不限于8-(4-氟苯基)-5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪;4-(5,6-二氫
-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪-8-基)-2-氟芐腈;4-(5,6-二氫-8H-咪唑并
[5,1-c][1,4]嗪-8-基)-2,6-二氟芐腈;4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪
-8-基)-2-甲氧基芐腈;3-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪-8-基)芐腈;
4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪-8-基)酞腈;4-(8-(4-氰基苯基)-5,6-
二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪-8-基)芐腈;4-(5,6-二氫-8H-咪唑并
[5,1-c][1,4]嗪-8-基)芐腈;4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪-8-基)萘
-1-腈;8-[4-(1H-四唑-5-基)苯基]-5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]嗪,由
Speedel開發,或者在每種情況中其(R)或(S)對映異構體;或者如果適當的
話其可藥用鹽。

在所述組合中可用的醛固酮合成酶抑制劑是在例如WO2009/156462
和WO2010/130796中一般和具體公開的化合物和類似物,特別是化合物
權利要求和工作實施例的終產物,終產物、藥物制劑和權利要求的主題中
的化合物和類似物。

適用于本發明組合的優選的醛固酮合成酶抑制劑包括3-(6-氟-3-甲基
-2-吡啶-3-基-1H-吲哚-1-基甲基)-芐腈鹽酸鹽、1-(4-甲磺酰基-芐基)-3-甲基
-2-吡啶-3-基-1H-吲哚、2-(5-芐基氧基-吡啶-3-基)-6-氯-1-甲基-1H-吲哚、
5-(3-氰基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-煙酸乙酯、N-[5-(6-氯-3-氰基-1-甲基-1H-
吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-乙磺酰胺、吡咯烷-1-磺酸5-(6-氯-3-氰基-1-甲基
-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基酯、N-甲基-N-[5-(1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-
基甲基]-甲磺酰胺、6-氯-1-甲基-2-{5-[(2-吡咯烷-1-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶
-3-基}-1H-吲哚-3-腈、6-氯-2-[5-(4-甲磺酰基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-3-基]-1-
甲基-1H-吲哚-3-腈、6-氯-1-甲基-2-{5-[(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-甲基]-吡啶
-3-基}-1H-吲哚-3-腈、嗎啉-4-甲酸[5-(6-氯-3-氰基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-
吡啶-3-基甲基]-酰胺、N-[5-(6-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-乙
磺酰胺、C,C,C-三氟-N-[5-(1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-甲磺酰
胺、N-[5-(3-氯-4-氰基-苯基)-吡啶-3-基]-4-三氟甲基-苯磺酰胺、N-[5-(3-氯
-4-氰基-苯基)-吡啶-3-基]-1-苯基-甲磺酰胺、N-(5-(3-氯-4-氰基苯基)吡啶-3-
基)丁-1-磺酰胺、N-(1-(5-(4-氰基-3-甲氧基苯基)吡啶-3-基)乙基)乙磺酰胺、
N-((5-(3-氯-4-氰基苯基)吡啶-3-基)(環丙基)甲基)乙磺酰胺、N-(環丙基
(5-(1H-吲哚-5-基)吡啶-3-基)甲基)乙磺酰胺、N-(環丙基(5-萘-1-基-吡啶-3-
基)甲基)乙磺酰胺、乙磺酸[5-(6-氯-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-吡
啶-3-基甲基]-酰胺和乙磺酸{[5-(3-氯-4-氰基-苯基)-吡啶-3-基]-環丙基-甲
基}-乙基-酰胺。

術語“內皮素受體阻斷劑”包括波生坦。

術語“CETP抑制劑”指抑制膽甾醇酯轉移蛋白(CETP)介導的多種膽
甾醇酯和甘油三酯從HDL轉運至LDL和VLDL的化合物。這類CETP
抑制活性容易由本領域技術人員按照標準測定法(例如美國專利6,140,343)
來測定。實例包括美國專利6,140,343和美國專利6,197,786中公開的化合
物(例如[2R,4S]4-[(3,5-雙-三氟甲基-芐基)-甲氧基羰基-氨基]-2-乙基-6-三氟
甲基-3,4-二氫-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(托徹普(torcetrapib));美國專利
6,723,752中公開的化合物(例如(2R)-3-{[3-(4-氯-3-乙基-苯氧基)-苯
基]-[[3-(1,1,2,2-四氟-乙氧基)-苯基]-甲基]-氨基}-1,1,1-三氟-2-丙醇);美國專
利申請序列號10/807,838中公開的化合物;美國專利號5,512,548中公開的
多肽衍生物;分別在J.Antibiot.,49(8):815-816(1996)和Bioorg.Med.Chem.
Lett.;6:1951-1954(1996)中公開的玫瑰酮內酯衍生物和含磷酸的膽甾醇酯
類似物。此外,CETP抑制劑還包括WO2000/017165、WO2005/095409
和WO2005/097806中公開的那些。

可用于所述組合中的CETP抑制劑是例如WO2008/009435、WO
2009/059943和WO2009/071509中一般和具體公開的化合物和類似物,特
別是化合物權利要求和實施例的最終產物,最終產物、藥物制劑和權利要
求的主題中的化合物和類似物。

磷酸二酯酶5型(PDE5)抑制劑的實例是西地那非、阿伐那非、
iodenafil、米羅那非、他達拉非、伐地那非和烏地那非。

特別感興趣的第二種活性劑包括內皮素拮抗劑、腎素抑制劑、血管緊
張素II受體拮抗劑、磷酸二酯酶5型(PDE5)抑制劑、鈣通道阻斷劑、利尿
劑、抗糖尿病劑例如DPPIV抑制劑和醛固酮合成酶抑制劑。

在一個實施方案中,本發明提供了組合產品,特別是藥物組合產品,
其包含治療有效量的根據式I、II、III或IV定義的化合物或其可藥用鹽,
以及一種或多種選自以下的治療活性劑:HMG-Co-A還原酶抑制劑、血管
緊張素II受體拮抗劑、血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑、鈣通道阻斷劑
(CCB)、內皮素拮抗劑、腎素抑制劑、利尿劑、ApoA-I模擬物、抗糖尿病
劑、減肥劑、醛固酮受體阻斷劑、內皮素受體阻斷劑、醛固酮合成酶抑制
劑(ASI)、CETP抑制劑和磷酸二酯酶5型(PDE5)抑制劑。

在一個實施方案中,本發明提供了抑制個體的中性內肽酶活性的方法,
其中該方法包括給個體施用治療有效量的根據式I、II、III或IV定義的化
合物或其可藥用鹽。

在一個實施方案中,本發明提供了治療個體的與中性內肽酶活性相關
的障礙或疾病的方法,其中該方法包括給個體施用治療有效量的根據式I、
II、III或IV定義的化合物或其可藥用鹽。

在一個實施方案中,本發明提供了治療個體的與中性內肽酶活性相關
的障礙或疾病的方法,其中障礙或疾病選自高血壓、肺性高血壓、肺動脈
高壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、心力衰竭、充
血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全(糖尿病性或非糖尿病性)、
腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖尿病性腎病、造影劑誘
導的腎病、腎病綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、原發性腎病
的蛋白尿、腎血管性高血壓、糖尿病性視網膜病變和終末期腎病(ESRD)、
內皮功能障礙、舒張期功能障礙、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上
性和室性心律失常、心房纖維性顫動(AF)、心臟纖維化、心房撲動、有害
的血管重塑、斑塊穩定、心肌梗死(MI)、腎纖維化、多囊腎病(PKD)、腎
衰竭(包括水腫和鹽潴留)、周期性水腫、Menière病、醛固酮增多癥(原發
性和繼發性)、高鈣尿癥、腹水、青光眼、月經障礙、早產難產、先兆子癇、
子宮內膜異位癥和生殖障礙(特別是男性和女性不育、多囊卵巢綜合征、植
入失敗)、哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫停、炎癥、白血病、疼痛、癲癇、情感
障礙例如抑郁和精神病性病癥,例如癡呆和老年意識混亂、肥胖和胃腸障
礙(特別是腹瀉和腸易激惹綜合征)、創傷愈合(特別是糖尿病性和靜脈潰瘍
和褥瘡)、膿毒性休克、胃酸分泌功能障礙、高腎素血癥、囊性纖維化、再
狹窄、2型糖尿病、代謝綜合征、糖尿病并發癥、動脈粥樣硬化以及男性
和女性的性功能障礙。在又一個實施方案,本發明提供了治療個體的與中
性內肽酶的活性相關的障礙或疾病的方法,其中障礙或疾病選自高血壓、
肺性高血壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、充血性
心力衰竭和肺動脈高壓。

在一個實施方案中,本發明提供了根據式I、II、III或IV定義的化合
物或其可藥用鹽,其用作藥物。

在一個實施方案中,本發明提供了根據式I、II、III或IV定義的化合
物或其可藥用鹽在治療個體的與中性內肽酶活性相關的障礙或疾病中的用
途。

在一個實施方案中,本發明提供了根據式I、II、III或IV定義的化合
物或其可藥用鹽在制備用于治療個體的特征為中性內肽酶活性的障礙或疾
病的藥物中的用途,其中所述的障礙或疾病特別選自:高血壓、肺性高血
壓、肺動脈高壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、心
力衰竭、充血性心力衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全(糖尿病性或
非糖尿病性)、腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖尿病性腎
病、造影劑誘導的腎病、腎病綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、
原發性腎病的蛋白尿、腎血管性高血壓、糖尿病性視網膜病變和終末期腎
病(ESRD)、內皮功能障礙、舒張期功能障礙、肥厚性心肌病、糖尿病性心
肌病、室上性和室性心律失常、心房纖維性顫動(AF)、心臟纖維化、心房
撲動、有害的血管重塑、斑塊穩定、心肌梗死(MI)、腎纖維化、多囊腎病
(PKD)、腎衰竭(包括水腫和鹽潴留)、周期性水腫、Menière病、醛固酮增
多癥(原發性和繼發性)、高鈣尿癥、腹水、青光眼、月經障礙、早產難產、
先兆子癇、子宮內膜異位癥和生殖障礙(特別是男性和女性不育、多囊卵巢
綜合征、植入失敗)、哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫停、炎癥、白血病、疼痛、
癲癇、情感障礙例如抑郁和精神病性病癥,例如癡呆和老年意識混亂、肥
胖和胃腸障礙(特別是腹瀉和腸易激惹綜合征)、創傷愈合(特別是糖尿病性
和靜脈潰瘍和褥瘡)、膿毒性休克、胃酸分泌功能障礙、高腎素血癥、囊性
纖維化、再狹窄、2型糖尿病、代謝綜合征、糖尿病并發癥、動脈粥樣硬
化以及男性和女性的性功能障礙。在又一個實施方案,本發明提供了根據
式I、II、III或IV定義的化合物在制備用于制備用于個體的特征為中性內
肽酶活性的障礙或疾病的藥物中的用途,其中所述的障礙或疾病特別選自
高血壓、肺性高血壓、單純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、
充血性心力衰竭和肺動脈高壓。

在一個實施方案中,本發明提供了根據式I、II、III或IV定義的化合
物或其可藥用鹽在治療個體的特征為中性內肽酶活性的障礙或疾病中的用
途,其中所述的障礙或疾病選自:高血壓、肺性高血壓、肺動脈高壓、單
純收縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、心力衰竭、充血性心力
衰竭、左心室肥大、心絞痛、腎功能不全(糖尿病性或非糖尿病性)、腎衰
竭(包括水腫和鹽潴留)、糖尿病性腎病、非糖尿病性腎病、造影劑誘導的
腎病、腎病綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、原發性腎病的蛋
白尿、腎血管性高血壓、糖尿病性視網膜病變和終末期腎病(ESRD)、內皮
功能障礙、舒張期功能障礙、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和
室性心律失常、心房纖維性顫動(AF)、心臟纖維化、心房撲動、有害的血
管重塑、斑塊穩定、心肌梗死(MI)、腎纖維化、多囊腎病(PKD)、腎衰竭(包
括水腫和鹽潴留)、周期性水腫、Menière病、醛固酮增多癥(原發性和繼發
性)、高鈣尿癥、腹水、青光眼、月經障礙、早產難產、先兆子癇、子宮內
膜異位癥、生殖障礙(特別是男性和女性不育、多囊卵巢綜合征、植入失敗)、
哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫停、炎癥、白血病、疼痛、癲癇、情感障礙例如
抑郁和精神病性病癥,例如癡呆和老年意識混亂、肥胖和胃腸障礙(特別是
腹瀉和腸易激惹綜合征)、創傷愈合(特別是糖尿病性和靜脈潰瘍和褥瘡)、
膿毒性休克、胃酸分泌功能障礙、高腎素血癥、囊性纖維化、再狹窄、2
型糖尿病、代謝綜合征、糖尿病并發癥、動脈粥樣硬化以及男性和女性的
性功能障礙,并且更特別的疾病或障礙選自高血壓、肺性高血壓、單純收
縮期高血壓、頑固性高血壓、外周血管疾病、充血性心力衰竭和肺動脈高
壓。

本發明的例證:

以下實施例用于解釋本發明,而不解釋為限制本發明。溫度以攝氏度
給出。若無另外指出,所有蒸發在減壓下、優選在約15mmHg至100mm
Hg(=20-133mbar)下進行。終產物、中間體和原料的結構通過標準分析方
法例如微量分析和光譜特征如MS、IR、NMR來確定。所用縮略語是本領
域常規的那些。

用于合成本發明化合物的所有原料、結構單元、試劑、酸、堿、脫水
劑、溶劑和催化劑是商購可獲得的,或者可以通過本領域技術人員已知的
有機合成方法來制備(Houben-Weyl,第4版,1952,MethodsofOrganic
Synthesis,Thieme,第21卷)。而且,本發明化合物可以通過本領域技術人
員已知的有機合成方法如以下實施例中所示的那樣來制備。

本發明的例證:

縮略語:



以下實施例用于解釋本發明,而不解釋為限制本發明。溫度以攝氏度
給出。若無另外指出,所有蒸發在減壓下、優選在約15mmHg至100mm
Hg(=20-133mbar)下進行。終產物、中間體和原料的結構通過標準分析方
法例如微量分析和光譜特征例如MS、IR、NMR來確定。所用縮略語是本
領域常規的那些。

用于合成本發明化合物的所有原料、結構單元、試劑、酸、堿、脫水
劑、溶劑和催化劑是商購可獲得的,或者可以通過本領域技術人員已知的
有機合成方法來制備(Houben-Weyl,第4版,1952,MethodsofOrganic
Synthesis,Thieme,第21卷)。而且,本發明化合物還可以通過本領域技術
人員已知的有機合成方法如以下實施例中所示的那樣來制備。

實施例1:(3-(((2R)-1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-4-(1-(((環己基氧基)
羰基)氧基)乙氧基)-4-氧代丁-2-基)氨基)-3-氧代丙基)膦酸的合成


A:(R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)丁酸

在(R)-4-(4-溴苯基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(HBC2251,14g,39
mmol)和5-氯-2-氟苯基硼酸(8.5g,49mmol)的300mLH2O溶液中加入
Na2CO3(12.5g,118mmol)。將該溶液溫至40℃,并且加入9mL的THF,
然后加入Pd(PPh3)2Cl2(0.6g,0.86mmol)。然后,將反應混合物在60℃攪
拌約1天。將反應混合物冷卻至23℃,并且真空除去THF。將產生的水性
懸浮液通過硅藻土過濾,并且將固體用H2O沖洗。然后,用約3:1的乙酸
異丙酯/丙酮(400mL)萃取合并的濾液和H2O洗滌液。分離后,棄去有機層。
向水層中加入TBME(300mL),然后緩慢加入6NHCl(32mL)。然后,
分離有機層并且通過硅藻土過濾。固體用TBME洗滌。合并的濾液和洗滌
液濃縮成類白色固體(14.96g,36.7mmol,產率94%,LCMS純度為約
96%UV)。LCMS(ES-)C21H23ClFNO4:計算值:407.1;實測值:
406.4[M-H]+。


B:(3R)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)乙基3-((叔丁氧基羰基)氨
基)-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)丁酸酯

將1-氯乙基環己基碳酸酯通過HPLC在制備ChiralpakID柱上拆分,
使用庚烷/TBME98:2和旋光檢測器。由該拆分,確定在ChiralpakID柱
上的峰2具有98%ee,并且用于隨后的步驟。在0℃在1-氯乙基環己基碳
酸酯(來自ChiralpakID柱庚烷/TBME98:2的第二洗脫異構體)(1.75g,
8.47mmol)和(R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)
丁酸(1.5g,3.68mmol)的35mL無水DMF中加入碳酸銫(1.2g,3.68mmol)。
在反應混合物攪拌5分鐘后,移走冰浴,并且將反應混合物在23℃攪拌4.5
小時。LCMS表明,反應完成了約40%。將反應混合物攪拌約18小時,
在該點LCMS表明反應完成了約95%。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋,
并且用飽和氯化銨水溶液(水層的pH為約6-7)洗滌。分離后,將水層用乙
酸乙酯萃取兩次。合并的有機層用水洗滌一次,用飽和氯化鈉水溶液洗滌
一次,經硫酸鈉干燥,過濾,濃縮,并且用硅膠色譜在IscoRediSep120g
硅膠柱(0-20%乙酸乙酯-庚烷)上純化,得到(3R)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)
乙基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)丁酸酯(2.07
g,產率97%,在分析超臨界流體HPLC中使用ChiralpakAD-H在CO2
中的5-55%MeOH與20mMNH4OH測定為95.8%ee)。LCMS(ES+)
C30H37ClFNO7:計算值:577.2;實測值:578.3[M+H]+。


C:(3R)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)乙基3-氨基-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-
聯苯]-4-基)丁酸酯

在(3R)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)乙基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(5’-
氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)丁酸酯(2.02g,3.49mmol)中加入9mL在1,4-二
烷中的的4MHCl。反應混合物在23℃攪拌約1小時。將反應混合物蒸
發近干,得到(3R)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)乙基3-氨基-4-(5’-氯-2’-氟
-[1,1’-聯苯]-4-基)丁酸酯(約1.73g,104%),并且直接用于下面的步驟。
LCMS(ES+)C25H29ClFNO5。計算值:477.2;實測值:478.2[M+H]+。


D:(3-(((R)-1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-4-((S)-1-(((環己基氧基)羰
基)氧基)乙氧基)-4-氧代丁-2-基)氨基)-3-氧代丙基)膦酸

在3-膦酰基丙酸(1.62g,10.5mmol)的15mL無水DMF溶液中加入
HATU(4g,10.5mmol)。反應混合物冷卻至0℃,并且緩慢加入二異丙基
乙基胺(9mL,51.5mmol),使反應混合物變成明亮的黃色。添加完成后,
移走冰浴,并且將反應混合物在23℃攪拌~20分鐘。然后,將(3R)-1-(((環
己基氧基)羰基)氧基)乙基3-氨基-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)丁酸酯
(1.73g,3.36mmol)的15mL無水DMF溶液加入至反應混合物中,然后
將其在23℃攪拌約2.5天。反應混合物的LCMS表明,通過UV的混合物
為約2:1的產物:原料。向反應混合物中加入另外的二異丙基乙基胺(2.4
mL,13.7mmol),然后加入3-膦酰基丙酸(0.54g,3.5mmol)和HATU(1.3
g,3.5mmol)。將反應混合物在23℃攪拌約4小時。LCMS表明,通過
UV的產物:原料為約10:1的比例。將反應混合物在23℃攪拌約18小時。
LCMS表明,通過UV的產物:原料為約20:1的比例。將反應混合物用乙
酸乙酯稀釋,并且用3NHCl(水溶液)洗滌,直到用LCMS觀察不到HATU-
衍生的極性雜質(例如≥4×洗滌)。有機層用水洗滌,然后用飽和氯化鈉水
溶液洗滌,經硫酸鈉干燥,過濾并且濃縮。將產生的白色固體在甲苯中攪
拌約3天,然后過濾并且高真空干燥,得到1.3g(3-(((R)-1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-
聯苯]-4-基)-4-((S)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)乙氧基)-4-氧代丁-2-基)氨
基)-3-氧代丙基)膦酸(2.1mmol,產率62%)。用X-射線晶體學測定絕對立
體化學。分離產物為結晶形式A。HRMS(ES+)C28H34ClFNO9P:計算值:
613.2;實測值:614.2[M+H]+。1HNMR(DMSO-d6)δ:10.45(brs,2H),
8.05(d,J=8.3Hz,1H),7.58(dd,J=6.8,2.7Hz,1H),7.50(dd,J=8.2,
1.5Hz,2H),7.46(ddd,J=6.6,4.3,2.1Hz,1H),7.37(dd,J=10.3,8.8
Hz,1H),7.30(d,J=8.2Hz,2H),6.61(q,J=5.4Hz,1H),4.49-4.59(m,
1H),4.21-4.34(m,1H),2.71-2.86(m,2H),2.49-2.52(m,2H),2.10-2.27
(m,2H),1.75-1.88(m,2H),1.63(m,4H),1.14-1.51(m,9H)。

下面結晶形式A的X-射線粉末衍射(XPRD)、差示掃描量熱法(DSC)
和熱重分析(TGA)由更大批次的(3-(((R)-1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-
基)-4-((S)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)乙氧基)-4-氧代丁-2-基)氨基)-3-氧代
丙基)膦酸獲得,其制備與上述方法相似。

形式A

a)X-射線粉末衍射

X-射線粉末衍射圖在BrukerTMD8GADDSDiscover衍射計上記錄,
CuKα陽極(CuKα輻射(λ=1.5418))。

由此測定的X-射線衍射圖在表1中顯示,并且最重要線的反射線表示
于下表2。

表2.

角度
強度%
2-θ°

3.331
48.3
5.729
47
8.734
23.7
11.423
33.2
14.4
44.8
15.861
28.4
16.545
59.6
17.525
90.7
17.817
81.5
18.732
99.8
19.611
49.1
20.153
74.4
20.68
83.4
21.169
38.1

21.696
100
21.94
66.2
23.174
31.5
23.937
48.3
24.117
57.7
24.571
61.1
25.024
62.1
25.47
50.5
27.365
51.3
27.362
40.4
27.985
31.1
28.386
36.4
29.167
39.6
29.606
48.2
30.692
45
31.789
40
32.487
34.2

b)元素分析:

含水量(KarlFischer滴定):0.77%m/m*(質量/質量)

表3

元素
理論含量[%m/m]
測定含量[%m/m]
C
54.77
54.69*
H
5.58
6.231*
N
2.28
2.22*
F
3.09
未報告*
Cl
5.77
未報告*
P
5.04
未報告*
O
23.45
未報告*

試驗數據相應于對(3-(((R)-1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-
基)-4-((S)-1-(((環己基氧基)羰基)氧基)乙氧基)-4-氧代丁-2-基)氨基)-3-氧代
丙基)膦酸游離酸的預期。

c)差示掃描量熱法(DSC):

形式A的差示掃描量熱法(DSC)和熱重分析(TGA)跡線用TA儀器
Q2000(DSC)和Q5000(TGA)、鋁盤(TI20608)得到;加熱速率為10C°/分
鐘,溫度范圍:25至250℃。熔化吸熱:T起始=146.09,ΔH=66.56J/g;在
熔化開始前的小初始重量損失為0.38%。

DSC:

準確稱取0.5-1.0mg試驗物質至封閉的樣品盤。空樣品盤用作參照。
DSC熱分析圖記錄如下:該裝置的溫度調節至約-40℃,并且以10℃/分鐘
的加熱速率加熱至300℃,在50mL/分鐘的氮氣流。該裝置用銦(至少
99.9999%純)校準溫度和焓。使用這種方法測量的樣品溫度的準確度在約±
1℃內,并且測量的熔化熱可在約±5%的相對誤差內。

TGA:

準確稱取0.5-1.0mg試驗物質至開放樣品盤。TGA熱分析圖記錄如下:
將樣品上樣至爐中,溫度平衡至30℃,并且以10℃/分鐘的加熱速率加熱
至300℃,在25mL/分鐘的氮氣流下。

該裝置用鎳和鋁校準溫度,并且用100mg標準品校準重量。

實施例2:(R)-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-3-(3-膦酰基丙酰氨基)
丁酸的合成


A:(R)-(3-((1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-4-乙氧基-4-氧代丁-2-基)
氨基)-3-氧代丙基)膦酸

將(R)-3-氨基-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)丁酸乙酯(114mg,0.306
mmol)、3-膦酰基丙酸(47.2mg,0.306mmol)、EDC(58.7mg,0.306mmol)
和HOBT(46.9mg,0.306mmol)的大多數溶于DMF(1mL),并且加入
DIPEA(0.321mL,1.837mmol)。攪拌反應混合物,并且在70℃加熱約18
小時,然后過濾,并且用HPLC純化:30-80%ACN/H2O0.1%TFA,40mL/
分鐘歷經15分鐘,30×100SunfireC18,產品洗脫約5.5-8分鐘。將混合
級分在20-55%的梯度歷經20分鐘再次純化,并且產物洗脫~12.5-13分鐘。
將級分蒸發至干,得到(R)-(3-((1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-4-乙氧基-4-
氧代丁-2-基)氨基)-3-氧代丙基)膦酸(17mg)。LCMS(ES+)
C21H24ClFNO6P:計算值:471.1;實測值:472.0[M+H]+。


B:(R)-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-3-(3-膦酰基丙酰氨基)丁酸

將(R)-(3-((1-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-4-乙氧基-4-氧代丁-2-基)氨
基)-3-氧代丙基)膦酸(17mg,0.036mmol)與0.144mL1NNaOH、0.288mL
水攪拌,然后是0.5mLMeOH。加入另外的0.2mL1NNaOH,并且將溶
液加熱至50℃達1小時。蒸發溶劑,在23℃加入0.4mL的1NHCl,并
且再次將混合物濃縮至干。加入乙腈,并且過濾混合物并且通過HPLC純
化:20-55%ACN/H2O0.1%TFA,歷經8分鐘,40mL/分鐘30×10Sunfire
C18,在7-7.5分鐘洗脫產物。(R)-4-(5’-氯-2’-氟-[1,1’-聯苯]-4-基)-3-(3-膦酰
基丙酰氨基)丁酸(3.3mg)。LCMS(ES+)C19H20ClFNO6P:計算值:443.1;
實測值:444.1[M+H]+。1HNMR(MeOD)δ:7.46-7.41(m,3H),7.37-7.35
(m,2H),7.33-7.29(m,1H),7.16(dd,J=10.2,8.8Hz,1H),4.44(m,
1H),3.01(dd,J=13.5,5.5Hz,1H),2.83(dd,J=21.3,7.8Hz,1H),
2.44-2.31(m,4H),1.73-1.62(m,2H)。

實施例3.1-3.15根據實施例1中描述的方法制備。實施例3.1使用來自
ChiralpakID柱庚烷/TBME98:2的第一洗脫異構體制備。









可以看出,本發明化合物可用作中性內肽酶活性抑制劑,因此可用于
治療與中性內肽酶的活性相關的疾病和病癥,例如本文所公開的疾病。

此外,本發明的化合物不會引起CNS中Aβ肽濃度的增加或僅很小地
引起CNS中Aβ肽濃度的增加,并且可能提供有益的安全性。

應理解的是,本發明僅通過實施例的方式予以描述,并且可以在本發
明的范圍和精神內進行修飾。

關 鍵 詞:
作為 NEP 中性 肽酶 抑制劑 取代 聯苯 丁酰膦酸 衍生物
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:作為NEP中性內肽酶抑制劑的取代的聯苯丁酰膦酸衍生物.pdf
鏈接地址:http://www.wwszu.club/p-6385995.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
鬼佬大哥大