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載藥脂質體的制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201010131339.7

申請日:

2010.03.18

公開號:

CN102188379B

公開日:

2014.10.15

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A61K 9/127申請日:20100318|||專利申請權的轉移IPC(主分類):A61K 9/127變更事項:申請人變更前權利人:魯翠濤變更后權利人:浙江海正藥業股份有限公司變更事項:地址變更前權利人:100021 北京市朝陽區武圣西里8樓2門403變更后權利人:318000 浙江省臺州市椒江區外沙路46號登記生效日:20121211|||公開
IPC分類號: A61K9/127; A61K45/00; A61K47/34; A61K47/32 主分類號: A61K9/127
申請人: 浙江海正藥業股份有限公司
發明人: 魯翠濤; 趙應征
地址: 318000 浙江省臺州市椒江區外沙路46號
優先權:
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201010131339.7

授權公告號:

102188379B|||||||||

法律狀態公告日:

2014.10.15|||2013.04.10|||2013.01.09|||2011.09.21

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||專利申請權、專利權的轉移|||公開

摘要

本發明涉及一種載藥脂質體的制備方法。該方法將采用二次冷凍干燥法制備包載水溶性藥物脂質體,第一次冷凍干燥是在水相體系中進行,第二次冷凍干燥在有機相體系中進行,通用二次冷凍干燥法實現水溶性藥物均勻包載于脂質體中,提高藥物包封率,減少包載水溶性藥物脂質體的突釋效應。本發明的脂質體適于包裹各種水溶性藥物,并且適用劑型范圍廣。

權利要求書

1.一種載藥脂質體的制備方法,其特征在于:將水溶性藥物與兩親性高分子材料溶解于水相體系中,進行第一次冷凍干燥處理,然后將包含水溶性藥物的凍干粉與脂質體成膜材料均勻分散于有機相體系中,進行第二次冷凍干燥方法,制成包載水溶性藥物的脂質體。2.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述的水溶性藥物是指不溶于中等或弱極性有機溶劑的親水性強的藥物,包括發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的中藥有效成分、化學藥物、氨基酸、多肽或蛋白藥物。3.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述的兩親性高分子材料是指藥學上公認的天然高分子材料、半合成高分子材料和合成高分子材料,包括聚乙二醇、泊洛沙姆、聚維酮和聚乙烯醇。4.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述的脂質體成膜材料包括氫化磷脂或合成磷脂、膽固醇和表面活性劑,氫化磷脂包括:氫化蛋黃磷脂或氫化大豆磷脂;合成磷脂是指藥學已公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物,包括:二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物;表面活性劑包括:吐溫系列、司盤系列、油酸、十六醇、十八醇、甘油、丙二醇。5.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述的有機相是指碳數在10以內的直鏈、支鏈的醇。6.根據權利要求5所述的制備方法,其特征在于:所述的有機相是叔丁醇。7.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述的水相體系和有機相體系中還含有藥學公知的表面活性劑、多元醇或糖類、高分子骨架支持劑、抗氧劑、穩定劑、緩沖鹽中的一種或幾種。8.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述的包載水溶性藥物的脂質體粒徑是微米級或納米級。9.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:所述的包載水溶性藥物的脂質體進一步通過透析、離心、層析的處理方法去除脂質碎片和多余鹽離子。

說明書

載藥脂質體的制備方法

【技術領域】

本發明屬于藥物制劑學領域,更具體地說,本發明涉及一種載藥脂質體的制備方法。

【背景技術】

脂質體(liposomes)是一種由排列有序的脂質雙分子層組成的單層或多層微囊。脂質體屬于膠體系統,具有類似細胞的結構,與細胞膜親和力強,可以增加被包封藥物透過細胞膜的能力。脂質體生物相容性好,可實現藥物體內靶向遞送,具有延長藥物作用時間、增加藥物的體內外穩定性、降低藥物毒性,增強藥理作用等諸多優點。

制備脂質體的方法很多,有薄膜分散法、逆相蒸發法、冷凍干燥法、注入法、超聲波分散法等。目前脂質體用于包載脂溶性藥物較好,而包載水溶性藥物時脂質體包封率較低,通常達不到80%包封率的最低要求。盡管有報道利用逆相蒸發法等制備包載水溶性藥物脂質體的方法,但該方法藥物突釋效應明顯,不能滿足藥典相應的規定。

采用pH梯度法等主動載藥技術可以提高脂質體對于水溶性藥物包載量,但是主動載藥技術操作較為繁瑣,重現性差,很難工業化批量制備。

此外,大多數制備方法得到的脂質體一般是呈液體狀態,其保存、運輸等均比較困難,易受環境條件變化的影響而出現絮凝、聚團、沉淀、藥物滲漏等問題,且在體內作用時間較短,影響制劑的有效、安全和穩定。

【發明內容】

本發明要解決的技術問題是針對現有制備包載水溶性藥物的脂質體的不足之處,提供一種解決方案。

我們在制備包載水溶性藥物的脂質體實驗中發現,水溶性藥物很難溶解或均勻分散于中等極性或弱極性有機溶劑中,因此不能與磷脂材料共同分散于有機相體系中制備脂質體。但是有一些兩親性高分子材料如聚乙二醇、泊洛沙姆、聚維酮等,很容易分散于水和中等極性甚至弱極性有機溶劑中。因此我們將水溶性藥物與兩親性高分子材料先溶解于水相體系中,進行第一次冷凍干燥處理,然后將包含水溶性藥物的凍干粉末與脂質體成膜材料均勻分散于有機相體系中進行第二次冷凍干燥處理,實現水溶性藥物均勻包載于脂質體中,提高藥物在脂質體的包封率,減少包載水溶性藥物脂質體的突釋效應。

經過多次試驗,為提高載藥脂質體制備效率,本發明采用了以下的技術方案:

本發明的一種載藥脂質體的制備方法,是將水溶性藥物與兩親性高分子材料溶解于水相體系中,進行第一次冷凍干燥處理,然后將包含水溶性藥物的凍干粉與脂質體成膜材料均勻分散于有機相體系中,進行第二次冷凍干燥方法,制成包載水溶性藥物脂質體,實現水溶性藥物均勻包載在于脂質體中,提高藥物在脂質體的包封率,減少包載水溶性藥物脂質體的突釋效應。

上述的水溶性藥物是指不溶于中等或弱極性有機溶劑的親水性強的藥物,包括發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的中藥有效成分、化學藥物、氨基酸、多肽或蛋白藥物。

上述的兩親性高分子材料是指藥學上公認的天然高分子材料、半合成高分子材料和合成高分子材料,包括聚乙二醇、泊洛沙姆、聚維酮和聚乙烯醇。

上述的脂質體成膜材料包括氫化磷脂、合成磷脂、膽固醇和表面活性劑,氫化磷脂包括:氫化蛋黃磷脂和/或氫化大豆磷脂;合成磷脂是指藥學已公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物,包括:二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物;表面活性劑包括:吐溫系列、司盤系列、油酸、十六醇、十八醇、甘油、丙二醇。

上述的有機相是指碳數在10以內的直鏈、支鏈的醇,優選叔丁醇。

上述的水相體系和有機相體系中可以含有藥學公知的表面活性劑、多元醇或糖類、高分子骨架支持劑、抗氧劑、穩定劑、緩沖鹽。

上述的包載水溶性藥物的脂質體粒徑可以是微米級或納米級。

上述的包載水溶性藥物的脂質體可以進一步通過透析、離心、層析的處理方法去除脂質碎片和多余鹽離子。

上述的包載水溶性藥物脂質體可以進一步加工,形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥制劑的原料,制成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體制劑。

上述的包載水溶性藥物脂質體的制備方法具有以下優點:

1.本發明的包載水溶性藥物脂質體的制備方法提高水溶性藥物在脂質體的包封率,明顯減少包載水溶性藥物的滲漏。

2.本發明的包載水溶性藥物脂質體的制備方法減少包載水溶性藥物脂質體的突釋效應,延長水溶性藥物的釋放,達到緩釋效果。

3.本發明的包載水溶性藥物脂質體的制備方法適于包裹多種水溶性藥物,尤其適用于包載易氧化的藥物、熱不穩定的藥物和具有生物活性的氨基酸、多肽、蛋白類藥物。

4.本發明制備的包載水溶性藥物脂質體成品為固態,穩定性高,適用劑型廣泛,可以進一步加工,形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥制劑的原料,制成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體制劑。

注:突釋效應(dumping或burst?effect),藥物釋放首先是粘附在微粒表面的少量藥物發生初期的快速釋放,稱為突釋效應。中華人民共和國藥典(2005版)規定,脂質體等載藥微粒在開始0.5h內的釋放量應低于40%。

【具體實施方式】

現結合下列實例來進一步描述本發明。

以下通過幾個實施例來進一步說明本發明。

實施例1:雙氯芬酸鈉脂質體

本發明的第一個實施方案采用雙氯芬酸鈉為靶藥,兩親性高分子材料選用聚維酮(PVP),脂質體成膜材料選用氫化大豆磷脂、膽固醇、吐溫80和十六醇,制備包載雙氯芬酸鈉的脂質體。

實驗組:20mg聚維酮(PVP)溶解于6ml水中,加入8mg雙氯芬酸鈉完全溶解,裝于西林瓶中,-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,20h)得到雙氯芬酸鈉固態凍干品。20mg氫化大豆磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80和2mg十六醇共同溶于20ml叔丁醇,在65℃水浴中溶解,加入雙氯芬酸鈉固態凍干品,完全溶解,加入120mg甘露醇(PVP),分散均勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載雙氯芬酸鈉的脂質體固態凍干品。

對照組:20mg氫化大豆磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80和2mg十六醇共同溶于20ml叔丁醇,在65℃水浴中溶解,加入8mg雙氯芬酸鈉微粉(粒徑在15μm以下)分散均勻,加入120mg甘露醇,完全混勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載雙氯芬酸鈉的脂質體固態凍干品。

實驗組和對照組分別注入蒸餾水5ml,輕微搖動,即得到包載雙氯芬酸鈉的脂質體混懸液,然后進行以下測定。

包封率測定:取雙氯芬酸鈉脂質體混懸液經過10000r/min離心1min,吸取含有游離雙氯芬酸鈉的上層溶液2ml,用紫外-可見分光光度計于274nm測吸收度,代入雙氯芬酸鈉標準曲線,利用“包封率(%)=[(雙氯芬酸鈉總量-游離雙氯芬酸鈉量)/雙氯芬酸鈉總量]×100”公式計算雙氯芬酸鈉脂質體的包封率。雙氯芬酸鈉脂質體混懸液樣品25℃放置0.5h后再次測定包封率。

雙氯芬酸鈉標準曲線:精密稱取雙氯芬酸鈉標準品,用蒸餾水配制成0.1、0.2,0.5,1.0,2.5mg/ml的系列標準溶液,于274nm測吸收度,得到雙氯芬酸鈉濃度與吸收度的標準曲線,利用該標準曲線計算雙氯芬酸鈉的濃度。

結果:實驗組雙氯芬酸鈉脂質體包封率平均值為82%,而對照組包封率平均值為51%。25℃放置0.5h后實驗組雙氯芬酸鈉脂質體包封率平均值為68%,0.5h內的釋放量低于40%,避免了脂質體的突釋效應。而對照組25℃放置0.5h后包封率平均值降為28%,0.5h內的釋放量超過40%,脂質體存在突釋效應。結果表明本發明制備的雙氯芬酸鈉脂質體有效提高了雙氯芬酸鈉的包封率,避免了脂質體的突釋效應,從而延長了雙氯芬酸鈉脂質體的釋放作用。

實施例2:鹽酸阿霉素脂質體

本發明的第二個實施方案采用鹽酸阿霉素為靶藥,兩親性高分子材料聚乙二醇(PEG?2000),脂質體成膜材料選用二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、聚乙二醇2000接枝的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)和司盤85,制備包載鹽酸阿霉素的脂質體。

實驗組:15mg聚乙二醇(PEG?2000)溶解于6ml水中,加入5mg鹽酸阿霉素完全溶解,裝于西林瓶中,-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,20h)得到鹽酸阿霉素固態凍干品。5mg二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、1mg聚乙二醇2000接枝的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)、2mg司盤85加入20ml叔丁醇中,在65℃水浴中溶解,加入鹽酸阿霉素固態凍干品,加入100mg聚乙二醇(PEG?2000),分散均勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載鹽酸阿霉素的脂質體固態凍干品。

對照組:5mg二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、1mg聚乙二醇2000接枝的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)、2mg司盤85加入20ml叔丁醇中,在65℃水浴中溶解,加入5mg鹽酸阿霉素微粉(粒徑在15μm以下)分散均勻,加入100mg聚乙二醇(PEG?2000),完全混勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載鹽酸阿霉素的脂質體固態凍干品。

實驗組和對照組分別注入蒸餾水5ml,輕微搖動,即得到包載鹽酸阿霉素的脂質體混懸液,然后進行以下測定。

包封率測定:取鹽酸阿霉素脂質體混懸液經過10000r/min離心1min,吸取0.5ml含有游離鹽酸阿霉素的上層溶液,用紫外-可見分光光度計于480nm測吸收度,代入鹽酸阿霉素標準曲線,利用“包封率(%)=[(鹽酸阿霉素總量-游離鹽酸阿霉素量)/鹽酸阿霉素總量]×100”公式計算鹽酸阿霉素脂質體的包封率。鹽酸阿霉素脂質體混懸液樣品25℃放置0.5h后再次測定包封率。

鹽酸阿霉素標準曲線:精密稱取鹽酸阿霉素標準品,用蒸餾水配制成0.25、0.5,1.0,2.0,5.0mg/ml的系列標準溶液,于480nm測吸收度,得到鹽酸阿霉素濃度與吸收度的標準曲線,利用該標準曲線計算鹽酸阿霉素的濃度。

結果:鹽酸阿霉素脂質體包封率平均值為84%,而對照組包封率平均值為42%。25℃放置0.5h后鹽酸阿霉素脂質體包封率平均值為73%,未顯示突釋效應。而對照組25℃放置0.5h后包封率平均值降為16%,具有明顯突釋效應。結果表明本發明制備的鹽酸阿霉素脂質體有效提高藥物的包封率,避免了脂質體的突釋效應,提高其制劑的安全性和穩定性。

實施例3:重組人生長激素脂質體

本發明的第三個實施方案采用蛋白類藥物重組人生長激素為對象,兩親性高分子材料選用泊洛沙姆(Poloxamer?188),脂質體成膜材料選用氫化大豆磷脂、膽固醇、吐溫80和丙二醇,制備包載重組人生長激素的脂質體。

實驗組:20mg泊洛沙姆(Poloxamer?188)溶解于6ml水中,加入1ml重組人生長激素(5mg/ml)完全混勻,裝于西林瓶中,-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,20h)得到重組人生長激素固態凍干品。20mg氫化大豆磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80和4mg丙二醇共同溶于20ml叔丁醇,在65℃水浴中溶解,加入重組人生長激素固態凍干品,完全溶解,加入150mg甘露醇(PVP),分散均勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載重組人生長激素的脂質體固態凍干品。

對照組:20mg氫化大豆磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80和4mg丙二醇共同溶于20ml叔丁醇,在65℃水浴中溶解,加入1ml重組人生長激素(5mg/ml)分散均勻,加入150mg甘露醇,完全混勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載重組人生長激素的脂質體固態凍干品。

實驗組和對照組分別注入蒸餾水2ml,輕微搖動,即得到包載重組人生長激素的脂質體混懸液,然后進行以下測定。

包封率測定:包載重組人生長激素的脂質體混懸液經過Sephadex?G-75凝膠柱洗脫,將游離重組人生長激素與包載到脂質體中的重組人生長激素分離,以考馬斯亮藍G-250染色法測定收集的游離重組人生長激素溶液的含量,利用“包封率(%)=[(重組人生長激素總量-游離重組人生長激素量)/重組人生長激素總量]×100”公式計算重組人生長激素脂質體的包封率。重組人生長激素脂質體混懸液樣品25℃放置0.5h后再次測定包封率。

結果:實驗組重組人生長激素脂質體包封率平均值為88%,而對照組包封率平均值為38%。25℃放置0.5h后實驗組重組人生長激素脂質體包封率平均值為80%,0.5h內的釋放量低于40%,避免了脂質體的突釋效應。而對照組25℃放置0.5h后包封率平均值降為18%,0.5h內的釋放量超過40%,脂質體存在突釋效應。結果表明本發明制備的重組人生長激素脂質體有效提高了重組人生長激素的包封率,避免了脂質體的突釋效應,從而延長了重組人生長激素脂質體的釋放作用。

實施例4:鹽酸伊立替康脂質體

本發明的第四個實施方案采用鹽酸伊立替康為靶藥,兩親性高分子材料泊洛沙姆(Poloxamer?188),脂質體成膜材料選用氫化蛋黃磷脂、膽固醇、吐溫80,制備包載鹽酸伊立替康的脂質體。

實驗組:15mg泊洛沙姆(Poloxamer?188)溶解于6ml水中,加入5mg鹽酸伊立替康完全溶解,裝于西林瓶中,-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,20h)得到鹽酸伊立替康固態凍干品。20mg氫化蛋黃磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80加入20ml叔丁醇中,在65℃水浴中溶解,加入鹽酸伊立替康固態凍干品,加入100mg泊洛沙姆(Poloxamer?188),分散均勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載鹽酸伊立替康的脂質體固態凍干品。

對照組:20mg氫化蛋黃磷脂、6mg膽固醇、2mg吐溫80加入20ml叔丁醇中,在65℃水浴中溶解,加入5mg鹽酸伊立替康微粉(粒徑在15μm以下)分散均勻,加入100mg1泊洛沙姆(Poloxamer?188),完全混勻,裝于西林瓶中-30℃冷凍5小時,冷凍干燥(5×10-4Pa,24h)得到包載鹽酸伊立替康的脂質體固態凍干品。

實驗組和對照組分別注入蒸餾水5ml,輕微搖動,即得到包載鹽酸伊立替康的脂質體混懸液,然后進行以下測定。

包封率測定:取鹽酸伊立替康脂質體混懸液經過10000r/min離心1min,吸取2ml含有游離鹽酸伊立替康的上層溶液,用紫外-可見分光光度計于370nm測吸收度,代入鹽酸伊立替康標準曲線,利用“包封率(%)=[(鹽酸伊立替康總量-游離鹽酸伊立替康量)/鹽酸伊立替康總量]×100”公式計算鹽酸伊立替康脂質體的包封率。鹽酸伊立替康脂質體混懸液樣品25℃放置0.5h后再次測定包封率。

鹽酸伊立替康標準曲線:精密稱取鹽酸伊立替康標準品,用蒸餾水配制成0.25、0.5,1.0,2.0,5.0mg/ml的系列標準溶液,于370nm測吸收度,得到鹽酸伊立替康濃度與吸收度的標準曲線,利用該標準曲線計算鹽酸伊立替康的濃度。

結果:鹽酸伊立替康脂質體包封率平均值為81%,而對照組包封率平均值為35%。25℃放置0.5h后鹽酸伊立替康脂質體包封率平均值為69%,未顯示突釋效應。而對照組25℃放置0.5h后包封率平均值降為12%,具有明顯突釋效應。結果表明本發明制備的鹽酸伊立替康脂質體有效提高藥物的包封率,避免了脂質體的突釋效應。

實施例5:鹽酸伊立替康脂質體注射劑

本發明的第五個實施方案采用實施例3制備的鹽酸伊立替康脂質體進一步加工制備鹽酸伊立替康脂質體注射劑。

將實施例3實驗組制得的鹽酸伊立替康脂質體混懸液通過0.8μm的微孔濾膜進行整粒,整粒后的脂質體經葡聚糖凝膠柱洗脫,將游離的鹽酸伊立替康與包載鹽酸伊立替康的脂質體分開。將包載鹽酸伊立替康脂質體封裝于5ml的安瓿中,60Co輻射滅菌(RAD=150~180萬),制成鹽酸伊立替康脂質體注射劑。鹽酸伊立替康脂質體注射劑取樣進行電鏡形態觀察,包載鹽酸伊立替康的脂質體形態圓整,均勻,無聚團,粒徑分布600-800nm。結果表明包載鹽酸伊立替康的脂質體可以制成注射劑等具體制劑,形態保持較好,穩定性較高。

在上述實施例中,僅對本發明進行了示范性描述,但是本領域技術人員在閱讀本專利申請后可以在不脫離本發明的精神和范圍的情況下對本發明進行各種修改。

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脂質體 制備 方法
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