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禽類加工中的微生物控制.pdf

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禽類 加工 中的 微生物 控制
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摘要
申請專利號:

CN201210154251.6

申請日:

2002.06.25

公開號:

CN102669502B

公開日:

2014.11.19

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A23L 1/015申請日:20020625|||公開
IPC分類號: A23L1/015; A23L1/315 主分類號: A23L1/015
申請人: 雅寶公司
發明人: 約翰N·浩沃斯
地址: 美國路易斯安那州
優先權: 2001.06.28 US 09/893,581; 2001.12.21 US 10/029,329
專利代理機構: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243 代理人: 張敬強;丁文蘊
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210154251.6

授權公告號:

||||||

法律狀態公告日:

2014.11.19|||2012.11.14|||2012.09.19

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明提供了屠宰禽類的改進方法,包括將禽類畜體或其部分用水洗滌的步驟,將殺微生物劑以下列形式被引入所述水中:(a)至少一種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲,其中的一個烷基是甲基,另一個烷基包含1至4個碳原子,或者(b)一種或多種活性鹵素類物質的殺微生物水溶液,該溶液是至少一種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲在含水介質中的衍生產品,其中的一個烷基是甲基,另一個烷基包含1至4個碳原子;或者(c):(a)和(b)二者;使該水中含有相當于10ppm?Cl2到150ppm?Cl2范圍內的殺生物有效量的活性溴,并且該量不明顯或不相當可觀地漂白禽類的表皮或者不對肉的感官味覺具有明顯或相當可觀的負面影響。

權利要求書

1.一種屠宰禽類的改進方法,該方法包括其中禽類畜體或其部分用
水洗滌的步驟,該改進包括將有效提供殺微生物活性量的鹵素基殺微生
物劑引入所述水中,所述殺微生物劑以下列形式被引入:
(a)至少一種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲,其中的一個烷基是甲
基,另一個烷基包含1至4個碳原子,或者(b)一種或多種活性鹵素類
物質的殺微生物水溶液,該溶液是至少一種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰
脲在含水介質中的衍生產品,其中的一個烷基是甲基,另一個烷基包含1
至4個碳原子;或者(c):(a)和(b)二者;
使該水中含有相當于10ppm?Cl2到150ppm?Cl2范圍內的殺生物有效量
的活性溴,并且該量不明顯或不相當可觀地漂白禽類的表皮或者不對肉
的感官味覺具有明顯或相當可觀的負面影響。
2.權利要求1的改進方法,其中所述殺微生物劑包括(d)至少一
種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲,其選自1,3二溴-5,5-二甲基乙內酰
脲、1,3-二溴-5-乙基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-正丙基-5-甲基乙
內酰脲和1,3-二溴-5-異丁基-5-甲基乙內酰脲,或者(e)至少一種或多
種活性鹵素類物質的殺微生物水溶液,該溶液是至少一種1,3-二溴-5,5-
二烷基乙內酰脲在含水介質中的衍生產品,所述乙內酰脲選自1,3-二溴
-5,5-二甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-乙基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-
正丙基-5-甲基乙內酰脲和1,3-二溴-5-異丁基-5-甲基乙內酰脲,或者
(f):(d)和(e)二者。
3.權利要求1的改進方法,其中所述殺微生物劑是(g)1,3-二溴
-5,5-二甲基乙內酰脲,或者(h)一種或多種活性鹵素類物質的殺微生物
水溶液,該溶液是1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲在含水介質中的衍生產
品,或者(i):(g)和(h)二者。

說明書

禽類加工中的微生物控制

本發明申請是申請號為02813135.5(PCT/US02/20236),國際申請日
為2002年6月25日的,發明名稱為“禽類加工中的微生物控制”的發
明申請的分案申請。

背景技術

禽類加工是其中微生物控制至關重要的領域。基于有關的加工性質,
存在著許多禽類與各種病原體接觸的機會,所述病原體是可移動細菌,
例如大腸桿菌(Escherichia?coli)、腸炎沙門氏菌(Salmonella?
enteritidis)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella?typhimurim)、空腸彎曲
桿菌(Campylobacter?jejuni)、結腸彎曲桿菌(Campylobacter?coli)、
紅嘴鷗彎曲桿菌(Campylobacter?lari)以及生物膜形式的病原體,例
如單核細胞增多性李斯特桿菌(Listeria?monocytogenes)、熒光假單胞
菌(Pseudomonas?fluorescens)、綠膿桿菌(Pseudomonas?aeruginosa)、
屎腸球菌(Enterococcus?faecium)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?
aureus)。據認為處理、加工和消除細菌感染的禽類是非常令人討厭的。

因此,有人建議將某些氯基殺微生物劑嘗試用于提供與禽類加工有
關的適當衛生環境。不巧地是,雖然某些氯基殺微生物劑顯示出一些效
果,但它們具有多種嚴重缺點。其一是它們不如期望的那樣有效。第二,
它們易于產生臭味并且在許多情況下可對禽類畜體產生漂白作用,這種
作用令消費者不喜愛。此外,由于與去除禽類內臟有關的糞便物質的傳
播,糞便細菌充斥。這種惡劣的條件結果導致洗滌水中、濕表面如切割
表面、水槽表面和其它無論如何與這些洗滌水接觸的下游設備上的高氮
水平。不巧地是,某些氯類物質的氯基殺微生物劑易于與含氮物質反應
形成氯胺,氯胺是催淚劑并對金屬表面具有溶蝕性。事實上,含有含氮
雜質的水洗滌槽中低至50ppm的氯就可產生工廠工人無法忍受量的空氣
重播性催淚劑。此外,形成氯胺過程中氯的消耗導致殺生效果的明顯喪
失,因為氯胺不是殺生活性物質。

顯然,在禽類加工工業中存在對一種新的、更有效的、經濟可行方
式的微生物控制方法的需求。

發明內容

本發明通過在禽類加工中和禽類加工中使用的設備、儀器、裝置和/
或水的消毒過程中以及/或者由禽類加工獲得的(屠宰后)畜體和/或部
分提供并利用某些高效的鹵素基殺微生物劑滿足了前述需求。本發明使
用的殺微生物劑可由相對低成本的原料以直接加工的方式經濟地制備,
并且由于它們的效力,它們可提供在經濟上符合工業需求的微生物控制。

在其一個實施方案中,本發明提供改進的禽類加工方法,該方法包
括用鹵素基殺微生物劑消毒這類加工中使用的設備、儀器、裝置和/或水,
以及/或者由這類加工方法獲得的禽類的畜體和/或部分,所述殺微生物
劑是:

(I)一種或多種活性鹵素類物質的殺微生物水溶液,該溶液是(a)溴、氯
或氯化溴,或者其任意兩種或全部三種,和(b)水溶性來源的氨基磺酸
根陰離子在含水介質中的衍生產品;或者

(II)一種或多種活性鹵素類物質的殺微生物水溶液,該溶液是至少一種
1,3-二鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲在含水介質中的衍生產品,其中一個鹵
原子是氯原子并且另一個是氯或溴原子,并且其中各個烷基獨立地包含1
至約4個碳原子;或者

(III)一種或多種活性鹵素類物質的殺微生物水溶液,該溶液是至少一
種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲在含水介質中的衍生產品,其中的一個
烷基是甲基,另一個烷基包含1至約4個碳原子;或者

(IV)(I)、(II)和(III)的任意兩種或多種的組合。

上面(I)的衍生產品是一種或多種活性鹵素類物質的殺微生物水溶
液,該溶液通過水中的溴、氯或氯化溴,或者其任意兩種或全部三種,
與水溶性來源的氨基磺酸根陰離子之間的反應形成和獲得。包含100,000
ppm以上活性鹵素的該類濃溶液可以商品名ATABROM909殺生劑購自
Albemarle?Corporation。濃溶液,例如這種濃溶液可首先進一步用水
稀釋或者不經稀釋地應用于禽類加工中使用的設備、儀器或者裝置以及
加入禽類加工用水中。另一方面,在應用于禽類畜體或其部分之前,這
種濃溶液應用水或在水中進行稀釋,例如通過將濃溶液加到冰水槽等中
的水中。類似地,上面(II)和(III)的衍生產品是一種或多種活性鹵素類
物質的殺微生物水溶液,該溶液通過將特定的1,3-二鹵代-5,5-二烷基乙
內酰脲溶于水中形成和獲得。這類1,3-二鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲通常
可以以固體和可由這類固體形成的濃縮水溶液形式購得,對于禽類加工
中使用的設備、儀器或者裝置,它們可以進一步稀釋或無需稀釋并加到
禽類加工用水中。但對于禽類畜體或其部分的應用,使用前應將該濃溶
液進一步用水稀釋,或者應將選擇的1,3-二鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲固
體以無需形成中間較濃溶液而直接產生所需殺微生物劑劑量的比例加到
水中。

純粹出于方便,當由氯化溴、溴和氯或者溴、氯和氯化溴以及氨基
磺酸鹽制成時,下文中有時將上述(I)的殺微生物劑稱為“氨基磺酸鹽-
穩定的氯化溴”,然而,從技術上說,含水介質中的實際化學物質大多不
是氯化溴分子或氨基磺酸鹽加成物或氯化溴的復合物。因此,命名“氨
基磺酸鹽-穩定的氯化溴”是指稱這類組合物的簡單的書記方式,并且該
命名并非象征、表示或暗示該組合物的任何實際化學結構。

在優選的實施方案中,用于上述加工的殺微生物劑是(A)溴基殺微
生物劑,其包括一種或多種活性溴類物質的高堿性殺微生物水溶液,所
述溴類物質由水中溴或氯化溴、氯化溴和溴的混合物或者溴和氯的組合
(其中氯的摩爾量等于溴的摩爾量或小于溴的摩爾量)與水溶性來源的
氨基磺酸根陰離子的反應獲得,或者(B)至少一種1,3-二溴-5,5-二烷基
乙內酰脲的殺微生物水溶液,其中的一個烷基是甲基且另一個烷基包含1
至約4個碳原子;或者(C)(A)和(B)二者的組合。因此,在本發明的實
施方案中,將禽類加工中使用的設備、儀器、裝置和/或水進行消毒,以
及/或者將由這類加工方法得到的禽類畜體或其它部分進行消毒,“溴
基”是指該段落的(A)、(B)或(C)中提及的任何殺微生物劑。實際上,使
要消毒的表面與(A)、(B)或(C)的殺微生物水溶液接觸,它們包含殺微生
物有效量的殺微生物劑和/或其殺微生物水解產物。

這類溴基殺微生物劑比氯基殺微生物劑能更有效地抗細菌和生物
膜。此外,與氯基殺微生物劑相比,這些溴基殺微生物劑不易于產生臭
味,因此基本避免了不期望的漂白活性。再者,雖然某些溴基殺微生物
劑可能與含氮物質反應,例如存在于水中和與禽類加工有關的表面上,
但得到的溴胺仍具殺微生物活性。因此,通過使用這些溴基殺微生物劑,
這種副反應不會大大降低禽類加工器可利用的微生物學效力。再者,溴
胺通常不表現出令加工廠工人討厭的性質,但在相同的條件下,由使用
某些氯基殺微生物劑產生的氯胺易于成為高效催淚劑。

如上所述,上面(I)的鹵素基殺微生物劑是一種或多種活性鹵素類物
質的殺微生物水溶液,該溶液是溴、氯或氯化溴,或者其任意兩種或全
部三種,和水溶性來源的氨基磺酸根陰離子在含水介質,如水中的衍生
產品。同樣,上面(A)的溴基殺微生物劑是一種或多種活性溴類物質的殺
微生物水溶液,所述溶液是溴或氯化溴、氯化溴和溴的混合物或者溴和
氯的組合物(其中氯的摩爾量等于溴的摩爾量或小于溴的摩爾量)與水
溶性來源的氨基磺酸根陰離子在含水介質,如水中的衍生產品。為形成
這些衍生產品,將形成衍生產品的組分一起加到含水介質,例如水中,
當形成該產品時,通過使用無機堿如氫氧化鈉使所述介質或水總是具有
至少7的pH并且有效總是具有高于7,例如10-14的pH。當使用市售
的該類產品(Stabrom?909殺生劑;Albemarle?Corporation),公認的水
產品的pH一般為13-14。

同樣,上面(II)的鹵素基殺微生物劑是一種或多種活性鹵素類物質
的殺微生物水溶液,該溶液是至少一種1,3-二鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲
在含水介質,如水中的衍生產品,其中一個鹵原子是氯原子且另一個是
氯或溴原子,并且其中的烷基如上所述。上面(II)的鹵素基殺微生物劑
中,優選的是一種或多種活性鹵素類物質的殺微生物溶液,該溶液是至
少一種1,3-二鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲在含水介質,如水中的衍生產
品,其中一個鹵原子是溴原子且另一個是氯原子(并且烷基如上所述)。
上面(III)和上面(B)的溴基殺微生物劑是一種或多種溴類物質的殺微生
物溶液,該溶液是至少一種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲在含水介質,
如水中的衍生產品,其中的烷基如上所述。當本段落中提及的1,3-二鹵
代-5,5-二烷基乙內酰脲溶于含水介質,如水中時,將發生轉化,這樣活
性鹵素(或溴)類物質將存在于所得溶液中。

在許多情況下,通過將殺微生物劑本身(即以未稀釋的形式)或者
以其預先形成的濃溶液加到一次或多次禽類加工中正使用的水(如流入
冰水槽的水或者已經存在于冰水槽中的水)中,以形成本發明的稀釋的
殺微生物水溶液,即用于本發明上述實施方案的殺微生物水溶液,將該
溶液與要消毒的表面接觸。或者,將預先形成的濃縮的殺微生物劑的水
溶液直接應用于要消毒的表面(如切割案板或刀子的表面),或者更通常
地是將這類濃溶液與水混合形成較稀的殺微生物劑溶液,將該溶液應用
于被消毒物的和/或加入禽類加工操作中使用的水中。總之,本發明使用
的這些實施方案的殺微生物水溶液可全部或部分用禽類加工操作中正使
用的或者將要使用的水進行制備,或者可全部使用與禽類加工中使用的
或將要使用的水分隔的水來制備。在各種情況下,無論如何,接觸制得
的殺微生物水溶液和/或將其應用于各種表面都將導致有效消毒。

目前,用于實踐本發明任意實施方案的最優選的溴劑殺微生物劑是
水溶性1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲,其中的一個烷基是甲基且另一個
烷基是包含1至約4個碳原子的烷基,其中,1,3-二溴-5,5-二甲基乙
內酰脲是最優選的。

由后續的說明和附錄的權利要求書,本發明的各個實施方案和特征
將更加清晰。

附圖說明

附圖1是冰水槽的殺微生物處理對雞皮上假單胞菌屬細菌的生長的
影響的圖示說明。

附圖2是冰水槽的殺微生物處理對雞皮上的全部需氧菌的生長的影
響的圖示說明。

附圖3是冰水槽的殺微生物處理對雞皮上的假單胞菌屬細菌的生長
的影響的圖示說明。

附圖4是冰水槽的殺微生物處理對雞皮上的全部需氧菌的生長的影
響的圖示說明。

附圖5和6涉及使用由氨基磺酸鹽-穩定的氯化溴衍生的溴類物質根
除生物膜和浮游生物形式的HPC細菌試驗(異養培養皿計數
(heterotrophic?plate?count))獲得的結果的圖示說明,溴在水中的濃
度分別為0.5ppm和2ppm。

附圖7和8涉及使用由氨基磺酸鹽-穩定的氯化溴衍生的溴類物質根
除生物膜和浮游生物形式的HPC細菌試驗(異養培養皿計數)獲得的結果
的圖示說明,溴在水中的濃度分別為4ppm和10ppm。

附圖9涉及使用由1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲衍生的溴類物質
根除生物膜形式的HPC細菌試驗(異養培養皿計數)獲得的結果的圖示說
明,溴在水中的濃度為0.5ppm和5ppm。

附圖10涉及使用由1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲衍生的溴類物質
根除浮游生物膜形式的HPC細菌試驗(異養培養皿計數)獲得的結果的圖
示說明,溴在水中的濃度為0.5ppm和5ppm。

具體實施方式

本發明的一組用于禽類加工中使用的設備、儀器、裝置和/或水,以
及/或者由禽類加工方法得到的禽類畜體和/或部分的鹵素基殺微生物劑
是一組或多種活性鹵素類物質的殺微生物水溶液,所述物質由溴、氯或
氯化溴,或者其任意兩種或全部三種,與水溶液來源的氨基磺酸根陰離
子在水中的反應獲得。在形成該殺微生物劑中,如果使用氨基磺酸,這
該溶液中還應加入堿,優選足以使該溶液保持堿性,即pH高于7,優選
高于10,最優選為約13或高于13的堿。pH越低,溶液就越不穩定,因
此,如果在立即使用處制備溶液,則不必使用堿。但是,優選使用制得
的殺微生物濃溶液,并且在這種情況下,濃溶液呈pH為約13或高于13
的高堿性溶液。通常,這類濃溶液將包含高于50,000ppm(wt/wt)的活
性鹵素,優選至少約100,000ppm(wt/wt)的活性鹵素,并且有時高達約
150,000ppm(wt/wt)或更高的活性鹵素,活性鹵素的含量可通過常規的
淀粉-碘滴定法測定。

一組優選的該類物質是在含水介質中,由溴或更優選地由氯化溴、
氯化溴和溴的混合物或者溴和氯的組合物(其中氯的摩爾數等于溴的摩
爾數或小于溴的摩爾數)與氨基磺酸和/或氨基磺酸的水溶性鹽的反應形
成的溴基殺微生物溶液。除在就地使用處制備外,這類溶液應是具有pH
至少為約12,優選至少為約13的高堿性溶液,在制備溶液過程中,這種
pH可以使用堿如氫氧化鈉等達到。這類濃溶液可以從市場獲得,例如
Stabrom?909殺生劑(Albemarle?Corporation)。制備這些濃縮水溶液的
方法記載于共同擁有的2000年5月30日頒布的美國專利6,068,861和
2001年10月9日頒布的6,299,909B1,它們的所有公開內容均在此引
作參考。

應該清楚,甚至在使用氯化溴、氯化溴和溴的混合物或者溴和氯的
組合物(其中氯的摩爾數等于溴的摩爾數或者小于溴的摩爾數)制備的
殺微生物劑時,殺微生物劑是溴基的也通常如同大多數氯一樣,以氯化
物鹽如氯化鈉形式終止,因為在加工中堿金屬堿,如氫氧化鈉一般用于
使產物溶液的pH升高到至少為約13。因此,該產物溶液中的氯不是以重
要的殺微生物劑形式存在。

本發明使用的這些實施方案的另一組鹵素基殺微生物劑是一種或多
種N,N’-鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲,其中一個鹵原子是氯且另一個是溴
或氯,并且其中的烷基各自獨立地包含1至約4個碳原子。適合的該類
化合物包括,例如下面的化合物:1,3-二氯-5,5-二甲基乙內酰脲、1,3-
二氯-5,5-二乙基乙內酰脲、1,3-二氯-5,5-二正丁基乙內酰脲、1,3-二
氯-5-乙基-5-甲基乙內酰脲、N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲、N,N’-溴
氯-5-乙基-5-甲基-乙內酰脲,N,N’-溴氯-5-丙基-5-甲基乙內酰脲、
N,N’-溴氯-5-異丙基-5-甲基乙內酰脲、N,N’-溴氯-5-丁基-5-甲基乙內
酰脲、N,N’-溴氯-5-異丁基-5-甲基乙內酰脲、N,N’-溴氯-5-仲丁基-5-
甲基乙內酰脲、N,N’-溴氯-5-叔丁基-5-甲基乙內酰脲、N,N’-溴氯-5,5-
二乙基乙內酰脲、以及前述任意兩種或多種的混合物。N,N’-溴氯-5,5-
二甲基乙內酰脲可以以商品名Bromide殺生劑(Great?Lakes?Chemical?
Corporation)購得。另一組適合的溴氯乙內酰脲混合物是由主要的N,N’-
溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲和少量(重量比)的1,3-二氯-5-乙基-5-甲基
乙內酰脲組成的混合物。后一種混合物可在市場上以商品名Dantobrom
殺生劑(Lonza?Corporation)購得。

將本發明使用兩種或多種前述的N,N’-溴氯-5,5-二烷基乙內酰脲的
混合物時,該混合物中的單個殺生劑彼此可以以任意比例存在。

應該清楚,關于N,N’的命名,比如N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲
是指該化合物可以是1-溴-3-氯-5,5-二甲基乙內酰脲,(2)1-氯-3-溴
-5,5-二甲基乙內酰脲或(3)1-溴-3-氯-5,5-二甲基乙內酰脲和1-氯-3-
溴-5,5-二甲基乙內酰脲的混合物。另外,應該可以想到,某些1,3-二氯
-5,5-二甲基乙內酰脲和1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲可以以與(1)、(2)
或(3)的混合物形式存在。

更優選用于實踐本發明的這些實施方案的系列是1,3-二溴-5,5-二
烷基乙內酰脲的溴基殺微生物溶液,其中的一個烷基是甲基且另一個烷
基包含1-約4個碳原子。這些優選的殺生劑包括1,3-二溴-5,5-二甲基
乙內酰脲、1,3-二溴-5-乙基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-正丙基-5-
甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-異丙基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-正丁
基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-異丁基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-
仲丁基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-叔丁基-5-甲基乙內酰脲、以及它
們的兩種或多種的混合物。這些殺生劑中,基于成本效益的觀點,1,3-
二溴-5-異丁基-5-甲基乙內酰脲、1,3-二溴-5-正丙基-5-甲基乙內酰脲
和1,3-二溴-5-乙基-5-甲基乙內酰脲分別是這組中優選的、更優選的和
甚至更優選的。本發明使用的前述殺生劑的混合物中,優選使用1,3-二
溴-5,5-二甲基乙內酰脲作為組分之一,其中1,3-二溴-5,5-二甲基乙內
酰脲和1,3-二溴-5-乙基-5-甲基乙內酰脲是特別優選的。該組最優選的
殺微生物劑是1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲。該化合物可以以商品名
Albrom100T殺生劑和Albrom100PC殺生劑以片或顆粒形式購得
(Albemarle?Corporation)。

當兩種或多種前述的1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲殺生劑的混合
物時,該混合物中的單個殺生劑彼此可以以任意比例存在。

制備1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲的方法是已知的或者報道于文
獻中。

如果需要,可將1,3-二鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲溶于包含或不包
水的適合的溫和、無害的水溶性有機溶劑中,以形成可應用于設備、儀
器或裝置的表面的溶液。根據使用的溶劑,表面可進一步用清水洗滌以
除去這類溶劑殘留物。除了提高可加到溶液中的1,3-二鹵代-5,5-二烷基
乙內酰脲的量以有助于濃溶液的形成外,還可例如在禽類加工的上述各
處,當例如將這種濃溶液加到上述各處使用的加工用水中稀釋時,其具
有1,3二鹵代-5,5-二烷基乙內酰脲產生的殺微生物活性。本發明使用的
這種水溶液可包含適合的少量的溫和、無害的水溶性有機溶劑,至少在
有關的劑量水平下,它們是無毒的,例如乙腈。

在其中需要非常強的殺生活性的情況,例如定期清洗和消毒操作時,
本發明的殺微生物劑的濃水溶液可直接應用于被病原性微生物感染的禽
類加工設備、儀器和/或裝置的表面。這類濃溶液可包含,例如高達
150,000ppm或160,000ppm或更高含量的活性溴,和高達約66,667ppm
或約71,111ppm的活性氯,它們的含量可通過淀粉-碘滴定進行測定。
如果需要,可在直接應用于這種禽類加工設備、儀器和/或裝置的表面之
前,將部分這種濃溶液用任意適合量的水進行稀釋,當然假定稀釋過的
溶液仍包含殺微生物有效量的活性溴類物質。此外,可加入本發明的濃
溶液,這樣用禽類加工操作中使用的加工水稀釋的形式使用,所述加工
水是例如流經水管的水、流入或存在于水槽中的水和噴洗設備用水。

本發明實踐中使用的殺微生物劑的量(濃度)將根據各種因素而有
所不同,例如使用的特定殺微生物劑、在先殺微生物處理的性質和頻率、
存在的微生物種類和性質、微生物可利用的營養物的量和種類、清潔作
用的性質和程度,如果有的話,還應結合殺微生物處理、被處理的微生
物的表面或場合等。在任何情況下,將本發明的殺微生物有效量的殺微
生物劑的稀釋水溶液應用于微生物或使微生物與之接觸。典型地是,稀
釋的溶液應包含殺微生物有效量的2-1000ppm(wt/wt),優選2-500
ppm(wt/wt),更優選25-250ppm(wt/wt)活性鹵素,活性鹵素可使用
常規DPD測試方法進行測定。如果溶液中的實際活性鹵素由活性氯組成,
使用的稀釋溶液的濃度優選比前述的范圍的低限高至少2-3倍。在本發
明使用1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲的情況下,普通情況(例如洗滌硬
表面,如桌面、墻面、地面、傳送機械或其部件,如傳送帶或鉤環、刀
子和切割刀片)下使用的特別優選的范圍是50-150ppm(wt/wt)的活性
溴。當使用本發明的由至少一種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲形成的水
溶液接觸禽類畜體或其可食用部分時,特別優選在洗滌或其它接觸禽類
畜體或其可食用部分的水中使用殺微生物有效量的活性溴,活性溴不會
明顯或相當可觀地漂白畜體的皮膚或者用禽類,如胸脯肉和腿肉烹制的
食品在感官味覺(organleptic?taste)上具有負面影響。該量通常為0.5
-30ppm(wt/wt),優選為5-25ppm(wt/wt)活性溴,其含量可通過
DPD測試方法進行測定。如果在這些畜體洗滌操作中使用氨基磺酸鹽-穩
定的氯化溴,認為也適用同樣的范圍。應該清楚,當認為必需或需要時,
也可偏離前述范圍,這種偏離也在本發明的實質范圍內。

因此,根據本發明的殺微生物劑被使用的方式,本發明殺微生物劑
的殺微生物有效量可擴展到低至約2ppm,最高可達所使用的特定活性鹵
素殺微生物劑在使用這類活性鹵素殺微生物劑的溫度下的最高水中溶解
度。

從上面可以看出,無論是活性氯、活性溴或二者兼備,都存在兩種
不同類型的用于測定活性鹵素含量的方法。對于測定接近超過約,例如
500ppm或類似(wt/wt)活性溴,或者超過約1100ppm活性氯的濃度,淀
粉-碘滴定發是優選的方法。另一方面,在濃度低于這些鄰近區時,常規
的DPD測試方法更為適合,因為這種測試是設計用以測定非常低的活性
鹵素濃度的,例如從零至約11-12ppm(wt/wt)的活性氯濃度或者從零至
約5ppm(wt/wt)的活性溴濃度。事實上,在活性氯的實際濃度介于例如
約11-12ppm至約1100ppm(wt/wt),或者在活性溴的實際濃度介于例
如約5ppm至約1100ppm(wt/wt)的情況下,在進行DPD分析之前,測
試樣品一般用純水稀釋,以使實際濃度在活性氯的情況下降至4至11-12
ppm,在活性溴的情況下降至2至5ppm。因此,可見雖然在使用何種方
法之間沒有嚴格的必需遵守的濃度區分界限,但上面給出的大致數值范
圍代表了實際的大致區分界限,因為當使用DPD測試方法時,水稀釋的
較濃溶液的量隨起始活性鹵素濃度的增加而增加,當分析較濃的溶液時,
使用淀粉-碘滴定法可方便地避免這種大量稀釋。總之,對于適合的稀溶
液,推薦使用DPD測試方法,對于較濃的溶液,推薦使用淀粉-碘滴定法。

用于測定活性鹵素的淀粉-碘滴定法由來已久。例如Willard-Furman
的Elementary?Quantitative?Analysis的第XIV章(Third?Edition,D.
Van?Nostrand?Company,Inc.,New?York,Copyright?1933,1935,1940)
描述了淀粉-碘滴定法。雖然使用淀粉-碘滴定法測定這類產品溶液中的
活性鹵素的標準定量分析步驟的細節可能隨溶液的不同而不同,但由一
種標準步驟到另一種標準步驟得到的結果一般是足夠一致,不會產生任
何結果不可靠的問題。推薦的淀粉-碘滴定法步驟如下:將磁力攪拌器和
50毫升冰醋酸放入碘燒瓶中。稱重要測定活性鹵素的樣品(通常為約0.2
-0.5g)并將其加到含乙酸的燒瓶中。然后往該燒瓶中加入水(50毫升)
和碘化鉀水溶液(15%wt/wt;25毫升)。該燒瓶用水封塞塞住。將該溶液
攪拌15分鐘后,打開塞子并將塞子和密封區域用水沖洗到燒瓶中。將0.1
標準的(normal)硫代硫酸鈉填充到自動滴定管(Metrohm?Limited)中。碘
燒瓶中的溶液用0.1標準的硫代硫酸鈉進行滴定;當觀察到淡黃色時,
加入1毫升1wt%淀粉水溶液,燒瓶中溶液的顏色由淡黃色變為藍色。繼
續用硫代硫酸鈉滴定直至藍色消失。用樣品的重量和滴定的硫代硫酸鈉
溶液的體積計算活性鹵素的量。由此,不管實際的化學形式是什么,都
可定量地測定水產品溶液中活性鹵素,如活性氯或活性溴的量。

用于測定低水平活性鹵素的標準DPD測試以Palin在1974年發明的
經典的測試方法為基礎。參見A.T.Palin,“Analytical?Control?of?Water?
Disinfection?With?Special?Reference?to?Differential?DPD?Methods?
For?Chlorine,Chlorine?Dioxide,Bromine,Iodine?and?Ozone”,J.
Inst.Water?Eng.,1974,28,139。雖然存在Palin方法的各種現代化
改進方法,但推薦的改進方法全面地記載在Hach?Water?Analysis?
Handbook,3rd?edition,copyright?1997中。在該出版物的第379頁呈
現的Method?8167明確了測定“氯總量”(即活性氯)的方法。概括地說,
“氯總量”的試驗包括加入包含活性鹵素的稀的水溶液樣品、包含DPD
指示劑粉末的粉末(即N,N’-二乙基二苯二胺)、KI和緩沖劑。存在的活
性鹵素類物質與KI反應,得到使DPD指示劑變為紅/粉色的碘類物質。
顏色的強度取決于樣品中存在的“氯總量”類物質(即活性氯)的濃度。
該強度使用將強度讀數轉化為mg/L?Cl2形式的“氯總量”數值的標準化
比色計進行測定。如果存在的活性鹵素是活性溴,將mg/L?Cl2形式的結
果除以2.25,得到以mg/L?Br2活性溴形式表示的結果。

詳細的DPD測試方法如下:

1.為測定水中存在的響應“氯總量”試驗的物質的量,應在采樣的數分
鐘內對水樣進行分析,并且優選在采樣后立即進行分析。

2.測定水樣中存在的響應“氯總量”試驗的物質的量的Hach?Method?8167
包括使用Hach?Model?DR?2010比色計。通過鍵控鍵盤上的“80”檢索氯
測定的貯存程序號,然后通過旋轉儀器一側的刻度盤設定吸收波長為530
nm。在觀察下,兩個相同的樣品池用水填充到10mL刻度。選擇任意一
個池為空白。向第二個池中加入DPD氯總量粉末系列(DPD?Total?Chlorine?
Powder?Pillow)的內容。將這些振搖10-20秒進行混合,粉紅色的呈
現指示水中存在著對DPD“氯總量”測試試劑反應陽性的物質。按壓鍵區
的SHIFT?TIMER鍵,開始三分鐘的反應時間。三分鐘后,發出嘟嘟的信
號指示反應完全。使用10mL池上升管,使空白樣品池進入Hach?Model?DR?
2010的樣品室,關閉保護柵以防止游走的光的作用。然后按壓ZERO鍵。
數秒后,顯示器記錄0.00mg/L?Cl2。然后,從Hach?Model?DR?2010的
池室中取出用于將儀器調零的空白樣品并以測試樣品替代,往測試樣品
中加入DPD“氯總量”測試試劑。然后與空白的操作一樣,關閉光柵并
按壓READ鍵。數秒內,顯示器上顯示出以mg/L?Cl2表示的結果。這種就
是檢測水樣的“氯總量”水平。

在本發明的實踐中,可以以不同的方式使用殺微生物體系。例如,
將本發明的殺微生物有效量的殺微生物劑,優選溴基殺微生物體系應用
于要根除或控制微生物的場合,以使殺微生物體系與這些微生物接觸。
殺生有效量的殺微生物劑的水溶液的應用可通過傾倒、噴霧、濕擦、充
溢和/或濕法擦拭被感染的或可能被感染的加工設備的表面或區域以及
鄰近區域,例如地面、墻面、桌面、傳送設備、支柱、水管、水槽和下
水道來進行。在適用和可能的情況下,將加工設備的部分浸入殺微生物
劑的水溶液中,如果需要,可臨時拆卸。應常規地進行這種應用,以足
以確保被加工的禽類與危害性微生物,例如細菌和生物膜的接觸被阻止
達到可能的最大程度。為達到最佳結果,這些操作應與徹底清潔操作,
例如洗滌、沖刷、刮擦以及其它除去可見或不可見的生物污染或生物膜
的感染的操作結合。在微生物與殺微生物劑接觸一段適當的時間,以確
保滲入這些不同種類的微生物的多糖粘液和其它防御機制之后,整個消
毒區域應進行清洗,例如以清水用水管澆,并且在使用前,清洗液本身
優選使用本發明的附加的殺微生物劑,優選溴基殺微生物劑進行消毒。
當然,接觸時間根據清潔和消毒操作的頻率和徹底性以及使用的特定殺
微生物溶液的特性和濃度有所不同。一般來說,接觸時間可以為大約數
分鐘至數小時,但應使用有效根除或控制禽類加工區域的微生物數量的
任何時間,這也在本發明的范圍內。

另一種應用本發明的這些實施方案的殺微生物有效量的固態殺微生
物劑的方式是使要萃取到水流中的殺微生物劑流經水管并進入在禽類加
工中使用的水槽或其它清洗裝置。例如,將適合的固體形式的殺微生物
劑,優選溴基殺微生物劑,如片、團塊、丸或小塊放入適合的有水流通
過的進料裝置中。水流通過殺微生物劑的床致使水流持續不斷地溶解少
量殺微生物劑,由此在水中提供殺微生物有效量的殺微生物劑。1,3-二
溴-5,5-二甲基乙內酰脲特別優選以這種應用方式來使用,因為其在室溫
下在水中具有較低的溶解度和較慢的溶解速率。這解釋為需再次填充裝
置使其保持所述固體之前的較長的使用時間。例如,1,3-二溴-5,5二甲
基乙內酰脲在75℉(約24℃)的水中的溶解度是405ppm(以Cl2表示),
而N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰胺及N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲和
1,3-二氯-5-乙基-5-甲基乙內酰脲的市售混合物在相同溫度下的溶解度
分別為890ppm和1905ppm(二者均以Cl2表示)。

具特別理想的成本-有效性和操作效率的并且高度優選的形成一種
或多種1,3-二溴-5,5-二烷基乙內酰脲(其中一個烷基是甲基且另一個烷
基包含1至約4個碳原子),最優選1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲(“二
溴二烷基乙內酰脲”)的殺微生物水溶液的方式包括使水通過放置在罐、
槽或其它類似容器(“池”)中的一種或多種顆粒、小塊、丸、片或其它
非粉末狀顆粒(“床”)形式的二溴二烷基乙內酰脲。槽的上部優選具有
用于定期重新填充床內容物的可壓力密封的槽口(port),并使水向上流
經床的部分。更優選地,槽在向上方向延伸以使床的底部到頂部的長度
長于從一側到另一側的長度,這種向上的水流僅通過床的下部送入床向
上流動,因此基本水平地通過設置在床和槽的下部和上部之間的槽口。
由此,床的上部用作床內容物的儲備供應,當床的下部被緩慢而攪拌均
勻地溶入水流中時,所述儲備供應的內容物在重力下自動填入床的下部。
因此在該操作中,水流優選至少是基本上連續流動,并且最優選是連續
流動。生產顆粒、片或其它非粉末狀的顆粒形式的1,3-二溴-5,5-二甲基
乙內酰脲的方法詳細記載于共同擁有的未審結的申請PCT/US?01/01541、
01/01545和01/01585,這些申請均于2001年1月17日提交,每個申請
都要求了基于分別早期提交的相應的美國申請的優先權。用于制備這種
顆粒、片或其它非粉末狀顆粒形式的1,3二溴-5,5-二甲基乙內酰脲的優
良方法技術詳細記載于共同擁有的未審結的申請PCT/US?01/01544中,
該申請于2001年1月17日提交,要求了基于早期提交的相應美國申請
的優先權。這些PCT和美國申請的公開內容再次均引作參考。在形成其
殺微生物的水溶液時,特別優選與這類顆粒、片或其它非粉末狀顆粒形
式的這些二溴二烷基乙內酰脲結合使用的裝置可購自Neptune?Chemical?
Pump?Company(R.A.Industrie,Inc.的分支機構,Lansdale,PA?19446,
“Bromine?Feeders”Models?BT-15、BT-40、BT-42、BT-80、BT-160、
BT-270和BT-350)或者相當的設備。使用結合的Model?BT-40與1,3-
二溴-5,5-二甲基乙內酰脲Albrom100殺生劑(可購自Albemarle
Corporation)獲得了良好的結果。在這類裝置中單獨加入片或顆粒形式
的這類殺微生物劑可提供長達五(5)個月的容器終端用水保持持續高效
的殺微生物活性,而不需要重新填充。

在本發明使用較易水溶的殺微生物劑的情況下,另一種適合的使殺
微生物劑與微生物接觸的方法是將包含殺微生物有效量的殺微生物劑的
水溶液泵入水管并且泵入禽類加工中使用的水槽或其它洗滌裝置中,例
如燙退槽和冰水槽中。這些方法的改進方法包括通過重力滴下作用使殺
微生物劑的水溶液直接分批配送到加工禽類的水槽或其它容器中。

本發明使用的另一種應用模式包括用殺微生物劑的水溶液接觸禽類
本身,典型的是屠宰之前和之后立即應用。在根除禽類表面上的細菌的
適合時間后,將禽類進行清洗以除去家禽本身暴露表面上的過量的殺微
生物劑和殺滅的(dispatched)微生物群。屠宰后家禽的內部器官也可
以采樣相同的方式進行處理和清洗。以這種方式的殺微生物溶液的應用
可以采取任意適合的形式,例如使用包含殺微生物有效量的殺微生物劑
的水噴霧劑,或者將家禽或其內部器官浸入一個或多個盛有殺微生物有
效量的殺微生物劑的水槽中。

優選使用兩種或多種前述的本發明殺微生物劑的應用方法。因此,
在本發明的這些實施方案的優選殺微生物劑的實施方案中,溴基殺微生
物水溶液優選通過下列步驟應用:(i)將禽類加工裝置的至少部分(如
果不是全部的話)與本發明的這些實施方案的殺微生物有效量的至少一
種殺微生物劑,優選溴基殺微生物劑的水溶液接觸,以進行消毒或衛生
處理,和(ii)在家禽分解之前和/或之后,優選之后,使禽類的暴露表
面與本發明的這些實施方案的殺微生物有效量的至少一種殺微生物劑的
水溶液,優選溴基殺微生物劑的水溶液接觸。在另一個實施方案中,本
發明的這些實施方案的殺微生物劑,優選溴基殺微生物的水溶液通過如
下步驟應用:(i)將禽類加工裝置的至少部分(如果不是全部的話)與
本發明的這些實施方案的殺微生物有效量的至少一種殺微生物劑,優選
溴基殺微生物劑的水溶液接觸,以進行消毒或衛生處理,和(ii)將分解
的家禽的可食用部分和/或內部器官與與本發明的這些實施方案的殺微
生物有效量的至少一種殺微生物劑的水溶液,優選溴基殺微生物劑的溶
液接觸。

本發明的特別優選的加工方法是其中家禽是通過包括下列系列步驟
進行加工的那些方法:(a)將家禽懸掛到移動夾或鉤環中,(b)使家禽
昏迷,但不殺戮家禽,例如使用適當的氣體,或者至少將家禽的頭部與
應用水的電休克接觸以使家禽昏迷,例如將頭浸入接有適合電流的水浴
中使其昏迷,(c)在昏迷家禽的頸部,用刀或用機械切割裝置自動切割
頸靜脈和/或頸動脈,(d)從畜體放血,(e)用熱水燙退禽鳥,如在燙退
水槽中,以助羽毛的除去,(f)退去羽毛,(g)除去家禽的頭和腳,(h)
用刀子手工取出,或者用機械取內臟裝置自動取出家禽的內臟,(i)從
畜體分離內臟,(j)洗滌畜體,和(k)冷卻畜體,例如在水中,如使畜
體經過至少一個或經常是兩個冰水槽,或者通過空氣冷卻。燙退步驟填
充在50-60℃的水中進行,為保持正常的黃色皮膚,較低的溫度是優選
的。對于火雞和用盡的下蛋母雞更經常地使用較高的溫度。使用的冷卻
溫度一般使畜體溫度降至低于約4℃,出貨的最終畜體的最終溫度低達約
-2℃。可包括其它步驟并且在某些情況下,可改變一個或多個(a)至(j)
的步驟或者步驟的順序也可發生一定程度的變化,以適應特定的情況。
可包括的額外步驟的實例包括檢查步驟,例如由政府控制的職工進行檢
查,和在水禽的情況下,浸入蠟中,以促進退羽毛的程度。檢查通常在
取出內臟步驟后進行,例如在從畜體分離內臟后。當加工水禽時,通常
采用浸入蠟的步驟,水禽的羽毛通常較,例如雞類難以除去。蠟的浸入
一般在使用脫毛機后直接進行,脫毛機利用橡膠“手指”打退羽毛。蠟
的浸入步驟通常包括將部分脫毛的畜體浸入槽中的熔融蠟中,使蠟在畜
體上硬化,然后通過剝落蠟衣一并除去包埋在蠟中的羽毛。根據需要,
在進行加工的下一步驟,如除去頭和腳之前,可以重復該操作。一種步
驟順序適當改變的示例是在步驟(d)之前進行步驟(g),代替步驟(f)后的
步驟。閱讀了該說明書之后,其它適合的順序的變化對于本領域普通專
業技術人員而言是顯而易見的,因此在此無需進一步說明。

在上述加工過程中,本發明的這些實施方案的殺微生物劑,優選本
發明中使用的一種或多種適用的溴基殺微生物劑的殺微生物作用可用于
操作中的各個適合的操作。例如,本發明的適用的殺微生物溶液可應用
于使用的任何或所有加工設備,包括刀子、傳送裝置、空去皮槽的表面、
脫毛裝置(例如橡膠“手指”)、用于切割家禽或取出家禽內臟的洗滌和
機械裝置、所有與家禽的血和內臟接觸的表面,包括桌面、傳送帶以及
所有與分離其內臟后的畜體接觸的表面。本發明適用的衛生處理溶液可
通過浸漬、噴霧、充溢或任何其它確保殺微生物有效溶液與包含有害微
生物,如細菌和/或生物膜(生物污染)的有害微生物或者與有害微生物
接觸的表面接觸的方式應用。

在上述加工過程中,可采用的本發明適用的殺微生物劑,優選本發
明使用的一種或多種適用的溴基殺微生物劑的殺微生物作用的另一種方
式包括將殺微生物有效量的殺微生物劑加到一個或多個加工步驟中使用
的水中。因此,燙退槽和/或冷卻槽中的水可進行如此處理。另一種方式
包括將殺微生物有效量的殺微生物劑加到洗滌畜體和各個部位的內臟的
水中,這些部位的部分被處理、分離和/或加工。根據需要,加工過程中
這些不同部位的劑量水平可以相同或不同。

下列非限制性實施例進一步說明本發明的實踐和優點。

實施例1

進行對比試驗,以測定在包含不同殺微生物劑組合物的標準1.5小時
冰水槽的水中浸漬期間對禽類畜體細菌(大腸桿菌屬菌株)的作用。還
研究了這些處理對殘留的冰水槽水的影響。首先將畜體浸入包含104個大
腸桿菌/升液體的溫水浴中。然后將畜體浸入含標準有機液體(血液、脂
肪、皮膚和肉類顆粒)并包含一種試驗的殺微生物組合物的冰水槽中。用
整個鳥禽(內部和外部)的細菌總數測定各自殺微生物組合物的效力。
測試的殺微生物組合物是Aquatize殺生劑(Bioxy?Incorporated,3733?
National?Drive,Suite?115,Raleigh,NC?27612-4845)、次氯酸鈉
(Clorox漂白劑)、溴化鈉(呈40%水溶液形式)、組合的次氯酸鈉與溴化
鈉、以及由氯化溴和氨基磺酸根陰離子制得的濃縮的堿性水溶液(SSBC)
(Stabrom909殺生劑;Albemarle?Corporation)。

使用的試驗進程和試驗設計如下:

a)對于所有處理以常規方式處理總共190只雞。每次處理涉及使用
10只雞。

b)制備包含每毫升5x104個DelMarVa(Delaware?Maryland?farm?
area)野生大腸桿菌(Escherichia?coli)菌株細菌的暖水浴(100℉)。
為每只雞至少提供總共200mL水浴液體。

c)將所有雞(對照組和處理組)隨機地浸入暖水浴中。將(屠宰后)
畜體的內、外區域都浸入以確保完全覆蓋。

d)每一獨立的冰水槽(chill?tank)水溶液(將普通自來水調節PH
至8.5,加入冰來產生<45℉的溫度)包含每毫升2x103個細菌。

e)為每一消毒處理制備冰水槽水溶液(每個至少750ml),將每只雞
浸入1.5小時。

f)在1.5小時冷卻期間,每10分鐘將雞完全提出溶液并重新浸入溶
液中。在1.5小時冷卻期后,將雞從冰水中取出并使水流干30秒,然后
迅速地(在5分鐘內)置于包含400ml稀釋的(Butterfield’s磷酸鹽稀
釋液)細菌收集品的無菌全雞細菌分離器(stomacher)袋中。

g)向每一個包含在無菌細菌分離器袋中的畜體上添加稀釋劑
(400ml),確保將稀釋劑倒入腹腔內部。用搖動動作漂洗畜體內部和外
部一分鐘(ca.35RPM)。最好用一只手抓住雛雞畜體,用另一只手抓住
袋子的密封上部,然后搖動在18-24英寸的弧內做往復運動,確保漂洗
所有畜體表面(內部和外部)。

h)然后將漂洗液從每一個細菌分離器袋中轉入獨立的樣品瓶內,注
意確保收集日期、收集時間和處理組這些信息與樣品相符。將每個瓶子
用石蠟膜密封并存儲在冰箱中。

i)稀釋液體使麥氏平板(MacConkey?plate)上為25-250計數。在
液體被稀釋后,將0.1ml液體置于麥氏瓊脂板上并測定細菌數目。如果
在平板上25-250計數的目標沒有達到,則再一次進行稀釋且進行平板
計數。

j)在用于每一處理的所有畜體都已浸過后,測定水樣的細菌。

k)計算每只雞的總細菌數。

使用的冰水由每升950ml自來水、50ml血、10g基礎腹部脂肪和10g
肉粒組成。為了形成用作試驗細菌來源的細菌培養物,將在BHI肉湯中
的過夜培養物轉移到新鮮的BHI肉湯中,并且在37℃保溫1.5小時來使
種群密度達到每毫升約8x106DFU(光密度在600nm,~0.1)。在冷卻前,
向細菌溶液中加入水使其等于5x104來提供水溶液來預浸泡所有的雞。另
外,在浸泡雞的1.5小時冷卻期前,以每毫升冰水總共2x103個的細菌量
向冰水中加入另外的細菌。通過利用適合的無菌剝離溶液完全清洗整個
畜體表面(內部和外部),然后收集剝離溶液并將它們放置在平板上來進
行細菌計數從而完成禽類畜體微生物污染測量。

表1是受試組的試驗設計

表1



1陰性對照包含被污染的水(每毫升細菌2.67x105個)。

2陽性對照是加入50ppm?Cl2等同物的普通禽類工業實踐。

表2-4分別顯示在由Clorox漂白劑溶液和40%溴化鈉水溶液形成
冰水槽溶液的情況下,為了得到50ppm,100ppm和150ppm?Cl2等同物
而決定稀釋濃度的方法。

表2-50ppm?Cl2等同物的稀釋


表3-100ppm?Cl2等同物的稀釋


表4-150ppm?Cl2等同物的稀釋


NaBr=SANIBROM?40殺生物劑(包含40%溴化鈉,水溶液)。

Clorox漂白劑(Bleach)包含12.5%氯。

對于利用此受試組的其它殺生物劑的稀釋的計算基于如下:
Aquatize殺生物劑是包含3.67%亞氯酸鈉和Stabrom909的殺生物劑溶
液的溶液,它被計算為1.57倍Cl2等同物水平。此受試組的結果在表5
-7中匯總。

表5-畜體細菌減少



1此值代表每處理10只雞的平均值。

2第1受試組畜體包含2.67x105個總細菌計數。

表6-畜體細菌減少結果(減少百分率)


1此值代表每處理10只雞的平均值。

2第1受試組畜體包含2.67x105總細菌計數。

表7-冰水細菌計數



1此值代表處理水每豪升細菌計數。

實施例2

重復實施例1的步驟,除了具有殺微生物活性的受試材料是(a)次
氯酸鈉(Clorox漂白劑),(b)溴化鈉和次氯酸鈉的組合物,和(c)1,3-
二溴-5,5-二甲基乙內酰脲(DBDMH),在此受試組中使用100只雞,冰水
由每升950ml水、50ml血、10g基礎(ground)腹部脂肪、10g肉粒和
10g帶脂肪的皮組成。

此受試組使用的試驗設計在表8中匯總。

表8



1陰性對照包含被污染的水(每毫升細菌2.67x105)。

2陽性對照是加入50ppm?Cl2等同物的普通禽類工業實踐。

本發明的殺微生物溶液按照下述方式制備:

1.為了形成貯存液,將100g的1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲
(DBDMH)攪拌入10升(10,000ml)水20分鐘。過濾后,得到的澄清
液每升包含1300mg?Br2。當是Cl2時,這相當于每升580mg(或580ppm?Cl2)。

2.具有50ppm?Cl2等同物溶液含量的DBDMH洗滌溶液是通過將875ml
上述貯存液與10升(10,000ml)上述制備的雞冰水溶液混合形成的。
以相同的方式分別制備包含100ppm?Cl2等同物的150ml?ppm?Cl2等同物
的DBDMH洗滌溶液(不同的是分別與1750ml和2625ml的貯存液混合),
即將上述貯存液與單獨的10升份的上述制備的雞冰水溶液混合。

表9匯總了在此受試組中得到的結果。

表9-畜體細菌減少


1此值代表處理水每毫升的細菌計數。

2陰性對照包含被污染的水(每毫升細菌2.67x105)。

3陽性對照是添加50ppm氯的普通禽類工業實踐。

實施例3

進行此組試驗來決定在冰水槽“湯(soup)”中浸泡1.5小時后,
Clorox漂白劑,Aquatize殺生物劑,和1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲
(DBDMH)對于畜體細菌(大腸桿菌野生菌株)殘留物的作用。試驗利用
PH7,PH8和PH9(用磷酸三鈉調節)的湯操作來進行整只雞細菌計數。
用PH8的試驗來進行獨立的細菌計數。

通常試驗包括標準步驟,即利用56天大的雞并將畜體首先浸入暖水
浴中,此暖水浴包含每毫升104大腸桿菌(Escherichia?coli),每毫升
104腸炎沙門氏菌(Salmonella?enteritidis),每毫升104綠膿桿菌
(Pseudomonas?aeruginosa),每毫升104空腸彎曲桿菌(Campylobacter?
jejuni),和每毫升104分別來自三種菌株的酸敗細菌(單核細胞增多性
李斯特桿菌(Listeria?monocytogenes)和宋內氏志賀氏菌(Shigella?
sonnei))。然后將畜體浸入冰水槽“湯”中,此湯包含基本有機液體(血,
脂肪,皮和肉粒)和試驗中的殺微生物劑。

表10和11匯總了這些受試組的試驗設計。

表10-在PH7,PH8和PH9的全部雞細菌計數


表11-在PH8的獨立雞細菌計數


通過在表12中顯示的在合適的肉湯中生長的每個細菌樣本來制備用
于本受試組的細菌貯存液。每一個這種肉湯培養基的容量為至少500ml,
允許細菌生長至少6小時。觀察容器,不允許發展成濃的、混濁的視覺
外觀,那說明生長期太長了。因此溶液具有僅僅是模糊的或稍微不清楚
的外觀。

表12-肉湯處理


1宋內氏志賀氏菌(Shigella?sonnei),單核細胞增多性李斯特桿菌
(Listeria?monocytogenes),大腸桿菌(Escherichia?coli),腸炎沙
門氏菌(Salmonella?enteritidis),綠膿桿菌(Pseudomonas?aeruginosa)
和空腸彎曲桿菌(Campylobacter?jejuni)。

按下述方式制備本發明的殺微生物溶液:

1.為了形成貯存液,將100g的1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲
(DBDMH)攪拌入10升(10,000ml)水20分鐘。經過濾,得到的澄清
液每升包含1300mgBr2。當是Cl2時,這相當于每升580mg(或580ppm?Cl2)。

2.具有10ppm?Cl2等同物含量的DBDMH冰水溶液是通過將175ml上
述貯存液與10升(10,000ml)上述制備的雞冰水溶液混合形成的。DBDMH
冰水溶液包含20ppm?Cl2等同物和以相同的方式制備的150ml?ppm?Cl2
等同物,除了350ml的上述貯存液是與另一10-升部分上述制備的雞冰
水溶液混合。

表13是在這些試驗中使用的“雞湯”組合物。

表13-“雞湯”組合物

??材料1
??材料/2100ml2
??加入的水
??1840ml
??細菌貯存液
??200ml
??血液
??40ml
??雞腹部脂肪(基礎)
??30g
??大腿肉粒
??10g
??帶有脂肪的雞皮
??10g
??總計
??2100ml等同物

1將組合的材料冷卻過夜。

2材料是基本的,并在使用前充分攪拌。

用于整只雞洗滌采樣的步驟如下:

1.在收集后將所有樣本置于華氏50度以下。

2.在樣本收集24小時內開始樣本的微生物學分析。

3.將個體樣本鑒別、收集日期、收集時間(移動階段)、處理組
和樣本點的位置這些信息記錄在每個樣本瓶上。

4.在每一和定義的樣本時間,帶著乳膠或橡膠手套從加工線一個
一個單獨地取畜體。在每次收集之間用乙醇漂洗手套。

5.將畜體上任何多余的液體排干。將每個畜體獨立地轉移入無菌
細菌分離器袋中。

6.向每一個裝在無菌細菌分離器袋中的畜體上,加入400ml?
Butterfield’s磷酸稀釋液(BPD),在此期間確保將BPD倒入了畜
體腔的內部。用搖動動作將畜體內外漂洗一分鐘(ca.35RPM)。
最好用一只手抓住雛雞畜體,用另一只手抓住袋子的密封上部,
然后搖動在18-24英寸的弧內做往復運動,確保漂洗所有畜體表
面(內部和外部)。

7.然后將漂洗液從每一個細菌分離器袋中轉入獨立的樣品瓶中,
注意確保收集日期、收集時間(移動階段)和處理組和樣本點的
位置這些信息與樣品相符。

8.將每個瓶子用石蠟膜密封并放置在苯乙烯容器中,此容器帶有
碎冰或干冰或結冰的制冷機包使能過夜運至測試試驗室。

9.將所有填充了的苯乙烯貯存器放在冰冷的地方(不到凍結)直
到出貨的急件送件人收集的1到2小時內。

按照下面的方法來對細菌有機物進行定量或定性測定:

需氧平板計數-計數規則按照BAM第8版第3章。

大腸桿菌狀的和大腸桿菌計數-AOAC,991.14,Petrifilm。

沙門氏菌-AOAC?986.35,ELISA假定的篩選。

沙門氏菌-USDA?LC-75,發生率。

彎曲菌-USDA?LC-69,發生率。

李斯特桿菌屬-USDA?LC-57,發生率。

本受試組中使用的更詳細的試驗過程和試驗設計如下:

a)使用的受試微生物是:

大腸桿菌ATCC11229

綠膿桿菌ATCC15442

腸炎沙門氏菌ATCC13076

宋內氏志賀氏菌ATCC9290

單核細胞增多性李斯特桿菌ATCC7644

空腸彎曲桿菌ATCC?29428

b)試驗步驟:讓所有受試菌株在表12列舉的培養基中獨立地在35℃
生長24小時。通過在10,000xg離心10分鐘來采集細胞并用
Butterfield’s磷酸緩沖液(PH7.2的BPB)洗滌兩次。將細胞再混
懸在BPB中來獲得對于每一微生物大約1.0x108CFU/mL的細胞混懸
液。靶接種體水平是在最終受試溶液中是大約106CFU/mL。腸炎沙門
氏菌和綠膿桿菌的情況下,物種是通過倒入制備的帶有粗棉布過濾器
的無菌離心管洗滌的。然后將培養物壓成丸,利用上述的技術洗滌并
重復3次。

c)雞(56天大)在普通商業條件下加工。

d)將細菌加入大的批次的“雞湯”中,然后在用于每一次試驗的冰
水中等分得到的混合物。然后將試驗下的特定的消毒組合物加入到一
份冰水中。每一份冰水包含每毫升104大腸桿菌(Escherichia?coli),
每毫升104腸炎沙門氏菌(Salmonella?enteritidis),每毫升104綠
膿桿菌(Pseudomonas?aeruginosa),每毫升104空腸彎曲桿菌
(Campylobacter?jejuni),和每毫升104分別來自三種菌株的酸敗細
菌(單核細胞增多性李斯特桿菌(Listeria?monocytogenes)和宋內
氏志賀氏菌(Shigella?sonnei))。

e)將雞分別加入到10個50-加侖容器中,這些容器包含各自的處
理(或對照)并將雞放在容器中經歷1.5小時冷卻期。

f)在1.5小時冷卻期間,每10分鐘將混合物有力的攪拌。

g)在1.5小時冷卻期后,將整只雞放置在獨立的無菌細菌分離器袋
中,處理全部的雞漂洗液(如上所描述)并將漂洗液的樣本置于合適
的瓊脂平板上。將平板在37℃放置在培養箱中24小時。然后在24
小時后讀平板來測定在每個平板上的總計數。

此受試組的結果匯總在表14和15中。

表14


1每一個值代表每處理50只雞。

表15



1大腸桿菌(Escherichia?coli),腸炎沙門氏菌(Salmonella?
enteritidis),綠膿桿菌(Pseudomonas?aeruginosa),空腸彎曲桿菌
(Campylobacter?jejuni),單核細胞增多性李斯特桿菌(Listeria?
monocytogenes)和宋內氏志賀氏菌(Shigella?sonnei)。

2注:交叉污染更像在加工環境里,在此環境中處理雞且為個體培養決定
取樣。

3每個值代表每處理25只雞。

實施例4

進行研究來測定浸入冰水槽溶液1.5小時后和酸敗20-天期限(由
細菌污染引起)后,Clorox漂白劑和1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲
(DBDMH)對于畜體細菌殘留物的作用。在PH8(通過磷酸三鈉調整)下
進行試驗。在處理前或處理后測定皮著色(Minolta?
Color?Meter?L值或亮度,a值或紅和b值或黃)。

通常研究包括標準步驟,即利用56天大的雞并將畜體首先浸入暖水
浴中,此暖水浴包含每毫升104大腸桿菌(Escherichia?coli),每毫升
104腸炎沙門氏菌(Salmonella?enteritidis),每毫升104綠膿桿菌
(Pseudomonas?aeruginosa),每毫升104空腸彎曲桿菌(Campylobacter?
jejuni),和每毫升104分別來自三種菌株的酸敗細菌(單核細胞增多性
李斯特桿菌(Listeria?monocytogenes)和宋內氏志賀氏菌(Shigella?
sonnei))。然后將畜體浸入冰水槽“湯”中,此湯包含普通有機液體(血,
脂肪,皮和肉粒)和各種的殺微生物劑(稱為受試物質)。

在PH8下試驗四受試組雞來得到全部的雞細菌計數。表16列出了對
于這些全部細菌計數試驗的試驗設計。

表16


按實施例3制備DBDMH貯存液,細菌貯存液和“雞湯”。另外,細菌
肉湯處理,整只雞洗滌取樣步驟和用來對細菌有機物定量和定性分析的
方法按照實施例3進行。

本受試組中使用的更詳細的試驗過程和試驗設計如下:

a)使用的受試微生物是:

大腸桿菌ATCC11229

綠膿桿菌ATCC15442

腸炎沙門氏菌ATCC13076

宋內氏志賀氏菌ATCC9290

單核細胞增多性李斯特桿菌ATCC7644

空腸彎曲桿菌ATCC?29428

b)試驗步驟:讓所有受試菌株在表12列舉的培養基中獨立地在35℃
生長24小時。通過在10,000xg離心10分鐘來采集細胞并用
Butterfield’s磷酸緩沖液(PH7.2的BPB)洗滌兩次。將細胞再混
懸在BPB中來獲得對于每一微生物大約1.0x108CFU/mL的細胞混懸
液。靶接種體水平在最終受試溶液中是大約106CFU/mL。在腸炎沙門
氏菌和綠膿桿菌的情況下,物種是通過倒入制備的帶有粗棉布過濾器
的無菌離心管洗滌的。然后將培養物壓成丸,利用上述的技術洗滌并
重復3次。

c)雞(56天大)在普通商業條件下加工。

d)將細菌加入大的批次的“雞湯”中,然后在用于每一試驗的冰水
中等分得到的混合物。然后將試驗下的特定的消毒組合物加入到一份
冰水中。每一份冰水包含每毫升104大腸桿菌(Escherichia?coli),
每毫升104腸炎沙門氏菌(Salmonella?enteritidis),每毫升104綠
膿桿菌(Pseudomonas?aeruginosa),每毫升104空腸彎曲桿菌
(Campylobacter?jejuni),和每毫升104分別來自三種菌株的酸敗
細菌(單核細胞增多性李斯特桿菌(Listeria?monocytogenes)和宋
內氏志賀氏菌(Shigella?sonnei))。

e)將雞分別加入到10個50-加侖容器中,這些容器包含各自的處
理(或對照)并將雞放在容器中經歷1.5小時冷卻期。

f)在1.5小時冷卻期間,每10分鐘將混合物有力的攪拌。

g)在1.5小時冷卻期后,將全部雞放置在商業冰箱中儲存20天。

h)在冷卻處理前或冷卻處理后馬上對測定所有雞的皮著色(利用
Minolta?Color?Meter?L值或亮度,a值或紅和b值或黃)。

i)在第0天,從每一處理中隨機選取每次處理的總共5只完整的雞
并放置在獨立的無菌細菌分離器袋中,進行整只雞漂洗(如實施例3中
的描述)并將漂洗液樣本放置在合適的瓊脂平板上。

j)對于每一個接下去的第2,4,6,8,10,12,14,16,18,和20天,
從每一處理中隨機選取每次處理的總共5只完整的雞并放置在獨立的無
菌細菌分離器袋中并進行整個雞漂洗(如實施例3中的描述)并將漂洗
液樣本放置在合適的瓊脂平板上。

k)將所有處理的瓊脂平板放置在培育箱中24小時,35℃。在24小
時后讀平板來測定在每個板上的總計數。

這些試驗的結果匯總于表17-30中。

表17


表18



1指在沒有普通上標的行內是有顯著性差異的(P<0.05),由最小顯著
性差異決定。

表19


1指在沒有普通上標的行內是有顯著性差異的(p<0.05),通過最小顯著性
差異決定。

表20-消毒處理在第0天的作用


表21-消毒處理在第2天的作用



表22-消毒處理在第4天的作用


表23-消毒處理在第6天的作用



表24-消毒處理在第8天的作用


表25-消毒處理在第10天的作用



表26-消毒處理在第12天的作用


表27-消毒處理在第14天的作用



表28-消毒處理在第16天的作用


表29-消毒處理在第18天的作用


表30-消毒處理在第20天的作用



在表19-30中每一個每只雞的平均細菌計數數據代表5只雞的平均
值。

實施例5

本研究的目的是測定漂白劑殺微生物的對照(20ppm?Cl2等同物)和
用1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲的殺微生物的對照對于胸脯肉和大腿
肉的感官的味覺評價的作用。進行正式的受過培訓的味覺評價。試驗利
用49-天大的雞進行,此雞的加工沒有被外部來源的細菌感染并且是在
無菌條件下進行。

在本研究中總共使用120只雞。60只雞作為對照組。它們在包含20
ppm?Cl2等同物水平的Clorox漂白劑的冰水槽中處理。其余60只雞在相
同形式的冰水槽中處理,除了冰水包含在20ppm?Cl2等同物水平的DBDMH。
在冰水槽中的1.5小時冷卻期間,每10分鐘將冰水槽的內容物用力攪拌。
在1.5小時冷卻期后,將所有的雞獨立地放入袋中并在商業冰箱中放置
儲存20天。老化后,切割獨立的胸脯和大腿樣本并煮至內部溫度190℉。
利用10名受過培訓的測試小組專家來進行味道評價。使用等級系統(“1”
或“2”),其中“1”代表較好的味道樣本。使用每個人的目標評價或等
級的簡單平均值。通過利用每一對象作為block?employed?delta?0.05
來進行統計評價。

表31和32列出了這些味道評價的結果。

表31-冰水槽水處理對味道偏愛的影響(胸脯肉評價)



1S(人)=受過培訓的味道專門小組人數

2注:指在沒有普通上標的行內是有顯著性差異的(p<0.05),通過最小顯
著性差異決定。

表32-冰水槽水處理對味道偏愛的影響(大腿肉評價)


1S(人)=受過培訓的味道專門小組人數

2注:指在沒有普通上標的行內是有顯著性差異的(p<0.05),通過最小顯
著性差異決定。

實施例6

本研究的目標是測定在梯度水平研究模型中,在冰水槽溶液中浸泡
1.5小時和酸敗20天長時期后,Clorox漂白劑和1,3-二溴-5,5-二甲基
乙內酰脲(DBDMH)對于畜體細菌野生菌株的影響。在標準加工56天大
的雞后,將畜體首先浸入暖水浴中,此暖水浴包含每毫升104大腸桿菌
(Escherichia?coli),每毫升104腸炎沙門氏菌(Salmonella?
enteritidis),每毫升104綠膿桿菌(Pseudomonas?aeruginosa),每毫
升104空腸彎曲桿菌(Campylobacter?jejuni),和每毫升104分別來自
兩種菌株的酸敗細菌(單核細胞增多性李斯特桿菌(Listeria?
monocytogenes)和宋內氏志賀氏菌(Shigella?sonnei))。然后將畜體
浸入冰水槽“湯”中,此湯包含基本有機液體(血,脂肪,皮和肉粒)
和各種的殺微生物劑(稱作受試材料)。在PH8條件下進行這些試驗(用
磷酸三鈉調整)。在處理前或處理后測定皮著色(利用Minolta?Color?
Meter?L值或亮度,a值或紅和b值或黃)。在20天時期內測定冷卻后的
皮的各種菌株細菌。測定感官評價來說明酸敗時間和保存期限。在冰水
槽中沙門氏菌感染后,模擬并報告USDA?HACCP沙門氏菌檢測。

受試材料和這些試驗的試驗設計匯總在表33中。

表33



在表33中列出濃度的DBDMH貯存液和DBDMH受試溶液,細菌貯存液
和“雞湯”按實施例3制備。另外,細菌肉湯處理,整個雞的洗滌取樣
步驟,和用來對細菌有機物定量和定性分析的方法按照實施例3進行。

本受試組中使用的更詳細的試驗過程和試驗設計與實施例5中的相
同,除了下述例外:

a)儲存在冰箱中的20天期間的溫度是4℉。

b)在所有加工的雞上觀察“發腫(bloating)”度(定義為被認為可
注射的皮膚區域下水或空氣加入量)。

c)在每一個取樣天(第0,2,4,6,8,10,12,14,16,18和20天),
利用模板和消過毒的手術刀除去從胸脯直到頸部的23.8cm2皮膚來分析
從每一處理得到的10只畜體。將每一皮膚樣本放入添加有15mL?
Butterfield’s磷酸緩沖液(BPBS)的袋中并在細菌分離器袋中處理60
秒。將BPBS制成10倍稀釋級數混合物,并將每個20ml的兩個類似的平
行樣本鋪展在合適的平板計數瓊脂上來測定總的存活的數目。將平板在
35℃保溫24小時。從由每個冷卻和儲存的結合采集的三個樣本的兩個測
定來計算平均值。細菌數目作為合并和平均log10菌落—形成單位(CFU
‘S)/平方厘米報告。

d)也在取樣第0天,將從每次處理得到的剩余的110只畜體中的102
只(除去所有發腫和奇怪的處理的雞)用在實施例3中描述的取樣步驟
來進行“整只雞”沖洗。記錄沙門氏菌檢測并作為每51只雞的陽性沙門
氏菌菌落數目和總共的百分比報告。

表34-37匯總了此受試組的結果。

表34


1按照USDA?HACCP標準12/51只或更少被認為是統計學上可接受的。
使用總共102只雞來測定沙門氏菌陽性樣本和測定的簡單平均值。

表35


1每次處理4只或更多被認為是高度反對的。

表36


1非結構性新鮮的畜體內部氣味感覺的連續級數范圍在值1.0(最低
強度)到值9.0(最高強度)之間。注:指在沒有普通上標的行內是
有顯著性差異的(p<0.05),通過最小顯著性差異決定。

25只或更多被認為是高度反對的。

表37



1注:指在沒有普通上標的行內是有顯著性差異的(p<0.05),通過最
小顯著性差異決定。

2皮膚著色(Minolta?Color?Meter?L值或亮度,a值或紅和b值或黃)
上述試驗的結果,即冰水槽處理對假單胞菌屬種在雞皮膚上生長的影
響表示在圖1中。圖2是上述冰水槽處理對所有需氧細菌在雞皮上生
長的影響的試驗的結果。

實施例7

進行研究來測定本發明的一些殺微生物的化合物和次氯酸鈉(當用作
畜體漂洗劑)的作用。在此研究中使用的本發明的殺微生物劑是1,3-二
溴-5,5-二甲基乙內酰脲(DBDMH),N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲
(BCDMH)和Stabrom909殺生物劑(Albemarle公司),從氯化溴和氨基
磺酸陰離子生產的濃縮堿性水溶液(SSBC)。

標準加工56天大的雞后,將畜體首先浸入暖水浴中,此暖水浴包含
每毫升104大腸桿菌(Escherichia?coli),每毫升104腸炎沙門氏菌
(Salmonella?enteritidis),每毫升104綠膿桿菌(Pseudomonas?
aeruginosa),每毫升104空腸彎曲桿菌(Campylobacter?jejuni),和
每毫升104分別來自兩種菌株的酸敗細菌(單核細胞增多性李斯特桿菌
(Listeria?monocytogenes)和宋內氏志賀氏菌(Shigella?sonnei))。
然后將畜體浸入冰水槽“湯”中,此湯包含基本有機液體(血,脂肪,
皮和肉粒)和各種的殺微生物劑(稱作受試材料)。在PH8條件下進行這
些整只雞細菌計數試驗。利用Minolta?Color?Meter?L值或亮度,a值
或紅和b值或黃來測定試驗化合物對皮膚著色的影響。在20天時期后測
定冷卻后皮膚的各種菌株細菌。酸敗,利用感覺氣味作為模型,測定時
間允許來產生腐爛的/類似氨的氣味。在冰水槽中沙門氏菌感染后,模
擬并報告USDA?HACCP沙門氏菌檢測。表38描述了試驗材料劑量和整個
的受試組設計。

表38


按照實施例3制備DBDMH和BCDMH貯存液和稀釋的受試溶液(20ppm?
Cl2等同物),細菌貯存液和“雞湯”,除了Stabrom909殺生物劑的濃度
是通過在應用前添加30ml/L水稀釋的。將這一稀釋液噴灑到雞上(內
部和外部),噴灑量為每只雞200ml。另外,細菌肉湯處理,整只雞的洗
滌取樣步驟,用于細菌有機物定量和定性分析的方法按照實施例3進行。

關于使用的試驗時間的細節和在這些試樣中使用的詳細的試驗設計
如實施例6所述。唯一的區別是:

a)對于第5受試組的雞,當畜體仍舊是溫熱時,利用噴霧手持噴嘴
向10只雞每只的內部和外部都噴灑200ml?3%的Stabrom?909殺生物劑
(SSBC)。預先的利用染料的質量控制試驗已經確定使用200ml液體噴灑
劑能夠完全覆蓋畜體。允許噴灑劑在溫暖的畜體上停留60秒。

b)也在取樣第0天對從每次處理得到的剩余的110只畜體中的102
只的處理包括“整只雞”洗滌和沙門氏菌檢測,這些全都如實施例6所
述,但只應用于受試組1-4(參見表38)。

表39-42匯總了此受試組的結果。此實施例的冰水槽處理對假單胞
菌屬種在雞皮膚上生長的影響表示在圖3中。圖4是此實施例的冰水槽
處理對所有需氧細菌在雞皮上生長的影響的試驗的結果。

表39


1按照USDA?HACCP標準12/51只被認為是統計學可接受的。總共102
只雞被用來測定沙門氏菌陽性樣本和測定簡單平均值。

表40



1每次處理4只或更多被認為是高度反對的。

表41


1非結構性新鮮的畜體內部氣味感覺的連續級數范圍在值1.0(最低
強度)到值9.0(最高強度)之間。注:指在沒有普通上標的行內是
有顯著性差異的(p<0.05),通過最小顯著性差異決定。

25只或更多被認為是高度反對的。

表42


1注:指在沒有普通上標的行內是有顯著性差異的(p<0.05),通過最
小顯著性差異決定。

2皮膚著色(Minolta?Color?Meter?L值或亮度,a值或紅和b值或黃)。

3所有處理皮著色是在120只雞上進行的,除了SSBC只用了10只雞。

已經進行了許多的試驗來證明一些殺生物劑在根除或控制在禽類加
工系統中存在的各種的細菌種類中的微生物滅殺的效果。

此系列試驗中的一種涉及測定對大腸桿菌細菌的微生物學的控制。在
每一情況下,利用AOAC試驗方法以相同的方式進行比較試驗。此試驗包
括將微生物的培養物暴露在各種濃度的受試溶液前,此受試溶液是由受
試化合物的水貯存液制備的。在不同的時間間隔受試混懸液中的鹵素被
化學抵消,變化的細菌殘留量通過放置在營養瓊脂上并在37℃保溫2天
來計算。結果以Log10菌落形成單位(CFU)表示。在實驗中測定的化合物
的濃度需要在30秒內獲得完全滅殺(也就是沒有存活的細菌殘留)。

表43匯總了在實驗中獲得的數據,分別利用1,3-二溴-5,5-二甲基
乙內酰脲(DBDMH)和N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲(BCDMH),并且在
其中每一種情況下使用的微生物都是大腸桿菌。可以看到1,3-二溴-5,5-
二甲基乙內酰脲在1毫克溴(即Br2)/每升水處通過了試驗,證據是在
30秒內完全滅殺,然而N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲需要2毫克溴(即
Br2)/每升水來達到在30秒內完全滅殺。

表43-抗大腸桿菌有效性



表44匯總了在試驗中獲得的數據,分別利用1,3-二溴-5,5-二甲基
乙內酰脲(DBDMH)和N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲(BCDMH),并且在
其中每一種情況下使用的微生物都是抗腸道球菌faecium。表44顯示
1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲在1毫克溴(即Br2)/每升水處通過了
試驗,證據是在30秒內完全滅殺,然而N,N’-溴氯-5,5-二甲基乙內酰脲
需要2毫克溴(即Br2)/每升水來達到在30秒內完全滅殺。

表44-抗腸道球菌FAECIUM有效性



表45匯總了在MBEC?Biofilm?Technologies,Inc.進行的試驗得到的試
驗結果。卡爾加里,加拿大在各種殺生物劑在生物膜移除上的影響。試
驗程序,在卡爾加里大學發展,利用一種裝置,其允許在仔細地控制條
件下的96個相同的生物膜的生長。此裝置由兩部分容器構成,此容器由
相對于底部平板較高的包含96個胚栓的密封的上部平板組成。底部平板
可以由槽(用于生物膜生長)或標準96-孔板(用于殺生物劑作用)構
成。生物膜在96個胚栓上生長。此裝置已經被用作評價對于抗生素和殺
生物劑對于生物膜的效應的通用方法。在這一點上見H.Ceri,等,“The?
MBEC?Test:A?New?In?Vitro?Assay?Allowing?Rapid?Screening?for?
Antibiotic?Sensitivity?of?Biofilm”,Proceedings?of?the?ASM,1998,
89,525;Ceri,等.,″Antifungal?and?Biocide?Susceptibility?testing?
of?Candida?Biofilms?using?the?MBEC?Device″,Proceedings?of?the?
Interscience?Congerence?on?Antimicrobial?Agents?and??Chemotherapy,
1998,38,495;和H.Ceri,等.,″The?Calgary?Biofilm?Device:A?New?
Technology?for?the?Rapid?Determination?of?Antibiotic?
Susceptibility?of?Bacterial?Biofilms″,Journal?of?Clinical?
Microbiology,1999,37,1771-1776。

利用上述試驗程序和試驗裝置評價了六種殺生物劑系統。其中五種系
統是氧化型殺生物劑,即氯(來自NaOCl),鹵素(來自NaOCl??+NaBr),
鹵素(來自BCDMH),溴(來自DBDMH)和氯(來自三氯雷尿酸),所有都
以溴(Br2)mg/L表示,所以所有的試驗結果都在相同的基礎上。第6
種殺生物劑是戊二醛,非—氧化型殺生物劑。

這些殺生物劑系統被用來攻擊假單胞菌aeruginosa(ATCC?15442)。這是
一種革蘭氏陰性細菌,已經發現其在許多水系統中以微生物粘液形式普
遍存在。在這一點上見J.W.Costerton和H.Anwar,″Pseudomonas?
aeruginosa:The?Microbe?and?Pathogen″,Pseudomonas?aeruginosa?
Infections?and?Treatment,A.L.Baltch和R.P.Smith編,Marcel?
Dekker出版社,紐約,1994.在禽類加工領域,S.Notemnms,J.Dormans,
和G.C.Mead,Biofouling,1991,第5卷,第21-36頁,報導了通過
利用掃描電子顯微鏡在禽類屠宰房中觀察生物膜。

在表45中列出的MBEC(最小生物膜根除濃度)結果對應于在實驗中
使用的1小時殺生物劑接觸時間。為包含鹵素的殺生物劑給出的值按照
溴(Br2)mg/L表示。作為活性成分的戊二醛的數據是按照mg/L表示。
數據顯示在MBEC是溴(Br2)1.4mg/L這一條件下,相對于任何其他受
試的殺生物劑,BDBMH是更有效的。實際上,與BCDMH需要的總鹵素(以
Br2表示)相比,只要略多于來自BDBMH的鹵素中的一半就能移去生物膜。

表45-抗假單胞菌AERUGINOSA生物膜有效性


在另一受試組中,其結果在圖5-10中描述。試驗中利用了一些本發
明的溴基殺微生物劑來說明它們的在根除或控制異養性平板計數細菌,
也就是各種未經確認的物種的天然發生的致病菌的混合物中的有效性。
這些細菌既以生物膜形式也以浮游生物形式被攻擊。

在這些實驗中利用的試驗條件包括使用由三個平行的透明PVC取樣
管組成的儀器。這些管被用作生物膜(也就是固著的或表面附著的)細
菌樣本收集;一個作為對照管,一個是相對低殺生物劑濃度,第三個是
較高的殺生物劑濃度。在每一種情況下,殺生物劑的攻擊分為三個階段。
第一個是14天的接種。接下來是48小時消毒期。最后提供2星期恢復
期。實驗中的殺生物劑是slug-分劑量的并且在第1小時暴露過程中,
調整濃度來達到想要的濃度水平。

自然生長的異氧性平板計數(HPC)細菌的來源是沉淀物,并且相關
的水收集自醫院的循環熱水系統。將過濾筒插入醫院水系統中并且在約
兩個月后在過濾器上收集適宜量的沉淀物。然后收獲采集的過濾物/水
混懸液來培養。殺生物劑攻擊試驗的接種體由脫氯自來水,HPC-培養的
貯存液和營養供給溶液組成。在試驗開始前將接種體在37℃保溫1-14
天。將接種體與另外脫氯自來水一起引入有三個平行的透明PVC取樣管
組成的儀器。將這一混合物通過儀器以3.2加侖/分鐘的速度間歇式地
再回流1-14天來產生堅固的生物膜和浮游生物的HPC細菌種群。

這些細菌的樣本是在殺生物劑攻擊前在14天接種期的末尾收集的。
然后在每一試驗中,HPC細菌被特定濃度的溴基殺生物劑攻擊,在1,2,
3,12和48-小時時間間隔取樣。這些樣品是通過拭擦透明PVC取樣管
的預先測量的部分(長度,17/32英寸)的內部表面取得的。在放到平
板上前,將拭擦物在含有0.1ml中和劑(用來除去殘留的溴)的5ml去
離子水中形成渦流1分鐘。并行地,取水樣來列舉浮游生物的HPC細菌。

在48小時殺生物劑攻擊期間,步驟包括提供兩星期恢復期。提供這
一恢復期的目的是測定在循環水中多快存活的HPC細菌會仍舊以生物膜
和浮游生物形式存在。因此,將循環水從試驗裝置中排干,并將裝置中
重新充滿熱—無菌的自來水,此自來水也允許像前面一樣間歇地循環。
在7天和14天后,將裝置重新取樣,以如前面做的相同的方式根除生物
膜和浮游生物的HPC細菌。

這些試驗的結果以圖的形式顯示在圖5到10中。在圖5的試驗中分
別使用在0.5ppm和2ppm的由氨基磺酸鹽—穩定的氯化溴衍生得到的
活性溴種類(Stabrom909殺生物劑,Albemarle公司),都作為溴,來
攻擊與生物膜有關的HPC細菌。另外,以相同的方式進行對照,除了不
應用殺生物劑。我們能看到在較高的溴濃度,在三小時內根除了幾乎99%
的與生物膜有關的HPC細菌,然而當0.5ppm溴時,根除約95%的HPC
細菌。也能看到在活性溴的兩個濃度水平,在48小時殺生物劑攻擊階段
只發生非常少的生物膜HPC的恢復。而且,甚至在整個兩星期恢復期后,
HPC生物膜細菌仍舊沒有恢復到它們的原始的種群水平。

在圖6中在試驗里使用的活性溴種類以及它們的濃度與在圖5中的一
致,并且使用對照。然而,在這些試驗中HPC細菌是浮游生物形式的。
能夠看到在較高的溴濃度,在三小時內超過90%的浮游生物的HPC細菌
被根除,并且在0.5ppm溴時,大約85%浮游生物的HPC細菌被根除。
這些試驗結果也說明甚至在這些活性溴的低濃度,在兩星期恢復期內,
浮游生物的HPC細菌也不能恢復到與它們起初水平相等的種群。

圖7中的結果涉及與圖5的試驗相比較高濃度的從氨基磺酸鹽—穩定
的氯化溴衍生得到的活性溴種類(Stabrom909殺生物劑)。特別地,這
一殺微生物劑分別在4ppm和10ppm使用,都作為溴,來攻擊與生物膜
有關的HPC細菌。另外,以相同的方式進行對照,除了不應用殺生物劑。
能夠看到在較高的溴濃度,在三小時內差不多99.9%的與生物膜有關的
HPC細菌被根除。在4ppm溴時,差不多99.9%的HPC細菌在三小時內
被根除。可以看到,在活性溴濃度的兩個水平,在48小時攻擊期間只發
生很少的生物膜HPC細菌恢復。而且,甚至在完整的兩星期恢復期后,
HPC生物膜細菌仍舊不能恢復到與他們的原始水平相近的程度。

在圖8中使用的活性溴種類以及它們的濃度與在圖7中的一致,并且
使用對照。然而,在這些試驗中HPC細菌是浮游生物形式的。能夠看到
溴的兩個濃度,在三小時內超過99%的浮游生物的HPC細菌被根除。也
能看到,在48小時殺生物劑攻擊期間,在任何一個使用了溴殺生物劑的
實驗中,很少量的可存活的浮游生物的HPC細菌的恢復仍舊保持,很難
開始發生。這些試驗結果說明,為了使浮游生物的HPC細菌恢復種群到
與它們的原始水平相接近的程度,需要大大多于兩個星期的恢復期。

圖9中的試驗結果涉及使用1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲
(Albrom100殺生物劑,Albemarle公司)作為活性溴種類來源。在這
些試驗中使用的殺微生物劑在0.5ppm和5ppm水平作為溴來攻擊與生
物膜相關的HPC細菌。也以相同的方式進行對照除了不應用殺生物劑。
可以從圖9中看到在較高的溴濃度,在12小時內差不多99.9%的HPC細
菌被根除。在0.5ppm作為溴,在三小時內超過99%HPC細菌被根除。
可以看到在48小時殺生物劑攻擊期間,在使用溴殺生物劑的兩個實驗中,
仍舊存在的很少量的存活的HPC生物膜開始恢復。這些實驗結果也說明
為使HPC細菌恢復種群到與它們的初始水平相近的程度,需要大大多于
兩星期的時間。

在圖10中使用的活性溴種類以及它們的濃度與在圖9中的一致,并
且使用對照。然而,在這些試驗中HPC細菌是浮游生物形式的。能夠看
到在較高的溴濃度,在十二小時內差不多99.9%的浮游生物的HPC細菌
被根除。在0.5ppm作為溴和在三小時內,差不多99%的浮游生物HPC
細菌被根除。也能看到,在48小時殺生物劑攻擊期間,在使用溴殺生物
劑的兩個實驗中,仍舊存在的很少量的存活的浮游生物的HPC細菌開始
恢復。這些試驗結果也說明,為了使浮游生物的HPC細菌恢復種群到與
它們的原始水平相接近的程度,需要多于兩個星期的恢復期。

在本發明的實踐中,利用不同殺微生物劑的消毒步驟的結合,其中至
少一種是本發明的殺微生物劑,優選一種或多種本發明的溴基殺微生物
劑,能證明有效。例如,本發明的殺微生物劑,優選本發明的溴基殺微
生物劑,能被應用于或與不同的與禽類加工表面相關的表面接觸,例如
管道,槽(例如,燙槽,冰水槽),傳送帶或傳送線,并且禽類畜體本身
能用抗微生物劑處理,例如包含羧酸(醋酸或乳酸)和/或過氧羧酸(例
如過醋酸,過氧蛋白磺酸,過氧癸酸或類似物)的溶液或凝膠。這種羧
酸的使用的描述例如見US專利6113963。這種結合操作的結果是高度有
效的消毒。實際上,可以想到與迄今通常已經獲得的相比,這種結合操
作會導致更大程度的微生物的根除,特別是當使用的溴基殺生物劑是
1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲且使用的羧酸是過醋酸時。甚至,這些殺
生物劑的結合可能是協同的。

按照本發明在結合操作中能使用的另一種殺微生物劑是磷酸三鈉,一
種按照Capita?et?al.,Meat?Science,2000,55(4),471-474的物質,
作為在生禽類畜體上除去沙門氏菌的輔劑已經由USDA批準。在結合操作
中磷酸三鈉和一種或多種本發明的殺微生物劑被應用于畜體,優選一種
或多種本發明的溴基殺微生物劑,被用在與禽類加工有關的設備,裝置,
儀器的消毒中。也按照本發明,結合操作可以將二氧化氯處理與本發明
的殺微生物劑的使用一起利用。Smith,Meat?Processing,1996,35(1
0),47說明二氧化氯已經被USFDA批準用在禽類加工水中,并且在本發
明的實踐中本發明的一種或多種殺微生物劑,優選一種或多種本發明的
溴基殺微生物劑被用在禽類加工中的使用的各種設備,裝置和/或儀器
的消毒中,并且二氧化氯被用來消毒至少一些禽類加工水。

可以執行的按照本發明的結合操作的另一種方式包括向禽類的消化
道施用合適的生物的病原體—控制劑,例如在禽類的飲用水中加入這種
生物劑或在禽類的飼料中加入這種生物劑。可以以這種方式使用的例證
性的生物的病原體—控制劑包括在US專利6083500中描述的特定的大腸
桿菌菌株。因此,在本發明的實踐中,將這種生物的病原體—控制劑提
供給禽類通過飲水和/或吃食來消耗,本發明的至少一種殺生物劑的殺
微生物有效量的水溶液,其優選至少一種本發明的溴基殺微生物劑,被
用于在禽類加工中使用的裝置、儀器、設備和/或水,和/或在禽類加
工中得到的畜體和/或部分畜體的消毒。

另一結合操作包括(i)用在US專利6172040B1中描述的固定不動的
乳鐵傳遞蛋白抗微生物劑來處理畜體并且(ii)消毒所有或部分儀器、
裝置、設備和/或水,通過將它們與本發明的至少一種殺微生物有效量
的殺微生物劑的水溶液接觸,優選至少一種本發明的溴基殺微生物劑。

適用于分配本發明的殺微生物劑的自動化的分配設備在文獻中已有
描述,并且至少一些在市場上有售。作為對這些設備的參考,例如見US
專利5683724,其中描述了自動化的分配系統。

雖然化學家明白當與溶液或介質或其類似物有關的“水的”的含義,
但是為了可能會在專業上進行超越所使用的每個詞來詭辯的那些律師的
利益,可能需要對什么是“水的”的含義進行說明。形容詞“水的”指
溶液或介質或任何其它形容詞修飾的名詞,可以是高純度的或普通純度
的水(例如從龍頭中流出的水)。既然我們涉及食品加工,能夠解釋一個
人不會去用下水道的水或包含致命劑量毒藥(例如氰化物)的水。而且
天然—發生的痕量不純物能存在于,假設,通常適于飲用的水,例如普
通井水或市政用水中,形容詞“水的”也允許在水中存在可溶解的鹽,
這些鹽是在水中形成溴基殺生物劑的過程中形成的,例如通過在高堿性
的水溶液中氯化溴和氨基磺酸鈉之間的反應。另外,“水的”允許存在小
量無毒無害、水溶性的有機溶劑,例如可用作1,3-二鹵素-5,5-二烷基乙
內酰脲溶劑的乙醇。“水的”也允許在水中存在在水中能溶解量的鹵素基
殺微生物劑,加上任何可能在反應后殘留的溶解的反應物。水中也包括
一些原子,這些原子是從反應發生的容器中溶解出來的,加上在水中可
以發現它們的方式的產生空氣的不純物。在這里的觀點是術語“水的”
不限定介質或溶劑是絕對的純水——水溶液或介質或其類似物可能包含
在特定的條件下包括當使用普通正常意義時正常存在的和/或有理由認
為存在的物質。

在此文獻中無論何處通過化學名稱或結構式提到的化合物,無論以單
數或以復數提及,在與其它通過化學名稱或化學類型提到的另一種物質
(例如,另一種成分或溶劑)接觸前被認為是存在的。它與什么化學藥
品變化無關,如果一些,在得到的混合物或溶液中發生,這種變化是在
按照本公開要求的條件下將指定的物質結合在一起的天然結果。舉例,
短語“至少一種1,3-二鹵素-5,5-二烷基乙內酰脲”和有類似意思的短語
表示在與水性介質例如水接觸前,提及的至少一種1,3-二鹵素-5,5-二烷
基乙內酰脲是具體的1,3-二鹵素-5,5-二烷基乙內酰脲。因此此短語是提
及溶液的簡單的、明確的方式,并沒有暗示或意味著化學藥品在水中存
在不變化。發生的變化是將這些物質結合在一起的天然的結果并且因此
不需要進一步的詳細的說明。

盡管權利要求也可能以現在時態(例如“包括(comprises)”或“是
(is)”)提及物質,但是對于此物質的參考是在它第一次與本發明公開
的一種或多種其它的物質接觸、混合(blended)或混合(mixed)前,它
是存在的。

可能要另外說明的例外是,冠詞“a”或“an”如果或在這里使用時
不是用來限制,并且不應解釋為將說明書或權利要求限制到冠詞所指的
單個的要素。更合適的,冠詞“a”和“an”如果和在這里使用時指一種
或多種這樣的要素,除非正文另外說明。

本發明容許在附加的權利要求書的實質和范圍內的許多變化。

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