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一種抗黑條矮縮病載體及抗黑條矮縮病轉基因水稻培育.pdf

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一種 抗黑條矮縮病 載體 轉基因 水稻 培育
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摘要
申請專利號:

CN201310202564.9

申請日:

2013.05.28

公開號:

CN103276006B

公開日:

2014.12.10

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):C12N 15/63申請日:20130528|||公開
IPC分類號: C12N15/63; C12N15/82; A01H5/00 主分類號: C12N15/63
申請人: 揚州大學
發明人: 左示敏; 潘學彪; 張亞芳; 陳宗祥; 吳林波; 薛文霞
地址: 225009 江蘇省揚州市大學南路88號
優先權:
專利代理機構: 南京知識律師事務所 32207 代理人: 汪旭東
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310202564.9

授權公告號:

103276006B||||||

法律狀態公告日:

2014.12.10|||2013.10.09|||2013.09.04

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種抗黑條矮縮病載體及抗黑條矮縮病轉基因水稻培育。本發明的抗黑條矮縮病專用載體p1301/Ubi-S6RNAi包括常用的植物RNAi載體p1301/Ubi-RNAi的基本骨架和轉移T-DNA區,其特征在于在轉移T-DNA區中增加了S6RNAi片段。本發明將p1301/Ubi-S6RNAi載體應用于培育抗黑條矮縮病轉基因水稻,其特征在于本發明載體中的S6RNAi片段導入黑條矮縮病感病水稻中,可明顯提高轉基因水稻對黑條矮縮病的抗性。本發明的載體可廣泛應用于提高水稻對黑條矮縮病的抗性。

權利要求書

權利要求書
1.   一種抗黑條矮縮病載體p1301/Ubi?S6RNAi,包括常用的植物RNAi載體p1301/Ubi?RNAi的基本骨架和轉移T?DNA區,其特征在于在轉移T?DNA區中增加了S6RNAi片段,所述S6RNAi片段由S6(1)、內含子和S6(2)共三個片段串聯組成。

2.    一種如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體,其特征在于所述的S6(1)片段是通過特異PCR引物擴增黑條矮縮病病毒侵染稻株的cDNA所得,特異PCR引物S6F序列為5’ CGGGATCCCTCGAATC ATCCGTCACTTCTGAGT 3',S6R序列為5’ GGACTAGTGGACAAAACCTTTCCAATTATCGAG 3';S6(1)片段序列為ctcgaatcatccgt cacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaacaaaActtctcctcaacctaactcttcTgaatcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtc。

3.    一種如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體,其特征在于所述S6(2)片段為S6(1)的反向互補片段;S6(2) 片段序列為gacTagTggacaaaacctttccaattatcgagat ttttcattcgtaGctggcaagtggcattcacaactaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。

4.    一種如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體,其特征在于:所述 S6RNAi的片段序列為TtcgaatcatccgtcacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaacaaaActtctcctcaacctaactcttcTgaatcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtcgtaattaagcaaaacttatccaaaaccaaacattttactattattttgacctttttattccacttttcttagacaatgatttaacctcgtaatcaattgttaggacTagTggacaaaacctttccaattatcgagatttttcattcgtaGctggcaagtggcattcacaactaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。

5.     一種利用如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體進行抗黑條矮縮病轉基因水稻培育,其特征在于:將所述載體p1301/Ubi?S6RNAi轉入農桿菌EHA105,進而采用攜帶所述載體p1301/Ubi?S6RNAi的EHA105菌系侵染水稻,通過農桿菌介導轉化法,將載體p1301/Ubi?S6RNAi中的S6RNAi片段轉入水稻,最后通過特異PCR引物鑒定轉基因水稻中攜帶有S6RNAi片段;含有S6RNAi片段的轉基因水稻,在采用特異引物S6F1和S6R1進行PCR擴增時,可獲得一條284bp的特異條帶,S6F1引物序列為5’ CTCGAATCATCCGTCACTTCTGAGT 3',S6R1引物序列為5’ GGACAAAAC CTTTCCAATTATCGAG 3'。

說明書

說明書一種抗黑條矮縮病載體及抗黑條矮縮病轉基因水稻培育
技術領域
本發明屬于基因工程技術領域,具體涉及一種抗水稻黑條矮縮病的專用載體。
背景技術
水稻黑條矮縮病RBSDV病是一種主要由灰飛虱作為蟲媒傳播的病毒病,近年來,該病害在江蘇、浙江等長江中下游稻區猖獗流行,造成了巨大經濟損失。培育抗病品種是控制病害流行的最經濟有效的方法,但是迄今未發現優異的抗病種質或抗病基因資源,使得依靠傳統技術的抗黑條矮縮病育種無法開展。
近20年來,人類對付病毒危害的最主要方法就是轉基因技術。自從Powell等將病毒外殼蛋白基因在轉基因煙草中表達而使煙草獲得一定程度的抗TMV病毒侵染以來,大量的病毒基因及其片段都被證明可以誘導植物對相應病毒產生有效抗性的基因。該轉基因方法的主要過程是,將病毒的外殼蛋白等基因進行克隆和重組,然后轉入植物細胞內,使得轉基因植株獲得抗病毒的能力,但至今仍不清楚該方法使得植株產生抗性的分子機制。上世紀末,RNA干擾RNAi技術的出現及隨后的發展,為人類控制植物病毒病提供了一種高效方便的方法。目前利用RNAi技術控制植物病毒病的最主要技術過程是,在宿主植物體內表達基于病毒基因組序列為靶位點設計的RNAi片段,利用該片段在宿主體內表達以沉默入侵病毒基因組中的特定基因表達,從而影響病毒復制,使得宿主產生抗性。與以往技術相比,RNAi技術產生的抗病毒效應具有高度特異性,對非同源基因表達幾乎沒有影響,且產生的抗病毒效果好。目前,該技術已被普遍應用于植物抗病毒轉基因研究中。
Wang等(2000)以大麥黃矮病毒的復制酶為目的靶基因位點構建RNAi載體并轉化大麥,獲得了抗黃矮病的轉基因大麥。馬中良(2004)等根據水稻矮縮病毒RDV序列,構建了與其相關的RNAi載體并轉化水稻,獲得了對水稻矮縮病毒抗性有所提高的轉基因水稻。鐘環(2006)以病毒基因組中的SP基因和CP基因為靶標,分別構建了RNAi載體,轉入不同水稻品種中均成功的提高了水稻對條紋葉枯病的抗性。然而,大量的研究還發現,針對病毒的不同基因或同一基因的不同靶位點設計產生的RNAi片段,轉入宿主植物后所產生的干擾效果,彼此間差異明顯。這就要求,在針對具體的病毒RNAi轉基因研究中,需要篩選到合適的RNAi片段,以達到最好的抗病毒病效果。
水稻黑條矮縮病毒的基因組由10條線性的雙鏈RNA即dsRNA組成,根據其在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移距離,由小到大分別命名為S1?S10。研究結果表明RBSDV的基因組全長為29141bp,至少含有13個開放閱讀框 ORF,除了S5、S7和S9均含有2個順反子之外,其余7個基因組片段均為單順反子。
 
發明內容
本發明的目的在于提供一種包含特定RNAi片段的可有效控制水稻黑條矮縮病的專用載體,并應用該載體培育抗黑條矮縮病轉基因水稻,為通過轉基因技術培育抗黑條矮縮病水稻新品種提供基因資源。
為了解決以上技術問題,本發明所采用的技術方案如下:
一種抗黑條矮縮病載體p1301/Ubi?S6RNAi,包括常用的植物RNAi載體p1301/Ubi?RNAi的基本骨架和轉移T?DNA區,其特征在于在轉移T?DNA區中增加了S6RNAi片段,其具體由S6(1)、內含子和S6(2)共三個片段串聯組成。
所述的S6(1)片段是通過特異PCR引物擴增黑條矮縮病病毒侵染稻株的cDNA所得,特異PCR引物S6F序列為5’ CGGGATCCCTCGAATC ATCCGTCACTTCTGAGT 3',S6R序列為5’ GGACTAGTGGACAAAACCTTTCCAATTATCGAG 3';S6(1)片段序列為ctcgaatcatccgtcacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaacaaaActtctcctcaacctaactcttcTgaatcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtc。
所述S6(2)片段為S6(1)的反向互補片段;S6(2) 片段序列為gacTagTgga caaaacctttccaattatcgagatttttcattcgtaGctggcaagtggcattcacaactaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。
所述的S6RNAi片段為S6(1)片段、內含子片段和S6(2)片段串聯所得;所述 S6RNAi的片段序列為TtcgaatcatccgtcacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaacaaaAc ttctcctcaacctaactcttcTgaatcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtcgtaattaagcaaaacttatccaaaaccaaacattttactattattttgacctttttattccacttttcttagacaatgatttaacctcgtaatcaattgttaggacTagTggacaaaacctttccaattatcgagatttttcattcgtaGctggcaagtggcattcacaactaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。
一種利用上述載體進行抗黑條矮縮病轉基因水稻的培育,其特征在于:首先將所述載體p1301/Ubi?S6RNAi轉入農桿菌EHA105;其次采用攜帶所述載體p1301/Ubi?S6RNAi的EHA105菌系侵染水稻,通過農桿菌介導轉化法,將載體p1301/Ubi?S6RNAi中的S6RNAi片段轉入水稻;最后通過特異PCR引物鑒定轉基因水稻中攜帶有S6RNAi片段,含有S6RNAi片段的轉基因水稻,在使用特異引物S6F1和S6R1進行PCR擴增時,可獲得一條284bp的特異條帶;S6F1引物序列為5’ CTCGAATCATCCGTCACTTCTGAGT 3',S6R1引物序列為5’ GGACAAAACCTTTCCAATTATCGAG 3'。
本發明具有有益效果。本發明獲得的包含S6RNAi片段的專用載體p1301/Ubi?S6RNAi,轉入任何水稻,可從轉基因再生植株中篩選到對黑條矮縮病抗性顯著增強的轉基因水稻,表明本發明的包含S6RNAi片段的專用載體可用于培育抗黑條矮縮病轉基因水稻。
 
附圖說明
圖1為含有S6RNAi片段的抗水稻黑條矮縮病專用載體結構示意圖
注:圖A為特異PCR引物S6F和S6R的擴增效果;泳道1、2、5號中的DNA模板為染病稻株cDNA,可擴增出S6(1)片段,泳道3、4、6號為健康稻株cDNA,擴增不出S6(1)片段;M為分子量標準。圖B為專用載體p1301/Ubi?S6RNAi的雙酶切(BamH ISac I)結果;正確的重組質粒在雙酶切后應出現771bp的特異條帶;M為分子量標準;泳道1?3號依次為來自不同單克隆的重組質粒p1301/Ubi?S6RNAi的酶切結果。圖C為專用載體p1301/Ubi?S6RNAi的結構示意圖; 結構元件中除了S6RNAi區段為本載體特有之外,其它結構元件如LB、RB、GUS、35S、Ubi、NOS、HygR和KanR以及其它載體骨架均來自原植物表達載體p1301/Ubi?RNAi。
圖2為含有S6RNAi轉基因水稻PCR檢測及對黑條矮縮病的抗性效果圖
注:圖中A為包括S6RNAi轉基因株系在內的其它轉基因株系以及未轉基因對照,在江蘇4個不同實驗地點中的抗黑條矮縮病自然鑒定結果,圖中S1、S2、S6和S10分別表示含有S1RNAi、S2RNAi、S6RNAi和S10RNAi干擾片段的轉基因株系;CK為未轉基因對照株系;圖中B為采用特異PCR引物S6F1和S6R1檢測轉基因再生植株中是否含有S6RNAi片段,其中CK1和CK2分別表示陽性和陰性對照,泳道1、2、4、8~14、16、17、19~22號為S6RNAi陽性轉基因植株,其它為陰性轉基因植株。
 
具體實施方式
實施例一:載體p1301/Ubi?S6RNAi實施例
載體p1301/Ubi?S6RNAi中包含由S6(1)、內含子和S6(2)共3個片段串聯組成的S6RNAi片段; S6(1)片段是通過特異PCR引物擴增黑條矮縮病病毒侵染稻株的cDNA所得; S6(2)片段為S6(1)的反向互補片段;S6RNAi片段由S6(1)片段、內含子片段和S6(2)片段按順序串聯所得,之后導入植物表達載體中獲得p1301/Ubi?S6RNAi;含有S6RNAi片段的轉基因水稻,在使用特異引物S6F1和S6R1進行PCR擴增時,可獲得一條284bp的特異條帶,對黑條矮縮病的抗性顯著增強。
獲得的專用載體p1301/Ubi?S6RNAi,其示意圖如圖1所示,是在p1301/Ubi?RNAi載體中插入 S6RNAi片段后獲得。
通過特異PCR引物擴增黑條矮縮病病毒侵染稻株的cDNA得S6(1)片段。S6(1)片段序列為ctcgaatcatccgtcacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaacaaaActtctcctcaacctaactcttcTga atcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtc。
特異PCR引物為S6F和S6R,其序列分別為 S6F:5’ CGGGATCCCTCGA ATCATCCGTCACTTCTGAGT 3',和S6R:5’ GGACTAGTGGACAAAACCTTTCCAATTA TCGAG 3' 。
感染黑條矮縮病水稻植株的總RNA反逆轉錄成cDNA,其反轉錄反應體系為20ul,包括2ul的總RNA、0.5μL的引物Oligo dT、4.0μL的5倍反應緩沖液、5.0μL、0.5μL的RNA酶抑制劑、1.0μL的DTT、1.1μL的反轉錄酶RTase、8.9μL的DEPC處理過的ddH2O。反轉錄反應程序為50oC 50 分鐘、85oC 5分鐘、?20 oC保存備用。
特異PCR引物S6F和S6R擴增S6(1)片段的反應體系為20μl,包含2μl即100ng模板cDNA、2μl的10×聚合酶緩沖液、0.4μl的10mM dNTP;0.4μl 的10μM前后引物,1μl的高保真聚合酶、13.8μl的超純水;PCR反應條件為:在94℃下預變性5 分種;在94℃下變性 30秒,在60℃下退火30 秒,在72℃延伸1 分種,循環35次;在72℃下延伸5 分鐘;12℃保溫2小時;目標片段?20℃儲存備用。
S6(2)片段為S6(1)的反向互補片段。獲得過程按以下步驟進行:(1)利用BamH ISpeI分別雙酶切S6(1)片段和中間載體p1022,通過T4連接酶將酶切后的S6(1)片段連接至p1022載體中,獲得重組載體p1022?S6(1);(2)利用XbaIBg1II雙酶切重組載體p1022?S6(1),通過T4連接酶將步驟(1)中酶切后的S6(1)片段連接至重組載體p1022?S6(1)中,由于XbaISpeIBamH IBg1II分別同尾酶,因此導入p1022?S6(1)載體的片段為S6(1)的反向互補片段,命名為S6(2),同時獲得重組載體p1022?S6RNAi。
S6(2)的片段序列為:gacTagTggacaaaacctttccaattatcgagatttttcattcgtaGctggcaagtggcattcaca actaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。
S6RNAi片段為S6(1)片段、內含子片段和S6(2)片段按順序串聯所得。實驗中采用的中間載體p1022自身帶有水稻谷蛋白基因Gt1的第二個內含子片段,且BamH ISpeI位于內含子左側、XbaIBg1II位于內含子右側,因此,通過步驟(2)中的酶切連接,自然獲得S6(1)片段、內含子片段和S6(2)片段按順序串聯所得的片段S6RNAi。
     S6RNAi的片段序列為:TtcgaatcatccgtcacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaac aaaActtctcctcaacctaactcttcTgaatcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtcgtaattaagcaaaacttatccaaaaccaaacattttactattattttgacctttttattccacttttcttagacaatgatttaacctcgtaatcaattgttaggacTagTggacaaaacctttccaattatcgagatttttcattcgtaGctggcaagtggcattcacaactaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。
將S6RNAi片段導入植物表達載體p1301/Ubi?RNAi中,獲得專用載體p1301/Ubi?S6RNAi,具體方法為:通過BamHISacI分別雙酶切重組載體p1022?S6RNAi和植物表達載體p1301/Ubi?RNAi,酶切產物凝膠電泳后采用凝膠回收試劑盒回收S6RNAi片段和p1301/Ubi?RNAi載體,通過T4連接酶,將S6RNAi片段導入p1301/Ubi?RNAi載體,獲得重組載體p1301/Ubi?S6RNAi,即本發明的專用載體p1301/Ubi?S6RNAi。
含有S6RNAi片段的轉基因水稻培育,培育方法為:(1)將專用載體p1301/Ubi?S6RNAi轉入農桿菌,通過農桿菌介導法將載體中的S6RNAi片段轉入水稻,獲得候選轉基因植株;(2)通過特異PCR引物S6F1和S6R1擴增候選轉基因植株的總DNA,如果擴增獲得一條284bp的特異條帶,則證明目標植株為陽性轉基因植株,攜帶S6RNAi片段,否則為不含有S6RNAi片段的陰性植株。
特異PCR引物S6F1的序列為5’ CTCGAATCATCCGTCACTT CTGAGT 3',S6R1的序列為5’ GGACAAAACCTTTCCAATTATCGAG 3'。PCR反應體系為20μl,包含2μl即100ng的再生植株總DNA、2μl的10×聚合酶緩沖液、0.4μl的10mM的dNTPs;0.4μl 的10μM的S6F1引物,0.4μl 的10μM的S6R1引物、1U的DNA聚合酶、13.8μl的超純水。PCR反應條件為:在94℃下預變性5 分種;在94℃下變性 30秒,在60℃下退火30 秒,在72℃延伸1 分種,循環35次;在72℃下延伸5 分鐘;12℃保溫10分鐘后用于凝膠電泳;凝膠電泳中出現284bp的電泳條帶,表明目標植株中攜帶S6RNAi片段,為陽性轉基因植株。
對含有S6RNAi片段的陽性轉基因植株,測定其對黑條矮縮病的抗性水平,判斷S6RNAi控制水稻黑條矮縮病的效果。測定方法為:在多個試驗地點種植含有S6RNAi片段的轉基因水稻,同樣種植未轉基因對照,以及轉化含有其它病毒基因的特異RNAi片段的轉基因水稻;在整個水稻生育階段不防治黑條矮縮病病毒介體昆蟲灰飛虱;水稻抽穗期調查各株系中染病植株和健康株,計算各株系發病率;如果含有S6RNAi片段的轉基因水稻的發病率顯著低于未轉基因對照,則表明本發明的含有S6RNAi片段的專用載體p1301/Ubi?S6RNAi,可有效控制水稻黑條矮縮病。
實施例二:應用載體p1301/Ubi?S6RNAi培育抗黑條矮縮病轉基因水稻
下面實施方式進一步說明本發明所述的專用載體p1301/Ubi?S6RNAi可用于培育高抗黑條矮縮病轉基因水稻。本發明說明書所舉實例只是為了幫助理解本發明,它們不具任何限制作用。即本發明除說明書所舉實施方式外,還可以有其他實施方式。
以一個對黑條矮縮病高度感感的水稻品種武陵粳1號為改良對象。研究首先將p1301/Ubi?S6RNAi導入農桿菌中。進而通過農桿菌介導轉化法,轉化感病水稻品種的愈傷組織。對愈傷組織和攜帶p1301/Ubi?S6RNAi載體的農桿菌單克隆菌液共培養2天,吸干多余農桿菌菌液后轉入含有50mg/L潮霉素的N6培養基上,抗性篩選兩輪,每輪20天。選擇抗性愈傷至分化培養基上光照培養30天,獲得轉基因再生植株。對再生植株采用引物S6F1和S6R1進行PCR陽性和陰性檢測,保留陽性轉基因植株并移栽至大田。對包括S6RNAi轉基因株系在內的其它轉基因株系以及未轉基因對照,在江蘇4個不同地點進行抗黑條矮縮病自然鑒定,結果顯示如圖2和表1所示:S6RNAi轉基因株系對黑條矮縮病的抗性水平在不同地點均顯著高于對照,且優于其它干擾片段;各材料在不同地點間的平均病級多重比較結果顯示,S6RNAi載體的效果極顯著高于其它干擾片段;進一步從S6RNAi片段轉基因水稻株系中篩選到了3個對黑條矮縮病病毒病近乎免疫的新品系,表明p1301/Ubi?S6RNAi專用載體可用于培育高抗黑條矮縮病轉基因水稻。
表1 各載體轉基因純系及對照多點平均病級多重比較

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