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一種抗黑條矮縮病載體及抗黑條矮縮病轉基因水稻培育.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310202564.9

申請日:

2013.05.28

公開號:

CN103276006B

公開日:

2014.12.10

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):C12N 15/63申請日:20130528|||公開
IPC分類號: C12N15/63; C12N15/82; A01H5/00 主分類號: C12N15/63
申請人: 揚州大學
發明人: 左示敏; 潘學彪; 張亞芳; 陳宗祥; 吳林波; 薛文霞
地址: 225009 江蘇省揚州市大學南路88號
優先權:
專利代理機構: 南京知識律師事務所 32207 代理人: 汪旭東
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310202564.9

授權公告號:

103276006B||||||

法律狀態公告日:

2014.12.10|||2013.10.09|||2013.09.04

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種抗黑條矮縮病載體及抗黑條矮縮病轉基因水稻培育。本發明的抗黑條矮縮病專用載體p1301/Ubi-S6RNAi包括常用的植物RNAi載體p1301/Ubi-RNAi的基本骨架和轉移T-DNA區,其特征在于在轉移T-DNA區中增加了S6RNAi片段。本發明將p1301/Ubi-S6RNAi載體應用于培育抗黑條矮縮病轉基因水稻,其特征在于本發明載體中的S6RNAi片段導入黑條矮縮病感病水稻中,可明顯提高轉基因水稻對黑條矮縮病的抗性。本發明的載體可廣泛應用于提高水稻對黑條矮縮病的抗性。

權利要求書

權利要求書
1.   一種抗黑條矮縮病載體p1301/Ubi?S6RNAi,包括常用的植物RNAi載體p1301/Ubi?RNAi的基本骨架和轉移T?DNA區,其特征在于在轉移T?DNA區中增加了S6RNAi片段,所述S6RNAi片段由S6(1)、內含子和S6(2)共三個片段串聯組成。

2.    一種如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體,其特征在于所述的S6(1)片段是通過特異PCR引物擴增黑條矮縮病病毒侵染稻株的cDNA所得,特異PCR引物S6F序列為5’ CGGGATCCCTCGAATC ATCCGTCACTTCTGAGT 3',S6R序列為5’ GGACTAGTGGACAAAACCTTTCCAATTATCGAG 3';S6(1)片段序列為ctcgaatcatccgt cacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaacaaaActtctcctcaacctaactcttcTgaatcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtc。

3.    一種如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體,其特征在于所述S6(2)片段為S6(1)的反向互補片段;S6(2) 片段序列為gacTagTggacaaaacctttccaattatcgagat ttttcattcgtaGctggcaagtggcattcacaactaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。

4.    一種如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體,其特征在于:所述 S6RNAi的片段序列為TtcgaatcatccgtcacttctgagtGttctaattcgaaaaaacgctacgcacgtccatctaacaaaActtctcctcaacctaactcttcTgaatcatcCaatgaAactaaactgcGtcaGaatttgatttcttctgcttcaaattcctccgtggtgatgaaacctaattcagacgtactcaacctgtcCaaaactcaaactatccttccttctttagttgtgaatgccacttgccagCtacgaatgaaaaatctcgataattggaaaggttttgtccActAgtcgtaattaagcaaaacttatccaaaaccaaacattttactattattttgacctttttattccacttttcttagacaatgatttaacctcgtaatcaattgttaggacTagTggacaaaacctttccaattatcgagatttttcattcgtaGctggcaagtggcattcacaactaaagaaggaaggatagtttgagttttGgacaggttgagtacgtctgaattaggtttcatcaccacggaggaatttgaagcagaagaaatcaaattCtgaCgcagtttagtTtcattGgatgattcAgaagagttaggttgaggagaagTtttgttagatggacgtgcgtagcgttttttcgaattagaaCactcagaagtgacggatgattcgag。

5.     一種利用如權利要求1所述的抗黑條矮縮病載體進行抗黑條矮縮病轉基因水稻培育,其特征在于:將所述載體p1301/Ubi?S6RNAi轉入農桿菌EHA105,進而采用攜帶所述載體p1301/Ubi?S6RNAi的EHA105菌系侵染水稻,通過農桿菌介導轉化法,將載體p1301/Ubi?S6RNAi中的S6RNAi片段轉入水稻,最后通過特異PCR引物鑒定轉基因水稻中攜帶有S6RNAi片段;含有S6RNAi片段的轉基因水稻,在采用特異引物S6F1和S6R1進行PCR擴增時,可獲得一條284bp的特異條帶,S6F1引物序列為5’ CTCGAATCATCCGTCACTTCTGAGT 3',S6R1引物序列為5’ GGACAAAAC CTTTCCAATTATCGAG 3'。

關 鍵 詞:
一種 抗黑條矮縮病 載體 轉基因 水稻 培育
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