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楮實子提取物的制備方法及其在皮膚美白中的用途.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310293486.8

申請日:

2013.07.12

公開號:

CN103316083B

公開日:

2014.12.10

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A61K 36/60申請日:20130712|||公開
IPC分類號: A61K36/60; A61K8/97; A61P17/00; A61Q19/02; A61K131/00(2006.01)N 主分類號: A61K36/60
申請人: 上海相宜本草化妝品股份有限公司
發明人: 雷楊; 符移才; 張彬鋒; 王鞠駿
地址: 200444 上海市寶山區城銀路121號
優先權:
專利代理機構: 上海東亞專利商標代理有限公司 31208 代理人: 陳樹德;李穎薇
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310293486.8

授權公告號:

103316083B||||||

法律狀態公告日:

2014.12.10|||2013.10.30|||2013.09.25

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及一種楮實子提取物的制備方法及其在皮膚美白中的用途,制備包括:取楮實子,加入重量5-30倍的有機溶劑(乙醇),在50-100℃下回流提取1-10個小時,提取液經過靜置、過濾、濃縮,得到楮實子粗提物浸膏;浸膏用水分散后,用大孔吸附樹脂柱進行分離純化,洗脫液經濃縮、干燥,制得各部位的楮實子提取物。該提取物用于抑制酪氨酸酶活性和黑色素合成,制備皮膚美白的外用組合物,其用量按質量百分比計為0.01-15%。優點是:經各種美白功效測試表明:楮實子提取物具有較強的抑制酪氨酸酶活性和黑色素合成的效果,能夠用于體外美白化妝品和外用醫藥品中,具有較高的安全性和良好的美白效果。

權利要求書

權利要求書
1.    一種楮實子提取物的制備方法,其特征在于包括如下步驟:
步驟1:取楮實子,加入重量5~30倍的有機溶劑,在50~100℃下回流提取1~10個小時,提取液經過靜置、過濾、濃縮,得到楮實子粗提物浸膏;
步驟2:浸膏用水分散后,用大孔吸附樹脂柱進行分離純化,洗脫液經濃縮、干燥,得各部位的楮實子提取物;
其中,所述的有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或者多種的混合溶劑。

2.    根據權利要求1所述的楮實子提取物的制備方法,其特征在于:所述分離純化過程為依次用3~5倍樹脂柱體積的水洗脫、4~6倍樹脂柱體積的體積分數為20%~40%的有機溶劑?水溶液洗脫、3~7倍樹脂柱體積的體積分數為50%~75%的有機溶劑?水溶液洗脫、3~7倍樹脂柱體積的體積分數為80%~95%的有機溶劑?水溶液洗脫,得各部位的洗脫液。

3.    根據權利要求1所述的楮實子提取物的制備方法,其特征在于:所述的楮實子為蕁麻目桑科植物構樹的干燥的成熟果實。

4.    根據權利要求3所述的楮實子提取物的制備方法,其特征在于:所述的楮實子在用有機溶劑浸泡提取之前經過清洗、干燥,除去灰白色膜狀宿萼及雜質。

5.    針對權利要求1至4之一所述的楮實子提取物的用途,用于抑制酪氨酸酶活性和黑色素合成,制備皮膚美白的外用組合物。

6.    根據權利要求5所述的楮實子提取物的用途,其特征在于:所述的楮實子提取物在外用組合物中的用量按質量百分比計為0.01~15%。

7.    根據權利要求6所述的楮實子提取物的用途,其特征在于:所述外用組合物為外用化妝品組合物或藥品組合物,劑型為溶液、乳液、懸浮液、霜、凝膠、泡沫或噴霧。

8.    根據權利要求7所述的楮實子提取物的用途,其特征在于:所述的外用化妝品組合物中還包括除楮實子提取物之外的美白劑、抗衰老成分、抗氧化劑、維生素、多肽、多糖、鞘脂中的一種或多種。

說明書

說明書楮實子提取物的制備方法及其在皮膚美白中的用途
技術領域
本發明涉及中藥提取物,尤其是一種楮實子提取物的制備方法,以及該提取物作為活性成分在皮膚美白中的用途。
背景技術
黑色素是一種由黑色素細胞分泌的高分子量的生物色素,存在于皮膚基底層的細胞中間。當皮膚暴露于紫外線中時,會產生大量的黑色素,黑色素能夠吸收紫外線,從而起到保護皮膚的作用。黑色素的形成原因很多,紫外線的輻射只是其中的重要原因之一。人體膚色的差異主要取決于皮膚中黑素的含量以及成熟期的黑素小體,抑制黑色素的合成,就能有效地改善皮膚的顏色,起到美白的效果。
酪氨酸酶是黑色素合成過程中的關鍵酶,是黑色素合成中必不可少的物質,它能夠催化L?酪氨酸生成L?多巴,接著催化L?多巴進一步氧化生成多巴醌,多巴醌經過一系列的反應后,最終形成黑色素。抑制酪氨酸酶的活性,能夠有效減少黑色素的合成,從而到達美白肌膚的效果。
據《中國藥典》(2000版)記載,楮實子,為蕁麻目桑科植物構樹Broussoneriapapyrifera(L.)Vent.的干燥成熟果實。性寒,味甘,歸肝經,腎經。補腎清肝、明目、利尿。用于腰膝酸軟、虛勞骨蒸、砂暈目昏、目生翳膜、水腫脹滿。據文獻報道,楮實子總生物堿具有抗腫瘤的活性,楮實子油及紅色素具有清除自由基、抗衰老的活性。臨床上,楮實子主要用于治療老年癡呆,慢性丙型肝炎及肝硬化,慢性腎炎,眼科疾病,不孕不育,斑禿等。而在化妝品中,楮實子主要用于抗衰老方面,其提取物具有美白的活性功效未見報道。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于提供一種楮實子提取物的制備方法。
本發明所要解決的另一技術問題在于提供上述楮實子提取物的用途。
本發明解決上述技術問題所采取的技術方案是提供一種楮實子提取物的制備方法,包括如下步驟:
步驟1:取楮實子,加入重量5~30倍的有機溶劑,在50~100℃下回流提取1~10個小時,提取液經過靜置、過濾、濃縮,得到楮實子粗提物浸膏;
步驟2:浸膏用水分散后,用大孔吸附樹脂柱進行分離純化,洗脫液經濃縮、干燥,得各部位的楮實子提取物;
其中,所述的有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或者多種的混合溶劑。但不限于這些溶劑。
需要指出的是,無論是步驟1得到的粗提物浸膏,還是步驟2得到的提取物,均包含在本發明的目標產物中,即楮實子提取物。無論是步驟1濃縮得到粗提物浸膏,還是步驟2濃縮得到各部位的提取物,對濃縮均無特殊要求,只是通過適當稀釋以便進行測試。
在上述方案的基礎上,所述分離純化為依次用3~5倍樹脂柱體積的水洗脫、4~6倍樹脂柱體積的體積分數為20%~40%的有機溶劑?水溶液洗脫、3~7倍樹脂柱體積的體積分數為50%~75%的有機溶劑?水溶液洗脫、3~7倍樹脂柱體積的體積分數為80%~95%的有機溶劑?水溶液洗脫,得各部位的洗脫液。其中,用50%~75%的有機溶劑?水溶液洗脫得到的提取物效果最佳。
在上述方案的基礎上,所述的楮實子為蕁麻目桑科植物構樹的干燥的成熟果實。
在上述方案的基礎上,所述楮實子的果實在用有機溶劑浸泡提取之前經過清洗、干燥,除去灰白色膜狀宿萼及雜質。
本發明解決上述技術問題所采取的另一技術方案是提供上述楮實子提取物的用途,用于抑制酪氨酸酶活性和黑色素合成,制備皮膚美白的外用組合物。
這里所述的“皮膚”不僅包括覆蓋動物的臉或身體表面的組織,而且還包括頭皮和毛發。
在上述方案的基礎上,所述的楮實子提取物在外用組合物中的用量按質量百分比計為0.01~15%。具體用量可以為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、0.8、1、1.2、1.5、1.8、2、2.2、2.5、2.8、3、4、5、6、8、10、12、14或15%。
在上述方案的基礎上,所述外用組合物為外用化妝品組合物或藥品組合物。
對于外用化妝品組合物而言,可以為適于局部涂抹的任何劑型。例如,所述化妝品組合物可以為固體、溶液、乳液(水包油型乳液、油包水型乳液)、懸浮液、霜、凝膠、漿糊、泡沫或噴霧形式的組合物。這些劑型可以通過本領域所熟知的任何常用方法來制備。
在上述方案的基礎上,所述化妝品組合物可以包含其他能夠提高所述組合物主要效果且不影響主要效果的成分。具體的,所述的外用化妝品組合物中還包括除楮實子提取物之外的美白劑、抗衰老成分、抗氧化劑、維生素、多肽、多糖、鞘脂中的一種或多種。
此外,化妝品組合物還可以包含保濕劑、潤膚劑、表面活性劑、紫外吸收劑、防腐劑、消毒劑、抗氧化劑、pH調節劑、有機和/或無機顏料、調味劑、冷卻劑、止汗劑等。在不影響本發明的目的及效果的前提下,本領域的技術人員可容易地選擇所述化妝品組合物中的上述組合物的含量。
對于外用藥物組合物而言,亦可以為適于局部涂抹的任何劑型。例如,所述藥物組合物可以為固體、溶液、乳液(水包油型乳液、油包水型乳液)、懸浮液、霜、凝膠、漿糊或噴霧形式的組合物,但不限于這些劑型。根據本領域所熟知的任何常用方法,可以通過使用表面活性劑、賦形劑、保濕劑、乳化劑、懸浮劑、用于滲透壓的鹽或緩沖劑、著色劑、調味劑、穩定劑、防腐劑或其他常用的添加劑來制備所述藥物組合物的劑型。
本發明的有益效果是:
本發明的楮實子提取物能夠有效抑制酪氨酸酶的活性及黑色素的合成,可作為美白活性原料用于皮膚外用化妝品中,達到改善皮膚色素沉淀和美白肌膚的效果。
具體實施方式
通過下述實施例將有助于進一步理解本發明的權利要求書,但并不限制本發明的內容。
實施例1:楮實子提取物的制備方法
取楮實子清洗、干燥,除去灰白色膜狀宿萼及雜質,備用。
步驟1:稱取一定量的楮實子,用15倍量的乙醇進行提取,60~80℃下提取4~6小時,提取液經過靜置、過濾、濃縮,得到楮實子粗提物浸膏(提取物A);
步驟2:浸膏用水分散后,采用大孔吸附樹脂柱進行分離純化:依次用3倍樹脂柱體積的水、4倍樹脂柱體積的體積分數為20%的乙醇、3倍樹脂柱體積的體積分數為50%的乙醇和3倍樹脂柱體積的體積分數為80%的乙醇洗脫,分別收集各部位的洗脫液(用水洗脫得到的洗脫液標為提取物B,用20%的乙醇水溶液洗脫得到的洗脫液標為提取物C,用50%的乙醇水溶液洗脫得到的洗脫液標為提取物D,用80%的乙醇水溶液洗脫得到的洗脫液標為提取物E),濃縮,并將濃縮液真空干燥或冷凍干燥,得到各部位的楮實子提取物。
 1、步驟1所得楮實子提取物A抑制蘑菇酪氨酸酶活性的評價
    配制pH=6.8,0.1M的磷酸鹽緩沖溶液。取1.770mLPBS,先后加入30μL不同濃度的提取物A與0.2mL(100U)的蘑菇酪氨酸酶溶液,混勻。30℃水浴10分鐘,然后加入1mL加入0.1% L?DOPA溶液,水浴20分鐘后,475nm下測定吸光度。評估結果見表一。

由表一可知,步驟(1)所得楮實子粗提物(提取物A)表現出一定的抑制酪氨酸酶的作用,因此可進一步分離,獲得活性較高的楮實子提取物。
 2、步驟2所得各部位的楮實子提取物B,C,D和E在B16細胞中的毒性評價
    用胰蛋白酶消化對數期的單層細胞,將細胞收集至細胞培養液中。離心,棄上清。用培養液重新懸浮細胞,計數。調整細胞懸液的濃度至2.5×103~50×103個/mL。鋪96孔板,于含有5%CO2的細胞培養箱中孵育24h。將楮實子提取物B,C,D和E以一定濃度稀釋,加入細胞中,繼續培養48h。配制5μg/mL的MTT溶液,每孔加入20μL,繼續培養4h。棄上清,每孔加入150μL的DMSO溶解紫色結晶,放置15min。輕輕搖晃96孔板,使得紫色溶液混合均勻,用酶標儀于490nm下測定吸光度。所述提取物的細胞毒性結果如表二所示。

由表二可知,步驟2所得各楮實子提取物B,C,D和E在1、10和25μg/mL三個濃度下,對B16細胞沒有細胞毒性。
 3、步驟2所得各部位的楮實子提取物B,C,D和E抑制B16細胞酪氨酸酶活性的評價
用胰蛋白酶消化對數期的單層細胞,將細胞收集至細胞培養液中。離心,棄上清。用培養液重新懸浮細胞,計數。調整細胞懸液的濃度至2.5×103~50×103個/mL。鋪96孔板,于含有5% CO2的細胞培養箱中孵育24h。將步驟2所得各部位楮實子提取物B,C,D和E以一定濃度稀釋,加入細胞中,繼續培養48h。PBS洗滌1遍。每孔加入0.5%脫氧膽酸鈉溶液100μL,震蕩10min,0℃。30min后升溫至37℃,加入0.1% L?DOPA溶液10μL。孵育20min后,475nm下測定吸光度。所述提取物對酪氨酸酶活性的抑制率結果如表三所示。

由表三可知,步驟2所得各部位的楮實子提取物中,相同濃度下,提取物D對B16細胞酪氨酸酶活性的抑制最強。
 4、步驟2所得各部位的楮實子提取物B,C,D和E抑制蘑菇酪氨酸酶活性的評價
根據實施例3的方法,評估步驟2所得楮實子提取物B,C,D和E抑制蘑菇酪氨酸酶活性,結果如表四所示。

由表四可知,步驟2所得楮實子提取物中,相同濃度下,提取物D對蘑菇酪氨酸酶活性的抑制最強,其IC50為68.3μg/mL。
 5、步驟2所得各部位的楮實子提取物B,C,D和E抑制B16細胞黑色素合成的評價
將B16細胞接種在12孔細胞培養板內,每孔細胞密度為104個/mL,培養24小時后,更換為含有不同濃度楮實子提取物B,C,D和E的新鮮培養液,繼續培養48小時,棄去培養液,PBS清洗1次,胰酶消化后,收集細胞離心,棄上清,將細胞溶于一定體積的1M NaOH中,475nm下測定吸光度,結果如表五所示。

由表五可知,步驟2所得楮實子提取物中,相同濃度下,提取物D對B16細胞黑色素合成的抑制最強。
測試實施例1:美白霜
    將實施例1中的楮實子提取物D,按表六中的配比制備美白霜,用于測試。

 1、皮膚安全性評估
按受試者入選標準選擇30名參加試驗的人員,15名男性,15名女性,平均年齡為31歲。將受試物放入斑試器內,用量約為0.020g~0.025g(固體或半固體)或0.020mL~0.025mL液體(液體)。對照孔為空白對照(不置任何物質),將加有受試物的斑試器用無刺激膠帶貼敷于受試者的背部或前臂曲側,用手掌輕壓使之均勻地貼敷于皮膚上,持續24h。去除受試物斑試器后30min,待壓痕消失后觀察皮膚反應,按皮膚不良反應分級標準表劃分不良反應等級。如結果為陰性,于斑貼試驗后24h和48h分別再觀察一次,結果如表七所示。

由表七可知,測試實施例1中的組合物,對皮膚沒有產生刺激,因此可得出本發明的化妝品組合物對皮膚是安全的。
 2、皮膚美白功效測試
選取30名18?40歲的成年女性,平均年齡33歲。采用雙盲安慰劑對照原則,將測試實施例1中美白霜(含有50%乙醇部位的楮實子提取物)和對照組(不含楮實子提取物)分別均勻涂抹在兩只胳膊的前臂上,每只胳膊涂抹一種樣品,每天早晚各一次。測量黑色素含量的儀器為配有MX18探頭的MPA580,在測試者前臂內側相同位置選取一個半徑為2cm的測試區域,分別在使用前和第二、三和四周測定黑色素的含量,測試結果如表八所示。

由表八可知,經過4周之后,涂抹了測試實施例1的美白霜的皮膚,黑色素含量明顯降低;從視覺上觀察,與對照組相比,皮膚更具有光澤。說明了測試實施例1的美白霜具有顯著的美白效果。
應用實施例1:乳液
用下表九列出的成分根據常規方法配制應用實施例1的乳液。

應用實施例2:凝膠
用下表十列出的成分根據常規方法配制應用實施例2的凝膠。

應用實施例3:面膜
用下表十一列出的成分根據常規方法配制應用實施例3的面膜。

應用實施例4:水
    用下表十二列出的成分根據常規方法配制應用實施例4的水。

應用實施例5:牛奶洗液
    用下表十三列出的成分根據常規方法配制應用實施例5的牛奶洗液。

關 鍵 詞:
楮實子 提取物 制備 方法 及其 皮膚 中的 用途
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