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具有預防糖尿病作用的鼠李糖乳桿菌CCFM0528.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310220050.6

申請日:

2013.05.31

公開號:

CN103275905B

公開日:

2014.12.10

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):C12N 1/20申請日:20130531|||公開
IPC分類號: C12N1/20; A61K35/74; A61P3/10; A23L1/30; A23C11/10; A23C9/123; A23F3/10; A23L1/06; C12R1/225(2006.01)N 主分類號: C12N1/20
申請人: 江南大學
發明人: 陳衛; 張秋香; 陳佩; 王剛; 田豐偉; 劉小鳴; 趙建新; 張灝
地址: 214122 江蘇省無錫市蠡湖大道1800號江南大學食品學院
優先權:
專利代理機構: 北京君智知識產權代理事務所 11305 代理人: 向華
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310220050.6

授權公告號:

103275905B||||||

法律狀態公告日:

2014.12.10|||2013.10.09|||2013.09.04

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及一種具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus?rhamnosus)Lactobacillus?rhamnosus?CCFM0528,該菌株保藏在中國微生物菌種保藏中心,保藏編號為CGMCC?No.7317。CCFM0528的發酵上清和細胞質對α-葡萄糖苷酶活的抑制率分別為29.2%和14.1%,研究發現CCFM0528不僅對α-葡萄糖苷酶活性有抑制作用,還對葡萄糖的轉運有抑制作用。實驗結果表明CCFM0528能夠預防2型糖尿病的發生,有效降低小鼠空腹血糖和餐后血糖,提高其對葡萄糖的耐受性,其原理可能是CCFM0528對腸道的α-葡萄糖苷酶活性及酶的表達量有抑制作用,并對與葡萄糖轉運有關的蛋白SGLT-1和GLUT-2的基因表達水平有影響。

權利要求書

權利要求書
1.   一種具有預防糖尿病作用的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528,該菌株已于2013年3月15日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物所,保藏編號為CGMCC No.7317。 

2.   包含權利要求1所述的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528的藥物組合物,其特征在于其中所包含的菌株是活菌株或干菌株。 

3.   包含培養發酵權利要求1所述的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528后獲得的發酵上清液的藥物組合物。 

4.   根據權利要求2或3所述的包含鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528的藥物組合物,其特征在于所述藥物組合物還包含藥學上可接受的載體,其劑型為口服制劑。 

5.   根據權利要求4所述的包含鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528的藥物組合物,其特征在于所述口服制劑是片劑,膠囊劑,口服液或凍干粉劑。 

6.   包含權利要求1所述的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528或其發酵液的食品。 

7.   根據權利要求6所述的食品,其特征在于所述食品是發酵食品。 

8.   根據權利要求7所述的的食品,其特征在于所述發酵食品是酸豆奶、奶制品、發酵果凍或發酵茶飲料。 

9.   根據權利要求1所述的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528或權利要求2?4任一項所述的藥物組合物在制備用于預防糖尿病的藥物中的用途。 

10.   權利要求8所述的用途,其特征在于所述糖尿病是1型或2型糖尿病。 

說明書

說明書具有預防糖尿病作用的鼠李糖乳桿菌CCFM0528 
技術領域
本發明涉及生物技術領域的微生物領域,特別是具有預防糖尿病作用的鼠李糖乳桿菌CCFM0528。 
技術背景
根據1999年世界衛生組織(World Health Organization,WHO)和國際糖尿病聯盟(International Diabetes Federation,IDF)公布的定義,其主要分為胰島素依賴型糖尿病(1型即DIDM)和非胰島素依賴型糖尿病(2型即NIDDM),其它類型和妊娠糖尿病四種類型,其中2型糖尿病患者約占90%以上。近年來,糖尿病在全世界廣泛流行,已成為繼腫瘤、心血管疾病之后第三位嚴重危害人類健康的慢性疾病。我國糖尿病患病率在過去20年中上升了4倍,2007年全國糖尿病患病人數為3980萬,僅次于印度成為全球糖尿病患者人數第二大國。因此,急需通過有效措施來預防和治療糖尿病。而控制餐后高血糖對于治療早期糖尿病具有極其重要的意義,其中控制餐后碳水化合物的吸收是一種降低餐后高血糖的有效治療方法。由于小腸只能夠吸收和運輸單糖到血液循環中,而由腸上皮細胞分泌的α?葡萄糖苷酶,能夠將多糖水解為單糖,所以被認為是腸內葡萄糖吸收的重要因素。因此對于2型糖尿病患者而言,服用一些含有α?葡萄糖苷酶抑制劑的降血糖口服藥能夠有效地降低高血糖。這些藥物能夠競爭性地抑制α?葡萄糖苷酶,抑制雙糖水解成單糖,妨礙葡萄糖的消化與吸收,從而降低餐后血液中的血糖含量。目前所發現的α?葡萄糖苷酶抑制劑種類較少,因此人們仍不斷致力于開發新型α?葡萄糖苷酶抑制劑。 
乳酸菌指發酵糖類主要產物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱,是一種存在于人類體內的益生菌。益生菌能夠幫助消化,有助人體腸臟的健康,因此常被視為健康食品,添加在酸奶之中。據最近幾年研究資料表明,乳酸菌作為定居腸道中的有益菌群具有多種保健作用:1.能維持微生態平衡和腸管機能;2.有抗菌作用,能抑制腐敗菌,如可殺滅李斯特菌,葡萄球菌和明串珠菌,以抑制和消滅革蘭氏陰性菌、過氧化氫酶陽性菌,大腸桿菌和沙門氏菌等;3.能改善肝功能;4.乳酸菌能使腸道減少對膽固醇的吸收,并能將一部分膽固醇轉 變成膽酸鹽排出體外;5.能增強免疫功能和抗腫瘤病。近年來,有研究報道乳酸菌對糖尿病治療有積極地影響。乳酸菌可以預防和延遲不同類型糖尿病的發生。2004年日本河合乳酸菌研究所負責人河合康雄發現了能降低血糖的乳酸菌,其可用來開發預防和治療糖尿病的藥物。目前大量研究表明,乳酸菌具有減少糖尿病發病率的潛力,但是人們對于乳酸菌作為糖尿病治療劑的研究還是很少。 
發明內容
本發明涉及一種具有預防糖尿病作用的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528,其特征在于該菌株具有抑制α?葡萄糖苷酶的活性,在中國微生物菌種保藏中心保藏編號為CGMCC No.7317。 
另一方面,本發明還涉及鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528在制備用于預防糖尿病的藥物中的用途,所述糖尿病是1型或2型糖尿病。 
本發明還涉及包含鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528的藥物組合物,所述藥物組合物中所包含的菌株可以是活菌株或干菌株或菌株的代謝物,此外藥物組合物還包含藥學上可接受的載體,其劑型可以是口服制劑,例如片劑,膠囊劑,口服液,凍干粉劑等常見的口服劑型。藥學上常見的可接受載體有賦形劑,保護劑,溶解劑等。 
本發明還涉及包含鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)CCFM0528的食物,所述食物是發酵食品,例如酸豆奶,發酵果凍,發酵茶飲料或奶制品,如酸奶,酸酸乳,奶酪制品,乳酸菌奶粉,酸蛋奶冰淇淋等。 
1、根據基本的益生特性及對α?葡萄糖苷酶活性的抑制作用,建立一種具有抑制α?葡萄糖苷酶活性作用的益生菌的初篩方法。CCFM0528的發酵上清和細胞質對α?葡萄糖苷酶活的抑制率分別為29.2%和14.1%。 
2、在Caco?2細胞模型中評價CCFM0528對α?葡萄糖苷酶活性及表達量的影響作用。CCFM0528的發酵上清和細胞質對α?葡萄糖苷酶活性的抑制率分別為15.7%和20.0%,對葡萄糖的轉運抑制率分別為7.0%和19.3%;CCFM0528的上清和細胞質對α?葡萄糖苷酶(S?I)基因表達水平分別下調7.29倍和上調1.04倍,對鈉?葡萄糖共轉運體?1(SGLT?1)基因表達水平分別下調2.5倍和上調2.2倍,對葡萄糖轉運蛋白?2(GLUT?2)的基因表達水平分別下調1.1倍和1.2倍。 
3、利用高脂飼料喂養及STZ注射的動物模型評價CCFM0528對2型糖尿病的預防作用。造模成功后模型組空腹血糖水平為12.9mmol/L,CCFM0528能夠顯著 降低預防組的空腹血糖水平至8.13mmol/L(P﹤0.01);模型組餐后2h血糖水平為23.0mmol/L,CCFM0528能夠顯著降低預防組的餐后2h血糖水平至14.3mmol/L(P﹤0.01);與模型組相比CCFM0528顯著改善預防組的口服葡萄糖耐受(OGTT)(P﹤0.01)。 
附圖說明
圖1CCFM0528在pH3.0模擬胃液中的存活率; 
圖2CCFM0528在pH8.0模擬腸液中的存活率; 
圖3CCFM0528上清及無細胞提取物對大鼠α?葡萄糖苷酶活性的抑制率; 
圖4生長在微孔濾膜上21天時的細胞單層掃描電鏡圖,A×1000;B×10000; 
圖5CCFM0528對Caco?2細胞中α?葡萄糖苷酶活性的抑制率; 
圖6CCFM0528對Caco?2細胞中葡萄糖轉運的抑制作用; 
圖7S?I,SGLT?1和GLUT?2三種基因的相對表達量,注:**表示與對照組相比差異極顯著,P<0.01; 
圖8各組小鼠試驗期間體重變化; 
圖9造模成功后各組小鼠空腹血糖水平,注:**表示與正常組相比差異極顯著,P<0.01; 
圖10造模成功后各組小鼠餐后血糖水平,注:**表示與正常組相比差異極顯著,P<0.01; 
圖11造模成功后各組小鼠的糖耐受性; 
圖12造模一周后各組小鼠AUC比較,注:**表示與正常組相比差異極顯著,P<0.01。 
具體實施方式
1、乳酸菌樣品來源 
CCFM0528由本實驗室菌種保藏庫提供,通過16S鑒定為鼠李糖乳桿菌Lactobacillus rhamnosus CCFM0528,該菌株已于2013年3月15日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號,中國科學院微生物所),保藏編號為CGMCC No.7317。 
將CCFM0528菌體在固體MRS中劃線,挑單菌落于液體培養基中培養18h, 傳代2次后用于后續試驗。 
2、CCFM0528對模擬胃液的耐受能力分析 
將CCFM0528重懸于生理鹽水中,按菌液密度109CFU/mL接入到pH3.0的模擬胃 
液中,37℃培養3h,分別在1h,2h,3h計算乳酸菌的存活率,其存活率如圖1所示。CCFM0528在模擬胃液中生長3h后,其存活率可達84.2%。 
3、CCFM0528對模擬腸液耐受能力分析 
將在模擬胃液中培養3h后的菌液,取1mL加入到9mL pH8.0模擬腸液中,37℃培養8h,分別在2h,4h,8h計算CCFM0528的存活率,其存活率如圖2所示。CCFM0528在模擬腸液中生長8h后,其存活率可達85.4%。 
4、CCFM0528的耐膽鹽能力分析 
將CCFM0528按照2%的接種量分別加入到加和不加0.3%膽鹽的MRS?THIO(MRS 
培養基中添加0.2%巰基乙酸鈉)培養基中。菌液在37℃中培養,CCFM0528在未加和加有膽鹽培養基中生長,OD值達到0.3時所需的時間分別為3.7±0.1h和5.2±0.1h,所以CCFM0528的膽鹽延遲時間為1.5h,反應了此乳酸菌對膽鹽有很強的耐受性。 
5、CCFM0528的粘附能力分析 
CCFM0528離心后用PBS洗滌3次,再用DMEM調菌液濃度至109CFU/mL,將菌懸液加入到已培養好的Caco?2單層細胞中,37℃共培養2h,用甲醇固定30min后革蘭氏染色。在電鏡下觀察20個視野100個細胞,計算該乳酸菌的粘附力為12.0±0.2每個細胞。 
6、CCFM0528發酵上清和無細胞提取物的制備 
將CCFM0528活化培養后接種于MRS液體培養基中,37℃培養18h,培養物經6000r/min,4℃離心l0min,得到培養上清液和菌體沉淀,菌體沉淀經PBS兩次洗滌后,將菌體用PBS重新懸浮,調整細胞濃度為109CFU/mL,上清液經0.22μm濾膜過濾后得無細胞上清液(CFS),另一組用于無細胞提取物(CFE)的制備,將細胞懸浮液用超聲波破碎儀在冰浴中處理,工作3s、間隔8s,超聲破碎10min,顯微鏡下檢查沒有完整菌體,然后以4℃,12000×g離心20min,收集上清液, 經0.22μm濾膜過濾即為無細胞提取物。上清及無細胞提取物經100℃加熱20min后,制成熱滅活的上清和無細胞提取物。 
7、CCFM0528對大鼠腸道提取的α?葡萄糖苷酶活性的抑制能力分析 
CCFM0528對α?葡萄糖苷酶抑制活性測定:在150μL PBS(0.1M pH6.8)中加入75μL20mM的4?硝基酚?α?D?吡喃葡葡糖苷(PNPG)溶液及25μL待測樣品,將混合物于37℃水浴10min。加入50μL大鼠腸道提取的α?葡萄糖苷酶溶液(0.17U/mL)繼續反應10min。加入1mL0.1M Na2CO3作為反應終止液。并將反應液于405nm處測其吸光值,吸光值與4?硝基酚(PNP)的游離量成正比。反應體系中采用pH6.8的0.1M PBS作為α?葡萄糖苷酶溶液及待測樣品的空白對照,采用以下公式計算樣品的抑制活性: 
酶抑制率(%)=[1?(C?D)/(A?B)]×100% 
其中A為含有α?葡萄糖苷酶溶液但不含樣品的測定吸光值 
B為不含α?葡萄糖苷酶溶液及待測樣品的測定吸光值 
C為含有α?葡萄糖苷酶溶液及待測樣品的測定吸光值 
D為不含α?葡萄糖苷酶溶液但含待測樣品的測定吸光值 
由圖3可知,CCFM0528的上清和無細胞提取液均對α?葡萄糖苷酶活性有抑制作用,上清的抑制率(29.2%)大于無細胞提取物的抑制率(14.2%),并且經過滅活后的上清和無細胞提取物對酶的抑制率均大大降低(﹤8.5%),因此可推測是CCFM0528中的某些活性物質對酶活性有抑制作用。 
8、Transwell細胞模型的建立及評估 
用于構建Transwell細胞模型的Caco?2細胞為22~40代之間。將細胞按照密度2×105個/ml接種于12孔Transwell小室上(膜孔徑0.4μm生長面積1.12cm2),轉運槽腸腔側(上室,AP側)加入調好密度的細胞懸液500ul,基地側(下室,BL側)加入1.5ml細胞培養液,每天換液,待細胞長至21d時備用。 
模型的評估: 
(1)掃描電鏡驗證細胞是否形成致密的單層,結果如圖4所示。 
從圖4A中可看出細胞在聚碳酸酯膜上形成了致密的單層,圖4B中可看出細胞表面形成良好的刷裝緣以及細胞間形成緊密連接,從而形成緊密的細胞單層。 
(2)熒光素鈉通透性檢測:第21天時,12孔Transwell板中各孔的表觀滲 透系數均遠遠小于0.5x10?6cm2/s。進一步證明了細胞已形成良好的緊密連接單層。 
(3)堿性磷酸酶AKP極性檢測:上層小室的酶活均是底層酶活的4倍以上。培養 
到21天的細胞單層其腸腔側的堿性磷酸酶活性顯著高于基底側酶活性,約高出4倍之多,說明該標志酶已經大部分集中在刷裝緣一側,細胞單層已經形成了極性。 
9、CCFM0528對Transwell細胞模型中α?葡萄糖苷酶的抑制作用 
用PBS沖洗已培養21天的Transwell小室上下面3次(上加0.25ml,下加0.6ml),去除葡萄糖。加入475ul含20mM的麥芽糖(過濾除菌)作為底物,并加入CCFM0528的上清或無細胞提取物25ul(共0.5ml)一起到粘膜層,1.5mlPBS加入到下層,板子在37℃培養2h,上下層各取100μl溶液到微孔板中檢測葡萄糖含量,以此分別計算對酶活性的抑制率和葡萄糖轉運率的抑制作用。結果分別見圖5和圖6。 
由圖5可知,CCFM0528細胞提取物對酶的抑制率大于上清的抑制率,而其細胞提取物對大鼠腸道酶活性的抑制率高于上清的抑制率,其大小與此結果不一致,說明在細胞環境和體外的環境還是存在很大的差異,所以結果也并不完全一致,但都表現出對酶活性有一定的抑制作用。 
如圖6所示,CCFM0528的上清和細胞提取物都對Caco?2細胞中的葡萄糖轉運有一定的抑制作用,且細胞提取物的抑制率高于上清的抑制率,這與上述CCFM0528對酶活性的抑制率相一致。 
10、CCFM0528對Caco?2細胞中的S?I,SGLT?1,GLUT?2基因表達量的影響 
碳水化合物的消化與吸收過程中與此相關酶及轉運載體主要有α?葡萄糖苷酶(S sucrase?isomaltase,S?I),鈉葡萄糖共轉運載體1(sodium glucose cotransponers l,SGLT?l)和葡萄糖協助擴散轉運載體2(facilitative glucose transporte2,GLUT?2)。將CCFM0528上清及細胞提取物按5%加入到已培養21天的Caco?2單層細胞中與其共培養2h后,用試劑盒提取Caco?2的總RNA并反轉錄合成cDNA,后進行熒光定量PCR,并選用β?actin作為內參基因。進行熒光定量PCR所用引物序列如表1所示。 
PCR反應條件為:(1)95℃for15min;(2)95℃,10s,64℃,20s,72℃,30s,40個循環;(3)72℃,5min;(4)95℃,15s,60℃,15s,95℃,15s。以2?△△CT法計算CCFM0528對Caco?2細胞中的S?I,SGLT?1,GLUT?2基因表達量的影響。結果如圖7所示。 
表1熒光定量PCR的寡核苷酸序列 

由圖7A可知,CCFM0528上清可顯著下調Caco?2細胞中S?I基因的表達量,細胞提取物對S?I基因的表達量無顯著性影響。該乳酸菌的上清中含有大量的有機酸,如乳酸,乙酸等。有研究報道乙酸對Caco?2細胞的酶活性有抑制作用,我們研究發現CCFM0528上清中的某些活性物質對大鼠腸道提取的α?葡萄糖苷酶活性有抑制作用,因此可推測CCFM0528的發酵產物中的某些活性物質和有機酸對α?葡萄糖苷酶活性有抑制作用,并且可以抑制酶的表達量,從而有效緩解碳水化合物的分解吸收,從源頭減少單糖的生成量。 
由圖7B可知,CCFM0528的上清可顯著下調Caco?2細胞中SGLT?1的表達量,而細胞提取物可顯著上調Caco?2細胞中SGLT?1的表達量。結果與CCFM0528對葡萄糖的轉運率抑制相一致。 
由圖7C可知,CCFM0528的上清可顯著下調Caco?2細胞中GLUT?2的表達量,細胞提取物對S?I基因的表達量無顯著性影響。 
11、CCFM0528體內預防糖尿病作用的動物實驗 
體內預防糖尿病試驗采用高脂飼料喂養加注射鏈脲霉素(STZ)造成的2型糖尿病模型。實驗動物采用SPF級雄性3周齡C57BL/6小鼠24只,由上海斯萊克實驗動物有限公提供。小鼠在室溫下飼養,自由飲水采食,經1周適應性飼養后,隨即分為正常組、模型組和試驗組,每組8只。正常組飼喂基礎飼料(蛋白含量25.7%,脂肪含量13.8%,碳水化合物60.5%);模型組和試驗組以高脂飼料飼喂(蛋白含量20.0%,脂肪含量40.0%,碳水化合物40.0%);試驗組每天灌胃 乳酸菌2×109CFU/mL。3周后禁食12h,加低劑量鏈脲佐菌素100mg/Kg(0.1mol/L檸檬酸緩沖液,pH4.5,0.2μm濾膜過濾)腹腔注射,1周后觀察:正常組組小鼠體態正常,行為活躍,毛色光亮,無脫毛,食量與飲水正常,大小便正常。注射STZ造模組小鼠逐漸出現毛色不潔,飲水增加,尿量增加,情緒暴躁,體重減輕等Ⅱ型糖尿病相關癥狀。試驗期間每周測量體重一次,如圖8所示。在給STZ誘導造模后一周,各組小鼠禁食不禁水12h,以血糖儀測定尾靜脈血糖值,為空腹血糖值,如圖9所示;喂食2h后,再次以血糖儀測定尾靜脈血糖值,為餐后2h血糖值,如圖10所示。在造模后8天,各組小鼠禁食不禁水(12h),灌胃2g/kg葡萄糖(50%),并分別測定0min、15min、30min、60min、90min、120min鼠尾靜脈血糖值。根據血糖值使用orgin7.5繪制血糖變化曲線,并計算出糖耐量曲線下面積(Area Under Cerve,AUC)如圖11和圖12所示。 
如圖8所示,在第4周注射STZ后,正常組老鼠體重正常增加,模型組小鼠體重增加不如正常組高,CCFM0528組小鼠體重也增加緩慢。 
由圖9可知,注射STZ一周后檢測各模型組和CCFM0528組小鼠的空腹血糖均高于糖尿病的臨界值7.0mmol/L,表明糖尿病模型造模成功。模型組的血糖水平遠遠高于正常組,CCFM0528組的血糖水平雖然高于7.0mmol/L,但其與正常組血糖水平無顯著性差異。表明CCFM0528可以顯著降低糖尿病小鼠的空腹血糖水平。 
由圖10可知,注射STZ一周后檢測各模型組和CCFM0528組小鼠的餐后2h血糖均高于糖尿病的臨界值11.0mmol/L,表明糖尿病模型造模成功。從圖中可以看出模型組的餐后血糖水平最高,且與正常組差異極顯著。乳酸菌組的餐后血糖雖然與正常組差異極顯著,但其血糖水平遠遠低于模型組,表明CCFM0528可以降低糖尿病小鼠的餐后血糖。 
由圖11可知,在灌胃葡萄糖后15min至30min內,各組大鼠血糖均呈上升趨勢,正常組變化非常平緩,在2h后基本保持正常水平;模型組和乳酸菌組在30min內顯著上升(p<0.01),并達到最高血糖,模型組在2h后依然保持在較高水平,說明葡萄糖耐受能力顯著降低(p<0.01),符合Ⅱ型糖尿病糖耐量降低的特征。其中,CCFM0528組小鼠在90min時其血糖水平趨于正常組小鼠血糖。 
由圖12可知,造模一周后各組小鼠的AUC值差異顯著,模型組的AUC面積 顯著大于正常組,乳酸菌組的AUC面積雖與正常組差異顯著,但較模型組明顯降低。說明CCFM0528對預防組小鼠的糖耐量具有顯著改善作用。 
12、含有Lactobacillus rhamnosus CCFM0528的食物或藥物組合物 
應用實施例1:利用CCFM0528制造具有預防糖尿病功能的酸豆奶 
原料豆漿中加入6%蔗糖,于121℃,滅菌15min,以7%體積百分比的量加入本發明的鼠李糖乳桿菌CCFM0528,在37℃發酵至滴定酸度為0.7%-0.8%(以乳酸計), 
冷藏至4℃并冷藏保存即得到具有預防糖尿病功能的酸豆奶。 
應用實施例2:利用CCFM0528制造具有預防糖尿病功能的乳酸菌飲料 
將原料乳(脫脂奶、鮮奶、復原奶等)經100℃,滅菌10min后冷卻至4℃,加入本發明的鼠李糖乳桿菌CCFM0528,使其濃度達到106cfu/ml以上,4℃冷藏保存即得到活菌乳飲料。 
應用實施例3:利用CCFM0528制造具有預防糖尿病功能的酸奶 
將原料乳(脫脂奶、鮮奶、復原奶等)經100℃,滅菌10min后冷卻至4℃,以3%-5%體積百分比的量加入本發明的鼠李糖乳桿菌CCFM0528,以及加入可共生的制備酸奶的商業發酵劑如保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌,37℃混菌發酵至滴定酸度為0.6%-0.7%(以乳酸計),冷藏至4℃并冷藏保存即得到具有預防糖尿病功能的酸奶。 

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具有 預防 糖尿病 作用 鼠李糖乳 桿菌 CCFM0528
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