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一種共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物制備方法及其應用.pdf

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一種 共軛 油酸 連接 藥物 制備 方法 及其 應用
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摘要
申請專利號:

CN201210064883.3

申請日:

2012.03.13

公開號:

CN102617679B

公開日:

2014.11.26

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):C07H 19/073申請日:20120313|||公開
IPC分類號: C07H19/073; C07H1/00; A61K31/7068; A61P35/00 主分類號: C07H19/073
申請人: 北京大學
發明人: 王堅成; 張強; 陶小妹; 張烜
地址: 100191 北京市海淀區學院路38號藥學院412房
優先權:
專利代理機構: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130 代理人: 王為
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210064883.3

授權公告號:

102617679B||||||

法律狀態公告日:

2014.11.26|||2012.09.26|||2012.08.01

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及一種共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物制備方法及其應用,其中的共軛亞油酸與吉西他濱通過酰胺鍵相連,其制備方法為,在氮氣保護下,將共軛亞油酸溶解于溶劑中,-15℃低溫攪拌下加入活化劑,活化共軛亞油酸形成高反應活性的混合酸酐,將吉西他濱溶于溶劑中滴加到混合酸酐中,室溫攪拌反應;溶劑是指三乙胺,四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺中的一種或其混合溶液;活化劑為氯甲酸乙酯;反應時間為2-72小時;吉西他濱∶共軛亞油酸的投料摩爾比為1∶0.5-5,活化劑與共軛亞油酸的摩爾比為1∶0.5-5。本發明的目的是增加吉西他濱的抗腫瘤療效。

權利要求書

1.一種共軛亞油酸與吉西他濱相連的前體藥物,其特征在于,共軛亞油酸與吉
西他濱通過酰胺鍵相連。
2.權利要求1所述的前體藥物,其特征在于:所述共軛亞油酸至少含有兩個
同分異構體,一是順9,反11-共軛亞油酸(I),二是反10,順12-共軛亞
油酸(II),其結構式如下:

3.一種制備權利要求1所述的共軛亞油酸與吉西他濱相連的前體藥物的方法,
其特征在于,該方法的步驟如下:
(1)在氮氣保護下,將共軛亞油酸溶解于溶劑中,-15℃低溫攪拌下加入活化
劑,活化共軛亞油酸形成高反應活性的混合酸酐,將吉西他濱溶于溶劑中滴加到
混合酸酐中,室溫攪拌反應;溶劑是指三乙胺,四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺
中的一種或其混合溶液;活化劑為氯甲酸乙酯;反應時間為2-72小時;吉西他
濱∶共軛亞油酸的投料摩爾比為1∶0.5-5,活化劑與共軛亞油酸的摩爾比為
1∶0.5-5。
(2)取上述反應所得物料,減壓真空干燥,用飽和碳酸氫鈉水溶液與乙酸乙酯
萃取,收集乙酸乙酯層,減壓真空干燥,用硅膠層析法純化,洗脫液為甲醇和二
氯甲烷的混合溶劑(1∶10-100),收集有機溶劑,減壓真空干燥,得前體藥物。
4.如權利要求3所述的方法,其特征在于:活化劑與共軛亞油酸的摩爾比優
選為1∶1。
5.權利要求1所述的前體藥物用于腫瘤治療,所述腫瘤選自乳腺癌、膀胱癌、
肺癌、胰腺癌中的一種。
6.含有權利要求1所述的前體藥物的藥物組合物。
7.權利要求6所述的藥物組合物,含有藥物可接受的載體。
8.權利要求6所述的藥物組合物采用口服給藥或非腸道給藥。
9.權利要求8所涉及的口服給藥可以將藥物組合物制備成合適的口服固體或液
體制劑,優選為口服膠囊。
10.權力要求8所涉及的非腸道給藥可以將藥物組合物制備成合適的注射劑,優
選為靜脈注射劑。

說明書

一種共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物制備方法及其應用

技術領域

本發明涉及共軛亞油酸與吉西他濱(gemcitabine)N4位置的氨基通過酰胺
鍵連接的一種前體藥物,與吉西他濱相比,本發明的前體藥物具有更好的抗腫瘤
活性。本發明還涉及所述前體藥物的制備方法。

發明背景

吉西他濱(gemcitabine,GEM)是一種新型嘧啶類脫氧核苷類似物,常用其鹽
酸鹽,其化學名稱為(+)2’-脫氧-2’2’-二氟胞嘧啶鹽酸鹽,通過抗代謝作用來
發揮抗腫瘤效應,主要作用于DNA合成期,并可在一定條件下阻止細胞由G1期
向S期進展。臨床上常與其他藥物合用或單獨給藥,作為乳腺癌,非小細胞肺癌,
膀胱癌,胰腺癌的一線用藥。但是,血液中存在的脫氧胞苷脫氨酶會使吉西他濱
脫去4’-氨基失活,使吉西他濱的體內半衰期很短(8-17min),必須持續靜脈
給藥來維持其對癌細胞的毒性,這種劑量限制性毒性影響臨床療效發揮,并大大
增加毒副作用[1]。同時水溶性吉西他濱必須通過特定的核酸轉運載體才可以進
入腫瘤細胞,當核酸轉運載體缺乏時,腫瘤容易產生耐藥性[2]。

共軛亞油酸(Conjugated?linoleic?acid,CLA)即共軛十八碳二烯酸,是
亞油酸的一組構象和位置異構體,這些異構體的共同特征為2個雙鍵直接通過
1個碳-碳單鍵連接,沒有被亞甲基隔開,包括順反構型,共有十幾種同分異構
體。天然共軛亞油酸主要存在于瘤胃動物牛、羊等的乳脂及肉制品中,每克乳脂
中含量從2mg~25mg不等,且CLA的含量隨奶牛的年齡增長而增加。人工合成
共軛亞油酸主要以亞油酸或富含亞油酸的植物油為底物,通過堿催化的異構化
反應合成。人工合成的共軛亞油酸仍是多種異構體的混合物,主要含有順9,
反11-CLA和/或反10,順12-CLA。有意思的是,目前已有研究證實共軛
亞油酸(CLA)體內外抗腫瘤治療中具有顯著的抑制腫瘤生長的作用,其主要作用
機制包括抑制DNA合成、促進細胞凋亡以及特異性免疫功能增強等,并且在動物
長期給與CLA過程中并沒有發現明顯的血液毒性和器官毒性,表明該物質在體內
應用是具有良好的安全性[3-6]。多不飽和脂肪酸是人體必須的一類脂肪酸,人
體無法通過自主合成而得,只能通過外界攝取。與正常細胞相比,腫瘤細胞的代
謝更為旺盛,需要更多的營養物質,其中包括多不飽和脂肪酸[7]。由此,可以
推測CLA具有一定的腫瘤趨向性。

我們課題組在先前的研究工作中曾經設計合成了一種共軛亞油酸與紫杉醇
通過酯鍵連接而成的前體藥物,試驗結果證實了該前體藥物具有良好的腫瘤靶向
性和抗腫瘤效果[8]。該研究成果已獲得中國專利授權[張烜、柯曦宇、張強,一
種共軛亞油酸與抗腫瘤藥物連接的前體藥物及其制備方法,專利號:
200910180079]。基于已開展研究中CLA所表現出來的良好生物學活性,本發明
將共軛亞油酸與吉西他濱連接,制備成前體藥物,意外的發現對水溶性吉西他濱
的4’-氨基用共軛亞油酸進行結構修飾,可以減少脫氧胞苷脫氨酶對吉西他濱
的降解失活,并且可以通過改變前體藥物脂溶性而影響其跨細胞膜轉運機制,以
達到降低吉西他濱對核酸轉運載體缺乏引起的耐藥性。

因此,在本發明設計合成共軛亞油酸與吉西他濱相連的前體藥物,以達到靶
向腫瘤組織,延長吉西他濱半衰期,增加吉西他濱脂溶性和透膜性,提高吉西他
濱抗腫瘤療效,減少并降低耐藥性。

發明內容

本發明公開了一種共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物(CLA-GEM共軛
物)的制備方法及其應用。

本發明的共軛亞油酸與吉西他濱相連的前體藥物,其中,共軛亞油酸與吉西
他濱通過酰胺鍵相連。

所述共軛亞油酸至少含有兩個同分異構體,一是順9,反11-共軛亞油酸
(I),二是反10,順12-共軛亞油酸(II),其結構式如下:



本發明所述的前體藥物用于腫瘤治療,所述腫瘤選自乳腺癌、膀胱癌、肺癌、
胰腺癌中的一種。

本發明還包括,含有權利要求1所述的前體藥物的藥物組合物。

本發明的藥物組合物,根據需要,還可含有藥物可接受的載體。

本發明的藥物組合物可采用口服給藥或非腸道給藥。

本發明所涉及的口服給藥可以將藥物組合物制備成合適的口服固體或液體
制劑,優選為口服片劑。

本發明所涉及的非腸道給藥可以將藥物組合物制備成合適的注射劑,優選為
靜脈注射劑。

本發明所涉及的前體藥物(CLA-GEM共軛物)能夠提高抗腫瘤療效及降低毒
性和耐藥性,更適合臨床使用。

本發明所涉及前體藥物(CLA-GEM共軛物)的制備方法如下:在氮氣保護
下,將共軛亞油酸溶解于溶劑中,-15℃低溫攪拌下加入活化劑,活化共軛亞油
酸形成高反應活性的混合酸酐,將吉西他濱溶于溶劑中滴加到混合酸酐中,室溫
攪拌反應;溶劑是指三乙胺,四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺中的一種或其混合
溶液;活化劑為氯甲酸乙酯;反應時間為2-72小時;吉西他濱:共軛亞油酸的
投料摩爾比為1∶0.5-5,優選1∶1;活化劑與共軛亞油酸的摩爾比為1∶0.5
-5,優選1∶1。

更優的制備方法為:在氮氣保護下,將共軛亞油酸溶解于一定量四氫呋喃和
三乙胺中,-15℃低溫攪拌下加入活化劑氯甲酸乙酯,攪拌下,再加入吉西他濱
的N,N-二甲基甲酰胺溶液,室溫攪拌反應。取上述反應所得物料,減壓真空干
燥,用飽和碳酸氫鈉水溶液與乙酸乙酯萃取,收集乙酸乙酯層,減壓真空干燥,
用硅膠層析法純化,洗脫液為甲醇和二氯甲烷的混合溶劑(1∶10-100),收集洗
脫液,減壓真空干燥,得前體藥物。

本發明所涉及的前體藥物(CLA-GEM共軛物)具有顯著的體外抑制腫瘤細胞
生長作用。采用硫氰酸銨B(SulforhodamineB)(SRB)[6]測定方法,在第
0天將細胞接種于96孔板中,在第1天,從原液中制備一系列前體藥物的稀
釋液,加入到腫瘤細胞中,每樣6孔,孵育24小時,48小時,72小時,棄去
培養基,用10%三氯乙酸在4℃固定細胞1小時,用純凈水沖洗后,晾干
并用0.4%SRB在4℃染色30分鐘,取出用0.1%乙酸沖洗,晾干后
加入10uM的Tris溶液,置搖床震蕩30分鐘后,用酶標儀在540nm處測定
吸光值。結果表明,共軛亞油酸吉西他濱連接的前體藥物的細胞毒具有明顯的時
間和劑量依賴性,24小時即有明顯的細胞毒效應,而吉西他濱卻要在72h后才
有明顯的腫瘤抑制作用,結果表明,共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物能夠
更快滲透進入細胞膜,且具有明顯的腫瘤細胞生長抑制作用。

本發明所涉及的前體藥物(CLA-GEM共軛物)改變了吉西他賓原形藥物的細
胞轉運機制,且不受核酸轉運載體抑制劑的影響。有文獻報道,吉西他賓原形藥
物的細胞攝取受細胞膜上核苷轉運載體的轉運入胞發揮藥效,如果細胞中核苷轉
運載體數量較少或不表達時就可能產生耐藥。通過在吉西他濱藥物結構中N4位
置的氨基上連接共軛亞油酸后,該共軛物具有較強的親脂性,導致細胞攝取機制
發生改變。按照細胞毒試驗方法,在96孔板的細胞中預先加入核酸轉運載體抑
制劑(100umol?S-(4-硝基芐基)-6-硫肌苷或者4ug/ml雙嘧達莫)溶液孵育30
分鐘,然后加入一系列濃度的藥物(CLA-GEM共軛物或吉西他濱原形藥),孵育
72小時,棄去培養基,用10%三氯乙酸在4℃固定細胞1小時,用純凈水
沖洗后,晾干并用0.4%SRB在4℃染色30分鐘,取出用0.1%乙酸沖
洗,晾干后加入10uM的Tris溶液,置搖床震蕩30分鐘后,用酶標儀在
540nm處測定吸光值。結果表明,共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物體外細
胞毒作用幾乎不受核酸轉運載體抑制劑的影響,而吉西他濱原形藥物的細胞毒則
明顯受核苷轉運載體抑制劑的影響。

本發明所涉及的前體藥物(CLA-GEM共軛物)具有更優的生物利用度和體內
血漿藥物半衰期。采用大鼠尾靜脈注射的給藥方式,分別給予相同劑量的前體藥
物(CLA-GEM共軛物)和吉西他濱原形藥物,于不同時間點從大鼠眼眶取血,離
心得血漿,對處理后的血漿采用高效液相色譜法測定其藥物濃度,結果表明,前
體藥物(CLA-GEM共軛物)在靜脈注射后可維持更高的吉西他濱藥物濃度和更長
的血藥持續時間,其AUC0-24h和半衰期T1/2為未修飾的吉西他濱原形藥物的3倍左
右。

本發明所涉及的前體藥物(CLA-GEM共軛物)具有更優的抗腫瘤治療效果。
以接種乳腺癌MCF-7細胞的裸鼠為評價模型,于接種腫瘤細胞后的第8天、第
12天、第16天、第21天分別靜脈注射給予吉西他濱原形藥及前體藥物
(CLA-GEM共軛物),于接種24天后處死大鼠,取腫瘤,測定瘤重。結果表明,
與吉西他濱原形藥相比,前體藥物(CLA-GEM共軛物)具有更強的抗腫瘤療效。

本發明所涉及的前體藥物(CLA-GEM共軛物)具有良好的脂溶性,其logP
值為3.6,表明具有良好的腸道粘膜滲透性。所以將此前體藥物與適當的藥用輔
料混合制備成藥物組合物可以通過口服給藥方式得以吸收。

附圖表說明

圖1前體藥物(CLA-GEM共軛物)合成路線示意圖

圖2.1H-NMR譜,(A)CLA,(B)鹽酸吉西他濱原形藥,(C)CLA-GEM共軛物。

圖3經CLA-GEM共軛物(■)和吉西他濱原形藥(○)孵育處理24小時的細胞生
存率。

圖4,靜脈注射CLA-GEM與鹽酸吉西他濱注射液的抗腫瘤效應評價,(■)為生
理鹽水組;(▲)為鹽酸吉西他濱組;為CLA-GEM組。雌性裸鼠接種人乳腺
癌MCF-7細胞后形成實體瘤。

表1.核苷轉運體抑制劑(NBMPR和dipyridamole)對CLA-GEM共軛物和吉西他濱
原形藥物細胞毒作用的影響(人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231細胞經藥物處理72
小時)


表2.靜脈注射CLA-GEM共軛物和鹽酸吉西他濱注射液后血漿中游離吉西他濱藥
物共動力學參數(每組4只大鼠).


具體實施方式

以下通過實施例,進一步說明本發明,但不作為對本發明的限制。

實施例1共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物(CLA-GEM共軛物)
將共軛亞油酸(0.50g,1.78mmol)和三乙胺(0.20g,2.0mmol)溶解于3ml
四氫呋喃中,維持溫度在-10℃,攪拌下滴加氯甲酸乙酯(0.19g,1.78mmol),
滴加完畢后在-15℃攪拌30分鐘。然后將鹽酸吉西他濱(0.53g,1.78mmol)和
三乙胺(0.20g,2.0mmol)溶于5ml?N,N-二甲基甲酰胺中,在-15℃滴加到上述
共軛亞油酸溶液中,反應液在氮氣保護下室溫攪拌72小時,真空干燥。取上述
反應所得物料,加入飽和碳酸氫鈉水溶液和乙酸乙酯溶液各50ml水洗,收集乙
酸乙酯層,真空干燥,用硅膠色譜柱分離,梯度洗脫,洗脫液為1%-10%的甲醇/
二氯甲烷溶液,收集有機相,室溫下氮氣吹干,得共軛亞油酸與吉西他濱連接的
前體藥物0.48g。

實施例2共軛亞油酸與吉西他濱連接的前體藥物(CLA-GEM共軛物)結構確證

采用400MHz?1H-NMR(Bruker?AVANCEIII?400,德國)對所制得的前體藥
物(CLA-GEM共軛物)進行結構驗證。

1H?NMR(400MHz,d-DMSO,δppm)

δ10.97(1H,s,NHCO),8.24(1H,d,J=7.6Hz,6-CH),7.29(1H,d,J=7.6Hz,
5-CH),6.30-6.31(1H,m,CH=CH),6.28(1H,m,CH=CH),6.15(1H,t,J=7.6Hz,
1’-CH),5.89(1H,m,CH=CH),5.65(1H,m,CH=CH),4.18(1H,m,3’-CH)
3.63-3.90(3H,m,4’-CH?and?5’-CH2),2.398(2H,t,J=7.6,CO-CH2),2.1
(4H,m,2CH2),1.2-1.5(18H,m,CH2),0.88(3H,t,CH3)

實施例3前體藥物(CLA-GEM共軛物)體外細胞毒及細胞膜轉運機制評價

采用硫氰酸銨B(SulforhodamineB)(SRB)測定方法。將MCF-7人乳
腺癌細胞接種于96孔板中(2500個細胞/孔),孵育24小時后,將鹽酸吉西他
濱水溶液和CLA-GEM共軛物的DMSO溶液稀釋成不同濃度的藥物溶液,加入到腫
瘤細胞中,每樣6孔,繼續孵育24小時后,棄去培養基,用10%三氯乙酸
在4℃固定細胞1小時,用純凈水沖洗后,晾干并用0.4%SRB在4℃染
色30分鐘,取出用0.1%乙酸沖洗,晾干后加入10uM的Tris溶液,置
搖床震蕩30分鐘后,用酶標儀在540nm處測定吸光值。

研究結果表明,24小時后,5uM的CLA-GEM共軛物就產生明顯的細胞毒作用(殺
死40%MCF-7細胞),50uM可以殺死92%腫瘤細胞。而吉西他濱原形藥幾乎無細
胞毒性。

實施例4前體藥物(CLA-GEM共軛物)體外細胞膜轉運機制評價

吉西他濱屬于核苷酸類似物,細胞內攝取轉運載體是通過人平衡型核苷轉運
蛋白(hENT),其中以hENT1型為主。對hENT1轉運載體的調控或抑制在臨床上
會引起吉西他濱耐藥性的產生。在體外可通過加入核酸轉運載體抑制劑來模擬耐
藥性,而CLA-GEM共軛物對核酸轉運載體抑制劑不敏感。本試驗采用兩種核苷轉
運載體抑制劑(100μM?S-(4-硝基芐基)-6-硫肌苷和4ug/ml雙嘧達莫)進行驗
證。在加入各種濃度的CLA-GEM共軛物和吉西他濱原形藥物之前,預先用核苷轉
運體抑制劑處理30分鐘,后續步驟同體外細胞毒試驗方法。

研究結果表明,用NBMPR和雙嘧達莫處理后的MCF-7細胞,對吉西他濱的細
胞毒活性分別降低了14倍和24倍,而對CLA-GEM的細胞毒活性只分別降低了
2.5倍和1.2倍。用NBMPR和dipyridamole處理后的MDA-MB-23細胞,對吉西
他濱的細胞毒活性分別降低了23倍和14倍,而對CLA-GEM的細胞毒活性只分別
降低了2.6倍和1.2倍。這說明吉西他濱的轉運需要hENT1載體,而CLA-GEM
的跨細胞轉運基本不需要hENT1載體。

實施例5前體藥物(CLA-GEM共軛物)體內靜脈注射后的藥物動力學研究

將CLA-GEM共軛物溶解在吐溫80和13%乙醇的混合溶媒(1∶4,V/V)中,
用生鹽水稀釋配制成注射液,將鹽酸吉西他濱直接溶解在生理鹽水中配制成注射
液。采用雄性SD大鼠尾靜脈給藥(給藥劑量均為7.5mg/kg吉西他濱),給藥后
眼眶取血,用高效液相法測定血漿中藥物濃度。

研究結果表明,與吉西他濱原形藥相比,靜脈注射CLA-GEM共軛物后血漿中
的游離吉西他濱濃度顯著較高,并且血漿中藥物半衰期和AUC增加了近3倍。

實施例6前體藥物(CLA-GEM共軛物)體內靜脈注射后的抗腫瘤藥效學評價

將CLA-GEM共軛物溶解在吐溫80和13%乙醇的混合溶媒(1∶4,V/V)中,
用生鹽水稀釋配制成注射液,將鹽酸吉西他濱直接溶解在生理鹽水中配制成注射
液。雌性BALB/c裸鼠(初始重量16-18g,北京大學醫學部提供),接種MCF-7
細胞后形成實體瘤,于接種后第8,12,16和21天分別尾靜脈注射吉西他濱或
CLA-GEM注射液,給藥劑量為25mg/kg吉西他濱,采用游標卡尺測定瘤體尺寸,
并計算瘤體大小。

研究結果表明,于生理鹽水對照組相比,CLA-GEM與鹽酸吉西他濱注射液均
有抗腫瘤效應。與鹽酸吉西他濱組相比,靜脈注射CLA-GEM組的抗腫瘤效應更顯
著,(p<0.05)。

實施例7含前體藥物(CLA-GEM共軛物)的藥物組合物口服片劑制備

將實施例1所制備得到的前體藥物固體物粉碎過篩,加入乳糖、交聯聚維酮、
微晶纖維素、滑石粉,混合均勻后,直接壓片,進行片劑的質量檢查,即得口服
片劑。

實施例8含前體藥物(CLA-GEM共軛物)的藥物組合物口服膠囊制備

將實施例1所制備得到的前體藥物固體物粉碎過篩,加入淀粉、糊精制備成濕
顆粒,烘干干燥得干顆粒,直接裝膠囊,進行膠囊的質量檢查,即得口服膠囊。

參考文獻

1)Heinemann,V.,et?al.,Cellular?elimination?of?2′,2′-difluorodeoxycytidine?5′-triphosphate:a?
mechanism?of?self-potentiation.Cancer?Res,1992.52(3):p.533-9.

2)Spratlin,J.,et?al.,The?absence?of?human?equilibrative?nucleoside?transporter?1?is?associated?
with?reduced?survival?in?patients?with?gemcitabine-treated?pancreas?adenocarcinoma.
Clinical?Cancer?Research,2004.10(20):p.6956-6961.

3)Maggiora?M,Bologna?M,Ceru?MP,Possati?L,Angelucci?A,Cimini?A,et?al.An?overview?of?
the?effect?of?linoleic?and?conjugated-linoleic?acids?on?the?growth?of?several?human?tumor?cell?
lines.International?journal?of?cancer.2004;112:909-19.

4)Palombo?JD,Ganguly?A,Bistrian?BR,Menard?MP.The?antiproliferative?effects?of?
biologically?active?isomers?of?conjugated?linoleic?acid?on?human?colorectal?and?prostatic?
cancer?cells.Cancer?Lett.2002;177:163-72.

5)Kelley?NS,Hubbard?NE,Erickson?KL.Conjugated?linoleic?acid?isomers?and?cancer.The?
Journal?of?nutrition.2007;137:2599-607.

6)J.A?S.Toxicological?Evaluation?of?Dietary?Conjugated?Linoleic?Acid?in?Male?Fischer?344
Rats.Food?and?Chemical?Toxicology.1998;36:391-5.

7)V.Vichai,K.Kirtikara.Sulforhodamine?B?colorimetric?assay?for?cytotoxicity?screening.
Nat.Protoc,1(3):1112-1116,2006.

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