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一種從蟾酥中提取脂蟾毒配基的方法.pdf

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一種 蟾酥 提取 脂蟾毒配基 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310142212.9

申請日:

2013.04.23

公開號:

CN103191132B

公開日:

2014.12.24

當前法律狀態:

終止

有效性:

無權

法律詳情: 未繳年費專利權終止IPC(主分類):A61K 31/585申請日:20130423授權公告日:20141224終止日期:20150423|||授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A61K 31/585申請日:20130423|||公開
IPC分類號: A61K31/585 主分類號: A61K31/585
申請人: 山東中醫藥大學
發明人: 林桂濤; 盛華剛; 鄧華亮
地址: 250000 山東省濟南市中醫藥大學
優先權:
專利代理機構: 濟南泉城專利商標事務所 37218 代理人: 袁敬清
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310142212.9

授權公告號:

|||103191132B||||||

法律狀態公告日:

2016.06.15|||2014.12.24|||2013.08.07|||2013.07.10

法律狀態類型:

專利權的終止|||授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明提供了一種從中藥蟾酥中提取高純度脂蟾毒配基的制備方法,蟾酥粉碎成中粗粉后,加入70~95%乙醇提取,提取液經過硅膠柱層析分離,得到高純度的脂蟾毒配基,脂蟾毒配基的含量達到98%以上。本發明方法簡單,所得提取物的純度較高。

權利要求書

權利要求書
1.   一種從蟾酥中提取脂蟾毒配基的制備方法,其特征是,蟾酥粉碎成中粗粉后,加入70~95%乙醇提取,提取液經過硅膠柱層析分離,得到高純度的脂蟾毒配基,脂蟾毒配基的含量達到98%以上。

2.   根據權利要求1所述的制備方法,其特征是,按以下方法制備的:
(1)蟾酥粉碎通過40目篩,加入20~40倍蟾酥量的70~95%乙醇,加熱回流提取2~3次,每次提取2~4小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端,以體積比為9:1的石油醚?丙酮混合溶劑為洗脫劑洗脫,洗脫至脂蟾毒配基成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的脂蟾毒配基提取物;
(4)測定高純度脂蟾毒配基提取物的含量;
所述硅膠柱的徑高比為1:3~10,裝量為提取液A中蟾酥量的10~30倍。

3.   根據權利要求2所述的制備方法,其特征是,所述提取用乙醇的濃度為95%。

說明書

說明書一種從蟾酥中提取脂蟾毒配基的方法
技術領域
本發明涉及一種從中藥蟾酥中提取高純度脂蟾毒配基的方法,屬于中藥技術領域。 
背景技術
中藥蟾酥來源于蟾蜍科動物中華大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。辛,溫;有毒。歸心經具有解毒,止痛,開竅醒神功能,有毒。用于癰疽疔瘡,咽喉腫痛,中暑神昏,痧脹腹痛吐瀉。蟾酥因現代藥理研究表明其具有抗腫瘤、抗病原微生物和強心等作用而收到了國內外的重視,其所含的脂蟾毒配基即是其活性成分之一,且是蟾酥中含量較高的活性成分。但脂蟾毒配基同時也是其毒性成分之一。 
蟾酥因產地不同、加工方法不同和采收季節和時間的差異,蟾酥中脂蟾毒配基的含量差異較大,不利于較好的控制其藥效,因此提純蟾酥中的活性成分是較好的保證其安全性和有效性的手段。但是,現有技術中提取的脂蟾毒配基的提取物一般純度較低。 
發明內容
為了解決上述技術問題,本發明提供了一種從中藥蟾酥中提取高純度脂蟾毒配基的方法,脂蟾毒配基的含量大于98%。其方法如下: 
(1)蟾酥粉碎成通過20目篩的細粉,加入20~40倍蟾酥量的70~95%乙醇,加熱回流提取2~3次,每次提取2~4小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A。
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析住的頂端(硅膠柱的徑高比為1:3~10,裝量為提取液A中蟾酥量的10~30倍),以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑洗脫,洗脫至脂蟾毒配基成分洗脫完全,得洗脫液B。 
(3)洗脫液B加熱回收溶劑,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的脂蟾毒配基提取物。 
下面為本發明的實驗內容及結果:
1.提取方法:
根據蟾酥藥材的性質,藥材的粒度選擇為40目。
根據影響提取的因素,用正交試驗法考察提乙醇濃度(A)、提取時間(B)、料液比(C)對提取效果的影響,考察的因素及水平見表1,考察指標為提取的脂蟾毒配基的量和提取浸膏量。考察因素及水平見表1。 
表1          蟾酥提取條件考察L9(33)正交水平設計表 

取蟾酥粉末(40目)2.0g,共9份,精密稱定,置圓底燒瓶中,按正交表布表組合進行提取,提取液抽濾,合并兩次濾液,混勻,加相應濃度乙醇定容至250ml,混勻,得蟾酥提取液。測定提取液中脂蟾毒配基的量和提取浸膏量,結果見表2、表3、表4。
表2                  蟾酥提取正交實驗結果 

注:三種成分的百分含量為每100g蟾酥原藥材中所含各個成分的克數,即g/100g。
表3               脂蟾毒配基方差分析表 

表4                 浸膏率方差分析表

從實驗結果可以看出,在設計的范圍內,各因素及不同水平對脂蟾毒配基的提取效果影響較小,但乙醇的濃度對浸膏的提取量影響較大(P<0.01)。乙醇濃度越高,提取的浸膏量越小,提取浸膏中,脂蟾毒配基的含量越高,雜質越少,因此,為了純化時方便,提取溶劑優選用95%乙醇。
純化方法
2.1蟾酥提取液的制備:精密稱取蟾酥藥材40g,精密稱定,置圓底燒瓶中,加乙醇加熱回流提取2次,第一次加乙醇960ml,加熱回流1h,第二次,加乙醇640ml,加熱回流1h,濾過,合并濾液,回收乙醇至約1000ml,置1000ml容量瓶內,加乙醇至刻度,搖勻,即得。
2.2徑高比的考察 
硅膠柱的預處理:稱取30g硅膠,以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,濕法裝柱,洗脫1.5個柱體積。三組硅膠柱的徑高比為:2:20、2.5:13.5、3:9。
上樣硅膠的制備:精密移取50ml蟾酥提取液3份,分別置蒸發皿內,水浴揮去溶劑至約2ml,加入1g硅膠(100目~200目)混合均勻,揮干溶劑,即得。 
取3份上樣硅膠,分別干法上樣到預處理好的硅膠柱上,飽和30min,洗脫,洗脫速度為2.5ml/min。以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑洗脫洗脫,洗至脂蟾毒配基完全,洗脫液蒸干,加無水乙醇溶解,濾過,轉移至稱量至恒重的干凈稱量瓶內, 85℃烘干,至減壓干燥器內干燥48h,得純化產物。測定提取物中脂蟾毒配基的量,計算脂蟾毒配基的純度。結果見表5。 
表5                不同徑高比的考察結果 

2.3硅膠粒度的考察
硅膠柱的預處理:稱取硅膠100目~200目、200目~300目各30g,以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,濕法裝柱,洗脫1.5個柱體積。硅膠柱的徑高比為2.5:13.5。
上樣硅膠的制備:各精密移取50ml蟾酥提取液,水浴揮去溶劑至約2ml,加入1g硅膠(100目~200目)混合均勻,揮干溶劑,即得。 
取上述上樣硅膠,分別干法上樣到預處理好的硅膠柱上,同2.2項下方法洗脫,制備純化物,測定脂蟾毒配基純度。結果見表6。 
表6                 不同硅膠粒度的考察結果 粒度脂蟾毒配基純度(%)100~20098.59200~30098.68
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步的說明。 
實施例1 
(1)蟾酥粉碎通過40目篩,加入30倍蟾酥量的95%乙醇,加熱回流提取3次,每次提取3小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端,以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑洗脫,洗脫至脂蟾毒配基成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的脂蟾毒配基提取物;
(4)測定高純度脂蟾毒配基提取物的含量為98.89%;
實施例2
(1)蟾酥粉碎通過40目篩,加入40倍蟾酥量的70%乙醇,加熱回流提取3次,每次提取2小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端,以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑洗脫,洗脫至脂蟾毒配基成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的脂蟾毒配基提取物;
(4)測定高純度脂蟾毒配基提取物的含量為98.23%;
實施例3
(1)蟾酥粉碎通過40目篩,加入20倍蟾酥量的85%乙醇,加熱回流提取3次,每次提取4小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端,以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑洗脫,洗脫至脂蟾毒配基成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的脂蟾毒配基提取物;
(4)測定高純度脂蟾毒配基提取物的含量98.57%。

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