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一種從蟾酥中提取華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310142353.0

申請日:

2013.04.23

公開號:

CN103191133B

公開日:

2014.12.24

當前法律狀態:

終止

有效性:

無權

法律詳情: 未繳年費專利權終止IPC(主分類):A61K 31/585申請日:20130423授權公告日:20141224終止日期:20150423|||授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A61K 31/585申請日:20130423|||公開
IPC分類號: A61K31/585 主分類號: A61K31/585
申請人: 山東中醫藥大學
發明人: 林桂濤; 張超; 鄧華亮
地址: 250000 山東省濟南市山東中醫藥大學
優先權:
專利代理機構: 濟南泉城專利商標事務所 37218 代理人: 袁敬清
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310142353.0

授權公告號:

|||103191133B||||||

法律狀態公告日:

2016.06.15|||2014.12.24|||2013.08.07|||2013.07.10

法律狀態類型:

專利權的終止|||授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明一種從蟾酥中提取華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的制備方法,其特征是,蟾酥粉碎成中粗粉后,加入70~95%乙醇提取,提取液經過硅膠柱層析分離,得到高純度的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物,華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的含量達到80%以上。用本發明的制備方法提取的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的總含量達80%以上。

權利要求書

權利要求書
1.   一種從蟾酥中提取華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的制備方法,其特征是,蟾酥粉碎成中粗粉后,加入70~95%乙醇提取,提取液經過硅膠柱層析分離,得到高純度的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物,華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的含量達到80%以上。

2.   根據權利要求1所述的制備方法,其特征是,包括以下步驟:
(1)蟾酥粉碎成通過40目篩的粗粉,每次加入20~40倍蟾酥量的70~95%乙醇,加熱回流提取2~3次,每次提取2~4小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,得上樣硅膠,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端,先以體積比為9:1的石油醚?丙酮混合溶劑為洗脫劑,洗脫,棄去洗脫液,繼以體積比為8.5:1.5的石油醚?丙酮混合溶劑為洗脫劑,洗脫至華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物提取物;
(4)高純度華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物提取物的含量測定;
所述硅膠柱的徑高比為1:3~10,裝量為提取液A中蟾酥量的10~30倍。

3.   根據權利要求1或2所述的制備方法,其特征在于,提取用乙醇的濃度為95%。

4.   根據權利要求1或2所述的制備方法,其特征在于,所述硅膠柱的徑高比為2.5:13.5。

說明書

說明書一種從蟾酥中提取華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的方法
技術領域
本發明涉及一種從中藥蟾酥中提取高純度華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的方法,屬于中藥技術領域。 
背景技術
中藥蟾酥來源于蟾蜍科動物中華大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。辛,溫;有毒。歸心經,具有解毒,止痛,開竅醒神功能,有毒。用于癰疽疔瘡,咽喉腫痛,中暑神昏,痧脹腹痛吐瀉。蟾酥因現代藥理研究表明其具有抗腫瘤、抗病原微生物和強心等作用而受到了國內外的重視,其所含的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物即是其活性成分之一,且是蟾酥中含量較高的活性成分。 
蟾酥因產地不同、加工方法不同和采收季節和時間的差異,蟾酥中華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的含量差異較大,不利于較好的控制其藥效,因此提純蟾酥中的活性成分是較好的保證其安全性和有效性的手段。但現有技術中這兩種成分的提取物,純度一般都很低。 
發明內容
為了解決上述技術問題,本發明提供了一種從中藥蟾酥中提取高純度華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的方法,華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的含量大于80%。其提取方法如下: 
(1)蟾酥粉碎成通過40目篩的粗粉,加入20~40倍蟾酥量的70~95%乙醇,加熱回流提取2~3次,每次提取2~4小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端(硅膠柱的徑高比為1:3~10,裝量為提取液A中蟾酥量的20~30倍),先以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,洗脫,棄去洗脫液,繼以石油醚?丙酮(8.5:1.5)混合溶劑為洗脫劑,洗脫至華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物提取物;
(4)測定華蟾酥毒基和蟾毒靈的含量。
下面為本發明的實驗內容及結果
1.提取方法:
根據蟾酥藥材的性質,藥材的粒度選擇為40目。
根據影響提取的因素,用正交試驗法考察提乙醇濃度(A)、提取時間(B)、料液比(C)對提取效果的影響,考察的因素及水平見表1,考察指標為提取的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的量和提取浸膏量。考察因素及水平見表1。 
表1          蟾酥提取條件考察L9(33)正交水平設計表 

取蟾酥粉末(40目)2.0g,共9份,精密稱定,置圓底燒瓶中,按正交表布表組合進行提取,提取液抽濾,合并兩次濾液,混勻,加相應濃度乙醇定容至250ml,混勻,得蟾酥提取液。測定提取液中華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的量和提取浸膏量,結果見表2、表3、表4、表5。
表2                  蟾酥提取正交實驗結果 

注:三種成分的百分含量為每100g蟾酥原藥材中所含各個成分的克數,即g/100g。
表3               華蟾素配基方差分析表 

表4                 蟾毒靈方差分析表

表5                 浸膏率方差分析表

從實驗結果可以看出,在設計的范圍內,各因素及不同水平對華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的提取效果影響較小,但乙醇的濃度對浸膏的提取量影響較大(P<0.01)。乙醇濃度越高,提取的浸膏量越小,提取浸膏中,華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的含量越高,雜質越少,因此,為了純化時方便,提取溶劑選用95%乙醇。
純化方法
2.1蟾酥提取液的制備:精密稱取蟾酥藥材40g,精密稱定,置圓底燒瓶中,加乙醇加熱回流提取2次,第一次加乙醇960ml,加熱回流1h,第二次,加乙醇640ml,加熱回流1h,濾過,合并濾液,回收乙醇至約1000ml,置1000ml容量瓶內,加乙醇至刻度,搖勻,即得。
2.2徑高比的考察 
硅膠柱的預處理:稱取30g硅膠,以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,濕法裝柱,洗脫1.5個柱體積。三組硅膠柱的徑高比為:2:20、2.5:13.5、3:9。
上樣硅膠的制備:精密移取50ml蟾酥提取液3份,分別置蒸發皿內,水浴揮去溶劑至約2ml,加入1g硅膠(100目~200目)混合均勻,揮干溶劑,即得。 
取3份上樣硅膠,分別干法上樣到預處理好的硅膠柱上,飽和30min,洗脫,洗脫速度為2.5ml/min。先以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑洗脫,棄去洗脫液,再以石油醚?丙酮(8.5:1.5)混合溶劑為洗脫液,洗至華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物完全,洗脫液蒸干,加無水乙醇溶解,濾過,轉移至稱量至恒重的干凈稱量瓶內, 85℃烘干,至減壓干燥器內干燥48h,得純化產物。測定提取物中華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的量,計算華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物的純度。結果見表6。 
表6                不同徑高比的考察結果 

2.3硅膠粒度的考察
硅膠柱的預處理:稱取硅膠100目~200目、200目~300目各30g,以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,濕法裝柱,洗脫1.5個柱體積。硅膠柱的徑高比為2.5:13.5。
上樣硅膠的制備:各精密移取50ml蟾酥提取液,水浴揮去溶劑至約2ml,加入1g硅膠(100目~200目)混合均勻,揮干溶劑,即得。 
取上述上樣硅膠,分別干法上樣到預處理好的硅膠柱上,同2.2項下方法洗脫,制備純化物,測定華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物純度。結果見表7。 
表7                 不同硅膠粒度的考察結果 粒度華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物純度(%)100~20085.97200~30081.89
具體實施方式
   下面對本發明作進一步的說明。 
實施例1 
  (1)蟾酥粉碎成通過40目篩的粗粉,加入30倍蟾酥量的95%乙醇,加熱回流提取3次,每次提取3小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端(硅膠柱的徑高比為2.5:13.5,裝量為提取液A中蟾酥量的20~30倍),先以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,洗脫,棄去洗脫液,繼以石油醚?丙酮(8.5:1.5)混合溶劑為洗脫劑,洗脫至華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物提取物;
(4)用高效液相色譜測定華蟾酥毒基和蟾毒靈的含量85.21%。
實施例2 
蟾酥粉碎成通過40目篩的細粉,加入40倍蟾酥量的80%乙醇,加熱回流提取3次,每次提取2小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端(硅膠柱的徑高比為1:10,裝量為提取液A中蟾酥量的20~30倍),先以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,洗脫,棄去洗脫液,繼以石油醚?丙酮(8.5:1.5)混合溶劑為洗脫劑,洗脫至華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物提取物;
(4)測定華蟾酥毒基和蟾毒靈的含量為82.47%。
實施例3 
蟾酥粉碎成通過20目篩的細粉,加入20倍蟾酥量的70%乙醇,加熱回流提取2次,每次提取4小時,提取液濾過,濾液回收乙醇至無乙醇味,得乙醇提取液A;
(2)提取液A中,加入5倍蟾酥量,粒度為100~200目的硅膠,蒸干,加入已裝有硅膠的層析柱的頂端(硅膠柱的徑高比為1:3,裝量為提取液A中蟾酥量的20~30倍),先以石油醚?丙酮(9:1)混合溶劑為洗脫劑,洗脫,棄去洗脫液,繼以石油醚?丙酮(8.5:1.5)混合溶劑為洗脫劑,洗脫至華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物成分洗脫完全,得洗脫液B;
(3)洗脫液B加熱回收溶劑至無溶劑味,減壓干燥器內干燥48h,得高純度的華蟾酥毒基和蟾毒靈混合物提取物;
(4)測定華蟾酥毒基和蟾毒靈的含量為80.29%。

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