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一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法.pdf

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一種 青花菜 雄性不育 系快繁 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310166265.4

申請日:

2013.05.08

公開號:

CN103262795B

公開日:

2014.12.24

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 專利權的轉移IPC(主分類):A01H 4/00登記生效日:20190430變更事項:專利權人變更前權利人:蚌埠永源電子科技有限公司變更后權利人:武漢亞非種業有限公司變更事項:地址變更前權利人:233400 安徽省蚌埠市東海大道2595號8號樓道創空間1樓眾創空間A-43號變更后權利人:430000 湖北省武漢市武昌區武珞路36號首義順民大廈3單元19層2號|||專利權的轉移IPC(主分類):A01H 4/00登記生效日:20190424變更事項:專利權人變更前權利人:江蘇匯智知識產權服務有限公司變更后權利人:蚌埠永源電子科技有限公司變更事項:地址變更前權利人:212114 江蘇省鎮江市丹徒區高資街道香山大道1號變更后權利人:233400 安徽省蚌埠市東海大道2595號8號樓道創空間1樓眾創空間A-43號|||專利權人的姓名或者名稱、地址的變更IPC(主分類):A01H 4/00變更事項:專利權人變更前:江蘇匯智知識產權服務有限公司變更后:江蘇匯智知識產權服務有限公司變更事項:地址變更前:212000 江蘇省鎮江市潤州區南徐大道101號變更后:212114 江蘇省鎮江市丹徒區高資街道香山大道1號|||專利權的轉移IPC(主分類):A01H 4/00登記生效日:20151030變更事項:專利權人變更前權利人:鎮江瑞繁農藝有限公司變更后權利人:江蘇匯智知識產權服務有限公司變更事項:地址變更前權利人:212400 江蘇省鎮江市句容市華陽鎮寧杭路112號變更后權利人:212000 江蘇省鎮江市潤州區南徐大道101號|||授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A01H 4/00申請日:20130508|||公開
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 鎮江瑞繁農藝有限公司
發明人: 張振超; 戴忠良; 潘躍平; 毛忠良; 姚悅梅; 秦文斌; 潘永飛; 肖燕; 吳國平; 孫春青; 馬志虎
地址: 212400 江蘇省鎮江市句容市華陽鎮寧杭路112號
優先權:
專利代理機構: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 代理人: 李紀昌
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310166265.4

授權公告號:

||||||||||||103262795B||||||

法律狀態公告日:

2019.05.21|||2019.05.14|||2017.01.11|||2015.11.18|||2014.12.24|||2013.09.25|||2013.08.28

法律狀態類型:

專利申請權、專利權的轉移|||專利申請權、專利權的轉移|||專利權人的姓名或者名稱、地址的變更|||專利申請權、專利權的轉移|||授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明公開了一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,主要包括以下步驟:從田間青花菜胞質雄性不育系植株上取回外植體,將外植體切成3~5cm的小塊,采用濃度為75%的無水乙醇在其表面滅菌30~60秒,再用體積分數為8%的次氯酸鈉溶液消毒18~20分鐘,用無菌水沖洗5~6次,然后將無菌外植體接種到增殖培養基上,置于25±2℃培養室中培養;培養20~25天時,增殖形成新的幼芽,分離新幼芽無菌轉接到培養基中繼續培養,重復轉接培養5~10次后把組培苗轉接到生根培養基中生根,經過馴化移栽到大田。該方法具有操作簡便、繁殖效率高等優點。

權利要求書

權利要求書
1.   一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,其特征在于主要包括以下步驟:從田間青花菜胞質雄性不育系植株上取回外植體,將外植體切成3~5cm的小塊,采用濃度為75%的無水乙醇在其表面滅菌30~60秒,再用體積分數為8%的次氯酸鈉溶液消毒18~20分鐘,用無菌水沖洗5~6次,然后將無菌外植體接種到增殖培養基上,置于25±2℃培養室中培養;培養20~25天時,增殖形成新的幼芽,分離新幼芽無菌轉接到培養基中繼續培養,重復轉接培養5?10次后把組培苗轉接到生根培養基中生根,經過馴化移栽到大田。

2.   根據權利要求1所述的一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,其特征在于所述外植體為新長出的帶柄幼嫩花球,切塊后每塊外植體包含至少一個芽點和完整花球。

3.   根據權利要求1所述的一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,其特征在于所述增殖培養基為MS+2~3mg/L 6?BA+0.05~0.1mg/L NAA+20~30g/L蔗糖+1.0~1.3g/L瓊脂,pH值為5.8~6.0。

4.   根據權利要求1所述的一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,其特征在于所述生根培養基為1/2 MS+0.1~0.15 mg/L IBA+0.1~0.15 mg/L NAA+20~30g/L蔗糖+1.0~1.3g/L瓊脂,pH值為5.8~6.0。

說明書

說明書一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法
技術領域
本發明涉及植物組織培養技術領域,尤其涉及一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法。
背景技術
青花菜( Brassia oleracea L. var. varitalica Planch) 又名西蘭花、綠菜花、嫩莖青花菜,為十字花科蕓薹屬甘藍類蔬菜,富含多種維生素、礦物質和天然防癌抗癌物質,是營養價值很高的蔬菜。青花菜起源于地中海沿岸,國內種質資源匱乏,種子價格昂貴,國外優良種質又難以獲得,這些因素制約著國內青花菜多類型優良品種選育工作的開展。優質、抗逆、抗病品種的培育一直是育種家關注的熱點問題之一。而培育優良品種的首要關鍵是選育具備目標特性的青花菜種質資源。
利用雄性不育取代自交不親和生產青花菜雜交種的趨勢日漸明顯。利用胞質雄性不育系配制雜交種,既能克服自交不親和系人工蕾期授粉繁殖成本高、長期連續自交生活力衰退、雜交率受環境制約難以達到100%等缺陷,又比顯性細胞核雄性不育系繁育親本簡單易行。同時這種不育系具有轉育簡單、不育性徹底,用其配制的雜交種,大田雜種純度能保證達到100%。近年來,我單位在田間選育獲得了一些胞質雄性不育系材料,但由于對其遺傳背景不甚明了,尚未找到較好的保持系,而通過青花菜離體快速繁殖, 可實現對其保存和擴繁, 以滿足育種和生產上的需要。
關于青花菜的組織培養、快繁的研究最早見于國外的Anderson(1977)和Johnson(1978)。而在國內,李曙軒等(1983)利用葉片、中肋等外植體的組培,在基本培養基MS內附加一定量的激素配比的條件下已取得了不錯的效果;張麗麗等(2008)以青花菜帶柄子葉為外植體,研究其高頻離體再生體系,獲得了較高的再生頻率均高于80%。但采用青花菜花球作為外植體進行組培快繁的研究未見報道。
發明內容
解決的技術問題:本發明提供了一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,實現對胞質雄性不育系材料的保存和擴繁,以滿足育種和生產上的需要。
技術方案:本發明提供了一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,主要包括以下步驟:從田間青花菜胞質雄性不育系植株上取回外植體,將外植體切成3~5cm的小塊,采用濃度為75%的無水乙醇在其表面滅菌30~60秒,再用體積分數為8%的次氯酸鈉溶液消毒18~20分鐘,用無菌水沖洗5~6次,然后將無菌外植體接種到增殖培養基上,置于25±2℃培養室中培養;培養20~25天時,增殖形成新的幼芽,分離新幼芽無菌轉接到培養基中繼續培養,重復轉接培養5~10次后把組培苗轉接到生根培養基中生根,經過馴化、移栽到大田,從而實現了青花菜胞質雄性不育系材料的快繁及生產應用。
所述外植體為新長出的帶柄幼嫩花球,切塊后每塊外植體包含至少一個芽點和完整花球。
所述增殖培養基為MS+2~3mg/L 6?BA+0.05~0.1mg/L NAA+20~30g/L蔗糖+1.0~1.3g/L瓊脂,pH值為5.8~6.0,其中NAA為萘乙酸,6?BA為6?芐基腺嘌呤。
所述生根培養基為1/2 MS+0.1~0.15 mg/L IBA+0.1~0.15 mg/L NAA+20~30g/L蔗糖+1.0~1.3g/L瓊脂,pH值為5.8~6.0,其中NAA為萘乙酸,IBA為吲哚丁酸。
所述MS培養基,以1L計,組成為:NH4HO3 1650 mg,KNO3 1900 mg,CaCl2·2H2O 440 mg,KH2PO4 170 mg,MgSO4·7H2O 370 mg,FeSO4·7H2O 27.8 mg,Na2EDTA 37.3 mg,H3BO3 6.2 mg,MnSO4·H2O 16.9 mg,ZnSO4·7H2O 8.6 mg,Na2MoO4·2H2O 0.25 mg,CuSO4·5H2O 0.025 mg,CoCl2·6H2O 0.025 mg,KI 0.83 mg,肌醇100 mg,甘氨酸2 mg,煙酸0.5 mg,維生素B1 0.1 mg,維生素B6 0.5 mg和余量的無菌水。
有益效果:(1)本發明提供的一種青花菜胞質雄性不育系快繁的方法,采用的是幼嫩帶柄小花球作為外植體進行組培快繁,由于帶柄小花球含有生長點,滅菌后在增殖培養基中培養易于生長形成新芽,經過多次轉接后可以快速獲得大量的組培苗,滿足生產需要,具有操作簡便、繁殖效率高等優點。(2)本發明獲得的不定芽增殖系數為5~6,生根率85~90%,平均生根數7~9條,組培苗移栽成活率為94~96%。組培苗再生植株與種子實生苗在田間表現相比,沒有明顯差異。
具體實施方式
實施例1  
增殖培養基為:MS+2mg/L 6?BA +0.05mg/L NAA +20g/L蔗糖+1.0g/L瓊脂,pH值為6.0;生根培養基為1/2 MS+0.1mg/L IBA+0.15 mg/L NAA+20g/L蔗糖+1.0g/L瓊脂,pH值為6.0。
從田間取回正在生長的青花菜幼嫩帶柄花球,在實驗室超凈工作臺上用解剖刀切成3cm的小塊,用濃度為75%的無水乙醇在其表面滅菌30秒,再用體積分數為8%的次氯酸鈉溶液消毒18分鐘,用無菌水沖洗5次,然后將無菌外植體接種到增殖培養基上,置于23℃培養室中培養,培養20天時形成新芽,轉接新芽到增殖培養基中繼續培養,重復轉接培養5次后把組培苗轉接到生根培養基中生根,最后形成的健康帶根幼苗經過馴化、移栽到田間。
本實施例獲得的不定芽增殖系數為5,生根率85%,平均生根數7條,組培苗移栽成活率為94%,組培苗再生植株與種子實生苗在田間表現相比,沒有明顯差異。
實施例2  
增殖培養基為:MS+3mg/L 6?BA + 0.1mg/L NAA +25g/L蔗糖+1.15g/L瓊脂,pH值為5.9;生根培養基為1/2 MS+0.12 mg/L IBA+0.12 mg/L NAA+25g/L蔗糖+1.15g/L瓊脂,pH值為5.9。
從田間取回正在生長的青花菜幼嫩帶柄花球,在實驗室超凈工作臺上用解剖刀切成4cm的小塊,用濃度為75%的無水乙醇在其表面滅菌45秒,再用體積分數為8%的次氯酸鈉溶液消毒19分鐘,用無菌水沖洗5次,然后將無菌外植體接種到增殖培養基上,置于25℃培養室中培養,培養25天時形成新芽,轉接新芽到增殖培養基中繼續培養,重復轉接培養8次后把組培苗轉接到生根培養基中生根,最后形成的健康帶根幼苗移栽到田間。
本實施例獲得的不定芽增殖系數為5.5,生根率87%,平均生根數8條,組培苗移栽成活率為95%,組培苗再生植株與種子實生苗在田間表現相比,沒有明顯差異。
實施例3  
增殖培養基為:MS+3mg/L 6?BA + 0.08mg/L NAA +30g/L蔗糖+1.3g/L瓊脂,pH值為5.8;生根培養基為1/2 MS+0.15 mg/L IBA+0.15 mg/L NAA+30g/L蔗糖+1.3g/L瓊脂,pH值為5.8。
從田間取回正在生長的青花菜幼嫩帶柄花球,在實驗室超凈工作臺上用解剖刀切成5cm的小塊,用濃度為75%的無水乙醇在其表面滅菌60秒,再用體積分數為8%的次氯酸鈉溶液消毒20分鐘,用無菌水沖洗6次,然后將無菌外植體接種到增殖培養基上,置于25℃培養室中培養,培養25天時形成新芽,轉接新芽到增殖培養基中繼續培養,重復轉接培養10次后把組培苗轉接到生根培養基中生根,最后形成的健康帶根幼苗移栽到田間。
本實施例獲得的不定芽增殖系數為6,生根率90%,平均生根數9條,組培苗移栽成活率為96%,組培苗再生植株與種子實生苗在田間表現相比,沒有明顯差異。

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