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一種鄂西紅豆樹離體胚培養及植株再生的方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201310200730.1

申請日:

2013.05.27

公開號:

CN103283599B

公開日:

2014.12.24

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A01H 4/00申請日:20130527|||公開
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 何碧珠
發明人: 何碧珠; 彭彪; 林蔚; 彭東輝; 何官榕; 阮宜煥; 阮宜瑤
地址: 350002 福建省福州市倉山福建農林大學
優先權:
專利代理機構: 福州元創專利商標代理有限公司 35100 代理人: 蔡學俊
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310200730.1

授權公告號:

103283599B||||||

法律狀態公告日:

2014.12.24|||2013.10.16|||2013.09.11

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明提供一種鄂西紅豆樹離體胚培養及植株再生的關鍵技術,屬于紅豆樹種子資源的保存和大量繁殖的技術。解決現有技術中紅豆樹種子來源困難,種子易遭鼠食;種子堅硬,種皮干燥后不容易吸收水分,種皮透水性差,自然繁衍能力、傳播擴散能力不強,結實年齡遲,自然更新困難且需要間隔3~5年開花結果,優良種苗稀缺的問題。本發明選取當年結實籽粒飽滿的種子為材料,經過胚誘導培養20~35天即可萌發出生長健壯的胚芽植株,再經過25~45天的增殖培養和20~30天壯苗培養;以及25~35天生根的培養即可成苗、移栽,成活率達95%以上,擴繁系數較高,增殖時間短,成苗移植后成活率高,苗木健壯挺拔,葉片亮綠,長勢良好,整齊一致。

權利要求書

權利要求書
1.   一種鄂西紅豆樹離體胚培養及植株再生的關鍵技術,其特征是:
1)取材方法:選取當年結實的籽粒飽滿的鄂西紅豆樹紅豆樹種子為材料,采摘后用濕布包好,帶回實驗室后用洗滌劑漂洗干凈,再置于流水中沖滴。
2)培養基的配制:按以下配方配制各個培養基:
胚芽誘導培養基:WPM+BA(1.0mg·L?1)+KT (0.5mg·L?1)+NAA (0.1mg·L?1)+瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (20g·L?1)+活性炭 (1.0~1.5 g·L?1);
芽增殖培養基:WPM+BA(1.5mg·L?1) +KT (1.0mg·L?1) +TDZ(0.2mg·L?1)+NAA (0.3mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (20g·L?1) +活性炭 (1.0~1.5 g·L?1);
壯苗培養培養基:WPM+BA(1.5mg·L?1) +KT (1.0mg·L?1) +TDZ(0.2mg·L?1)+NAA (0.5mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (30g·L?1) +活性炭 (1.5~2.0 g·L?1);
    生根培養基:1/2 WPM + NAA (0.3mg·L?1) +IBA (1.0mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (30g·L?1) +活性炭 (1.5~2.0g·L?1);
     培養基厚度均為1.4~1.6cm;
3) 材料的消毒處理:先對種子材料用機械力去除堅硬的種子生長點外殼的1/3部分,用自來水沖洗,置飽和漂白粉上清液中浸泡,并用輕輕刷洗種子外殼,浸泡刷洗干凈后,在自來水下滴沖0.5?1h后,再雙蒸水沖洗,之后置超凈工作臺用75%的酒精消毒30s后倒去酒精,加入0.1%wt升汞溶液浸泡13~15min后倒去升汞溶液,用無菌水沖4~6遍,用消毒濾紙吸干種子材料表面水分;
4) 胚芽誘導培養:取步驟3)處理后的種子材料接種于經滅菌的胚芽誘導培養基中;胚芽誘導的培養條件:溫度為25±2℃,前10~15天暗培養,16天以后光強度為1000~1500lx,光照時間12h/d,胚芽誘導時間:暗培養10~15天后,再培養10~20天;
5) 增殖培養:將經步驟4)胚芽誘導培養所得到的生長良好的芽切成1~2cm長的帶液芽莖段,接種在增殖培養基中進行增殖培養;所述增殖培養的條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度為1500~2000lx,增殖培養時間25~45天;
6)壯苗培養:將經增殖培養所得到的生長良好的完整植株單株切下,帶有1~2片葉子,株高1~1.5cm,轉移到壯苗培養基中;所述壯苗培養的培養條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度:光照強度為1500~2000lx,壯苗培養時間20~30天;
 7)誘導生根:將壯苗培養出來的幼苗單株,帶有2~3片葉子,株高1~2cm,轉移到生根培養基中;所述生根培養的培養條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度:光照強度為1500~2000lx,生根培養時間25~35天;
8)試管苗完成:當誘導生根培養出的試管苗生長至3~4cm高,有3~5條根,3~6片葉片,葉長2~3cm時,完成紅豆樹離體胚培養及植株再生的試管苗培養;
    9) 瓶苗移栽:將步驟8)完成的試管苗放在自然光下煉苗3~5天,再打開瓶蓋進行煉苗2天;然后從培養瓶中取出,洗去附著在根系的培養基,移入蛭石和腐殖土以質量比1:2混合的基質中,放置在溫度15~30℃,濕度在75%~85%,避免陽光直射的環境下培養,獲得的紅豆樹種苗。

說明書

說明書一種鄂西紅豆樹離體胚培養及植株再生的關鍵技術
技術領域
本發明屬于經濟林的栽培方法,特別是涉及我國特有鄉土樹種鄂西紅豆樹,屬于木本植物紅豆樹種子資源的保存和大量繁殖技術的組織培養方法。
背景技術
   鄂西紅豆樹(Ormosia hosiei.et Wils),別名:花櫚木、紅豆樹、黑樟、烏樟絲、番紅木,為蝶形花科Papilionaceae。是我國特有鄉土種,國家二級珍稀瀕危植物。紅豆樹木材是目前中國紅木家具中最主要的木材原料, 紅豆樹集珍貴用材、藥材價值、景觀利用、森林文化于一體, 具極高經濟價值和開發利用前景,果實鮮紅圓潤,晶瑩剔透,久存不蛀不朽,被譽為“植物紅寶石”。 其文化底蘊深厚,可用來作庭院“風水定位”,唐詩中有“紅豆生南國,春來發幾枝,愿君多采擷,此物最相思”,所以稱其為相思紅豆。半落葉特點有利于人們夏季遮陽,冬采光熱的環保節能要求,樹姿優雅,樹冠濃陰覆地,易移栽,紅豆樹是一種發生病蟲害較低抗污染能力較強的樹種,在城市的抗污染力大體和銀杏、天竺桂相當, 成年樹可單獨構成一景,是優良的園林綠化樹種, 沒有特定病蟲害的記錄。所以紅豆樹的壽命一般都很長,上千年的紅豆樹并不鮮見,因此只要不人為砍伐極易自然成長為古樹。
紅豆樹具有較高藥用價值,是一種重要的中草藥, 它的根、 莖、皮、 葉均可入藥,  種子可入藥, 藥名赤小豆俗稱紅豆, 其味: 甘、 平、酸、 無毒; 主治疝氣、腹痛、消腫、化膿、健脾胃、泄痢、通便、血滯、閉經、風濕關節炎及無名腫毒等; 其根、葉也可入藥, 主治暴冷、胃中冷逆、霍亂腹痛、解酒毒, 是藥物中品。 由于天然林資源遭到大量砍伐, 造成現有天然資源大量減少,分布范圍曰益狹窄,成年樹日益稀少 ,紅豆樹種群小, 主要以風水林保留于村口和寺廟旁,國際市場上被視為木中珍品。紅豆樹材質優良, 堅實耐腐, 收縮性小, 其紋理美觀, 可與桃花心木比美, 是我國珍貴的用材樹種。長期以來由于群眾濫伐, 紅豆樹天然林資源已瀕于枯竭, 急需發展人工造林, 擴大種群規模。鄂西紅豆樹結實年齡遲,并且有大小年之分,一般在35年左右才開花結實,結果盛期在50年以后,而且通常需間隔3—5a開花結果,開展優良單株的選擇并采取組織培養無性繁殖技術,為培育優質苗木以及珍貴鄉土樹種的保護開發,調整林種樹種結構,促進林業可持續發展,對高效保育珍稀瀕危紅豆樹資源具有重要的研究意義和較高經濟價值及開發利用前景。
  
發明內容
本發明的目的是提供一種鄂西紅豆樹離體胚培養及植株再生的組織培養方法,解決現有技術中紅豆樹種子易遭鼠食;種子堅硬,種皮干燥后不容易吸收水分;種皮透水性差,必須經特殊催芽處理才能萌發,自然更新困難,自然繁衍能力和傳播擴散能力都不強;而且結實年齡遲(一般在35年左右才開花結實,結果盛期在50年以后)且需要間隔3~5年開花結果,種子來源困難,優良種苗稀缺的問題。該培養方法擴繁系數較高,增殖時間短,成苗移植后成活率高,苗木健壯挺拔,葉片亮綠,長勢良好整齊一致,對高效保育珍稀瀕危紅豆樹資源具有重要的研究意義和較高經濟價值及開發利用前景。
本發明的方法是以如下方式實現的:一種鄂西紅豆樹離體胚培養及植株再生的關鍵技術,其特征是:
1)取材方法:選取當年結實的籽粒飽滿的鄂西紅豆樹紅豆樹種子為材料,采摘后用濕布包好,帶回實驗室后用洗滌劑漂洗干凈,再置于流水中沖滴。
2)培養基的配制:按以下配方配制各個培養基:
胚芽誘導培養基:WPM+BA(1.0mg·L?1)+KT (0.5mg·L?1)+NAA (0.1mg·L?1)+瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (20g·L?1)+活性炭 (1.0~1.5 g·L?1);
芽增殖培養基:WPM+BA(1.5mg·L?1) +KT (1.0mg·L?1) +TDZ(0.2mg·L?1)+NAA (0.3mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (20g·L?1) +活性炭 (1.0~1.5 g·L?1);
壯苗培養培養基:WPM+BA(1.5mg·L?1) +KT (1.0mg·L?1) +TDZ(0.2mg·L?1)+NAA (0.5mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (30g·L?1) +活性炭 (1.5~2.0 g·L?1);
    生根培養基:1/2 WPM + NAA (0.3mg·L?1) +IBA (1.0mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (30g·L?1) +活性炭 (1.5~2.0g·L?1);
     培養基厚度均為1.4~1.6cm;
3) 材料的消毒處理:先對種子材料用機械力去除堅硬的種子生長點外殼的1/3部分,用自來水沖洗,置飽和漂白粉上清液中浸泡,并用輕輕刷洗種子外殼,浸泡刷洗干凈后,在自來水下滴沖0.5?1h后,再雙蒸水沖洗,之后置超凈工作臺用75%的酒精消毒30s后倒去酒精,加入0.1%wt升汞溶液浸泡13~15min后倒去升汞溶液,用無菌水沖4~6遍后,用消毒濾紙吸干種子材料表面水分;
4) 胚芽誘導培養:取步驟3)處理后的種子材料接種于經滅菌的胚芽誘導培養基中;胚芽誘導的培養條件:溫度為25±2℃,前10~15天暗培養,16天以后光強度為1000~1500lx,光照時間12h/d,胚芽誘導時間:暗培養10~15天后,再培養10~20天;
5) 增殖培養:將經步驟4)胚芽誘導培養所得到的生長良好的芽切成1~2cm長的帶液芽莖段,接種在增殖培養基中進行增殖培養;所述增殖培養的條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度為1500~2000lx,增殖培養時間25~45天;
6)壯苗培養:將經增殖培養所得到的生長良好的完整植株單株切下,帶有1~2片葉子,株高1~1.5cm,轉移到壯苗培養基中;所述壯苗培養的培養條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度:光照強度為1500~2000lx,壯苗培養時間20~30天;
 7)誘導生根:將壯苗培養出來的幼苗單株,帶有2~3片葉子,株高1~2cm,轉移到生根培養基中;所述生根培養的培養條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度:光照強度為1500~2000lx,生根培養時間25~35天;
8)試管苗完成:當誘導生根培養出的試管苗生長至3~4cm高,有3~5條根,3~6片葉片,葉長2~3cm時,完成紅豆樹離體胚培養及植株再生的試管苗培養;
    9) 瓶苗移栽:將步驟8)完成的試管苗放在自然光下煉苗3~5天,再打開瓶蓋進行煉苗2天;然后從培養瓶中取出,洗去附著在根系的培養基,移入蛭石和腐殖土以質量比1:2混合的基質中,放置在溫度15~30℃,濕度在75%~85%,避免陽光直射的環境下培養,獲得的紅豆樹種苗。
 
本發明的顯著優點是:采用本發明方法進行,胚經過誘導培養,20~35天即可萌發生長出健壯的胚芽;再經過25~45天增殖培養和20~30天壯苗培養,經25~35天誘導生根后即可成苗、移栽,成活率高達95%以上;擴繁系數在16倍以上,該培養方法擴繁系數較高,增殖時間短,成苗移植后成活率高苗木成活后生長健壯,長勢良好。
 
附圖說明
圖1 本發明紅豆樹種子去除堅硬外殼后生長成的胚狀體
圖2本發明紅豆樹種子胚狀體生長成的胚芽
圖3本發明增殖繁殖的胚芽莖段組織
圖4紅豆樹胚芽莖段組織形成的叢芽
圖5紅豆樹形成根系的植株
圖6移栽成活的紅豆樹苗
具體實施方式
為了使本發明所述的內容更加便于理解,下面結合具體實施方式對本發明所述的技術方案做進一步的說明,但是本發明不僅限于此。
實施例 1
1)取材方法:選取當年結實的籽粒飽滿的鄂西紅豆樹紅豆樹種子為材料,采摘后用濕布包好,帶回實驗室后用洗滌劑漂洗干凈,再置于流水中沖滴。
2)培養基的配制:按以下配方配制各個培養基:
胚芽誘導培養基:WPM+BA(1.0mg·L?1)+KT (0.5mg·L?1)+NAA (0.1mg·L?1)+瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (20g·L?1)+活性炭 (1.0~1.5 g·L?1);
芽增殖培養基:WPM+BA(1.5mg·L?1) +KT (1.0mg·L?1) +TDZ(0.2mg·L?1)+NAA (0.3mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (20g·L?1) +活性炭 (1.0~1.5 g·L?1);
壯苗培養培養基:WPM+BA(1.5mg·L?1) +KT (1.0mg·L?1) +TDZ(0.2mg·L?1)+NAA (0.5mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (30g·L?1) +活性炭 (1.5~2.0 g·L?1);
    生根培養基:1/2 WPM + NAA (0.3mg·L?1) +IBA (1.0mg·L?1) + 瓊脂 (6.0g·L?1) +Su (30g·L?1) +活性炭 (1.5~2.0g·L?1);
     培養基厚度均為1.4~1.6cm;
3) 材料的消毒處理:先對種子材料用機械力去除堅硬的種子生長點外殼的1/3部分,用自來水沖洗,置飽和漂白粉上清液中浸泡,并用輕輕刷洗種子外殼,浸泡刷洗干凈后,在自來水下滴沖0.5?1h后,再雙蒸水沖洗,之后置超凈工作臺用75%的酒精消毒30s后倒去酒精,加入0.1%wt升汞溶液浸泡13~15min后倒去升汞溶液,用無菌水沖4~6遍后,用消毒濾紙吸干種子材料表面水分;
4) 胚芽誘導培養:取步驟3)處理后的種子材料接種于經滅菌的胚芽誘導培養基中;胚芽誘導的培養條件:溫度為25±2℃,前10~15天暗培養,16天以后光強度為1000~1500lx,光照時間12h/d,胚芽誘導時間:暗培養10天后,再培養20天;
5) 增殖培養:將經步驟4)胚芽誘導培養所得到的生長良好的芽切成1~2cm長的帶液芽莖段,接種在增殖培養基中進行增殖培養;所述增殖培養的條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度為1500~2000lx,增殖培養時間30天;
6)壯苗培養:將經增殖培養所得到的生長良好的完整植株單株切下,帶有1~2片葉子,株高1~1.5cm,轉移到壯苗培養基中;所述壯苗培養的培養條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度:光照強度為1500~2000lx,壯苗培養時間25天;
 7)誘導生根:將壯苗培養出來的幼苗單株,帶有2~3片葉子,株高1~2cm,轉移到生根培養基中;所述生根培養的培養條件:培養室溫度為25±2℃,光照時間12h/d,光照強度:光照強度為1500~2000lx,生根培養時間30天;
8)試管苗完成:當誘導生根培養出的試管苗生長至3~4cm高,有3~5條根,3~6片葉片,葉長2~3cm時,完成紅豆樹離體胚培養及植株再生的試管苗培養;
    9) 瓶苗移栽:將步驟8)完成的試管苗放在自然光下煉苗5天,再打開瓶蓋進行煉苗2天;然后從培養瓶中取出,洗去附著在根系的培養基,移入蛭石和腐殖土以質量比1:2混合的基質中,放置在溫度15~30℃,濕度在75%~85%,避免陽光直射的環境下培養,獲得的紅豆樹種苗。
 

關 鍵 詞:
一種 紅豆 樹離體胚 培養 植株 再生 方法
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