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無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201510170617.2

申請日:

20150410

公開號:

CN106134758A

公開日:

20161123

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01G1/04,A01K67/04 主分類號: A01G1/04,A01K67/04
申請人: 北京銀橋綠色農業科技有限公司,王蔭槐
發明人: 宋德銀,王蔭槐
地址: 102200 北京市昌平區南邵鎮昌崔路79號
優先權: CN201510170617A
專利代理機構: 北京中偉智信專利商標代理事務所 代理人: 張岱
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201510170617.2

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開一種無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法。為解決現有技術中蟲草素的含量低等問題而發明。所述的方法包括將注射蛹蟲草菌液后得到的僵硬化無菌蠶切成兩片以上的步驟。按照上述方法,提高了僵化蠶與空氣接觸的面積,能促使菌絲體和孢子梗的生長,從而可提高蟲草素的含量和產量;經檢測,蟲草素的含量較現有技術提高20%以上,產量提高30%以上。

權利要求書

1.一種無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,至少包括將注射蛹蟲草菌液后得到的僵化無菌蠶切成兩片以上的步驟。2.如權利要求1所述的無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,將所述的僵化的無菌蠶縱向剖開腹部,並均等地切成3片。3.如權利要求1所述的無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,所述的僵化無菌蠶是按下述方法制備的:(1)制備全封閉無菌隔離器;(2)將蠶卵經75%乙醇和4%甲醛滅菌后傳入隔離器內繼續孵化;(3)將孵出的蠶收集在人工飼料上;在溫度27±2℃、濕度70~90%、黑暗條件下,飼養至5齡備用;(4)在隔離器內,給所述的5齡備用蠶每條腹腔注射0.2ml蛹蟲草菌液;(5)經過2-5天后,得到死亡并僵化蠶。4.如權利要求2所述的無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,所述的蠶為5齡第4~7天。5.如權利要求1、2、3或4所述的無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,還包括一個保護的步驟:將切片的無菌僵化蠶置溫度20±1℃,濕度90%左右,黑暗條件下保護8-15天。6.如權利要求5所述的無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,還包括一個步驟:將保護后的切片的無菌僵化蠶轉入夜間溫度16~18℃;白天22~24℃;濕度100%,明暗相間保護,持續40~60天。7.一種蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,至少包括將注射蛹蟲草菌液后得到的僵化蠶切成兩片以上的步驟。8.如權利要求1所述的無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,將所述的僵化的蠶縱向剖開腹部,並均等地切成3片。9.如權利要求1所述的蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,所述的僵硬化無菌蠶是按下述方法制備的:(1)將蠶卵經75%乙醇和4%甲醛滅菌后進行孵化;(3)將孵出的蠶收集在人工飼料上;在溫度27±2℃、濕度70~90%、黑暗條件下,飼養至5齡第4~7天備用;(4)在隔離器內,給所述的5齡第4~7天備用蠶每條腹腔注射0.2ml蛹蟲草菌液;(5)經過2-5天后,得到死亡并僵化蠶。10.如權利要求7、8或9所述的蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,其特征在于,還包括下述步驟:將切片的僵化蠶置溫度20±1℃,濕度90%左右,黑暗條件下保護8-15天;將保護后的切片的僵化蠶轉入夜間溫度16~18℃;白天22~24℃;濕度100%,明暗相間保護,持續40~60天。

說明書

技術領域:

本發明涉及一種無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法

背景技術:

目前蛹蟲草的培育方法有以下幾種:蛹蟲草菌置液體培養基中進行發酵,以獲取蛹蟲草菌絲體。既無蟲也無孢子梗(草)。蛹蟲草菌置固體培養基中培育,以獲取蛹蟲草孢子梗。既無蟲也無菌絲體。以普通蠶和蛹為蛹蟲草菌的宿主,可培育出既有蟲、菌絲體和孢子梗—體的蠶蟲草。其不足在于棲息在蠶和蛹上的眾多其他生物體易引起蠶和蛹體污染腐敗不易成功。克服辦法是在生產過程中引入防腐劑或抗生素。在蠶蟲草生產過程中使用防腐劑或抗生素是不符合食品藥品規范的。

為解決上述問題,中國專利申請公布號CN 103798058 A,名稱《一種無菌蠶蟲草的培育方法》的發明專利公開了一種無菌環境下培育蠶蟲草的方法,這種方法排除了蠶體本身體內的多種微生物對蟲草生長的影響,較普通桑葉育家蠶幼蟲的接種僵化率、出草率高,并且培養出的蠶蟲草有效成分更高這種方法提高了僵化率和蠶蟲草的產量。但是這種方法對設備要求較高,且培育蠶蟲草的產量以及蟲草素的含量還有待進一步的提高。

發明內容:

為克服上述缺陷,本發明的目的在于提供一種提高蠶蟲草的產量的無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法。

為達到上述目的,本發明無菌蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法至少包括將注射蛹蟲草菌液后得到的僵硬化無菌蠶切成兩片以上的步驟。

優選地,將所述的僵硬化的無菌蠶縱向剖開腹部,並均等地切成3片。

優選地,所述的僵硬化無菌蠶是按下述方法制備的:

(1)制備全封閉無菌隔離器;

(2)將蠶卵經75%乙醇和4%甲醛滅菌后傳入隔離器內繼續孵化;

(3)將孵出的蠶收集在人工飼料上;在溫度27±2℃、濕度70~90%、黑暗條件下,飼養至5齡備用;

(4)在隔離器內,給所述的5齡備用蠶每條腹腔注射0.2ml蛹蟲草菌液;

(5)經過2-5天后,得到死亡并僵化蠶。

優選地,所述的蠶為5齡第4~7天。

優選地,還包括一個保護的步驟:將切片的無菌蠶置溫度20±1℃,濕度90%左右,黑暗條件下保護8-15天。

優選地,還包括一個保護的步驟:將保護后的切片的無菌蠶轉入夜間溫度16~18℃;白天22~24℃;濕度100%,明暗相間保護,持續40~60天。

為達到上述目的,本發明蠶接種蛹蟲草菌培育蠶蟲草方法,至少包括將注射蛹蟲草菌液后得到的僵化蠶切成兩片以上的步驟。

優選地,將所述的僵化的蠶縱向剖開腹部,並均等地切成3片。

優選地,所述的僵硬化無菌蠶是按下述方法制備的:

(1)將蠶卵經75%乙醇和4%甲醛滅菌后進行孵化;

(3)將孵出的蠶收集在人工飼料上;在溫度27±2℃、濕度70~90%、黑暗條件下,飼養至5齡第4~7天備用;

(4)在隔離器內,給所述的5齡第4~7天備用蠶每條腹腔注射0.2ml蛹蟲草菌液;

(5)經過2-5天后,得到死亡并僵化蠶。

優選地,還包括下述步驟:將切片的僵化蠶置溫度20±1℃,濕度90%左右,黑暗條件下保護8-15天;將保護后的切片的僵化蠶轉入夜間溫度16~18℃;白天22~24℃;濕度100%,明暗相間保護,持續40~60天。

按照上述方法,提高了僵化蠶與空氣接觸的面積,能促使菌絲體和孢子梗的生長,從而可提高蟲草素的含量和產量;經檢測,蟲草素的含量較現有技術提高20%以上,產量提高30%以上。

具體實施方式

本發明的方法是將注射蛹蟲草菌液后得到的僵硬化無菌蠶切成兩片以上,提高了僵化蠶與空氣接觸的面積,能促使菌絲體和孢子梗的生長,從而可提高蟲草素的含量和產量;。經過實驗,這種方法在無菌環境和非無菌環境下,均能大幅提高同等環境下無菌蠶蛹蟲草的產量和蟲草素的含量。為了便于說明,本發明下述的實施例均以無菌環境下培育蛹蟲草為例。

所述的僵硬化無菌蠶,可以沿長度方向無菌蠶縱向剖開腹部,並均等地切成2-5片;也可垂直于蠶的軸向切成若干片。

實施例1

制備全封閉無菌隔離器;

將蠶卵經75%乙醇和4%甲醛滅菌后傳入隔離器內繼續孵化;

將孵出的蠶收集在人工飼料上;在溫度27±2℃、濕度70~90%、黑暗條件下,飼養至5齡第6-7天備用;

在隔離器內,給所述的5齡第6-7天備用蠶每條腹腔注射0.2ml蛹蟲草菌液;經過2-5天后,得到死亡并僵化蠶。將僵化蠶沿長度方向縱向剖開腹部,并均等地切成3片;

將切片的無菌蠶置溫度20±1℃,濕度90%左右,黑暗條件下保護10天。

經10天保護的僵硬蠶轉入夜間溫度16~18℃;白天22~24℃;濕度100%,明暗相間保護,持續50天。其間菌絲體由少漸增多,顏色由白色漸成黃色至橙黃色,蠶體開始萌發孢子梗原基并逐漸長成長短不等、粗細不同的橙黃色孢子梗。無菌蠶蟲草孢子梗多為叢生,萌發率可達95%以上。

用無菌蠶作為蛹蟲草菌的宿主,既可避免防腐劑和抗生素的使用,且可常年培育高效、優質、環保蠶蟲草。無菌隔離器是個全封閉的屏障系統,經用2%過氧乙酸滅菌后,無菌度可達100%以上,保證無菌蠶飼養的絕對安全。凡傳入隔離器的物品、飼料、飲水..等均必須嚴格滅菌。最終培育蠶蟲草的蟲草素的含量較現有技術提高20%以上,蠶蟲草產量較現有技術提高30%以上。.

實施例2

制備全封閉無菌隔離器;

將蠶卵經75%乙醇和4%甲醛滅菌后傳入隔離器內繼續孵化;

將孵出的蠶收集在人工飼料上;在溫度27±2℃、濕度70~90%、黑暗條件下,飼養至5齡第4-5天備用;

在隔離器內,給所述的5齡第4-5天備用蠶每條腹腔注射0.2ml蛹蟲草菌液;經過2-5天后,得到死亡并僵化蠶。將僵化蠶垂直于蠶的軸向切成若干片,每片2-3毫米;

將切片的無菌蠶置溫度20±1℃,濕度90%左右,黑暗條件下保護10天。

經10天保護的僵硬蠶轉入夜間溫度16~18℃;白天22~24℃;濕度100%,明暗相間保護,持續50天。其間菌絲體由少漸增多,顏色由白色漸成黃色至橙黃色,蠶體開始萌發孢子梗原基并逐漸長成長短不等、粗細不同的橙黃色孢子梗。無菌蠶蟲草孢子梗多為叢生,萌發率可達95%以上。

用無菌蠶作為蛹蟲草菌的宿主,既可避免防腐劑和抗生素的使用,且可常年培育高效、優質、環保蠶蟲草。無菌隔離器是個全封閉的屏障系統,經用2%過氧乙酸滅菌后,無菌度可達100%以上,保證無菌蠶飼養的絕對安全。凡傳入隔離器的物品、飼料、飲水..等均必須嚴格滅菌。最終培育蠶蟲草的蟲草素的含量較現有技術提高20%以上,最高達到18.5mg/g,蠶蟲草產量較現有技術提高30%以上。

關 鍵 詞:
無菌 接種 蟲草 培育 方法
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