鬼佬大哥大
  • / 6
  • 下載費用:30 金幣  

河蚌三倍體純系高效育成方法.pdf

關 鍵 詞:
河蚌 三倍 體純系 高效 育成 方法
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
摘要
申請專利號:

CN201610495711.X

申請日:

20160630

公開號:

CN106172090A

公開日:

20161207

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01K61/00 主分類號: A01K61/00
申請人: 湖南文理學院
發明人: 楊品紅,羅玉雙,劉飛
地址: 415000 湖南省常德市武陵區洞庭大道西段388號
優先權: CN201610495711A
專利代理機構: 常德市源友專利代理事務所 代理人: 江妹
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201610495711.X

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種河蚌三倍體純系高效育成方法,包括如下步驟:他莫昔芬喂養料的配備、對母蚌進行投喂他莫昔芬喂養料、熱休克處理、雌激素抑制劑溶液配制、雌激素抑制劑溶液泡浴、獲得河蚌的雄性四倍體純系、采用回交的方式,獲得三倍體。通過此方法,可獲得100%的河蚌三倍體純系,提高了三倍體的育成率與出苗率,減少了育種與選種的麻煩,更主要是對自然水產品種種質和生態環境無污染。

權利要求書

1.河蚌三倍體純系高效育成方法,包括如下步驟:(1)他莫昔芬喂養料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑,加入到河蚌人工飼養飼料中,制成喂養料,其中他莫昔芬含量為10~20g/500g喂養料,待用;(2)投喂:在母蚌產卵前5~10天,按常規飼料投喂方法對母蚌進行投喂他莫昔芬喂養料,每天兩次,早上8:00每100g母蚌投喂5~10g,下午6:00每100g母蚌投喂8~10g;至其卵發育成熟,然后,取公蚌在吊養在一起,使其自然產卵受精,得受精“懷卵”母蚌;(3)熱休克處理:觀察“懷卵”母蚌受精卵的發育情況,在受精卵第一次卵裂前2~3min,把上述“懷卵”母蚌放入溶氧達5~8mg/l、溫度為39~42℃恒溫水中,熱休克3~5min,待用;(4)雌激素抑制劑溶液配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中,再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液,其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為120~240mg/l,睪酮的濃度為10~50mg/l;(5)取步驟(3)處理后的“懷卵”母蚌,放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中,常溫泡浴90~150S,“懷卵”母蚌與溶液重量比為1:2,通過充氧,使溶液中的氧氣含量達5~10mg/l;(6)取步驟(5)處理后的“懷卵”母蚌,放入育苗池中進行常規培育;直至產出鉤介幼蟲,寄生到魚體,再脫落,形成仔蚌,從而獲得河蚌的雄性四倍體純系;(7)三倍體河蚌的獲得:取步驟(6)的雄性四倍體作為父本,取普通二倍體作為母本,采用回交的方式,獲得100%三倍體。

說明書

技術領域

本發明涉及河蚌的多倍體繁育方法,具體涉及河蚌的三倍體純系高效育成方法。

背景技術

河蚌,又名河歪、河蛤蜊、鳥貝、西施舌等,屬于軟體動物門瓣鰓綱蚌科,是一種以濾食藻類為生的貝殼類水生動物。常見的有角背無齒蚌、褶紋冠蚌、三角帆蚌、麗蚌等數十種,我國大部分地區的河湖水泊中有出產。河蚌肉質特別脆嫩可口,是筵席之佳肴,更是人工育珠的好材料。河蚌的繁殖,雌蚌成熟的卵經生殖孔排至身體外套腔中;雄蚌成熟的精子由輸精管經生殖孔排至鰓上腔,再經出水管排到體外水體中。精子隨水進入雌蚌外套腔中與待孕的卵結合,完成受精,受精卵就在母蚌的左右兩側外鰓瓣上進行胚胎發育,以下稱為“懷卵”母蚌。三倍體河蚌的不育特征,使其在生長速度、抗逆性、抗病性以及肉質等方面表現出更為顯著的優勢。現有技術中,到目前為止,還未見用此中方法生產三倍體河蚌的方法,更未見用全雄四倍體與二倍體母本回交的先例。

發明內容

針對上述現有技術存在的不足,本發明的目的是提供一種方法穩定、種群純度高達100%的河蚌三倍體純系高效育成方法。

為達到上述目的,本發明的技術方案如下:

河蚌三倍體純系高效育成方法,包括如下步驟:

(1)他莫昔芬喂養料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑,加入到河蚌人工飼養飼料中,制成喂養料,其中他莫昔芬含量為10~20g/500g喂養料,待用;

(2)投喂:在母蚌產卵前5~10天,按常規飼料投喂方法對母蚌進行投喂他莫昔芬喂養料,每天兩次,早上8:00每100g母蚌投喂5~10g,下午6:00每100g母蚌投喂8~10g;至其卵發育成熟,然后,取公蚌在吊養在一起,使其自然產卵受精,得受精“懷卵”母蚌;

(3)熱休克處理:觀察“懷卵”母蚌受精卵的發育情況,在受精卵第一次卵裂前2~3min,把上述“懷卵”母蚌放入溶氧達5~8mg/l(通過人工充氧)、溫度為39~42℃恒溫水中,熱休克3~5min,待用;

(4)雌激素抑制劑溶液配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中,再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液,其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為120~240mg/l,睪酮的濃度為10~50mg/l;

(5)取步驟(3)處理后的“懷卵”母蚌,放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中,常溫泡浴90~150S,“懷卵”母蚌與溶液重量比為1:2,通過充氧,使溶液中的氧氣含量達5~10mg/l;

(6)取步驟(5)處理后的“懷卵”母蚌,放入育苗池中進行常規培育;直至產出鉤介幼蟲,寄生到魚體,再脫落,形成仔蚌,從而獲得河蚌的雄性四倍體純系;

(7)三倍體河蚌的獲得:取步驟(6)的雄性四倍體作為父本,取普通二倍體作為母本,采用回交的方式,獲得100%三倍體。

本發明的優點:1、本發明中在母本中注射他莫昔芬,起到抑制DNA復制和促雄性的雙重作用的同時,推延了受精卵第一次卵裂的時間(3-5min)和提高了同步程度(高達99%),為操作下一步提供時間保障和奠定染色體加倍的基礎;2、采用熱休克短時間處理受精卵,有效降低對長時間熱休克對受精卵的破壞作用,提高受精卵的成活率;3、雌激素抑制劑溶液浸泡,再一次強化與保證雄性轉化率;4、用純系的雄性四倍體與原有的雌性二倍體回交,有效保證了三倍體的純度。因而通過此方法,可獲得100%的河蚌三倍體純系,提高了三倍體的育成率與出苗率,減少了育種與選種的麻煩,更主要是對自然水產品種種質和生態環境無污染。

具體實施方式

現結合具體實施例,對本發明作進一步描述。

實施例一

河蚌三倍體純系高效育成方法,包括如下步驟:

(1)他莫昔芬喂養料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑,加入到河蚌人工飼養飼料中,制成喂養料,其中他莫昔芬含量為10g/500g飼料,待用;

(2)投喂:在母蚌產卵前5天,按常規飼料投喂方法對母蚌進行投喂他莫昔芬喂養料,每天兩次,早上8:00每100g母蚌投喂10g,下午6:00每100g母蚌投喂10g;至其卵發育成熟,然后,取公蚌在吊養在一起,使其自然產卵受精,得受精“懷卵”母蚌;

(3)熱休克處理:觀察“懷卵”母蚌受精卵的發育情況,在受精卵第一次卵裂前3min,把步驟(2)中的“懷卵”母蚌放入溶氧達8mg/l(通過人工充氧)、溫度為42℃恒溫水中,熱休克3min,待用;

(4)雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于90%的乙醇中,再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液,其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為200mg/l,睪酮的濃度為40mg/l;

(5)取步驟(3)處理后的“懷卵”母蚌,放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中,常溫泡浴120S,“懷卵”母蚌與溶液比為1:2,通過充氧,使溶液中的氧氣含量達10mg/l;

(6)取步驟(5)處理后的“懷卵”母蚌,放入育苗池中進行常規培育,直至產出鉤介幼蟲,寄生到魚體,再脫落,形成仔蚌,從而獲得河蚌的雄性四倍體純系;

(7)三倍體河蚌的獲得:取步驟(6)的雄性四倍體作為父本,取普通二倍體作為母本,采用回交的方式,獲得100%三倍體。

實施例二

河蚌三倍體純系高效育成方法,包括如下步驟:

(1)他莫昔芬喂養料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑,加入到河蚌人工飼養飼料中,制成喂養料,其中他莫昔芬含量為20g/500g飼料,待用;

(2)投喂:在母蚌產卵前10天,按常規飼料投喂方法對母蚌進行投喂他莫昔芬喂養料,每天兩次,早上8:00每100g母蚌投喂5g,下午6:00每100g母蚌投喂8g;至其卵發育成熟,然后,取公蚌在吊養在一起,使其自然產卵受精,得受精“懷卵”母蚌;

(3)熱休克處理:觀察“懷卵”母蚌受精卵的發育情況,在受精卵第一次卵裂前2min,把步驟(2)中的“懷卵”母蚌放入溶氧達5mg/l(通過人工充氧)、溫度為39℃恒溫水中,熱休克3min,待用;

(4)雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于90%的乙醇中,再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液,其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為240mg/l,睪酮的濃度為50mg/l;

(5)取步驟(3)處理后的“懷卵”母蚌,放入用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中,常溫泡浴90S,“懷卵”母蚌與溶液比為1:2,通過充氧,使溶液中的氧氣含量達10mg/l;

(6)取步驟(5)處理后的“懷卵”母蚌,放入育苗池中進行常規培育,直至產出鉤介幼蟲,寄生到魚體,再脫落,形成仔蚌,從而獲得河蚌的雄性四倍體純系;

(7)三倍體河蚌的獲得:取步驟(6)的雄性四倍體作為父本,取普通二倍體作為母本,采用回交的方式,獲得100%三倍體。

上述兩個實施例僅為本發明的優選方案之二,并不能限制本發明的保護范圍,任意與本發明等同或相似的技術手段視為本發明的保護范圍。以下附上本發明部分處理方式及結果統計。

附:河蚌三倍體育成結果統計

注:上述結果是在母本產卵前10天投喂他莫昔芬,受精卵第一次卵裂前2min、溶氧達5mg/l、熱休克3min,雌激素抑制劑浸泡90s所取得的結果。

關于本文
本文標題:河蚌三倍體純系高效育成方法.pdf
鏈接地址:http://www.wwszu.club/p-6717252.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
鬼佬大哥大 6476132642936772444555187958495487755402894181905501351375698089513221820686169281913810144234796 (function(){ var bp = document.createElement('script'); var curProtocol = window.location.protocol.split(':')[0]; if (curProtocol === 'https') { bp.src = 'https://zz.bdstatic.com/linksubmit/push.js'; } else { bp.src = 'http://push.zhanzhang.baidu.com/push.js'; } var s = document.getElementsByTagName("script")[0]; s.parentNode.insertBefore(bp, s); })();