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一種改善仔豬免疫力的飼料添加劑.pdf

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一種 改善 仔豬 免疫力 飼料添加劑
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摘要
申請專利號:

CN201710748519.1

申請日:

20170828

公開號:

CN107348203A

公開日:

20171117

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A23K50/30,A23K20/111,A23K20/163 主分類號: A23K50/30,A23K20/111,A23K20/163
申請人: 佛山播恩生物科技有限公司
發明人: 郭麗,鄒新華,黃翔,陳俊才,倪冬嬌
地址: 528000 廣東省佛山市三水工業區大塘園48-6號地
優先權: CN201710748519A
專利代理機構: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 代理人: 劉娟娟
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710748519.1

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種改善仔豬免疫力的飼料添加劑,其中活性成分阿魏酸與豬苓多糖的重量比為(1:10)~(10:1)。與普通飼料添加劑相比,本發明的仔豬飼料添加劑制備方法簡單,配伍合理,療效顯著,能夠顯著改善仔豬免疫力。由于添加劑中無西藥成分,因此飼料添加劑無毒副作用,無耐藥性。

權利要求書

1.一種改善仔豬免疫力的飼料添加劑,其特征在于,其中活性成分阿魏酸與豬苓多糖的重量比為(1:10)~(10:1)。2.根據權利要求1所述的飼料添加劑,其特征在于,阿魏酸與豬苓多糖的重量比為(1:1)~(1:9)。3.根據權利要求2所述的飼料添加劑,其特征在于,阿魏酸與豬苓多糖的重量比為1:3。4.根據權利要求1所述的飼料添加劑,其特征在于,所述飼料添加劑進一步包括其他活性成分。5.根據權利要求4所述的飼料添加劑,其特征在于,所述其他活性成分選自氨基酸、維生素中的一種或兩種。6.根據權利要求5所述的飼料添加劑,其特征在于,所述氨基酸選自蛋氨酸、賴氨酸和/或蘇氨酸,所述維生素選自維生素A、維生素C和/或維生素E。7.權利要求1-6任一項所述的飼料添加劑在制備改善仔豬免疫力的飼料中的應用。8.根據權利要求7所述的應用,其特征在于,所述100重量份的飼料中,含有1-5重量%的飼料添加劑。

說明書

技術領域

本發明涉及飼料領域,具體涉及一種仔豬飼料添加劑。

背景技術

長期以來,斷奶仔豬疾病高發是嚴重困擾我國養豬業發展的重要原因。仔豬斷奶后,由于母乳被中斷,環境、飼料等的突然改變,造成各系統功能紊亂、機體免疫力下降,容易感染各種免疫抑制性疾病(如藍耳病病毒、豬瘟野毒偽狂犬病毒、圓環病毒等),造成仔豬斷奶后發病率和死亡率高等嚴重后果。

目前,國外主要通過調整飼糧組成(如高營養性、高適應性仔豬斷奶料)、溫控及其他環境的控制來防制仔豬斷奶綜合征。國內主要通過在飼料中添加抗生素類藥物來控制繼發感染,但容易造成耐藥性、仔豬免疫機能下降、藥物殘留及污染環境等弊端。

中藥制劑富含多種多糖等活性成分,在提高機體免疫力和抗病力方面有著顯著的作用,現已證明數百種中草藥有多方面的免疫活性,如促進免疫器官的生長發育,增強機體的細胞免疫和體液免疫,促進干擾素-γ、白細胞介素-2等細胞因子產生等作用,并且綠色、安全、不易產生耐藥性。因此,中草藥的開發利用已成為眾望所歸。

阿魏酸(ferulic acid),化學名為4-羥基-3-甲氧基苯丙烯酸,分子量194.18。阿魏酸溶于熱水,乙醇和乙酸乙酯,稍溶于乙醚,難溶于苯和石油醚。從化學結構上看,阿魏酸有順式和反式兩種立體異構體。阿魏酸的合成有半合成法、生物合成法及化學合成法。其中,半合成法以谷維素為原料,工藝簡單,收率可達,適于工業化生產。

現已發現,阿魏酸至少具有以下功能:抗血小板凝集和血栓、清除亞硝酸鹽、氧自由基、過氧化亞硝基、抗菌消炎、抗腫瘤、抗突變、增加免疫功能、增強人體精子活力和運動性等。

研究表明,阿魏酸具有很強抗氧化活性,對過氧化氫、超氧自由基、輕自由基、過氧化亞硝基都有強烈清除作用。阿魏酸不僅能清除自由基,且能調節人體生理機能,抑制產生自由基之酶,促進清除自由基的酶產生。阿魏酸能增加谷胱甘肽轉硫酶和醌還原酶活性,抑制酪氨酸酶活性。實驗研究還發現,阿魏酸能保護體內產生過氧化物,特別是羥自由基、一氧化氮造成的細胞損傷。

阿魏酸鈉能明顯抑制血小板聚集、抑制經色胺、血栓素(TXA2)樣物質釋放,選擇性抑制TXA2合成酶活性,使前列環素PGI2/TXA2比率升高。其抑制血栓素機制可能為:一是選擇性抑制血栓素合成酶;二是拮抗血栓素作用;三是通過抑制磷脂酶A2阻止花生四烯酸游離,從而阻止TXA2生成。另外,阿魏酸用于自發性高血壓大鼠短期和長期研究表明,阿魏酸有明顯降壓作用。當給麻痹自發性高血壓大鼠靜脈注射阿魏酸,其降低頸動脈壓效果與劑量呈依賴關系。另外,用NO合酶抑制劑LNAME3mg/kg預處理自發性高血壓大鼠后,靜注阿魏酸,阿魏酸降壓作用減弱,提示阿魏酸降壓效果可能與介導血管舒張有關。

近年來,阿魏酸抗結腸癌研究較多。科研人員采用偶氮甲烷(AOM)誘導F334鼠產生結腸癌,發現飼喂含有500mg/kg阿魏酸,異常病灶隱窩數下降27%。科研人員認為,阿魏酸抗癌活性與其能激活解毒酶如谷胱甘肽轉硫酶、醌還原酶活性有關。

阿魏酸對多種視網膜神經細胞均具有促增殖作用,細胞活性強度呈現劑量依賴性,對于小鼠視網膜神經細胞,阿魏酸在15.6-1000mg/L內均具有促細胞增殖作用。對于新生小牛和7個月人胚胎視網膜神經細胞,阿魏酸在125-1000mg/L內具有促細胞增殖作用。對7個月人胚胎視網膜神經細胞,阿魏酸在62.5-1000mg/L內具有促DNA合成作用,最佳效應濃度為500mg/L。腦源性神經營養因子(BDNF)在12.5-50μg/L內具有促細胞增殖作用,最佳效應濃度為50μg/L,阿魏酸對3種視網膜神經細胞促增殖作用明顯強于BDNF。阿魏酸能有效提高視網膜神經細胞活性,有望成為一種新的防治退行性視網膜病變有效成分。另外,阿魏酸能有效降低視網膜神經細胞內游離鈣水平,對于促進增殖和保護細胞具有重要作用。

豬苓(Polyporus umbellatus)在分類學上屬于擔子菌綱、無褶菌目、多孔菌科、多孔菌屬。它的干燥菌核稱為豬苓,是常用藥用真菌。豬苓藥用價值在我國古代早有應用和記載,至今已有2500多年藥用歷史,在國內外享有盛名。豬苓味甘、淡,性平,歸腎、膀胱經,功效利水滲濕,主治小便不利、水腫、泄瀉、淋濁、帶下。

豬苓之所以有如此之多的藥用價值是因其中含有大量的生物活性物質豬苓多糖。豬苓中提取的多糖是由10種以上單糖分子組成的高分子多糖,無甜味,溶于水而不溶于酒精。它與有甜味的單糖(葡萄糖等)和雙塘(蔗糖、乳糖、麥芽糖等)以及無甜味的淀粉、糖元、纖維素等低分子多糖均不同,它不僅是生物的主要能源,更重要的是它具有多方面的生物活性。研究發現,豬苓多糖具有抗衰老、能提高機體的非特異性免疫能力、能顯著地加強網狀內皮系統吞噬細胞的功能,增強B細胞對抗原刺激的反應,使癌細胞的生長受到抑制,它們的抑瘤作用機理不同于細胞毒類藥物的直接殺傷作用,而是通過提高機體免疫功能,間接抑制腫瘤的生長,為抗癌藥研究開辟了一條新途徑。

豬苓多糖能明顯提高小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬指數和吞噬率、淋巴細胞轉化率、E玫瑰花環率及EAC花環率,表明豬苓多糖可以通過提高巨噬細胞生物活性,淋巴細胞轉化能力,T細胞免疫活性等增強或促進小鼠的非特異性和特異性免疫功能。用MTT比色法檢測有或無豬苓多糖作用的腫瘤細胞S180培養上清,對ConA誘導的小鼠脾細胞增殖和IL-2產生,對小鼠脾細胞殺傷活性,以及CTLL-2細胞對IL-2反應性的影響。用流式細胞儀檢測該培養上清對小鼠脾細胞表面IL-2Rα表達的影響,結果表明豬苓多糖可抵消腫瘤上清的免疫抑制作用,下調腫瘤細胞S180合成和/或分泌免疫抑制物質。

豬苓多糖可以增強糖原異生酶活性,加速糖異生使荷癌鼠肝糖原積累增加,改善機體自穩狀態,同時使荷癌鼠亢進的皮質功能恢復正常。提示豬苓多糖有適應原作用,可能為其抗腫瘤作用的一個藥理基礎。豬苓多糖具有抑制腫瘤生長和增強荷瘤動物及腫瘤患者免疫功能的作用。豬苓多糖對小鼠S180瘤體的抑制率達50%-70%,瘤重抑制率達30%以上,約6%-7%荷瘤小鼠腫瘤完全消退,同時可增強荷瘤小鼠的免疫功能,使荷瘤小鼠脾淋巴樣細胞對瘤細胞的殺傷作用增強。研究發現豬苓多糖注射液可抵消S180腫瘤細胞培養上清的免疫抑制作用,下調腫瘤細胞S180合成和分泌免疫抑制物質而發揮抗瘤作用。通過豬苓多糖對結直腸癌Colon26細胞腫瘤免疫抑制的研究,表明豬苓多糖確實可以下調腫瘤細胞免疫抑制分子分泌,在一定程度上逆轉腫瘤細胞的免疫抑制,可能是其抗瘤效應機制之一。

豬苓多糖能減輕四氯化碳對小鼠肝臟的損傷,使肝組織病理損傷減輕、血清谷丙轉氨酶活性下降,防止肝6-磷酸葡萄糖磷酸酶和結合酸性磷酸酶活性降低。豬苓多糖在整體及體外肝勻漿試驗中均對四氯化碳引起的脂質過氧化作用增強無抑制作用,提示其保肝作用不在于抑制四氯化碳的激活或四氯化碳代謝的作用,具體機制有待進一步研究。豬苓多糖治療慢性乙型肝炎的療效較為肯定,無論豬苓多糖單獨應用,或是與其他中藥、乙肝疫苗、干擾素、拉米夫定等聯合應用,均可有效抑制乙肝病毒復制,提高HBeAg和HBV-DNA陰轉率、抗-HBe陽轉率,改善肝功能。尤其在與其他藥物聯合時可以從不同方面發揮治療作用,提高療效,并在一定程度上減輕他藥的不良反應,為中西醫結合治療慢性乙型肝炎開辟了一條新途徑。

豬苓多糖具有明顯的防治小鼠急性放射病的效果,有效劑量和時間都比較寬,而且照前照后,腹腔注射和口服都有防護效價,預防比治療效價高。豬苓多糖對受照小鼠的造血功能無保護作用,但能明顯提高受照小鼠腎上腺皮質的應激功能,因此豬苓多糖可能是通過調節垂體-腎上腺系統使機體處于應激狀態,從而增強抗輻射損傷的能力。豬苓多糖對環磷酰胺(CTX)產生的微核有一定抑制作用,能降低CTX致突變作用,并抑制突變細胞有絲分裂,減少微核產生,穩定和促進DNA修復,具有抗誘變作用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種能有效改善仔豬免疫力,且毒副作用低的仔豬飼料添加劑。

本發明解決上述問題所采用的技術方案是,提供一種改善仔豬免疫力的飼料添加劑,其中活性成分阿魏酸與豬苓多糖的重量比為(1:10)~(10:1)。

優選的,所述飼料添加劑中阿魏酸與豬苓多糖的重量比為(1:1)~(1:9)。

更優選的,阿魏酸與豬苓多糖的重量比為1:3。

優選的,所述豬苓多糖的制備方法如下:取豬苓加水于浸提,多次提取后合并上清液真空濃縮,用無水乙醇沉淀,沉淀物再溶于適量水中,用Sevag法脫蛋白,適量90%-95%乙醇沉淀,真空干燥得豬苓多糖。

更優選的,所述豬苓多糖的制備方法如下:取豬苓加10-20倍重量水于70-80℃浸提1-2小時,共提取1-3次,合并上清液真空濃縮,用5-10倍濃縮液體積的無水乙醇沉淀,沉淀物再溶于適量水中,用Sevag法脫蛋白,適量90%-95%乙醇沉淀,真空干燥得豬苓多糖。

優選的,所述飼料添加劑進一步包括其他活性成分。

更優選的,所述其他活性成分選自氨基酸、維生素等中的一種或多種。

最優選的,所述氨基酸為蛋氨酸、賴氨酸和/或蘇氨酸等,所述維生素為維生素A、維生素C和/或維生素E等。

本發明還提供一種上述飼料添加劑在制備改善仔豬免疫力的飼料中的應用。

優選的,所述100重量份的飼料中,含有1-5重量%的飼料添加劑。

本發明具有積極有益的效果:

令人驚奇的是,本發明意外發現將阿魏酸與豬苓多糖組合使用,對于改善仔豬免疫力具有協同增效的效果,配合其他活性成分使用效果更佳。

與普通飼料添加劑相比,本發明的豬飼料添加劑制備方法簡單,配伍合理,療效顯著,能夠顯著提高豬瘟抗體水平,增強B淋巴細胞的增殖反應,實驗證明對改善仔豬免疫力有特效;由于添加劑中無西藥成分,因此飼料添加劑無毒副作用,無耐藥性。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作更進一步的說明,但本發明的實施方式不限于此。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明,均為常規方法。

實施例1、豬苓多糖的提取

取豬苓加20倍重量的水于80℃浸提1小時,共提取3次,合并上清液真空濃縮,用5倍濃縮液體積的無水乙醇沉淀,沉淀物再溶于適量水中,用Sevag法脫蛋白,適量95%乙醇沉淀,真空干燥得豬苓多糖。

實施例2、飼料添加劑的制備

取阿魏酸5重量份,實施例1制備的豬苓多糖5重量份,混合后制成阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:1的飼料添加劑A1。

取阿魏酸2.5重量份,實施例1制備的豬苓多糖7.5重量份,混合后制成阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:3的飼料添加劑A2。

取阿魏酸1重量份,實施例1制備的豬苓多糖9重量份,混合后制成阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:9的飼料添加劑A3。

實施例3、本發明飼料添加劑在改善仔豬免疫力中的應用

1.試驗動物及分組處理

選取臨床健康、體質量相近的20日齡仔豬,采血檢測豬瘟母源抗體水平,挑選出抗體水平相近的仔豬60頭,隨機分成6組,即本發明中藥組合物組1-3(實施例2制備的飼料添加劑A1-A3)、阿魏酸組、豬苓多糖組和對照組。21日齡進行豬瘟兔化弱毒苗(購自上海海利生物技術有限公司)免疫。27-31日齡開始在A1-A3中藥組合物組、阿魏酸組、豬苓多糖組日糧中按照飼料總重量的1%添加上述飼料添加劑(每組加入的中藥活性成分總量相同),對照組的日糧為不添加上述飼料添加劑的相同重量的豬飼料,各組豬每日投喂3次。在55日齡對每組仔豬前腔靜脈采血各5mL,分離血清用于豬瘟抗體測定,全血用于B淋巴細胞增殖的測定。

2.試驗檢測指標和方法

(1)血清豬瘟抗體水平

采用ELISA法測定豬瘟抗體,參照豬瘟抗體檢測試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)說明書進行。

(2)血液B細胞增殖反應

采用MTT法進行。取各組濃度為1×106個/mL的淋巴細胞懸液加入96孔細胞培養板上,每孔加100μL,然后對照組每孔加入100μL RPMI 1640(購自IBCO公司)完全培養液,試驗組每孔加入100μL質量濃度為10mg/L LPS(購自sigma公司),每個樣品設置3個重復。37℃、5%CO2培養44h,每孔加入5g/L四甲基偶氮唑鹽(MTT)溶液10μL,培養4h后每孔再加入DMSO溶液100μL,繼續培養2h,使紫色結晶完全溶解,用酶聯免疫檢測儀在570nm波長下測定D值,作為淋巴細胞增殖的指標。

3.試驗結果

血清豬瘟抗體水平和淋巴細胞增殖指標試驗結果見表1。

表1各試驗組仔豬血清豬瘟抗體水平及B淋巴細胞增殖情況

由實施例3可以看出,與對照組相比,本發明的飼料添加劑能顯著提高仔豬血清中豬瘟抗體水平,改善B淋巴細胞增殖水平,是效果優異的仔豬免疫增強劑。特別是阿魏酸和豬苓多糖的組合使用產生了協同效果,減少了藥物的使用量,其中阿魏酸和豬苓多糖重量比為1:3的飼料添加劑效果最為突出,產生了難以預期的優異效果。

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