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一種補腎健腦的中藥組合物及其制備方法.pdf

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一種 補腎 中藥 組合 及其 制備 方法
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摘要
申請專利號:

CN201810094855.3

申請日:

20180131

公開號:

CN107998314A

公開日:

20180508

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審查中

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IPC分類號: A61K36/8994,A61P13/12,A61P25/00,A61P1/14,A61K35/30 主分類號: A61K36/8994,A61P13/12,A61P25/00,A61P1/14,A61K35/30
申請人: 吉林修正藥業新藥開發有限公司
發明人: 高嵩,白冰,徐建,石菊,郭文英,王偉
地址: 130012 吉林省長春市順達路1369號修正大廈4-6樓
優先權: CN201810094855A
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法律狀態
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CN201810094855.3

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法律狀態類型:

摘要

本發明涉及藥物領域,特別涉及組合物及其制備方法和應用。本發明提供了組合物包括動物腦、何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根、西洋參、紫蘇子和石菖蒲。實驗結果表明,本發明提供的組合物顯著降低腦組織中乙酸膽堿醋酶的活性,減少其對乙酞膽堿的降解,增加其含量,從而改善學習、記憶能力,且作用效果優于對照組。此外,本發明提供的組合物能減少海馬CAI神經細胞凋亡,而且本發明提供的組合物比對照組效果更為顯著。本發明通過觀測血管性癡呆大鼠給藥后血液流變學、腦內乙酞膽堿醋酶活性、海馬區神經細胞凋亡的觀察,確定本發明提供的組合物對改善學習、記憶能力作用,且作用效果優于對照組。

權利要求書

1.組合物,其特征在于,包括動物腦、何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根、西洋參、紫蘇子和石菖蒲。2.根據權利要求1所述的組合物,其特征在于,以質量份計,包括如下組分:3.根據權利要求1或2所述的組合物的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:步驟1:取動物腦經預處理,與水混合后勻漿、脫脂,過濾收集沉淀,去除溶劑,制得動物腦脫脂干粉;步驟2:取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,回流水解,冷卻,離心,收集沉淀和上清液,將所述上清液調節pH值,獲得沉淀A及上清液A;步驟3:取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,經胰蛋白酶酶解,滅酶,離心,過濾,分別收集沉淀和上清液,獲得沉淀B和上清液B;步驟4:合并所述沉淀A和所述沉淀B,經離子交換柱以30%氯化鈉溶液進行洗脫,收集洗脫液,制得提取物A;步驟5:合并所述上清液A與所述上清液B,用8000~12000道爾頓分子量的濾膜超濾,收集濾液,制得提取物B;步驟6:取何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根與水混合后回流提取,過濾,收集濾液過大孔吸附樹脂,經水洗脫,棄去洗脫液,再經60~80%乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,得提取物C;步驟7:取西洋參、紫蘇子、石菖蒲,混合后粉碎,過篩,得藥材細粉。4.根據權利要求3所述的制備方法,其特征在于,步驟2中所述pH值為2~5,所述回流水解的溫度為60~80℃,所述回流水解的時間為3~6h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min,所述上清液的pH值為至7~8。5.根據權利要求3或4所述的制備方法,其特征在于,步驟3中所述pH值為7.5~8,所述胰蛋白酶的酶活為2500~4000;所述酶解的溫度為30~60℃,所述酶解的時間為5~8h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min。6.根據權利要求3至5任一項所述的制備方法制得的組合物。7.組合物,其特征在于,以質量份計,包括如下組分:其中,所述提取物A的制備方法為動物腦經預處理,與水混合后勻漿、脫脂,過濾收集沉淀,去除溶劑,制得動物腦脫脂干粉;取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,回流水解,冷卻,離心,收集沉淀和上清液,將所述上清液調節pH值,獲得沉淀A及上清液A;取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,經胰蛋白酶酶解,滅酶,離心,過濾,分別收集沉淀和上清液,獲得沉淀B和上清液B;合并所述沉淀A和所述沉淀B,經離子交換柱以30%氯化鈉溶液進行洗脫,收集洗脫液,制得提取物A;所述提取物B的制備方法為:合并所述上清液A與所述上清液B,用8000~12000道爾頓分子量的濾膜超濾,收集濾液,制得提取物B;所述提取物C的制備方法為:取何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根與水混合后回流提取,過濾,收集濾液過大孔吸附樹脂,經水洗脫,棄去洗脫液,再經60~80%乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,得提取物C;其中,何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根的質量比為9:9:6:6:6:6:6;所述藥材細粉的制備方法為:取西洋參、紫蘇子、石菖蒲,混合后粉碎,過篩,得藥材細粉;其中,西洋參、紫蘇子、石菖蒲的質量比為1:9:9。8.根據權利要求7所述的組合物,其特征在于,所述提取物A的制備方法中,所述pH值為2~5,所述回流水解的溫度為60~80℃,所述回流水解的時間為3~6h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min,所述上清液的pH值為至7~8。9.根據權利要求7或8所述的組合物,其特征在于,所述提取物A的制備方法中,所述pH值為7.5~8,所述胰蛋白酶的酶活為2500~4000;所述酶解的溫度為30~60℃,所述酶解的時間為5~8h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min。10.根據權利要求1或2或6~9任一項所述的組合物在制備補腎和/或健腦的藥物中的應用。

說明書

技術領域

本發明涉及藥物領域,特別涉及一種補腎健腦的中藥組合物及其制備方法。

背景技術

腎臟是人體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以尿液的排出清除體內代謝物及某些廢物、毒素等,同時經重吸收功能保留水分及其他有用物質、如蛋白質、氨基酸、鈉離子、葡萄糖、鉀離子等,以調節水、電解質的平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能,生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內環境的問題,使新陳代謝得意正常進行。

隨著環境的日益惡化、市場競爭的加劇,人們的生活節奏越來越快,生活和工作壓力的增大,加之經常應酬和不合理的飲食結構,年輕人性欲無節度,極易造成腎臟虧虛。往往會出現肝腎陰虧,體力不支,腎虛痿痹的癥狀。肝腎陰虛證是肝腎兩臟陰液不足所致的病證。肝腎陰虛證同肝腎陰虛。多由久病及腎,或房事過度,情志內傷,精血不足,損傷肝腎之陰等引起。慢性肝炎、肝硬化、心腦血管疾病、慢性腎炎、更年期綜合征等,只要出現上述癥狀都可以按肝腎陰虛治療。肝腎陰虧表現為頭暈目眩,健忘耳鳴,失眠多夢,咽干口燥,腰膝酸軟,脅痛,五心煩熱,顴紅盜汗,男子遺精,女子月經量少或閉經,舌紅少苔,脈細數。肝腎陰虛,虛火上擾,頭目失于陰精的滋養,故見頭暈目眩,耳鳴健忘,口燥咽干;肝脈布于兩脅,肝陰不足,肝脈失養,故見脅痛;陰虛內熱,虛火上擾,故五心煩熱,盜汗顴紅,失眠多夢,男子遺精;沖任隸屬肝腎,肝腎陰傷,沖任空虛,故月經量少或閉經;舌紅少苔,脈細數也為陰虛內熱之象。

盡管目前補腎的藥物很多,但都是以西藥為主,中藥為輔。目前市場上的保護腎臟或補腎類西藥或保健品的種類繁多,缺補腎效果不佳、副作用大,甚至有些補腎藥物含有激素,造成人體內分泌紊亂,可能會對人體造成傷害。近年來,用中草藥材補腎的藥物相關的專利申請也有所增長,但很多并沒有辯證分類治療,中醫認為,腎虛分腎陰虛和腎陽虛,要根據不同的癥狀做不同的診治。腎虛多為長期積累成疾,切不可因急于求成而用大補之藥進補,而應慢慢調理。對于補腎的藥物市場的需求還很大,能夠進一步提高藥物的療效也是很多患者所期待的。因此提供療效好的補腎藥物具有重要的現實意義。

發明內容

有鑒于此,本發明提供了一種補腎健腦的中藥組合物及其制備方法。該組合物具有較好的補腎健腦功效。

為了實現上述發明目的,本發明提供以下技術方案:

本發明提供了組合物包括動物腦、何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根、西洋參、紫蘇子和石菖蒲。

在本發明的一些具體實施方案中,以質量份計,包括如下組分:

本發明還提供了組合物的制備方法,包括如下步驟:

步驟1:取動物腦經預處理,與水混合后勻漿、脫脂,過濾收集沉淀,去除溶劑,制得動物腦脫脂干粉;

步驟2:取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,回流水解,冷卻,離心,收集沉淀和上清液,將所述上清液調節pH值,獲得沉淀A及上清液A;

步驟3:取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,經胰蛋白酶酶解,滅酶,離心,過濾,分別收集沉淀和上清液,獲得沉淀B和上清液B;

步驟4:合并所述沉淀A和所述沉淀B,經離子交換柱以30%氯化鈉溶液進行洗脫,收集洗脫液,制得提取物A;

步驟5:合并所述上清液A與所述上清液B,用8000~12000道爾頓分子量的濾膜超濾,收集濾液,制得提取物B;

步驟6:取何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根與水混合后回流提取,過濾,收集濾液過大孔吸附樹脂,經水洗脫,棄去洗脫液,再經60~80%乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,得提取物C;

步驟7:取西洋參、紫蘇子、石菖蒲,混合后粉碎,過篩,得藥材細粉。

在本發明的一些具體實施方案中,步驟2中所述pH值為2~5,所述回流水解的溫度為60~80℃,所述回流水解的時間為3~6h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min,所述上清液的pH值為至7~8。

在本發明的一些具體實施方案中,步驟3中所述pH值為7.5~8,所述胰蛋白酶的酶活為2500~4000;所述酶解的溫度為30~60℃,所述酶解的時間為5~8h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min。

本發明還提供了上述的制備方法制得的組合物。

本發明還提供了組合物,以質量份計,包括如下組分:

其中,所述提取物A的制備方法為動物腦經預處理,與水混合后勻漿、脫脂,過濾收集沉淀,去除溶劑,制得動物腦脫脂干粉;

取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,回流水解,冷卻,離心,收集沉淀和上清液,將所述上清液調節pH值,獲得沉淀A及上清液A;

取所述動物腦脫脂干粉與水混合,調節pH值,經胰蛋白酶酶解,滅酶,離心,過濾,分別收集沉淀和上清液,獲得沉淀B和上清液B;

合并所述沉淀A和所述沉淀B,經離子交換柱以30%氯化鈉溶液進行洗脫,收集洗脫液,制得提取物A;

所述提取物B的制備方法為:合并所述上清液A與所述上清液B,用8000~12000道爾頓分子量的濾膜超濾,收集濾液,制得提取物B;

所述提取物C的制備方法為:取何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根與水混合后回流提取,過濾,收集濾液過大孔吸附樹脂,經水洗脫,棄去洗脫液,再經60~80%乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,得提取物C;其中,何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根以質量份計

最佳的質量比例為9:9:6:6:6:6:6;

所述藥材細粉的制備方法為:取西洋參、紫蘇子、石菖蒲,混合后粉碎,過篩,得藥材細粉;其中,西洋參、紫蘇子、石菖蒲以質量份計

最佳的質量比為1:9:9。

在本發明的一些具體實施方案中,所述提取物A的制備方法中,所述pH值為2~5,所述回流水解的溫度為60~80℃,所述回流水解的時間為3~6h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min,所述上清液的pH值為至7~8。

在本發明的一些具體實施方案中,所述提取物A的制備方法中,所述pH值為7.5~8,所述胰蛋白酶的酶活為2500~4000;所述酶解的溫度為30~60℃,所述酶解的時間為5~8h,所述離心的轉速為5000~8000r/min,所述離心的時間為5min。

在本發明的一些具體實施方案中,將提取物A、提取物B、提取物C、藥材細粉按組方比例混合,由上述組合物與藥學上可接收的載體或稀釋劑組成,所訴制劑為片劑,顆粒劑,膠囊劑。

本發明還提供了上述的組合物在制備補腎和/或健腦的藥物中的應用。

本發明提供了組合物包括動物腦、何首烏、丹參、薏苡仁、五味子、天麻、遠志、葛根、西洋參、紫蘇子和石菖蒲。本發明提供的組合物能明顯延長小鼠的潛伏期,減少錯誤反應的次數,縮短累加電擊時間,與吡拉西坦相近。行為學檢測結果表明,本發明提供的組合物的高、中劑量組逃避潛伏期優于腦復康組。此外,本發明提供的組合物高劑量組能提高大鼠在原平臺象限游泳時間和路徑與總游泳時間和路徑比(P<0.01,P<0.05),顯著提高大鼠在原平臺象限游泳時間和路徑與總游泳時間和路徑比(P<0.05),且同劑量比較,本發明提供的組合物比對照組提高的明顯。表明本發明提供的組合物提高學習記憶能力優于對照組。大鼠腦組織內乙酰膽堿酯酶含量比較結果顯示,與模型組相比,腦復康組、本發明提供的組合物高、中劑量組,腦組織乙酰膽堿脂酶含量明顯降低,存在顯著差異(P<0.05)。細胞凋亡實驗結果表明,與模型組相比,各給藥組海馬CAI區細胞凋亡數目不同程度減少,其中本發明提供的組合物高劑量組海馬CAI區神經細胞凋亡明顯減少(P<0.01),腦復康組、本發明提供的組合物中劑量和對照組海馬CAI區神經細胞凋亡有所減少(P<0.05)。

具體實施方式

本發明公開了一種補腎健腦的中藥組合物及其制備方法,本領域技術人員可以借鑒本文內容,適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是,所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的,它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述,相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合,來實現和應用本發明技術。

本病病位在腦,與肝、心、脾、腎等臟的功能也是密切相關,年老腎精虧損,七情內傷,久病不愈,損傷正氣,耗損氣血;或后天之本虛衰,致使氣血生化無源;先天之本虧虛,不能上沖腦髓,髓竅失養;痰濕、血瘀痹阻,氣血阻滯,脈絡不通,臟腑氣機不能上養腦脈;或濕熱之氣郁久,生熱化火,濁耗氣血、津液,使氣血虧虛,腎精不足,腦髓無以充養,逐漸空虛。其病機為精髓耗減,腦機失養。人至老年,腎精呈生理性減少,不能上養于腦,或年老氣血虧虛,不能濡養神元,逐漸發展為呆愚病癥。此病的發生是因為腦髓無以充養,終至虧虛,神明之府廢用的一類以呆滯、呆傻、愚笨、智能下降為主的神志失常的精神疾病。它的致病有痰、瘀、虛,互相錯雜,本虛標實,多伴虛實夾雜。主要病理是在腦部血供不足的基礎上導致的,而導致血供不足的主要原因恰恰又是一些腦部的血管疾病。隨著受損腦組織的增加,最終出現認知功能障礙。其發生的核心環節是記憶中樞-海馬環路的損害,其發生的主要原因為腦部血管性疾病致使所支持的中樞神經系統膽堿能損害,是因為膽堿能自身的傳遞障礙可引起腦部血流灌注不足,從而形成了它自身的前腦底核部位由于血供不足引起的缺血樣病變,神經元細胞的缺失損害。目前臨床上的治療藥物主要是CHEI、改善腦部血流循環、腦部細胞激活劑、神經細胞保護劑以及雌激素代替療法等。這些藥物雖有一定的療效但是存在缺點頗多,如療效不穩定,藥品價格昂貴等這些弊端。而祖國醫學對其卻有著獨特而豐富的認識,在治療等各方面都有著獨到的見解。如:病因病機、發病的癥狀、中醫對本病的治療等,中醫藥治療有著多方法、多靶點、整體治療、辯證治療以及毒副作用小的優勢,在治療此病中發揮的作用愈來愈大。中醫認為記憶力減退病位在腦,病性為本虛標實,虛實夾雜。外邪侵襲或者機體自身氣血紊亂,引起氣血功能障礙、失調,或氣血虧虛或氣滯血瘀,或痰濁痹阻,致使精虧髓虛,神明之府失去濡養,調控遲鈍,逐發為記憶力衰退,甚者為癡呆。

動物腦提取物含有小分子肽、神經生長因子等多種活性成分,可用于治療血管性認知障礙(VCI)、阿爾茨海默癥(AD)等一些腦功能性疾病,目前已有眾多的腦提取物產品進入臨床,國外生產的腦活素已被廣泛應用于血管性認知障礙(VCI)、阿爾茨海默病、腦中風、腦震蕩、腦損傷的治療,取得了一定的療效。

本實驗研究,對豬腦進行了提取與分離,旨在通過觀察本發明提供的組合物對血管性認知功能障礙大鼠行為學實驗(水迷宮法)和海馬區神經細胞凋亡影響,研究本發明提供的組合物對血管性認知障礙(VCI)模型大鼠的神經細胞凋落死亡的影響,找到藥物對疾病起作用基礎。

本發明采用血管阻斷法永久結扎雙側頸總動脈造模,造成大鼠慢性的腦缺血,使腦組織發生缺血、缺氧損害,尤其在易損區域,如大腦皮質和海馬區,缺血更為明顯。同時此造模方式操作簡單,創傷少,重復性好,可較好的模擬人類的慢性低灌注引起的腦缺血、缺氧,最終導致神經細胞功能下降,學習記憶功能障礙,和因動脈粥樣硬化,動脈管腔狹窄等原因造成的血管性癡呆基本相似,通過行為學試驗也證實模型大鼠存在明顯的學習、記憶障礙,是較理想造模方式。

在水迷宮實驗中,由定位航行試驗和空間探索試驗兩部分組成,定位航行試驗可以了解各組大鼠的學習能力,而空間探索試驗可以更全面的了解各組大鼠的學習、記憶能力。

學習、記憶等復雜生理過程的高級整合與神經遞質密切相關,特別是乙酞膽堿是進行及維持高級神經功能的重要介質之一,在血管性癡呆的發病過程中,腦組織中的神經遞質明顯減少,尤其是大腦皮層的乙酞膽堿的減少與血管性癡呆的智力下降有著密切的關系。本發明通過觀察各組大鼠腦組織內乙酰膽堿酯酶的含量變化,發現模型組的含量明顯增高,與空白組相比存在顯著差異,說明血管性癡呆大鼠腦組織內乙酸膽堿含量明顯減少。而本發明提供的組合物顯著降低腦組織中乙酸膽堿醋酶的活性,減少其對乙酞膽堿的降解,增加其含量,從而改善學習、記憶能力,且作用效果優于對照組。

近年研究發現不同的腦區神經元對缺血的敏感性不同,海馬結構是最為敏感的區域,特別是海馬CAI區是與空間辨別及學習記憶關系最為密切。通過TUNEL法可以準確的反映細胞凋亡最典型的形態特征,其敏感度和特異性都較高,目前被廣泛應用。本發明結果顯示模型組海馬CAI區細胞凋亡數明顯增多,而各給藥組細胞凋亡數目雖然較空白組細胞凋亡數目增多,但于模型組比較,有顯著減少,說明本發明提供的組合物能減少海馬CAI神經細胞凋亡,而且本發明提供的組合物比對照組效果更為顯著。

本發明通過觀測血管性癡呆大鼠給藥后血液流變學、腦內乙酞膽堿醋酶活性、海馬區神經細胞凋亡的觀察,確定本發明提供的組合物對改善學習、記憶能力作用,且作用效果優于對照組。

本發明提供的組合物及其制備方法和應用中所用原料及試劑均可由市場購得。

下面結合實施例,進一步闡述本發明:

實施例1

取健康豬腦2kg,除去結締組織,按豬腦與水溶液比例為1:1混合后,進行勻漿,將勻漿后的豬腦勻漿液與70%乙醇比例為1:0.8混合,將混合液置于反應釜中,恒溫25℃攪拌脫脂30分鐘后,過濾,收集沉淀,揮干溶劑,得豬腦脫脂干粉800g。

取豬腦脫脂干粉400g,加2000ml倍量水混勻,再加入6mol/L鹽酸調節Ph值為3,70℃熱回流水解5h,冷卻至室溫,以6500r/min的速度離心分離5min,收集沉淀,上清液再用6mol/L的氫氧化鈉溶液調節Ph至7.5,得到沉淀A及上清液A。

取豬腦脫脂干粉400g,加2000ml倍量水混勻,用1%的氫氧化鈉溶液調節脫脂干粉溶液Ph值在7.7,再加入豬腦脫脂干粉量16g的胰蛋白酶(2500IU/g酶活力),45℃恒溫酶解6.5h,煮沸30min滅活酶,冷卻以6500r/min的速度離心分離5min,過濾,分別收集沉淀及上清液。得到沉淀B及上清液B。

合并沉淀A與沉淀B,置離子交換柱(DEAE sepharose FF),以30%氯化鈉溶液進行洗脫,收集洗脫液,濃縮,干燥,得豬腦提取物A。

合并上清液A與上清液B,用10000道爾頓分子量濾膜進行超濾,收集濾液,濃縮,干燥、得豬腦提取物B。

取何首烏90g、丹參90g、薏苡仁60g、五味子60g、天麻60g、遠志60g、葛根60g,加入3840ml量水回流提取2次,每次60分鐘,濾過,濾液濃縮至0.5g生藥每毫升,通過處理過的大孔吸附樹脂,用3倍柱體積的水洗脫,棄去洗脫液,再用6倍柱體積的70%乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,50℃以下減壓濃縮,得提取物C。

取西洋參10g、紫蘇子90g、石菖蒲90g,混合后粉碎,過100目篩,得藥材細粉。

取提取物A18g、提取物B10g、提取物C50g、藥材細粉24g,混合至干法制粒機中,壓制顆粒。

實施例2

取健康豬腦4kg,除去結締組織,按豬腦與水溶液比例為1:1混合后,進行勻漿,將勻漿后的豬腦勻漿液與70%乙醇比例為1:0.8混合,將混合液置于反應釜中,恒溫25℃攪拌脫脂30分鐘后,過濾,收集沉淀,揮干溶劑,得豬腦脫脂干粉1600g。

取豬腦脫脂干粉800g,加2000ml倍量水混勻,再加入6mol/L鹽酸調節Ph值為2,60℃熱回流水解3h,冷卻至室溫,以5000r/min的速度離心分離5min,收集沉淀,上清液再用6mol/L的氫氧化鈉溶液調節Ph至7,得到沉淀A及上清液A。

取豬腦脫脂干粉800g,加2000ml倍量水混勻,用1%的氫氧化鈉溶液調節脫脂干粉溶液Ph值在7.5,再加入豬腦脫脂干粉量16g的胰蛋白酶(4000IU/g酶活力),30℃恒溫酶解5h,煮沸30min滅活酶,冷卻以5000r/min的速度離心分離5min,過濾,分別收集沉淀及上清液。得到沉淀B及上清液B。

合并沉淀A與沉淀B,置離子交換柱(DEAE sepharose FF),以30%氯化鈉溶液進行洗脫,收集洗脫液,濃縮,干燥,得豬腦提取物A。

合并上清液A與上清液B,用8000道爾頓分子量濾膜進行超濾,收集濾液,濃縮,干燥、得豬腦提取物B。

取何首烏180g、丹參180g、薏苡仁120g、五味子120g、天麻120g、遠志120g、葛根120g,加入7680ml量水回流提取2次,每次60分鐘,濾過,濾液濃縮至0.5g生藥每毫升,通過處理過的大孔吸附樹脂,用3倍柱體積的水洗脫,棄去洗脫液,再用4倍柱體積的60%乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,50℃以下減壓濃縮,得提取物C。

取西洋參20g、紫蘇子180g、石菖蒲180g,混合后粉碎,過100目篩,得藥材細粉。

取提取物A16g、提取物B8g、提取物C40g、藥材細粉16g,混合加入適量輔料,壓制成片。

實施例3

取健康豬腦4kg,除去結締組織,按豬腦與水溶液比例為1:1混合后,進行勻漿,將勻漿后的豬腦勻漿液與70%乙醇比例為1:0.8混合,將混合液置于反應釜中,恒溫25℃攪拌脫脂30分鐘后,過濾,收集沉淀,揮干溶劑,得豬腦脫脂干粉1600g。

取豬腦脫脂干粉800g,加2000ml倍量水混勻,再加入6mol/L鹽酸調節Ph值為5,80℃熱回流水解6h,冷卻至室溫,以8000r/min的速度離心分離5min,收集沉淀,上清液再用6mol/L的氫氧化鈉溶液調節Ph至8,得到沉淀A及上清液A。

取豬腦脫脂干粉800g,加2000ml倍量水混勻,用1%的氫氧化鈉溶液調節脫脂干粉溶液Ph值在8,再加入豬腦脫脂干粉量16g的胰蛋白酶(酶活力3200IU/g),60℃恒溫酶解8h,煮沸30min滅活酶,冷卻以8000r/min的速度離心分離5min,過濾,分別收集沉淀及上清液。得到沉淀B及上清液B。

合并沉淀A與沉淀B,置離子交換柱(DEAE sepharose FF),以30%氯化鈉溶液進行洗脫,收集洗脫液,濃縮,干燥,得豬腦提取物A。

合并上清液A與上清液B,用12000道爾頓分子量濾膜進行超濾,收集濾液,濃縮,干燥、得豬腦提取物B。

取何首烏180g、丹參180g、薏苡仁120g、五味子120g、天麻120g、遠志120g、葛根120g,加入7680ml量水回流提取2次,每次60分鐘,濾過,濾液濃縮至0.5g生藥每毫升,通過處理過的大孔吸附樹脂,用3倍柱體積的水洗脫,棄去洗脫液,再用4倍柱體積的80%乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液,50℃以下減壓濃縮,得提取物C。

取西洋參20g、紫蘇子180g、石菖蒲180g,混合后粉碎,過100目篩,得藥材細粉。

取提取物A20g、提取物B12g、提取物C60g、藥材細粉30g,混合加入適量輔料,壓制成片。

實施例4

根據下述提取物比例混合,制備成實驗組A-I。

表1組方篩選表

將不同組方比例實驗組進行藥效學對比:

實驗方法:

選健康成年小鼠120只,體質量(18±2)g,雌雄各半,隨機分成12組,每組10只。空白組,模型組,吡拉西坦組(0.5g/kg),實驗組A(1.2g/kg),實驗組B(1.2g/kg)),實驗組C(1.2g/kg),實驗組D(1.2g/kg),實驗組E(1.2g/kg),實驗組F(1.2g/kg),實驗組G(1.2g/kg),實驗組H(1.2g/kg),實驗組I(1.2g/kg)。各組均灌胃給藥,劑量為20ml/kg,空白組和模型組給等容積生理鹽水,每日1次,連續15d。于第14天給藥后1h開始訓練,訓練前10min,空白組腹腔注射生理鹽水,其余各組均腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(1.5mg/kg)。訓練時先將小鼠放人避暗箱明室,小鼠進入暗室受到電擊(36V)后逃至明室,此后會再次進人暗室。適應3min后,將小鼠背向暗室放入明室,同時記時,小鼠進入暗室受到電擊視為錯誤反應。訓練5min,記錄小鼠自放人明室至首次進人暗室的時間(潛伏期)、5min內錯誤次數及累加遭受電擊的時問(錯誤反應時間),作為學習成績。24h后重新測試,將小鼠背向暗室放入明室,同時記時,余方法同訓練,記錄小鼠首次進入暗室的潛伏期、5min內錯誤反應次數及累加遭受電擊的時間,作為記憶成績。

實驗結果

用東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙,采用避暗法訓練小鼠的學習記憶能力。結果顯示,模型組小鼠的學習記憶成績明顯低于空白組(P<0.01,P<0.001),即潛伏期明顯縮短,錯誤次數明顯增多,累加電擊時間明顯延長。而參蘇補腎膠囊和吡拉西坦能明顯延長小鼠的潛伏期,減少錯誤反應的次數,縮短累加電擊時間。與模型組比較,各指標差異顯著(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。實驗組E的效果與吡拉西坦相近,作用效果優于實驗組A-I。結果見表2。

表2避暗法觀察不同組別對東莨菪堿所致小鼠學習記憶障礙的改善作用

注:與空白組比較:▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.001;與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

實施例5不同組方參蘇補腎膠囊對D-半乳糖致衰老模型大鼠肝腎功能及其自由基代謝的影響

1.模型建立及給藥

取健康大鼠120只,雌雄均半,隨機分成12組,即空白組,模型組,六味地黃丸組,參蘇補腎膠囊A-I組(見實施例4)。分組后,除正常對照組頸背部注射生理鹽水外,其他各組均注射配制的D-半乳糖溶液(125mg/kg)復制亞急性衰老模型,造模同時,灌胃給藥,六味地黃丸組給予六味地黃丸藥液0.4g/kg,參蘇補腎膠囊A-I組分別給予參蘇補腎膠囊A-I藥液1.2g/kg,,正常對照組與模型組給予純化水,連續造模、給藥8周。

2.取材及處理

末次給藥結束24h后,稱取大鼠體重,腹腔注射10%水合氯醛完全麻醉,于腹主動脈采集血液,室溫下放置2h,3000r/min離心,時間10min,去上清液血清,用于肝腎功能指標檢測;取腎組織,于冰冷生理鹽水中漂洗去組織表面殘留血液,濾紙吸干,稱重,加入適量生理鹽水,在冰水浴中機械勻漿,最終制得10%腎組織勻漿,將制得的組織勻漿在2000r/min條件下離心15min,取組織勻漿上清液,用于自由基代謝指標檢測。

3.生化指標測定

采用酶標儀對實驗大鼠血清進行ALT、AST、ALP、CREA、BUN各指標檢測;按照試劑盒說明書要求,對實驗大鼠腎組織勻漿中的SOD、MDA、T-AOC各指標水平進行測定。

4.實驗結果

4.1對大鼠血清中ALT、AST、ALP、CREA及BUN指標含量的影響

與正常對照組相比,模型組ALT含量明顯降低,具有統計學意義(P<0.01),AST、ALP、BUN、CREA皆有明顯増加,具有統計學意義(P<0.01,P<0.05);與模型組比較,各給藥組ALT含量明顯升高,AST、ALP、BUN、CREA皆有明顯降低,具有統計學意義(P<0.01,P<0.05),其中實驗組E的效果與六味地黃丸組相近,作用效果優于實驗組A-I。結果見表3。

表3對大鼠血清中ALT、AST、ALP、CREA及BUN指標含量的影響

注:與空白組比較:▲P<0.05,▲▲P<0.01;與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01。

4.2對大鼠皆組織中SOD、MDA及T-AOC指標含量的影響

與正常對照組相比,模型組SOD和T-AOC水平均顯著降低,MDA含量明顯升高,且具有統計學意義(P<0.01);與模型組比較,各給藥組SOD和T-AOC水平均顯著升高,MDA含量顯著降低,有統計學意義(P<0.01,P<0.05),其中實驗組E的效果與六味地黃丸組相近,作用效果優于實驗組A-I。結果見表4。

表4對大鼠腎組織中SOD、MDA及T-AOC指標含量的影響

注:與空白組比較:▲▲P<0.01;與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01。

結論

東莨菪堿為M受體阻斷劑。可破壞小鼠的空間記憶,造成小鼠記憶獲得障礙,結果易重復,模型較為理想,在國內外被廣泛采用。高體積分數乙醇會作用于大腦和小腦,抑制中樞,產生近記憶缺失,時空定向力障礙,增加小鼠的錯誤反應次數及延長錯誤反應時間。避暗法是利用鼠類的嗜暗習性而設計的。可以檢測小鼠的習慣性記憶。實驗結果表明,東莨菪堿所致小鼠獲得性記憶障礙模型制作成功.記憶障礙小鼠的習慣性記憶出現明顯損傷,參蘇補腎膠囊使得記憶障礙小鼠的記憶潛伏期延長,錯誤次數減少,遭受電擊的時間縮短,有明顯的改善作用。實驗組E效果與陽性藥吡拉西坦相近,作用效果優于實驗組A-I。

本研究結果表明,參蘇補腎膠囊具有提高大鼠腎組織中SOD和T-AOC活性水平,降低MDA含量的作用,與六味地黃丸功效相似,說明參蘇補腎膠囊補益肝腎效果顯著。ALT、AST、ALP是肝臟中重要酶系,CREA及BUN是評價腎臟功能的重要指標,當肝腎組織出現損傷或者病變,其對應的功能指標水平也將出現不同程度的變化。本實驗結果表明,實驗組對所測肝腎功能指標水平均有改善作用,在ALT、AST、ALP、CREA及BUN指標中表現出較為理想的效果,說明參蘇補腎膠囊具有改善衰老模型大鼠肝腎功能的作用。實驗組E效果與陽性藥吡拉西坦相近,作用效果優于實驗組A-I。

實施例6改善大鼠學習記憶能力的研究

1.動物分組及給藥

Wistar大鼠100只,留空白組和假手術組各10只,其余大鼠造模,取成活者60只隨機分6組:模型組,陽性對照組(腦復康0.3g·kg-1),對照組(1g·kg-1),本發明實施例1~3提供的組合物高、中、低劑量組(2,1,0.5g·kg-1)。正常對照組與模型組灌胃給予等量生理鹽水,各給藥組按體質量10mL·kg-1灌胃給藥,每天1次,共45天,大鼠自由飲水和攝食,每周稱重。

對照組:

原參蘇補腎膠囊制備工藝:

取豬腦去雜質攪碎,經丙酮脫脂、膽固醇三次,依次加入丙酮5倍、4倍、3倍,每次攪拌30分鐘,濾過,濾渣80℃干燥,粉碎成細粉,取細粉加蒸餾水調至成漿狀,調節ph6.5-7,水浴恒溫45℃,再經蛋白酶水解后,真空干燥,粉碎成細粉,過100目篩,備用;另取西洋參、石菖蒲、紫蘇子等三味,粉碎成細粉;其余何首烏、薏苡仁、五味子、天麻、丹參、遠志、葛根加水煎煮3次,第一次10倍量水,煎煮3小時,第二次7倍量水,煎煮2小時,第三次5倍量水,煎煮1小時,濾過合并濾液,濃縮至相對密度1.15-1.20的稠膏,加西洋參、石菖蒲、紫蘇子細粉混勻,真空干燥,粉碎成細粉,再取豬腦粉混勻,裝膠囊即得。

2.模型復制

采用雙側頸總動脈永久結扎法:大鼠術前12h禁食、4h禁水,用10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉,保證手術期間有自主呼吸。仰臥固定,頸前部去毛消毒后沿頸正中切開,分離出雙側頸總動脈,雙重絲線結扎,避免損傷頸交感神經和迷走神經,術中注意保暖,術后縫合傷口,動物送回動物房飼養,術后第三天取存活大鼠進行分組試驗。

3.檢測指標

3.1行為學實驗采用Morris水迷宮檢測:水迷宮為一園形不銹鋼水池,直徑為150cm,高50cm,水深30cm,水溫控制在(25±1)℃,把水池分為4個象限,每個象限標明一個入水點,任選一個象限,正中放置一個平臺,高28cm,直徑為15cm,迷宮上方裝有攝象頭,和錄像機和顯示器相連接,自動錄入大鼠游泳軌跡進行分析。

3.1.1定位航行實驗:共需5天,每天上午、下午各一次,將大鼠從兩個象限的入水點放入水中,記錄其在2分鐘里尋找平臺所用的時間(逃避潛伏期)和游泳路徑。如果大鼠在2分鐘內未找到平臺,則潛伏期為120s。并將大鼠放置于平臺15s,再將大鼠放回籠中。此實驗通過訓練大鼠游泳尋找平臺。觀測其逃避潛伏期和游泳路徑檢測大鼠的學習能力。

3.1.2空間探索實驗:大鼠在做完定位航行實驗后,在第6天撤除平臺,選擇一個入水點放入水中,記錄2分鐘內大鼠在池內的游泳軌跡和時間,分析各組大鼠在原平臺象限游泳的時間和路徑與總游泳時間和路徑的比值。此實驗觀察大鼠在5天訓練后的空間學習和記憶力的變化,學習記憶正常大鼠常能記住平臺的空間位置,故能很快找到平臺位置,撤除平臺后,學習記憶正常的大鼠在2分鐘內會在原平臺象限反復尋找平臺,而學習記憶差的大鼠則還是在迷宮里漫無目的的尋找平臺。通過計算他們的比值,可以進一步的反映大鼠的空間學習記憶能力。

3.2乙酸膽堿醋酶活性測定

大鼠麻醉狀態下,斷頭取腦,冰生理鹽水沖洗,稱取組織重量加9倍生理鹽水制備成10%勻漿,3000轉/分離心10分鐘,分為兩份。

3.2.1第一份取組織上清再按生理鹽水按1:9稀釋成1%組織勻漿,參照蛋白含量測定試劑盒說明書,計算所測樣本的蛋白含量。

蛋白含量=(測定管OD值-空白管OD值)/(標準管OD值-空白管OD值)×標準管濃度

3.2.2取第二份上清液作為樣本,參照乙酸膽堿醋酶試劑盒說明書,計算腦組織中乙酰膽堿醋酶活性。

TchE活性=(測定管OD值-對照管OD值)/(標準管OD值-空白管OD值)×標準管濃度/蛋白含量

3.3細胞凋亡的檢測采用法

大鼠麻醉狀態下,剪開胸腔,暴露心臟,從心尖插管,剪開右心耳,經升主動脈先灌注生理鹽水,待右心耳流出清水時灌注多聚甲醛,待大鼠尾巴完全僵直時斷頭取腦,取出腦組織,甲醛固定24小時,常規石蠟包埋、厚連續冠狀切片,參照試劑盒說明;

3.3.1常規脫蠟、復水,后續過程在濕盒內進行;

3.3.2 3%H2O2阻斷內源性辣根過氧化物酶30min;

3.3.3用0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min;

3.3.4切片浸入2×SSC溶液(80℃)20min;

3.3.5用0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min;

3.3.6用蛋白酶K消化5min;

3.3.7用0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min;

3.3.8 TDT緩沖液孵育10min;

3.3.9 TDT反應液37℃下孵育1h;

3.3.10切片浸入2×SSC溶液10min,以終止反應;

3.3.11用0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min;

3.3.12用鏈卵白素標記的辣根過氧化物酶孵育30min;

3.3.13用0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min;

3.3.14用0.04%的DAB顯色10min;

3.3.15蘇木素復染5min,常規復水、透明、封片;

鏡檢,在海馬區的神經細胞層,分別選擇個相鄰視野,以個視野為單位,結果取個視野的平均值,然后在光學顯微鏡下拍片。

4.實驗結果:

4.1行為學檢測結果

4.1.1大鼠前5天的逃避潛伏期結果

如表5在第1天,各組大鼠尋找平臺的時間沒有明顯的差異(P>0.05)。經過一天的訓練后,在第2天,空白組、腦復康組、本發明提供的組合物高劑量組大鼠的逃避潛伏期與模型組相比明顯縮短(p<0.05),對照組、本發明提供的組合物中劑量、低劑量組和模型組逃避潛伏期變化不明顯。又經過幾天的訓練后,到第5天時,模型組的逃避潛伏期還是沒有明顯的縮短,和其它各組逃避潛伏期比較都存在明顯差異(p<0.05),各給藥組逃避潛伏期都明顯比第1天縮短,其中本發明提供的組合物高、中劑量組逃避潛伏期優于腦復康組。本發明提供的組合物高、中劑量組逃避潛伏期明顯優于對照組。

表5各組大鼠前5天逃避潛伏期結果觀察(x±s,n=10)

注:與正常組比較#P<0.05,##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

4.1.2撤除平臺后大鼠在原平臺象限游泳時間和路徑與總游泳時間和路徑比

從表6可以看出,隨著訓練次數的增加,所有大鼠尋找平臺的潛伏期都呈下降趨勢,與空白組比較,模型組大鼠在原平臺象限游泳時間和路徑與總游泳時間和路徑比明顯縮短(P<0.01);與模型組相比,腦復康組和本發明提供的組合物高劑量組能提高大鼠在原平臺象限游泳時間和路徑與總游泳時間和路徑比(P<0.01,P<0.05),本發明提供的組合物中劑量組和對照組提高大鼠在原平臺象限游泳時間和路徑與總游泳時間和路徑比(P<0.05),且同劑量比較,本發明提供的組合物比對照組提高的明顯。表明本發明提供的組合物提高學習記憶能力優于對照組。

表6撤除平臺后大鼠在原平臺象限游泳時間和路徑與總游泳時間和路徑比(x±s,n=10)

注:與正常組比較##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01。

4.2大鼠腦組織內乙酰膽堿酯酶AchE含量結果比較

與空白組比較,模型組AchE酶活明顯升高,有一定差異(P<0.05),說明模型制備成功。與模型組相比,腦復康組、本發明提供的組合物高、中劑量組,腦組織乙酰膽堿脂酶含量明顯降低,存在顯著差異(P<0.05),而對照組腦組織乙酰膽堿脂酶含量無明顯變化,詳見表7。

表7大鼠腦組織內乙酞膽堿酯酶含量比較

注:與正常組比較#P<0.05;與模型組比較*P<0.05。

4.3細胞凋亡的比較

從表8可以看出,與空白組相比,模型組海馬CAI區細胞凋亡數目明顯增加(P<0.01);與模型組相比,各給藥組海馬CAI區細胞凋亡數目不同程度減少,其中本發明提供的組合物高劑量組海馬CAI區神經細胞凋亡明顯減少(P<0.01),腦復康組、本發明提供的組合物中劑量和對照組海馬CAI區神經細胞凋亡有所減少(P<0.05),且本發明提供的組合物組海馬CAI區神經細胞凋亡數量少于對照組。

表8各組實驗動物海馬CAI區神經細胞凋亡情況

注:與正常組比較##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01。

實施例7參蘇補腎膠囊對D-半乳糖致亞急性衰老模型大鼠肝腎功能的影響

1.模型建立、給藥方法及生化指標測定-同實施例4

2.實驗結果

2.1對大鼠血清中ALT、AST、ALP、CREA及BUN指標含量的影響

與正常對照組相比,模型組ALT含量明顯降低,具有統計學意義(P<0.01),AST、ALP、BUN、CREA皆有明顯増加,具有統計學意義(P<0.01,P<0.05);與模型組比較,本發明提供的組合物高、中劑量ALT含量明顯升高,AST、ALP、BUN、CREA皆有明顯降低,具有統計學意義(P<0.01,P<0.05)且同劑量比較,本發明提供的組合物比對照組提高的明顯。結果見表9。

表9對大鼠血清中ALT、AST、ALP、CREA及BUN指標含量的影響n=10)

注:與空白組比較:▲P<0.05,▲▲P<0.01;與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01。

4.2對大鼠腎組織中SOD、MDA及T-AOC指標含量的影響

與正常對照組相比,模型組大鼠腎組織中SOD和T-AOC水平均顯著降低,MDA含量明顯升高,且具有統計學意義(P<0.01);與模型組比較,本發明提供的組合物高、中劑量組大鼠腎組織中SOD和T-AOC水平均顯著升高,MDA含量顯著降低,有統計學意義(P<0.01,P<0.05),且同劑量比較,本發明提供的組合物比對照組提高的明顯。結果見表10。

表10對大鼠腎組織中SOD、MDA及T-AOC指標含量的影響

注:與空白組比較:▲▲P<0.01;與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01。

結論:

本發明采用——血管阻斷法永久結扎雙側頸總動脈造模,造成大鼠慢性的腦缺血,使腦組織發生缺血、缺氧損害,尤其在易損區域,如大腦皮質和海馬區,缺血更為明顯。同時此造模方式操作簡單,創傷少,重復性好,可較好的模擬人類的慢性低灌注引起的腦缺血、缺氧,最終導致神經細胞功能下降,學習記憶功能障礙,和因動脈粥樣硬化,動脈管腔狹窄等原因造成的血管性癡呆基本相似,通過行為學試驗也證實模型大鼠存在明顯的學習、記憶障礙,是較理想造模方式。

在水迷宮實驗中,由定位航行試驗和空間探索試驗兩部分組成,定位航行試驗可以了解各組大鼠的學習能力,而空間探索試驗可以更全面的了解各組大鼠的學習、記憶能力。

學習、記憶等復雜生理過程的高級整合與神經遞質密切相關,特別是乙酞膽堿是進行及維持高級神經功能的重要介質之一,在血管性癡呆的發病過程中,腦組織中的神經遞質明顯減少,尤其是大腦皮層的乙酞膽堿的減少與血管性癡呆的智力下降有著密切的關系。本試驗通過觀察各組大鼠腦組織內乙酰膽堿酯酶的含量變化,發現模型組的含量明顯增高,與空白組相比存在顯著差異,說明血管性癡呆大鼠腦組織內乙酸膽堿含量明顯減少。而本發明提供的組合物顯著降低腦組織中乙酸膽堿醋酶的活性,減少其對乙酞膽堿的降解,增加其含量,從而改善學習、記憶能力,且作用效果優于對照組。

近年研究發現不同的腦區神經元對缺血的敏感性不同,海馬結構是最為敏感的區域,特別是海馬CAI區是與空間辨別及學習記憶關系最為密切。通過TUNEL法可以準確的反映細胞凋亡最典型的形態特征,其敏感度和特異性都較高,目前被廣泛應用。本實驗結果顯示模型組海馬CAI區細胞凋亡數明顯增多,而各給藥組細胞凋亡數目雖然較空白組細胞凋亡數目增多,但于模型組比較,有顯著減少,說明本發明提供的組合物能減少海馬CAI神經細胞凋亡,而且本發明提供的組合物比對照組效果更為顯著。

本發明通過觀測血管性癡呆大鼠給藥后血液流變學、腦內乙酞膽堿醋酶活性、海馬區神經細胞凋亡的觀察,確定本發明提供的組合物對改善學習、記憶能力作用,且作用效果優于對照組。

參蘇補腎膠囊方中諸藥恰具有補腎健腦功效,從中醫理論上印證其延緩衰老作用。本發明具有提高大鼠腎組織中SOD和T-AOC活性水平,降低MDA含量的作用,與六味地黃丸功效相似,說明本發明補益肝腎效果顯著對所測肝腎功能指標水平均有改善作用。有研究表明,衰老大鼠的肝腎會出現組織結構的退行性病變,組織細胞超微結構的不同程度損傷。當肝腎組織呈現組織結構的退行性病變時,其代謝水平和生理功能都會受到一定程度的影響,在臨床上往往通過肝腎功能指標的檢測來診斷肝腎的生理功能是否異常,進而判斷組織可能的疾病。ALT、AST、ALP是肝臟中重要酶系,CREA及BUN是評價腎臟功能的重要指標,當肝腎組織出現損傷或者病變,其對應的功能指標水平也將出現不同程度的變化。實驗研究結果表明在ALT、AST、ALP、CREA及BUN指標中表現出較為理想的效果,說明參蘇補腎膠囊具有改善衰老模型大鼠肝腎功能的作用,且作用效果優于對照組。

以上所述僅是本發明的優選實施方式,應當指出,對于本技術領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明原理的前提下,還可以做出若干改進和潤飾,這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。

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