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一種中藥軟膠囊制劑的制備方法和質量控制方法.pdf

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一種 中藥 軟膠囊 制劑 制備 方法 質量 控制
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摘要
申請專利號:

CN200410038829.7

申請日:

20040430

公開號:

CN1569205A

公開日:

20050126

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K35/78,A61K9/48,A61P11/04,A61P1/02,A61P1/10,A61P17/10 主分類號: A61K35/78,A61K9/48,A61P11/04,A61P1/02,A61P1/10,A61P17/10
申請人: 成都優他制藥有限責任公司
發明人: 闕文彬
地址: 610041四川省成都市科華北路58號亞太廣場11FA-C座
優先權: CN200410038829A
專利代理機構: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 代理人: 張韜
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200410038829.7

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法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種中藥軟膠囊制劑的制備方法和質量控制方法。本發明將大黃、黃連、黃芩三味中藥經現代提取工藝提取有效成分后壓丸、洗丸、干燥等工序精制成的軟膠囊,具有崩解速度快、崩解后在腸道直接吸收、吸收快,生物利用度高、服用劑量小、藥物穩定性好等優點;制成的軟膠囊質量可控。

權利要求書

1、一種中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于其特征在于該方法為:大黃、黃連、黃芩三味,破碎成粗粉,分別加水煮煎二次,黃芩于80-90℃加入,第一次加水5~15倍量,煎煮1~2小時,第二次加水5~15倍量,煎煮0.5~1.5小時;合并煎液過濾,濾液減壓濃縮至藥材量的2~3倍,高速離心后取上清液在60-80℃時濃縮至相對密度約為1.25,噴霧干燥成干浸膏粉;上述浸膏粉加入991-999∶1-9比例的聚乙二醇400、聚乙二醇6000,混勻,藥粉所占囊液比例36%-45%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥即得軟膠囊。2、如權利要求1所述的中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于該方法為:取黃連、大黃、黃芩三味藥材,粉碎成粗粉,分別加水煮煎二次,黃芩于85℃加入,第一次加水10倍量,煎煮1.5小時,第二次加水10倍量,煎煮1小時,合并煎液過濾,濾液減壓濃縮至藥材量的2~3倍,10000轉/分以上高速離心,棄去沉淀,上清液在70℃濃縮至相對密度約為1.25,噴霧干燥成干浸膏粉;上述浸膏粉合并后加入99.5%聚乙二醇400和0.5%聚乙二醇6000的混合物,混勻,藥粉所占囊液比例42%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥即得軟膠囊。3、如權利要求1所述的中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于該方法為:取黃連、大黃、黃芩三味藥材,粉碎成粗粉,分別加水煮煎二次,黃芩于82℃加入,第一次加水12倍量,煎煮2小時,第二次加水8倍量,煎煮1.5小時,合并煎液過濾,濾液減壓濃縮至藥材量的2~3倍,高速離心,棄去沉淀,上清液濃在75℃縮至相對密度約為1.25,噴霧干燥成干浸膏粉;上述浸膏粉加入997∶3比例的聚乙二醇400、聚乙二醇6000,混勻,藥粉所占囊液比例39%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊。4、一種中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于該方法為:a、大黃的提取:大黃粉碎成粗粉,加入90%~95%乙醇5~15倍量浸泡12~36小時后,用頻率10~30kHz的超聲波處理20~40min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,依次用水和90%~99%的乙醇洗脫,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到大黃的有效成分蒽醌類、雙蒽酮類精制粉;b、黃連的提取:黃連粉碎成粗粉,加10~14倍水量,煎煮1~3小時,煎煮2~4次,合并煎液,濃縮后干燥、粉碎;再用30~50倍無水乙醇回流提取2~4次,每次20~60分鐘,趁熱過濾,濾液回收乙醇后經高速離心機離心,過濾,濃縮,濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,依次用水和90%~99%的乙醇洗脫,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到黃連的有效成分鹽酸小檗堿的精制粉;c、黃芩的提取:黃芩粉碎成粗粉,加90%~95%乙醇5~15倍量浸泡12~36小時后,用頻率10~30kHz的超聲波處理20~40min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,依次用水和90%~99%的乙醇洗脫,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到含有黃芩苷的精制粉;上述大黃、黃連、黃芩三味藥材的精制粉,合并后加入991-999∶1-9比例的聚乙二醇400、聚乙二醇6000,混勻,藥粉所占囊液比例36%-45%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊。5、如權利要求4所述的中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于該方法為:a、大黃的提取:大黃粉碎成粗粉,加入95%乙醇10倍量浸泡24小時后,用頻率20kHz的超聲波處理30min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用95%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點;收集醇洗脫液,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到大黃的有效成分蒽醌類精制粉;b、黃連的提取:黃連粉碎成粗粉,加以10倍量水,提取兩次,第一次1.5小時,第二次1小時,合并煎液,濃縮后將浸膏干燥、粉碎;再用40倍無水乙醇回流提取3次,每次30分鐘,趁熱過濾,濾液回收乙醇后經高速離心機離心,過濾,濃縮,濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用95%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點;收集醇洗脫液,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到黃連的有效成分鹽酸小檗堿的精制粉;c、黃芩的提取:黃芩2000重量份粉碎成粗粉,加95%乙醇10倍量浸泡24小時后,用頻率20kHz的超聲波處理30min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后,濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用95%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點;回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到含有黃芩苷的精制粉;上述大黃、黃連、黃芩三味藥材的精制粉,合并后加入99.5%聚乙二醇400和0.5%聚乙二醇6000的混合物,混勻,藥粉所占囊液比例42%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥工序即得軟膠囊。6、如權利要求4所述的中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于該方法為:a、大黃的提取:大黃粉碎成粗粉,加入92%乙醇12倍量浸泡30小時后,用頻率20kHz的超聲波處理35min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用92%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點;收集醇洗脫液,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到大黃的有效成分蒽醌類精制粉;b、黃連的提取:黃連粉碎成粗粉,加以12倍量水,提取兩次,第一次2.5小時,第二次1小時,合并煎液,濃縮后將浸膏干燥、粉碎;再用45倍無水乙醇回流提取4次,每次45分鐘,趁熱過濾,濾液回收乙醇后經高速離心機離心,過濾,濃縮,濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用98%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點;收集醇洗脫液,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到黃連的有效成分鹽酸小檗堿的精制粉;c、黃芩的提取:黃芩粉碎成粗粉,加98%乙醇10倍量浸泡18小時后,用頻率30kHz的超聲波處理25min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后,濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用96%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點;回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到含有黃芩苷的精制粉;上述大黃、黃連、黃芩三味藥材的精制粉,合并后加入99.7%聚乙二醇400和0.3%聚乙二醇6000的混合物,混勻,藥粉所占囊液比例39%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊。7、如權利要求1、2、3、4、5或6所述的中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于該方法中的軟膠囊囊殼以明膠、水、甘油、二氧化鈦原料,明膠、水、甘油、二氧化鈦之間的重量比為1.0∶1.2∶0.3-1.0∶0.01。8、如權利要求1、2、3、4、5或6所述的中藥軟膠囊制劑的制備方法,其特征在于該方法中的軟膠囊囊殼以明膠、水、甘油、二氧化鈦原料,明膠、水、甘油、二氧化鈦之間的重量比為1.0∶1.2∶0.3∶0.01。9、一種中藥軟膠囊制劑的質量控制方法,其特征在于該方法中包括如下鑒別方法中的一種或幾種:a、大黃素:取本中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬1.5-3小時,并時時振搖,濾過,濾液置水浴上蒸干,殘渣加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴上加熱20-40分鐘,立即冷卻,用氯仿20ml分2次提取,合并氯仿提取液,濃縮至約1ml,作為供試品溶液;另取大黃素對照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;在60~90℃溫度下,以15-18∶6-8∶1石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑,展開、涼干后置氨氣中熏的方法來顯色,供試品色譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點;b、鹽酸小檗堿:取本中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬1.5-3小時,并時時振搖,濾過,濾液置水浴上濃縮至約1ml,作為供試品溶液;另取鹽酸小檗堿對照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以10∶6∶1∶1醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑,展開,取出,涼干后置365nm紫外燈下檢視,顯相同顏色的熒光斑點;c、黃芩甙:取本中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,滴加鹽酸4~6滴,振搖15-30分鐘,濾過,濾液置水浴上濃縮至約4ml,作為供試品溶液;另取黃芩甙對照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各15μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以5-7∶3-4∶1∶1醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑,展開、涼干后噴以2%三氯化鐵乙醇溶液來顯色,供試品色譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點。10、如權利要求9所述的中藥軟膠囊制劑的質量控制方法,其特征在于該方法中包括如下鑒別方法中的一種或幾種:a、大黃素:取本發明內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖,濾過,濾液置水浴上蒸干,殘渣加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴上加熱30分鐘,立即冷卻,用氯仿20ml分2次提取,合并氯仿提取液,濃縮至約1ml,作為供試品溶液;另取大黃素對照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;在60~90℃溫度下,以15∶5∶1石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑,展開、涼干后置氨氣中熏的方法來顯色,供試品色譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點;b、鹽酸小檗堿:取本發明內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖,濾過,濾液置水浴上濃縮至約1ml,作為供試品溶液;另取鹽酸小檗堿對照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以10∶6∶1∶1醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑,展開,取出,涼干后置365nm紫外燈下檢視,顯相同顏色的熒光斑點;c、黃芩甙:取本發明內容物約2g,加甲醇50ml,滴加鹽酸4~6滴,振搖20分鐘,濾過,濾液置水浴上濃縮至約4ml,作為供試品溶液;另取黃芩甙對照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各15μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以5∶3∶1∶1醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑,展開、涼干后噴以2%三氯化鐵乙醇溶液來顯色,供試品色譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點。11、一種中藥軟膠囊制劑的質量控制方法,其特征在于該方法中包括如下含量測定方法:采用ODS反相色譜柱;以50∶50甲醇-0.2mol/L磷酸二氫鈉緩沖液為流動相,磷酸調pH值至2.7;檢測波長為276nm;黃芩苷峰的理論板數不少于3230;精密稱取內容物約0.6g,置50ml量瓶中,加甲醇約40ml,超聲20min,用甲醇定容,搖勻,精密吸取1ml至10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,離心10min,分取上清夜,即得供試品溶液;精密稱取105℃干燥至恒重的黃芩苷對照品約5mg,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,超聲20min,放冷后,用甲醇定容,搖勻,即得,每1ml含黃芩苷不少于100μg。

說明書

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發明領域

本發明涉及一種中藥軟膠囊制劑的制備方法和質量控制方法,特別涉及一 種具有清熱、瀉火、燥濕、解毒作用的的純中藥軟膠囊制劑的制備方法和質量 控制方法,屬醫藥技術領域。

背景技術

大黃為中醫將軍藥之一,從古至今一直是臨床最常用藥物,其性味苦寒, 入脾胃、大腸、肝、心包經。《神農本草經》中曾記載:“主下瘀血、血閉寒 熱,破癥瘕積聚、留飲宿食,蕩滌腸胃,推陳致新,通利水谷,調中化食,安 和五臟”。明代李時珍經實地考查和臨床驗證,對大黃功效進行了補充完善, 并在《本草綱目》中指出:“主下痢赤白,里急腹痛,小便淋瀝,實熱燥結, 潮熱譫語,黃疸諸火瘡”。

黃連也是自古著稱的藥物之一。良藥苦口利于病,是人們早已熟知的至理 名言。黃連正是因其苦才具有很高的醫療價值。黃連是毛茛科多年生草本植物, 藥用其根,為中藥要藥,《神農本草經》中將其列為上品。黃連以清熱解毒享 有盛名,因而歷代醫家都對它有很高評價。如南朝梁、齊間的陶弘景曾有“久 服長生”之說。明代繆希雍有“病酒之仙藥,滯下之神草”的贊譽。由于其根 呈連珠狀而色黃,故名黃連。又因歷史上主產四川地區的峨眉山和洪雅一帶, 而形如雞爪,故又有川連、雅連、雞爪連等稱號。早在兩干多年以前,黃連已 入藥用,現已成為弛名中外的名貴藥材,具有清熱、瀉火、燥濕、解毒、清心 除煩等多種用途。

黃芩,味苦,性寒,入心胃膽大腸經。別錄云:“黃芩,其性清肅,味苦 以燥濕,性寒以清熱,方主諸熱。諸熱者,邪熱與濕熱也。”具有消熱燥濕, 瀉火解毒,止血,安胎的功效。

火熱病癥,俗稱“上火”,是一種非常常見的疾病,一年四季均有發生。 主要是由于致病因素作用于機體后功能呈現異常亢奮的一類疾病,臨床表現為 口鼻生瘡、口舌干燥、大便秘結等。該病需用寒涼藥物治療。《金匱要略》中 記載的“瀉心湯”,大黃:瀉熱通腸,涼血解毒,逐瘀通經;黃連:清熱、瀉 火、燥濕、解毒、清心除煩;黃芩:清熱燥濕,瀉火解毒,止血,安胎。三種 成分均屬苦寒清熱解毒藥,此三種藥物配伍,使三焦實火郁熱經二便排出,對 三焦積熱所致諸癥極為合適。臨床適用于清熱解毒,瀉火通便,排毒養顏。用 于口鼻生瘡、咽喉腫閉、牙齒疼痛、口舌干燥,癥瘕積聚、頭暈目眩、大便秘 結、小便赤黃,以及各種咽喉炎、扁桃體炎、口腔潰瘍、牙齦腫脹以及粉刺座 瘡等屬于以上癥候者。但是,三味藥均為苦寒之品,制成顆粒劑口感極苦患者 不易接受,且服藥量較大,加之顆粒劑易吸潮不穩定,容易受水分、光線和氧 的破壞;如制成膠囊劑,則同樣存在服用量較大,口感差等缺點,并且藥物浸 膏中加有淀粉、滑石粉和硬脂酸鎂等輔料,在體內崩解時間長,吸收較差。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種中藥軟膠囊制劑的制備方法;本發明的另一 個目的在于提供一種含有大黃、黃連、黃芩有效成分提取物,具有清熱、瀉火、 燥濕、解毒功效的純中藥軟膠囊制劑的制備方法;本發明的第三個目的是提供 一種中藥軟膠囊制劑的質量控制方法。

本中藥軟膠囊制劑的制備方法為:

制備方法1:

大黃、黃連、黃芩三味,破碎成粗粉,分別加水煮煎二次(黃芩于80-90 ℃加入),第一次加水5~15倍量,煎煮1~2小時,第二次加水5~15倍量,煎 煮0.5~1.5小時,合并煎液過濾,濾液減壓濃縮至藥材量的2~3倍,高速離心 后取上清液濃縮至相對密度約為1.25(60-80℃),噴霧干燥成干浸膏粉;上述 浸膏粉加入991-999∶1-9比例的聚乙二醇400、聚乙二醇6000,混勻,藥粉所 占囊液比例36%-45%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序,即得軟 膠囊。

制備方法2:

a、大黃的提取:

大黃粉碎成粗粉,加入90%~95%乙醇5~15倍量浸泡12~36小時后,用 頻率10~30kHz的超聲波處理20~40min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機 離心后濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,依次用水和90 %~99%的乙醇洗脫,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到大黃的有效成 分蒽醌類、雙蒽酮類精制粉。

b、黃連的提取:

黃連粉碎成粗粉,加10~14倍水量,煎煮1~3小時,煎煮2~4次,合并煎 液,濃縮后干燥、粉碎。再用30~50倍無水乙醇回流提取2~4次,每次20~60 分鐘,趁熱過濾,濾液回收乙醇后經高速離心機離心,過濾,濃縮,濃縮濾液 過大孔樹脂層析柱,依次用水和90%~99%的乙醇洗脫,回收乙醇洗脫液,濃 縮,經噴霧干燥得到黃連的有效成分鹽酸小檗堿的精制粉。

c、黃芩的提取:

黃芩粉碎成粗粉,加90%~95%乙醇5~15倍量浸泡12~36小時后,用頻 率10~30kHz的超聲波處理20~40min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離 心后濃縮至相對密度約為1.10;濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,依次用水和90 %~99%的乙醇洗脫,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到含有黃芩苷的 精制粉;大黃、黃連、黃芩三味藥材的精制粉合并,加入991-999∶1-9比例的聚 乙二醇400、聚乙二醇6000,混勻,藥粉所占囊液比例36%-45%,過膠體磨,經 壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊。

上述兩種制備方法中的軟膠囊囊殼以明膠∶水∶甘油∶二氧化鈦原料,明膠∶ 水∶甘油∶二氧化鈦之間的重量比為1.0∶1.2∶0.3-1.0∶0.01;上述兩種制備方法 中的藥粉所占囊液比例為42%或39%。

本組合物制劑的質量控制方法含有如下鑒別和/或含量測定方法中的一種 或幾種,本發明質量控制方法中的鑒別及含量測定方法為:????

鑒別方法選自如下方法中的一種或幾種:

對處方中大黃、黃連、黃芩三味藥材分別以其代表成份大黃素、鹽酸小檗 堿和黃芩苷進行鑒別研究:

a、大黃(大黃素):

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬1.5-3小時,并時時振 搖,濾過,濾液置水浴上蒸干,殘渣加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴 上加熱20-40分鐘,立即冷卻,用氯仿20ml分2次提取,合并氯仿提取液,濃縮 至約1ml,作為供試品溶液;另取大黃素對照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的 溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法(《中國藥典》2000年一部附錄VIB) 試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的 硅膠G薄層板上;在60~90℃溫度下,以15-18∶6-8∶1石油醚-甲酸乙酯-甲酸 的上層液為展開劑,展開、涼干后置氨氣中熏的方法來顯色,供試品色譜中, 在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點。

b、黃連(鹽酸小檗堿):

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬1.5-3小時,并時時振 搖,濾過,濾液置水浴上濃縮至約1ml,作為供試品溶液;另取鹽酸小檗堿對 照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法(《中 國藥典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同 一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以10∶6∶1∶1醋酸乙酯-丁酮- 甲酸-水為展開劑,展開,取出,涼干后置紫外燈(365nm)下檢視,顯相同顏 色的熒光斑點。

c、黃芩(黃芩甙):

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,滴加鹽酸4~6滴,振搖15-30 分鐘,濾過,濾液置水浴上濃縮至約4ml,作為供試品溶液;另取黃芩甙對照 品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法(《中 國藥典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各15μl,分別點于同 一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以5-7∶3-4∶1∶1醋酸乙酯- 丁酮-甲酸-水為展開劑,展開、涼干后噴以2%三氯化鐵乙醇溶液來顯色,供試 品色譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點。

含量測定方法為:

黃芩苷是處方中黃芩的主要有效成分,故考慮采用HPLC法測定軟膠囊中黃 芩苷含量。

ODS反相色譜柱(4.6mm×150mm,I.D.);以50∶50甲醇-0.2mol/L磷酸二氫 鈉緩沖液(磷酸調pH值至2.7)(經抽濾、超聲脫氣后使用)為流動相;流速: 0.8ml·min-1;檢測波長:276nm;進樣量:10ul;靈敏度:0.05AUFS,柱溫: 室溫;黃芩苷峰的理論板數為3230。

精密稱取本中藥軟膠囊制劑內容物約0.6g,置50ml量瓶中,加甲醇約40ml, 超聲20min,用甲醇定容,搖勻,精密吸取1ml至10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻 度,搖勻,離心10min(15000r/min),分取上清夜,即得供試品溶液;精密稱 取105℃干燥至恒重的黃芩苷對照品約5mg,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,超 聲20min,放冷后,用甲醇定容,搖勻,即得,每1ml含黃芩苷不少于100μg。

本發明將三味中藥經現代提取工藝提取有效成分后精制成的軟膠囊(一清 軟膠囊),具有崩解速度快,崩解后在腸道直接吸收,無需溶解過程,吸收快; 生物利用度高,服用劑量小;藥物穩定性好,不易吸潮;密封性好,遮蓋了藥 物的不良氣味;服用方便,便于攜帶等優點。

下述實驗例用于進一步說明本發明:

試驗例1??大黃的提取工藝研究

本發明考慮用超聲波提取大黃得到粗提物,然后用樹脂層析柱分離提純精 制的工藝來提取大黃中的蒽醌類成分。

1.超聲波提取溶劑的選擇:

考察在不同頻率超聲波下使用水及不同濃度的乙醇(80%,90%,95%, 無水乙醇)作為溶劑時大黃提取液中蒽醌的含量。將水及不同濃度的乙醇提取 液中總蒽醌、游離蒽醌、結合蒽醌的百分含量對乙醇濃度進行了線性回歸。發 現結合蒽醌的百分含量與乙醇濃度有一定相關性,隨乙醇濃度的提高有增加的 趨勢,其中95%與無水乙醇提取液中蒽醌類百分含量差異無顯著性,故選用95 %的乙醇作為溶劑。

2.超聲波的頻率的選擇:

超聲波的頻率分別考察了10KHZ,20KHZ,200KHZ,600KHZ幾個不同的頻率 下同一溶劑中蒽醌的得率,其中20KHZ頻率下的蒽醌類成分得率最高。故選用 20KHZ的超聲波。

3.超聲波提取的時間選擇:

結合上述選擇條件,分別考察超聲提取20分鐘,30分鐘,40分鐘提取液中 蒽醌的百分含量,結果發現隨超聲提取時間的增加,提取液中蒽醌的百分含量 也相應的增加,其中30分鐘和40分鐘的得率差異沒有顯著性,故選用超聲提取 30分鐘。

4.大黃粗提液的精制:

為了最大限度地保留有效成分、去除無效成分,選擇高速離心法初步除去 藥液中的雜質。高速離心法是以離心機為主要設備,通過離心機的高速運轉, 使離心加速度超過重力加速度的成百上千倍,而使沉降速度增加,以加速藥液 中雜質沉淀并除去的一種方法。沉降式離心機分離藥液具有省時、省力,藥液 回收完全,有效成分含量高、澄明度高的特點,適于分離含難于沉降過濾的細 微粒或絮狀物的懸浮液。應用超速離心法,使提取液穩定,久置不混濁,同時 又避免了藥液反復濃縮、轉溶使有效成分受熱破壞所造成的含量降低。將上述 提取液過濾、合并,減壓濃縮至藥材量的2-3倍,進行離心,采用高速管式離 心機,轉速為10000r/min以上。將離心后的濾液減壓濃縮至相對密度約為1.25 (70℃),過大孔樹脂進行分離。

考慮利用了大孔吸附樹脂中非極性和中性樹脂的特點,將大黃提取液中游 離蒽醌和結合蒽醌分離和純化。選用P-MA結構型的高交聯度聚合樹脂或苯乙 烯型結構的樹脂,具有較強的親水性和表面親和力以及高孔隙的特點。調整大 黃粗提液PH值到7.5左右后上大孔樹脂層析柱,加樣完畢后先用純凈水洗脫至 洗脫液無色,再換用高濃度乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點。 收集醇洗脫液,回收乙醇得到蒽醌類精制粉。

TLC以蒽醌類大黃素為檢測指標,照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部 附錄VIB)進行試驗研究。

取蒽醌類精制粉約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖,濾過,濾 液置水浴上蒸干,殘渣加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴上加熱30分鐘, 立即冷卻,用氯仿20ml分2次提取,合并氯仿提取液,濃縮至約1ml,作為供試 品溶液。另取大黃素對照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶 液。吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅 膠G薄層板上;以石油醚(60~90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶7∶1)的上層液為 展開劑展開、涼干后置氨氣中熏的方法來顯色。

試驗例2??黃連的提取工藝研究

在水提的基礎上,對水提物用乙醇回流提取精制。

1.水煮提取條件的考察:采用正交實驗法,以加水量、提取時間、提取 次數為因素,按L9(34)正交表進行試驗,以干膏得率和有效成分為評價指標, 分別對黃連水煮提取工藝進行篩選。因素水平見表1。

??????????????????表1??因素水平表 ????水平 ????因素 ??A加水量(倍) ??B提取時間(h) ????C提取次數 ????1 ????2 ????3 ????8 ????10 ????12 ??0.5(0.5、0.5) ??1.5(1.0、0.5) ??2.0(1.5、1.0) ????1 ????2 ????3

取黃連藥材40g,粉碎成1cm以下的小塊,加水浸泡30min,照表1進行試驗。

鹽酸小檗堿測定測定方法為:取鹽酸小檗堿對照品約20mg,精密稱定,加 甲醇-鹽酸(100∶1)溶解后再用乙醇制成每1ml約含8μg的溶液,作為對照品 溶液。另精密稱取制得干膏粉約75mg,置50ml量瓶中,加甲醇-鹽酸(100∶1) 溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取1ml加于5g中性氧化鋁柱上(干法裝柱, 用乙醇20ml預洗),用乙醇25ml洗脫至50ml量瓶中,定容,作為供試品溶液。 取上述兩種溶液在345nm處測定吸收度,計算即得。試驗結果見表2。

??????????????????????表2??黃連提取正交試驗表 ??試驗號 ????A ????B ????C ?D(空白) 干膏粉得率(%) 鹽酸小檗堿含量(%) ????1 ????2 ????3 ????4 ????5 ????6 ????7 ????8 ????9 ????1 ????1 ????1 ????2 ????2 ????2 ????3 ????3 ????3 ????1 ????2 ????3 ????1 ????2 ????3 ????1 ????2 ????3 ????1 ????2 ????3 ????2 ????3 ????1 ????3 ????1 ????2 ????1 ????2 ????3 ????3 ????1 ????2 ????2 ????3 ????1 ????6.73 ????5.98 ????20.24 ????8.75 ????15.74 ????8.38 ????11.32 ????8.16 ????8.98 ????27.24 ????33.23 ????28.91 ????27.98 ????39.26 ????33.31 ????30.28 ????30.39 ????34.20 ??浸 ??膏 ??得 ??率 ??(%) K1 ? ??32.95 ??32.87 ??28.46 ??4.49 ? ??26.80 ??29.88 ??37.60 ??10.80 ? ??23.27 ??23.71 ??47.30 ??24.03 ? ???31.45 ???25.68 ???37.15 ???11.47 K2 K3R ??鹽 ??酸 ??小 ??檗 ??堿 ??% K ?89.38 ?100.55 ?94.87 ?11.17 ??85.50 ??102.88 ??96.42 ??17.38 ??90.94 ??95.41 ??98.45 ??7.51 ???100.70 ???96.82 ???87.28 ???13.42 K2K3R

結果表明以干膏率為考察指標,最佳組合為A1B3C3,C>B>A;以鹽酸小檗堿 含量為考察指標,最佳組合為A2B2C3,B>A>C,因為含量指標更為重要,故以含量 評價為主,又因為在含量的三因素中,C的影響最小,且K2與K3相近,考慮到 大生產中節約能源、降低成本,因此綜合考慮選擇C2,即以10倍量水,提取兩 次,第一次1.5小時,第二次1小時為最佳。

另取三份藥材進行驗證,結果見表3。

?????????????????表3??黃連提取驗證結果 ????序號 ????1 ????2 ????3 ????干膏率(%) ??鹽酸小檗堿含量(%) ????10.20 ????38.09 ????9.24 ????37.38 ????9.77 ????37.01

試驗結果與正交試驗結果相近,結果表明該水提工藝穩定。

2.乙醇回流條件的考察:

采用正交實驗法,以乙醇量、乙醇濃度、回流時間、回流次數為因素,按 L9(34)正交表進行試驗,以干膏得率和有效成分為評價指標,分別對黃連水提 浸膏的乙醇回流工藝條件進行篩選。因素水平見表4。

?????????????????????表4??因素水平表 ??水平 ????因素 ??A乙醇量(倍) B回流時間(h) ??C乙醇濃度(%) D回流次數 ????1 ????2 ????3 ????20 ????30 ????40 ????0.5 ????1.5 ????2.0 ????90% ????95% ????100% ????1 ????2 ????3 根據因素水平表進行正交試驗,結果見表5。

????表5??黃連水提浸膏的乙醇回流正交試驗表 ????????試驗號??????A?????B?????C????D????試驗結果 ????????????????????1?????2?????3????4??浸膏得率(%)??季胺總堿含量(%) ??????????1?????????1?????1?????1????1????5.13??????????????2.50 ??????????2?????????1?????2?????2????2????8.55??????????????4.86 ??????????3?????????1?????3?????3????3????10.75?????????????5.82 ??????????4?????????2?????1?????2????3????5.54??????????????3.00 ??????????5?????????2?????2?????3????1????8.14??????????????4.00 ??????????6?????????2?????3?????1????2????8.85??????????????5.33 ??????????7?????????3?????1?????3????2????6.01??????????????3.66 ??????????8?????????3?????2?????1????3????8.94??????????????5.53 ??????????9?????????3?????3?????2????1????9.62??????????????5.56 浸 膏 得 率 (%) ?K1???24.43?16.68?19.52?22.89 ?K2???22.53?25.63?23.71?23.41 ?K3???24.57?29.22?24.90?25.23 ?K1/2?8.14??5.56??6.51??7.63 ?Kg/3?7.51??8.54??7.90??7.80 ?K3/3?8.19??9.74??8.30??8.41 ?R????0.68??4.18??1.79??0.78 鹽 酸 小 檗 堿 % ?K1???13.18?9.16??13.36?12.06 ?K2???12.33?14.39?13.42?13.85 ?K3???14.75?16.71?13.48?14.35 ?K1/3??4.39?3.05??4.45??4.02 ?K2/3??4.11?4.80??4.47??4.62 ?K3/3??4.92?5.57??4.49??4.78 ?R?????0.81?2.52??0.04??0.76

結果以浸膏得率為指標得到的最佳提取工藝(A3B3C3D3),其浸膏得率和 鹽酸小檗堿含量均最高。驗證實驗進一步證明該工藝穩定可行。因此篩選得到 的最佳回流工藝為:用40倍無水乙醇回流提取3次,每次30min,趁熱過濾。 試驗例3黃芩的提取工藝研究

因為黃芩藥材中含有可將黃芩苷水解的酶,為了避免酶對黃芩苷分解破 壞,工藝考慮用超聲波對黃芩進行提取,一方面避免在較高的溫度下,黃芩自 身含有的酶對黃芩苷的分解,另一方面采用超聲波提取黃芩苷,收率明顯比水 煮法高。

1.超聲波提取溶劑的選擇:

考察在不同頻率超聲波下使用水及不同濃度的乙醇(80%,90%,95%, 無水乙醇)作為溶劑時黃芩提取液中黃芩苷的含量。將水及不同濃度的乙醇提 取液中黃芩苷的百分含量對乙醇濃度進行了線性回歸。發現黃芩苷的百分含量 與乙醇濃度有一定相關性,隨乙醇濃度的提高有增加的趨勢,其中95%與無水 乙醇提取液中黃芩苷的百分含量差異無顯著性,故選用95%的乙醇作為溶劑。

2.超聲波的頻率的選擇:

超聲波的頻率分別考察了10KHZ,20KHZ,200KHZ,600KHZ幾個不同的頻率 下同一溶劑中黃芩苷的得率,其中20KHZ頻率下的黃芩苷成分得率最高。故選 用20KHZ的超聲波。

3.超聲波提取的時間選擇:

結合上述選擇條件,分別考察超聲提取20分鐘,30分鐘,40分鐘提取液中 黃芩苷的百分含量,結果發現隨超聲提取時間的增加,提取液中黃芩苷的百分 含量也相應的增加,其中超聲提取30分鐘和40分鐘的黃芩苷得率差異沒有顯著 性,故選用超聲提取30分鐘。

試驗例4??大黃、黃芩兩味中藥水煮提取的工藝研究

采用正交實驗法,以加水量、提取時間、提取次數為因素,按L9(34)正交 表進行試驗,以干膏得率和有效成分為評價指標,分別對處方中大黃和黃芩提 取工藝進行篩選。因素水平見表6。

?????????????表6??因素水平表

????????????????????????因素

水平

???????A加水量(倍)????B提取時間(h)???????C提取次數

1????????8????????????0.5(0.5、0.5)??????????1

2????????10???????????1.5(1.0、0.5)??????????2

3????????12???????????2.0(1.5、1.0)??????????3

1.大黃的提取:

取大黃藥材40g,粉碎成1cm以下的小塊,加水浸泡30min,照表6進行 試驗,以干膏率和總蒽醌含量為評價指標。

總蒽醌測定方法為:

精密稱取經105℃干燥至恒重的1,8-二羥基蒽醌12.6mg,置25ml量瓶中, 加乙醚使溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密吸取5ml至50ml量瓶中,加乙醚稀 釋至刻度,搖勻,作為儲備液。各精密吸取儲備液1、2、3、4、5ml至10ml 量瓶中,水浴蒸干乙醚,加入0.5%醋酸鎂甲醇溶液至刻度,搖勻,于508nm處 測定吸收度,得回歸方程:Y=0.0441X+0.0077,相關系數r=0.9998。

精密稱取干膏粉約0.4g置燒瓶中,加2.5mol/L硫酸20ml回流1.5小時, 稍冷再加入30ml氯仿繼續回流1小時,分取氯仿層,再用氯仿10ml洗滌酸液, 合并氯仿液,定容至50ml,精密吸取2ml至25ml量瓶中,水浴蒸干氯仿,加 入0.5%醋酸鎂甲醇溶液至刻度,搖勻,于508nm處測定吸收度,代入回歸方程, 計算含量。試驗結果見表7。

?????????表7??大黃提取正交試驗表

試驗號???A?????B?????C???D(空白)??干膏粉得率(%)?總蒽醌(%)

1????????1?????1?????1?????1???????????3.43????????1.307

2????????1?????2?????2?????2???????????7.84????????1.523

3????????1?????3?????3?????3???????????9.46????????1.179

4????????2?????1?????2?????3???????????8.64????????1.865

5????????2?????2?????3?????1???????????10.32???????1.389

6????????2?????3?????1?????2???????????4.44????????1.297

7????????3?????1?????3?????2???????????10.15???????1.330

8????????3?????2?????1?????3???????????6.50????????1.653

9????????3?????3?????2?????1???????????9.43????????1.419

干???????20.73?22.22?14.37?23.18

膏??K1??23.40?24.66?25.91?22.43

得??K2??26.08?23.33?29.93?24.60

粉??K3

率??R????5.35??2.44??15.56?2.17

總??K1??4.009?4.502?4.257?4.115

蒽??K2??4.551?4.565?4.807?4.150

醌??K3??4.402?3.895?3.898?4.697

%??R????0.542?0.67??0.909?0.582

結果表明以干膏率為考察指標,最佳組合為A3B2C3,C>A>B;以總蒽醌含 量為考察指標,最佳組合為A2B2C2,C>B>A,以含量評價為主,綜合考慮選擇 A2B2C2,即以10倍量水,提取兩次,第一次1.5小時,第二次1小時。

取三份大黃藥材,進行驗證,結果見表8。

???????????表8??大黃提取驗證結果

序號???????????1???????????2????????????3

干膏率(%)????7.75????????7.02?????????8.14

含量(%)??????1.827???????1.882????????1.786

試驗結果與正交試驗結果相近,結果表明工藝穩定。

2.黃芩的提取:

對于黃芩的提取,因為黃芩藥材中含有可將黃芩苷水解的酶,為了避免酶 對黃芩苷分解破壞,采用黃芩于85℃水中投料。取黃芩藥材40g,粉碎成1cm 以下的小塊,于水溫85℃投料,照表1進行試驗。

黃芩苷含量測定照中國藥典2000年版一部248頁黃芩藥材含量測定進行。

???????????表9??黃芩提取正交試驗表

試驗號????A?????B?????C???D(空白)??干膏粉得率(%)??黃芩苷含量(%)

1?????????1?????1?????1?????1??????????4.30???????????15.62

2?????????1?????2?????2?????2??????????5.77???????????21.54

3?????????1?????3?????3?????3??????????8.60???????????20.09

4?????????2?????1?????2?????3??????????9.33???????????28.30

5?????????2?????2?????3?????1??????????10.20??????????26.72

6?????????2?????3?????1?????2??????????6.05???????????25.18

7?????????3?????1?????3?????2??????????10.64??????????19.90

8?????????3?????2?????1?????3??????????5.86???????????24.48

9?????????3?????3?????2?????1??????????8.20???????????26.93

干??????18.67?24.27?16.21??22.70

膏??K1?25.58?21.83?23.30??22.46

得??K2?24.70?22.85?29.44??23.79

粉??K3

率??R????6.91??2.44??13.23??1.33

黃??K1?57.25?63.82?65.28??69.27

芩??K2?80.20?72.74?76.77??66.62

苷??K3?71.31?72.20?66.71??72.87

%??R???22.95?8.92??11.49??6.25

結果表明以干膏率為考察指標,最佳組合為A2B1C3,C>A>B;以黃芩苷含 量為考察指標,最佳組合為A2B2C2,A>C>B,以含量評價為主,綜合考慮選擇 A2B2C2,即以10倍量水,提取兩次,第一次1.5小時,第二次1小時。????

取三份黃芩藥材,進行驗證,結果見表10。

?????????表10??黃芩提取驗證結果

?序號????????????1????????????2???????????3

干膏率(%)??????8.11?????????9.26????????9.79

含量(%)????????27.36????????28.40???????28.85

試驗結果與正交試驗結果相近,表明工藝穩定。

試驗例5??軟膠囊內容物的處方篩選研究:

1.基質的選擇

軟膠囊常用的基質有植物油和聚乙二醇(PEG400),考慮到PEG400對中藥 有效成分溶解度大,除適用于水溶性藥物制備軟膠囊外,尤其適用于中藥軟膠 囊和速效軟膠囊的制備,因此選擇PEG400、PEG6000作為內容物基質。

2.藥粉與基質的配伍試驗

為了考察藥粉與基質的配伍穩定性,進行了如下試驗:將上述噴霧干燥的 藥粉分為3份,其中2份分別加入1倍和1.5倍的PEG400和PEG6000的混合液,混 勻,制成模擬囊液,進行TLC和HPLC試驗。結果藥粉和囊液TLC都檢出大黃素、 鹽酸小檗堿和黃芩苷;囊液與藥粉HPLC圖都檢測出黃芩苷,并且未多出雜質峰, 說明基質與藥粉混合后比較穩定,并沒有相互發生反應,也沒有破壞其中的有 效成分。

3.內容物制備

軟膠囊內容物的要求應該是混懸均勻,不分層,具有適當的流動性。根據 Stokes定律,減少粒徑和增加分散介質黏度有利于混懸液的穩定,因此軟膠囊 囊液要先通過膠體磨以進一步減少粒徑。

按照藥粉所占囊液比例分別為30%、42%和48%擬定了3個配比進行了囊液處 方篩選。照上述比例配制3個侯選處方(各加0.5%的PEG6000),以500r/min 離心加速沉降2小時,計算沉降容積比(F=H/H0),觀察其穩定性。結果見表11。

??????????????表11??離心試驗結果

藥粉比例??????30%?????????42%????????????48%

沉降容積比F???0.93?????????≈1?????????????1

結論??????????不穩定???????穩定????????????穩定

結果表明,隨著藥粉比例的增加,混懸液穩定性增加,30%不穩定,42%和 48%穩定。接下來在壓丸工序中發現48%比例囊液太粘稠,漏丸多、成品率低, 壓丸困難;而42%比例則可以順利壓丸,成品率在90%以上,因此綜合考慮,選 擇42%為最佳囊液配比。

試驗例6??囊殼的配方研究

本發明的軟膠囊囊殼由明膠、增塑劑、水和附加劑組成,增塑劑選擇甘油, 遮光劑用二氧化鈦。囊殼中明膠與增塑劑的比例可以決定囊殼的硬度。但是通 常囊殼的配方中明膠和甘油的配比不好掌握,甘油太多則囊殼發軟;甘油太少 則囊殼發硬。均可以影響軟膠囊的質量穩定性及崩解時間。經過試驗發現明膠 與增塑劑甘油比較合適的比例為1∶0.3~0.4左右。若明膠與甘油的比例低于 1∶0.3時,囊殼發硬,若明膠與甘油的比例達到1∶1.8時則囊殼變軟。經試驗, 囊殼比例為明膠∶水∶甘油∶二氧化鈦(1∶1.2∶0.3∶0.01)時,壓制出的 膠囊外型美觀、軟硬適中,崩解時限照崩解時限檢查法(中國藥典2000年版一 部附錄XIIA)進行試驗,均在12min以內。結果見表12。

?????????????????????????????表12囊殼配方及崩解時間 試驗指標內 ????容 明膠:1?水:1.2 甘油:0.1?二氧 ??化鈦:0.01 明膠:1?水:1.2甘 油:0.2?二氧化鈦: ????0.01 明膠:1?水:1.2 甘油:0.3?二氧化 ????鈦:0.01 明膠:1?水:1.2 甘油:1.4?二氧化 ????鈦:0.01 明膠:1?水:1.2 甘油:1.8?二氧化 ????鈦:0.01 囊殼外觀及 ??物理性能 太硬,囊殼易碎 太硬,囊殼易碎 外觀光潔、軟硬度 ????合適 外觀光潔度較差、 ??太軟、易吸潮 外觀光潔度較差、 ??太軟、易吸潮 ??崩解時間 ????(分) ????11 ????12 ????10 ????12 ????12

根據上述試驗,可以得出結論,軟膠囊囊殼的配方以明膠∶水∶甘油∶二氧 化鈦=1∶1.2∶0.3∶0.01(重量比)為最佳配比。在此配比下囊殼的外觀光潔度, 軟硬度均適中,崩解時間在10分鐘左右。

試驗例7??本發明質量控制方法中的鑒別方法中展開劑的確定????

1、大黃(大黃素)

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖, 濾過,濾液置水浴上蒸干,殘渣加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴上加 熱30分鐘,立即冷卻,用氯仿20ml分2次提取,合并氯仿提取液,濃縮至約1ml, 作為供試品溶液;另取大黃素對照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的溶液,作為 對照品溶液;吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘 合劑的硅膠G薄層板上;以展開、涼干后置氨氣中熏的方法來顯色。照薄層色 譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)進行試驗研究。

對于展開劑的選擇,先采用石油醚(60~90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1) 的上層液為展開劑,雖然分離度好,斑點清晰、圓整,但是是大黃素比移值偏 低,Rf約為0.2;后對上述展開劑稍作調整,將比例該為15∶7∶1,取得較好的 分離效果,大黃素的比移值增大,Rf約為0.4。經試驗,三批中試樣品中均檢 出大黃素,且陰性樣品無干擾,說明本鑒別方法具有專屬性。

2、黃芩(黃芩甙)

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,滴加鹽酸4~6滴,振搖20 分鐘,濾過,濾液置水浴上濃縮至約4ml,作為供試品溶液;另取黃芩甙對照 品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;吸取上述兩種溶液各 15μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以展開、 涼干后噴以2%三氯化鐵乙醇溶液來顯色。

對于展開劑的選擇,先以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)為展開劑, 結果斑點拖尾嚴重,分離度差,經試驗,調整上述展開劑比例為醋酸乙酯-丁 酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1),并以冰醋酸預先飽和30分鐘時,結果取得良好的分離 效果,斑點清晰,Rf值適中。經試驗,三批中試樣品均檢出黃芩苷,且陰性樣 品無干擾,說明本鑒別方法具有專屬性。

試驗例8??本發明質量控制方法中的含量測定方法中測定波長的選擇

取黃芩苷對照品適量,用甲醇超聲溶解后,制成每1ml約含10ug的溶液, 在波長200~400?n?m的范圍內作紫外光譜掃描,結果表明在276nm處有最大吸 收波長,根據掃描結果確定其檢測波長為276nm。

試驗例9??軟膠囊穩定性的研究

取軟膠囊樣品按中國藥典2000年版二部附錄XIXC“藥物穩定性試驗指導 原則”進行溫度、濕度和強光照射影響因素試驗。濕度條件為92.5%、光照條 件為4500Lx、溫度條件選擇40℃(因為囊殼明膠在60℃會融化,生產中明膠化 膠溫度即為60℃)。選擇重點考察項目為性狀、鑒別、崩解時限和黃芩苷含量 測定。結果見表13。

?????????????????表13?軟膠囊影響因素試驗結果

試驗????時間?????????????????????????????????????崩解時限??含量

??????????????????????性狀??????????鑒別

條件????(天)??????????????????????????????????????(min)????(mg)

??????????????外觀整潔,內容物??檢出大黃素、鹽酸

?????????0?????????????????????????????????????????12????16.70

?????????????????均勻不分層??????小檗堿、黃芩苷

溫度??????????外觀整潔,內容物??檢出大黃素、鹽酸

?????????5?????????????????????????????????????????13????16.55

(40℃)??????????均勻不分層???????小檗堿、黃芩苷

??????????????外觀整潔,內容物??檢出大黃素、鹽酸

?????????10????????????????????????????????????????13????16.38?

????????????????均勻不分層???????小檗堿、黃芩苷

濕度??????????外觀整潔,內容物??檢出大黃素、鹽酸

?????????5?????????????????????????????????????????11????16.50

(92.5%)????????均勻不分層???????小檗堿、黃芩苷

??????????????外觀整潔,內容物??檢出大黃素、鹽酸

?????????10????????????????????????????????????????13????16.61

????????????????均勻不分層???????小檗堿、黃芩苷

??????????????外觀整潔,內容物??檢出大黃素、鹽酸

光照?????5?????????????????????????????????????????12????16.86

????????????????均勻不分層???????小檗堿、黃芩苷

??????????????外觀整潔,內容物??檢出大黃素、鹽酸

(4500L)??10????????????????????????????????????????11????16.53

????????????????均勻不分層???????小檗堿、黃芩苷

結果表明,一清軟膠囊樣品在上述影響因素條件下放置10天,其性狀、鑒 別、崩解時限及含量與放置前相比均無明顯變化,質量穩定,說明制備工藝合 理、可行。

另取3批樣品,以聚氯乙烯塑料瓶包裝,于室溫放置18個月,分別于0、3、 6、9、12和18個月取樣,按穩定性重點考察項目檢測各項指標(性狀、鑒別、 崩解時限、含量及試驗結束時的微生物限度檢查作為重點檢測指標)。結果見 表14。

????????????????????????表14??穩定性考察試驗數據 ??批 ??號 ??時間 ??(月) ??????性狀 ????鑒別 ??崩解時限 ??(min) ??微生物 ??限度 ??含量 ??(mg) ? ? ? ? ? ? 020908 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ????0 ????3 ????6 ? ????9 ????12 ????18 ? ? ? 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 粘稠液體,均勻無沉淀外觀 整潔,內容物為深褐色粘稠 ????液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 ? 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 ? ? ? ????12 ????14 ????18 ? ????21 ????24 ????29 ? ? ? 符合規定 ? ? ? ? 符合規定 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ????16.70 ????16.88 ????16.51 ? ????16.50 ????16.12 ????15.81 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?020910 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ????0 ????3 ????6 ? ????9 ????12 ????18 ? ? ? 外觀整潔,內容物為深褐色 粘稠液體,均勻無沉淀外觀 整潔,內容物為深褐色粘稠 液體,均勻無沉淀外觀整潔, 內容物為深褐色粘稠液體, ????均勻無沉淀 ? 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 ? 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 ? ? ? ????10 ????13 ????16 ? ????19 ????22 ????30 ? ? ? 符合規定 ? ? ? ? 符合規定 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ????15.82 ????15.58 ????15.27 ? ????14.84 ????15.04 ????14.57 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?020912 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ????0 ????3 ????6 ? ????9 ????12 ????18 ? ? ? ? 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 ? 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ? ??粘稠液體,均勻無沉淀 外觀整潔,內容物為深褐色 ??粘稠液體,均勻無沉淀 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 ? 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ? ????鹽酸小檗堿 檢出黃芩苷、大黃素、 ????鹽酸小檗堿 ? ? ? ????10 ????12 ????17 ? ????20 ????25 ????31 ? ? ? ? 符合規定 ? ? ? ? 符合規定 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ????18.15 ????17.95 ????17.46 ? ????17.60 ????17.30 ????16.94 ? ? ? ?

結果表明:本品在室溫下放置18個月,其外觀、鑒別、崩解時限、含量和 微生物限度檢查均符合相關規定,說明本品穩定性良好。

試驗例10?軟膠囊劑與膠囊劑崩解速度對比試驗

測定本發明制成的軟膠囊制劑與按照常規水提制備的膠囊制劑崩解時限, 結果見表15。

?????????????????????表15?崩解時限比較

結果表明:本發明制成的軟膠囊制劑的平均崩解時間為11分鐘,常規方 法制備的膠囊劑平均崩解時間為50分鐘。本發明制成的軟膠囊制劑的崩解速 度明顯增快。

實施例1:一清軟膠囊的制備(水提)

取黃連440g,大黃1333g,黃芩667g三味藥材,粉碎成粗粉,分別加水煮 煎二次(黃芩于85℃加入),第一次加水10倍量,煎煮1.5小時,第二次加水 10倍量,煎煮1小時,合并煎液過濾,濾液減壓濃縮至藥材量的2~3倍,高速 離心(10000轉/分以上),棄去沉淀,上清液濃縮至相對密度約為1.25(70℃), 噴霧干燥成干浸膏粉。上述浸膏粉合并后加入聚乙二醇400和聚乙二醇6000 的混合物(99.5%PEG400+0.5%PEG6000),混勻,藥粉所占囊液比例42%,過 膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊1000粒。

實施例2:一清軟膠囊的制備

取黃連440g,大黃1333g,黃芩667g三味藥材,粉碎成粗粉,分別加水 煮煎二次(黃芩于82℃加入),第一次加水12倍量,煎煮2小時,第二次加水 8倍量,煎煮1.5小時,合并煎液過濾,濾液減壓濃縮至藥材量的2~3倍,高 速離心(10000轉/分以上),棄去沉淀,上清液濃縮至相對密度約為1.25(75 ℃),噴霧干燥成干浸膏粉。上述浸膏粉合并后加入聚乙二醇400和聚乙二醇 6000的混合物(99.7%PEG400+0.3%PEG6000),混勻,藥粉所占囊液比例39%, 過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊1000粒。

實施例3:一清軟膠囊的制備

大黃的提取:

大黃4000g粉碎成粗粉,加入95%乙醇10倍量浸泡24小時后,用頻率20kHz 的超聲波處理30min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心(轉速為 10000r/min以上)后濃縮至相對密度約為1.10。

濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用95% 乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點。收集醇洗脫液,回收乙醇洗 脫液,濃縮,經噴霧干燥得到大黃的有效成分蒽醌類精制粉。

黃連的提取:

黃連1320g粉碎成粗粉,加以10倍量水,提取兩次,第一次1.5小時,第二 次1小時,合并煎液,濃縮后將浸膏干燥、粉碎。再用40倍無水乙醇回流提取3 次,每次30分鐘,趁熱過濾,濾液回收乙醇后經高速離心機離心(轉速為 10000r/min以上),過濾,濃縮,濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗 脫至洗脫液無色,再換用95%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點。 收集醇洗脫液,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到黃連的有效成分鹽酸 小檗堿的精制粉。

黃芩的提取:

黃芩2000g粉碎成粗粉,加95%乙醇10倍量浸泡24小時后,用頻率20kHz的 超聲波處理30min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后(轉速為 10000r/min以上)濃縮至相對密度約為1.10。

濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用95% 乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點。回收乙醇洗脫液,濃縮,經 噴霧干燥得到含有黃芩苷的精制粉。

上述大黃、黃連、黃芩三味藥材的精制粉,合并后加入聚乙二醇400和聚 乙二醇6000的混合物(99.5%PEG400+0.5%PEG6000),混勻,藥粉所占囊液比 例42%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊1000粒。?

實施例4:一清軟膠囊的制備

大黃的提取:

大黃4000g粉碎成粗粉,加入92%乙醇12倍量浸泡30小時后,用頻率20kHz 的超聲波處理35min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心(轉速為 10000r/min以上)后濃縮至相對密度約為1.10。

濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用92% 乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點。收集醇洗脫液,回收乙醇洗 脫液,濃縮,經噴霧干燥得到大黃的有效成分蒽醌類精制粉。

黃連的提取:

黃連1320g粉碎成粗粉,加以12倍量水,提取兩次,第一次2.5小時,第二 次1小時,合并煎液,濃縮后將浸膏干燥、粉碎。再用45倍無水乙醇回流提取4 次,每次45分鐘,趁熱過濾,濾液回收乙醇后經高速離心機離心(轉速為 10000r/min以上),過濾,濃縮,濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗 脫至洗脫液無色,再換用98%乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點。 收集醇洗脫液,回收乙醇洗脫液,濃縮,經噴霧干燥得到黃連的有效成分鹽酸 小檗堿的精制粉。

黃芩的提取:

黃芩2000g粉碎成粗粉,加98%乙醇10倍量浸泡18小時后,用頻率30kHz的 超聲波處理25min,過濾,棄去藥渣,濾液經高速離心機離心后(轉速為 10000r/min以上)濃縮至相對密度約為1.10。

濃縮濾液過大孔樹脂層析柱,先用純凈水洗脫至洗脫液無色,再換用96% 乙醇洗脫直至醇洗脫液經TLC檢測不出相應斑點。回收乙醇洗脫液,濃縮,經 噴霧干燥得到含有黃芩苷的精制粉。

上述大黃、黃連、黃芩三味藥材的精制粉,合并后加入聚乙二醇400和聚 乙二醇6000的混合物(99.7%PEG400+0.3%PEG6000),混勻,藥粉所占囊液比 例39%,過膠體磨,經壓丸,干燥,洗丸,干燥等工序即得軟膠囊1000粒。

實施例5:本中藥軟膠囊制劑的鑒別方法:

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖, 濾過,濾液置水浴上蒸干,殘渣加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴上加 熱30分鐘,立即冷卻,用氯仿20ml分2次提取,合并氯仿提取液,濃縮至約1ml, 作為供試品溶液;另取大黃素對照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的溶液,作為 對照品溶液;照薄層色譜法(《中國藥典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取 上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層 板上;在60~90℃溫度下,以15∶5∶1石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開 劑,展開、涼干后置氨氣中熏的方法來顯色,供試品色譜中,在與對照品色譜 相應位置上,顯相同顏色的斑點。

實施例6:本中藥軟膠囊制劑的鑒別方法:

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖, 濾過,濾液置水浴上濃縮至約1ml,作為供試品溶液;另取鹽酸小檗堿對照品, 加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法(《中國藥 典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以 羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以10∶6∶1∶1醋酸乙酯-丁酮-甲 酸-水為展開劑,展開,取出,涼干后置紫外燈(365nm)下檢視,顯相同顏色 的熒光斑點。

實施例7:本中藥軟膠囊制劑的鑒別方法:

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,滴加鹽酸4~6滴,振搖20 分鐘,濾過,濾液置水浴上濃縮至約4ml,作為供試品溶液;另取黃芩甙對照 品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法(《中 國藥典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各15μl,分別點于同 一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以5∶3∶1∶1醋酸乙酯-丁酮 -甲酸-水為展開劑,展開、涼干后噴以2%三氯化鐵乙醇溶液來顯色,供試品色 譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點。

實施例8:本中藥軟膠囊制劑的含量測定方法:

ODS反相色譜柱(4.6mm×150mm,I.D.);以50∶50甲醇-0.2mol/L磷酸二氫 鈉緩沖液(磷酸調pH值至2.7)??(經抽濾、超聲脫氣后使用)為流動相;流速: 0.8ml·min-1;檢測波長:276nm;進樣量:10ul;靈敏度:0.05AUFS,柱溫: 室溫;黃芩苷峰的理論板數為3230。

精密稱取中藥軟膠囊制劑內容物約0.6g,置50ml量瓶中,加甲醇約40ml, 超聲20min,用甲醇定容,搖勻,精密吸取1ml至10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻 度,搖勻,離心10min(15000r/min),分取上清夜,即得供試品溶液;精密稱 取105℃干燥至恒重的黃芩苷對照品約5mg,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,超 聲20min,放冷后,用甲醇定容,搖勻,即得,每1ml含黃芩苷100μg。

實施例9:本中藥軟膠囊制劑的鑒別方法:

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖, 濾過,濾液置水浴上蒸干,殘渣加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴上加 熱30分鐘,立即冷卻,用氯仿20ml分2次提取,合并氯仿提取液,濃縮至約1ml, 作為供試品溶液;另取大黃素對照品,加氯仿制成每1ml含0.5mg的溶液,作為 對照品溶液;照薄層色譜法(《中國藥典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取 上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層 板上;在60~90℃溫度下,以15∶5∶1石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開 劑,展開、涼干后置氨氣中熏的方法來顯色,供試品色譜中,在與對照品色譜 相應位置上,顯相同顏色的斑點。

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,浸漬2小時,并時時振搖, 濾過,濾液置水浴上濃縮至約1ml,作為供試品溶液;另取鹽酸小檗堿對照品, 加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法(《中國藥 典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各10μl,分別點于同一以 羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以10∶6∶1∶1醋酸乙酯-丁酮-甲 酸-水為展開劑,展開,取出,涼干后置紫外燈(365nm)下檢視,顯相同顏色 的熒光斑點。

取中藥軟膠囊制劑內容物約2g,加甲醇50ml,滴加鹽酸4~6滴,振搖20 分鐘,濾過,濾液置水浴上濃縮至約4ml,作為供試品溶液;另取黃芩甙對照 品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照品溶液;照薄層色譜法(《中 國藥典》2000年一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各15μl,分別點于同 一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上;以5∶3∶1∶1醋酸乙酯-丁酮 -甲酸-水為展開劑,展開、涼干后噴以2%三氯化鐵乙醇溶液來顯色,供試品色 譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色的斑點。

ODS反相色譜柱(4.6mm×150mm,I.D.);以50∶50甲醇-0.2mol/L磷酸二氫 鈉緩沖液(磷酸調pH值至2.7)??(經抽濾、超聲脫氣后使用)為流動相;流速: 0.8ml·min-1;檢測波長:276nm;進樣量:10ul;靈敏度:0.05AUFS,柱溫: 室溫;黃芩苷峰的理論板數為3230。

精密稱取中藥軟膠囊制劑內容物約0.6g,置50ml量瓶中,加甲醇約40ml, 超聲20min,用甲醇定容,搖勻,精密吸取1ml至10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻 度,搖勻,離心10min(15000r/min),分取上清夜,即得供試品溶液;精密稱 取105℃干燥至恒重的黃芩苷對照品約5mg,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,超 聲20min,放冷后,用甲醇定容,搖勻,即得,每1ml含黃芩苷100μg。

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