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修改器官和組織細胞膜的脂肪酸組合物.pdf

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修改 器官 組織 細胞膜 脂肪酸 組合
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摘要
申請專利號:

CN02817634.0

申請日:

20020720

公開號:

CN1553798A

公開日:

20041208

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K9/107,A61K31/23,A61P9/00 主分類號: A61K9/107,A61K31/23,A61P9/00
申請人: 目標打擊股份公司
發明人: Y·卡彭蒂爾,I·杜龐特
地址: 比利時布魯塞爾
優先權: 01117991.8
專利代理機構: 中國專利代理(香港)有限公司 代理人: 張元忠;孟凡宏
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法律狀態
申請(專利)號:

CN02817634.0

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種用于迅速改變器官和組織的細胞膜脂肪酸組成的組合物和方法,其特別是涉及通過給人或動物體胃腸外使用包含脂肪酸甘油三酯的等滲脂質乳劑形式的脂肪酸來增加器官和組織的細胞膜的ω-3脂肪酸的量。

權利要求書

1.一種等滲的脂質乳劑,以乳劑中脂質的總量為基礎,其包含(i)約60至約95%重量的中鏈甘油三酯(MCT),和(ii)約5至40%重量的魚油,前提是該乳劑不包含植物油。2.如權利要求1所述的等滲脂質乳劑,其中所述的中鏈甘油三酯脂肪酸包含約6至約14個碳原子。3.如權利要求2所述的等滲脂質乳劑,其中所述的中鏈甘油三酯包括至少約90%辛酸(C)和癸酸(C)的甘油三酯。4.如權利要求1所述的等滲脂質乳劑,其中所說的魚油選自沙丁魚、鮭魚、鯡魚、鯖魚和/或其它冷水魚油或通過甘油與通過冷水魚油的水解所獲得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成獲得的魚油。5.如權利要求1所述的等滲脂質乳劑,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約25%的二十碳五烯酸。6.如權利要求1所述的等滲脂質乳劑,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約12%的二十二碳六烯酸。7.如權利要求1所述的等滲脂質乳劑,其中以脂質乳劑的總量為基礎,總脂質含量為約5至約30%重量。8.如權利要求1所述的等滲脂質乳劑,其進一步包含至少一種助劑或添加劑,所說的助劑或添加劑選自乳化劑、乳化助劑(輔助乳化劑)、穩定劑、抗氧化劑和等滲添加劑。9.一種通過給受治療者使用治療有效量的等滲脂質乳劑來增加人或動物體關鍵器官和組織的細胞膜的ω-3-脂肪酸含量的方法,所說的等滲脂質乳劑以乳劑中脂質的總量為基礎,包含(i)約60至約95%重量的中鏈甘油三酯(MCT),和(ii)約5至約40%重量的魚油,前提是該乳劑不包含植物油。10.如權利要求9所述的方法,其中所說的中鏈甘油三酯脂肪酸包含約6至約14個碳原子。11.如權利要求9所述的方法,其中所說的中鏈甘油三酯包括至少約90%辛酸(C)和癸酸(C)的甘油三酯。12.如權利要求9所述的方法,其中所說的魚油選自沙丁魚、鮭魚、鯡魚、鯖魚和/或其它冷水魚油或通過甘油與通過冷水魚油的水解所獲得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成獲得的魚油。13.如權利要求9所述的方法,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約25%的二十碳五烯酸。14.如權利要求9所述的方法,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約12%的二十二碳六烯酸。15.如權利要求9所述的方法,其中以該脂質乳劑的總量為基礎,總脂質含量為約5至約30%重量。16.如權利要求9所述的方法,其進一步包含至少一種助劑或添加劑,所說的助劑或添加劑選自乳化劑、乳化助劑(輔助乳化劑)、穩定劑、抗氧化劑和等滲添加劑。17.如權利要求9所述的方法,其中所說的器官選自心、腎、腦、肝、肺和脂肪組織。18.如權利要求9所述的方法,其中所說的組織選自內皮、白細胞、血小板和免疫細胞。19.如權利要求9所述的方法,其是用于治療手術或經皮血管再造術、心肌局部缺血或梗死、不穩定的咽痛、短暫的局部腦缺血或中風、炎癥、自體免疫、以及血栓形成性疾病、器官移植、血管造影操作、血液透析、早產兒、急性期反應、急性呼吸痛苦綜合征、腸局部缺血、糖尿病的心血管并發癥、嚴重燒傷、嚴重的惡病質、雷諾氏病、以及細胞膜中ω-3脂肪酸不足。20.一種等滲的脂質乳劑用于制備增加關鍵細胞和組織細胞膜ω-3脂肪酸含量的藥物,其中以乳劑中脂質的總量為基礎,所說的等滲脂質乳劑包含(i)約60至約95%重量的中鏈甘油三酯(MCT),和(ii)約5至約40%重量的魚油,前提是該乳劑不包含植物油。21.如權利要求20所述的應用,其中所說的中鏈甘油三酯脂肪酸包含約6至約14個碳原子。22.如權利要求20所述的應用,其中所說的中鏈甘油三酯包括至少約90%辛酸(C)和癸酸(C)的甘油三酯。23.如權利要求2?0所述的應用,其中所說的魚油選自沙丁魚、鮭魚、鯡魚、鯖魚和/或其它冷水魚油或通過甘油與通過冷水魚油的水解所獲得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成獲得的魚油。24.如權利要求20所述的應用,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約25%的二十碳五烯酸。25.如權利要求20所述的應用,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約12%的二十二碳六烯酸。26.如權利要求20所述的應用,其中以該脂質乳劑的總量為基礎,總脂質含量為約5至約30%重量。27.如權利要求20所述的應用,其進一步包含至少一種助劑或添加劑,所說的助劑或添加劑選自乳化劑、乳化助劑(輔助乳化劑)、穩定劑、抗氧化劑和等滲添加劑。28.如權利要求20所述的應用,其中所說的器官選自心、腎、腦、肝、肺和脂肪組織。29.如權利要求20所述的應用,其中所說的組織選自內皮、白細胞、血小板和免疫細胞。30.如權利要求20所述的應用,其是用于治療手術或經皮血管再造術、心肌局部缺血或梗死、不穩定的咽痛、短暫的局部腦缺血或中風、炎癥、自體免疫、以及血栓形成性疾病、器官移植、血管造影操作、血液透析、早產兒、急性期反應、急性呼吸痛苦綜合征、腸局部缺血、糖尿病的心血管并發癥、嚴重燒傷、嚴重的惡病質、雷諾氏病、以及細胞膜中ω-3脂肪酸不足。31.一種包含一種等滲脂質乳劑的藥用組合物,其中以該乳劑中的脂質總量為基礎,所說的等滲脂質乳劑包含(i)約60至約95%重量的中鏈甘油三酯(MCT),和(ii)約5至約40%重量的魚油,前提是該乳劑不包含植物油。32.如權利要求31所述的藥用組合物,其中所說的中鏈甘油三酯脂肪酸包含約6至約14個碳原子。33.如權利要求32所述的藥用組合物,其中所說的中鏈甘油三酯包括至少約90%辛酸(C)和癸酸(C)的甘油三酯。34.如權利要求31所述的藥用組合物,其中所說的魚油選自沙丁魚、鮭魚、鯡魚、鯖魚和/或其它冷水魚油或通過甘油與通過冷水魚油的水解所獲得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成獲得的魚油。35.如權利要求31所述的藥用組合物,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約25%的二十碳五烯酸。36.如權利要求31所述的藥用組合物,其中以魚油提濃物的脂肪酸甲酯為基礎,所說魚油的甘油三酯包含至少約12%的二十二碳六烯酸。37.如權利要求31所述的藥用組合物,其中以該脂質乳劑的總量為基礎,總脂質含量為約5至約30%重量。38.如權利要求31所述的藥用組合物,其進一步包含至少一種助劑或添加劑,所說的助劑或添加劑選自乳化劑、乳化助劑(輔助乳化劑)、穩定劑、抗氧化劑和等滲添加劑。39.胃腸外應用的如權利要求31所述的藥用組合物。40.用于注射的如權利要求39所述的藥用組合物。

說明書

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本發明涉及一種組合物和用于迅速改變器官和組織細胞膜的脂肪 酸組成的方法,特別是通過給人或動物體胃腸外使用適宜的包含所選 擇的脂肪酸甘油三酯的等滲脂質乳劑形式的脂肪酸來增加器官和組織 細胞膜ω-3脂肪酸的量。

已知脂質乳劑是胃腸外營養品的必需組分并且現在考慮將其用于 其它應用。在正常(口服)營養品不可能、有害或有醫學禁忌的情況下 或當必須迅速改變細胞的脂肪酸模式時,用作胃腸外營養品的脂質乳 劑以可靜脈內可接受的劑型形式來為機體提供脂肪。目前可獲得的脂 質乳劑是由植物油(例如,紅花油或豆油)制得的。在一些情況下,其 還包含中鏈甘油三酯(MCT)和/或海洋來源的油(魚油)。

植物或海洋來源的長鏈甘油三酯可作為能量來源,并且當包含多不 飽和脂肪酸(“PUFA”)時,可用作必需脂肪酸的供應者。將該多不飽和 的脂肪酸分成ω-6(ω-6;在現有技術中有時被稱為“n-6”PUFA)或 ω-3(ω-3,有時被稱為“n-3”PUFA)系列的分類是以化學結構特征為基 礎的,更準確地說,是以第一個不飽和鍵與該脂肪酸分子甲基末端(ω 末端)的距離為基礎的。例如,在本說明書中,優選地使用“ω-3”。

植物油,例如,大豆油和紅花油的特征在于ω-6系列多不飽和脂肪 酸(主要是亞油酸,18∶2ω-6)的含量高而其ω-3脂肪酸(幾乎只是α- 亞麻酸形式,18∶3ω-3)的含量低。

得自冷水魚的魚油(“FO”)的特征在于ω-3系列多不飽和脂肪酸 (主要是順式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸,“EPA”,20∶5ω-3、二十 二碳五烯酸,"DPA",22∶5ω-3和順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六 烯酸,“DHA”,22∶6?ω-3)的含量高而其ω-6脂肪酸的含量低。

與脂質乳劑一起進行給藥的中鏈甘油三酯(“MCT”)主要作為能量 的來源。中鏈甘油三酯包含飽和脂肪酸,所以其既不包含ω-6也不包 含ω-3必需脂肪酸。因為它們的快速水解和其它性質(增強顆粒與細胞 的結合),所以MCT對乳劑顆粒的代謝具有令人感興趣的影響。

人體本身不能產生必需的ω-6或ω-3系列的多不飽和長鏈脂肪酸, 即,其必需口服、腸內或胃腸外給藥。機體僅能由短鏈不飽和脂肪酸來 合成長鏈不飽和脂肪酸。兩種系列競爭同一個延長-去飽和的酶系。但 是,不能由ω-3系列的母體來形成ω-6脂肪酸,反之亦然。

為了使身體可以獲得外源性的游離脂肪酸,其必需通過酶——脂蛋 白脂肪酶(LPL)從輸入的甘油三酯水解釋放或者與乳劑顆粒一起被吸 收或其殘余物直接進入細胞。一直認為這種開始的脂質水解步驟是脂 質代謝的限速步驟。這種限制是由裂解甘油三酯時脂質蛋白脂肪酶相 對受限制的活性所導致的。因此,植物油乳劑的最大代謝速率為每天 約3.8g脂質/kg體重(Hallberg等人,Acta?Physiol.Scand.(1965) 第65卷,增刊254,2-23頁)。

在甘油三酯輸入期間,希望達到盡可能低的甘油三酯血清濃度,例 如相當于網狀內皮系統(RES)對外源性脂質的低負載。

一般而言,手術后和創傷后的情況以及嚴重的膿毒性發作的特征為 免疫系統的極大刺激。免疫反應包括在高水平時可造成嚴重組織損害 的細胞因子(例如,腫瘤壞死因子和白介素)的釋放。此外,高細胞因子 濃度還損害LPL對循環的甘油三酯的水解。

在該類臨床情況中,特別重要的是使用可迅速水解和消除(以避免 血漿甘油三酯濃度的過度增加)并且可以提供能降低細胞因子的產生 以及細胞因子對組織的毒性的脂肪酸(例如ω-3脂肪酸)的外源性甘油 三酯。當脂肪酸從該甘油三酯分子裂解下來并混入(以游離形式或作為 磷脂的組分的形式)到細胞膜中時可獲得這種作用,其中,在細胞膜中 脂肪酸影響膜的結構(和功能)并可作為第二信使和類花生酸的母體。 因此,希望這種過程盡可能迅速地發生。

魚油的甘油三酯的水解比得自植物油(例如豆油)的甘油三酯的水 解更緩慢,得自植物油的甘油三酯的水解比中鏈甘油三酯的水解更 慢。向長鏈甘油三酯乳劑中添加魚油乳劑甚至可以抑制由LPL進行的 長鏈甘油三酯(得自豆油)的水解。

公開的歐洲專利申請EP-A-0311091公開了一種用于胃腸外營養 的包含中鏈甘油三酯和高量魚油的脂質乳劑。

公開的國際專利申請WO-A-90/08544公開了作為ω-脂肪酸來源的 包含魚油和以總脂質為基礎的0至90%中鏈甘油三酯的脂肪乳以及其 用于治療腹腔膿毒性感染的腹膜內應用。

公開的國際專利申請WO-A-97/19683公開了用于胃腸外營養的包 含中鏈甘油三酯、植物油和魚油的脂質乳劑。WO-A-97/19683還公開 了所說脂質乳劑用于治療手術后、創傷后、膿毒癥、炎癥或消瘦病、 血管血栓形成風險增加和嚴重的心律失常的應用。

公開的歐洲專利申請EP-A-0687418提供了一種限制患有創傷、燒 傷和/或膿毒癥的患者的損傷性響應的脂質乳劑,該脂質乳劑可以被腸 內給藥或胃腸外給藥。

Simoens,C.等人在Clinical?Nutrition(1995),14,177-185中 公開了四種包含不同植物油的脂質乳劑對各種組織中脂肪酸組成的影 響。Sato,M.等人在Journal?of?Parenteral?and?Enteral?Nutrition (1994),18,112-118中公開了在類似血漿的介質中脂蛋白脂肪酶對包 含中鏈和長鏈甘油三酯的混合脂質乳劑的水解。

公開的德國專利申請DE-A-3721137公開了一種只包含魚油或包 含魚油和植物油并包含或不包含中鏈甘油三酯的脂質乳劑用于胃腸外 營養和降低腫瘤生長的應用。

公開的德國專利申請DE-A-3409793描述了一種用于輸入的脂質 乳劑,其包含含有20至22個碳原子的脂肪酸、其酯或2或多種該類 脂肪酸或酯的混合物以及植物油、乳化劑、和水。脂肪酸是得自海洋 來源(魚油)的酯的脂肪酸,特別是ω-3脂肪酸。所說的植物油是精制 的豆油和/或紅花油。

Treskova,E.等人在Journal?of?Parenteral?and?Enteral Nutrition(2000),23,253-257中用小鼠模型對不同靜脈內脂質乳劑 (魚油;MCT/植物油/魚油;植物油和MCT/植物油)的血漿清除率和組織 靶向性進行了比較。Billman,G.E.,等人在Circulation (1999),99,2452-2457中令人信服地證明了以其純游離脂肪酸形式靜 脈內給藥的ω-3脂肪酸可預防狗的由局部缺血誘導的心律不齊。

由上面可以看出,公認的ω-多不飽和脂肪酸的主要作用有:

(i)降低炎癥和栓塞反應,

(ii)降低細胞對不同刺激的反應性(例如,降低心律失常的刺 激,即心肌梗塞或局部缺血期間的刺激,在癌癥和炎癥中降低作為對 介質如TNFα響應的惡疾),

(iii)改善組織的微灌注(例如,中風期間或局部缺血-重新灌注 后的微灌注),

(iv)改善細胞內的抗氧化劑情況(盡管PUFAs對過氧化物的敏 感性是眾所周知的,但是其可通過足夠量的脂溶性抗氧化劑來進行控 制),和

(v)限制細胞內的脂肪積聚。

此外,ω-3?PUFAs對于胎兒和早產新生兒中樞神經系統(CNS)和視 網膜的成熟而言也是必需的。但是,在口服供給后,ω-3脂肪酸富集 的速率在不同組織間有很大的差別并且在腦的一些區域和視網膜中特 別低。

雖然ω-3脂肪酸在所有這些不同水平都起著重要作用,但人類食 物攝取的發展特征為ω-3脂肪酸的消費大量增加和ω-6脂肪酸攝取的 增加,在西方國家人口中尤其如此。

在一些臨床情況中更已經證明了與進入到細胞膜磷脂中的ω-3脂 肪酸濃度十分相關的ω-3脂肪酸的益處。

本發明的一個目的是要提供一種使得可以使ω-3脂肪酸十分迅速 和有效地吸收/富集到器官和組織的細胞膜中的方法和組合物。ω-3脂 肪酸被有效攝入到器官和組織的細胞膜中指的是所給的ω-3脂肪酸或 其母體僅有一部分(或沒有)被氧化,其大多數(或全部)都混入到器官 和組織中即細胞膜中。在某些情況下,細胞膜及其磷脂富含ω-3長鏈 多不飽和脂肪酸對于ω-3和ω-6脂肪酸之間的恢復和充分平衡而言是 必需的(或至少是部分需要的)。獲得這些作用不僅對急性病癥中的患 者而言是必需的,而且對于有增加細胞膜磷脂中ω-3脂肪酸需要的所 有患者而言都是必需的,并且當通過靜脈內途徑給藥時可提供某些優 點,如在早產兒和患有惡病質性(cachectic)(消瘦)疾病的患者和不能 吸收到大量的ω-3脂肪酸的人的情況中都是有益的。

第一種選擇是輸入純ω-3?PUFA。但是,因為游離的脂肪酸具有很 高的細胞毒性,所以輸入純ω-3脂肪酸PUFA的唯一可能途徑是將其與 白蛋白(因為其存在于血漿中)相結合。輸入速率應十分緩慢以避免血 漿濃度的顯著增加。白蛋白的存在將增加血漿區的大小并還將顯著增 加成本。

第二種選擇是輸入純魚油乳劑。但是,純魚油乳劑顆粒具有十分緩 慢的消除速率,并且當考慮其在ω-3?PUFA方面的高含量時,用純魚油 乳劑所獲得的ω-3脂肪酸向細胞膜磷脂中的混入是十分低效的。這一 點可以用大部分通過其它途徑如氧化而被代謝的事實來說明。

第三種選擇是輸入MLF?541——一種由公開的國際專利申請WO- A-97/19683所獲知的脂質乳劑。按脂質的總量計,所說的脂質乳劑包 含50%MCT(“M”)、植物油(“L”)和10%魚油(“F”)。但是, 已經發現這種乳劑能維持膜磷脂中ω-3和ω-6脂肪酸之間的平衡,但 是卻不能誘發特定的ω-3脂肪酸的富集。

從上面可以看出,本發明的目的是胃腸外給藥,但并不涉及為了營 養支持/營養的目的而進行的平衡的脂肪酸供給。本發明的這種目的和 其它目的已經通過包含中鏈甘油三酯(MCT)和魚油的等滲脂質乳劑得 到了解決。本發明的乳劑不包含植物油。本發明特別是涉及一種等滲 的脂質乳劑,以該乳劑中的脂質總量計,其包含

(i)約60至約95%重量的中鏈甘油三酯(MCT),和

(ii)約5至約40%重量的魚油,

前提是該乳劑不包含植物油。

已經令人吃驚地發現,通過使用本發明的脂質乳劑可以顯著增加某 些關鍵器官和組織的細胞膜的ω-3脂肪酸含量。與包含魚油作為唯一 甘油三酯來源的相似乳劑或包含魚油、植物油和中鏈甘油三酯組合的 相似乳劑相比,雖然與純魚油乳劑相比使用的魚油更少并且不含任何 植物油,但上面所說的本發明的脂質乳劑更有效。已經進一步發現MCT 與魚油的比例對所得效果有顯著影響。

本發明的中鏈甘油三酯包含具有6至14個碳原子的脂肪酸。優選 地,至少90%重量的MCTs是辛酸(C8)和癸酸(C10)的甘油三酯。本發明 脂質乳劑中的中鏈甘油三酯部分優選地為該脂質乳劑總脂質含量的70 %至90%,更優選地為78%至85%重量。

已知魚油包含混入到甘油三酯中的二十碳五烯酸(EPA,20∶5ω-3) 和二十二碳六烯酸(DHA,22∶6ω-3),這些酸是所謂的高不飽和ω-3脂 肪酸,其對于必需供給機體的結構單元而言是必需的并且在生物學上 是很重要的,例如作為類花生酸類物質的母體和膜脂質的結構元素。 這些酸進一步有助于抗血栓形成和降低脂質的作用。因為將其從天然 產物分離出來和其化學合成的費用都很昂貴,所以選擇用較便宜的魚 油來提供這些必需脂肪酸。本發明中所用的術語“魚油”包括天然魚 油、加工的魚油、高純化的魚油濃縮物或(再-)酯化的(合成的)魚油。 在公開的歐洲專利申請EP-A-0298293中對加工的魚油進行了描述,該 公開物在這里被引入作為參考。

魚油的適宜實例有工業大規模得自冷水魚的油。典型的冷水魚選自 鮭魚、沙丁魚、鯖魚、鯡魚、鳳尾魚、胡瓜魚和箭魚。同樣,術語魚 油也包括通過ω-3-脂肪酸的(再-)酯化而合成獲得的油,其中所說的 ω-3-脂肪酸如得自上面冷水魚的魚油,所說的(再-)酯化是通過將甘 油三酯水解,然后進行純化并將所得的ω-3-脂肪酸與甘油一起進行濃 縮進行的。魚油一般包含具有12至22個碳原子鏈長度的脂肪酸的甘 油酯。特別優選的是高純化的魚油提濃物,例如,其是由沙丁魚、鮭 魚、鯡魚和/或鯖魚油獲得的。以通過氣相色譜法測定的魚油提濃物的 脂肪酸甲酯為基礎(面積百分數),其具有20至40%,優選至少25% 的二十碳五烯酸含量。此外,以通過氣相色譜測定的魚油濃縮物的脂 肪酸甲酯為基礎(面積百分數),其具有約10至20%,優選至少12% 的二十二碳六烯酸含量。在可通過ω-3脂肪酸的再酯化作用合成獲得 的魚油的情況中,以甘油三酯的總量計,可以將二十碳五烯酸和二十 二碳六烯酸的總濃度升至至少45%。USP?6,159,523公開了一種制備 魚油提濃物的方法。一般而言,天然魚油中ω-6系列(例如,亞油 酸,18∶2ω-6)多不飽和脂肪酸的量較低并且一般低于10%,優選低于 5%。

當要影響炎癥過程時,特別優選地使用一種富含EPA的魚油。在 ω-3脂肪酸不足從而影響了中樞神經系統的生長和成熟的情況中,在 兒科患者中特別優選富含DHA的魚油。

以該脂質乳劑的總脂質含量計,本發明乳劑的魚油含量優選地為約 5%至約30%,更優選地為約15%至約22%重量。

以水性脂質乳劑的總重量為基礎,該脂質乳劑的總脂質含量(MCT+ 魚油)為約5%至約30%,優選地為約10%至約25%重量。

在整篇說明書中,將在涉及該乳劑的脂質濃度時使用的“%重量” 與“g脂質/100mL乳劑”可互換使用。

除蒸餾水外,該等滲的脂質乳劑還可包含常規輔劑和/或添加劑, 如乳化劑、乳化助劑(輔助乳化劑)、穩定劑、抗氧化劑、和等滲添加 劑。

對于乳化劑而言,可以使用生理上可接受的乳化劑(表面活性 劑),如動物或植物來源的磷脂。特別優選的是精制的卵磷脂類,尤其 是大豆卵磷脂、雞蛋卵磷脂、或其某些部分、或相應的磷脂。以總乳 劑為基礎,乳化劑含量可以為約0.02至約2.5%重量,優選地為約0.6 %至約1.5%并且最優選地為約1.2%重量。??

此外,還可以用長鏈——C16至C20脂肪酸的堿金屬鹽來作為乳化助 劑(輔助乳化劑)。尤其優選的是其鈉鹽。以總乳劑為基礎,所用輔助 乳化劑的濃度為約0.005%至約0.1%,優選地為約0.02%至約0.04 %重量。此外,還可以使用單獨或與其它輔助乳化劑組合形式的膽固 醇、膽固醇酯,以乳劑為基礎,其使用濃度為約0.005%至約0.1%, 優選地為約0.02%至約0.04%重量。

本發明的脂質乳劑可包含有效量的抗氧化劑,如維生素E,特別是 α-生育酚(其是人體內維生素E的最具活性的異構體)以及β-和γ- 生育酚、和/或作為抗氧化劑的棕櫚酸抗壞血酸酯,從而避免形成過氧 化物。所說抗氧化劑的總量可高至5000mg。在一個優選的實施方案 中,以100g脂質為基礎,所說抗氧化劑的總量可以為約10mg至約 2000mg,更優選地為約25mg至約1000mg,最優選為約100mg至 500mg。

對于穩定和等滲而言,以該乳劑為基礎,本發明的乳劑可包含約2 %至約5%重量的穩定劑或等滲添加劑,例如多羥基的醇。優選甘油、 山梨醇、木糖醇或葡萄糖,特別優選甘油。以各治療必需的藥學有效 量將該等滲的脂質溶劑給予受治療者。給藥可以連續進行或以每天一 次或幾次劑量的形式進行。藥學有效量指的是每天每公斤體重約0.1 至約1.0g?TG(甘油三酯),優選地為每天每公斤體重提供約0.2g至 約0.5g?TG,最優選地為每天每公斤體重約0.25g至約0.33g?TG。

關鍵的組織選自內皮、白細胞、血小板和免疫細胞。器官選自心、 腦、腎、肺、肝和脂肪。本發明等滲的脂質乳劑和方法可用于治療患 有ω-3脂肪酸普遍不足或在某些器官和組織的細胞膜中相對不足的患 者。本發明的乳劑和方法特別是對于手術或經皮血管再造術如在冠狀 動脈或其它“外周”動脈中等的手術、心肌局部缺血或梗死、不穩定 的咽痛、短暫的局部腦缺血或中風、炎癥、自體免疫性、以及血栓形 成性疾病如靜脈或動脈的疾病、器官移植(既包括供體的輸入又包括受 體的輸入)、血管造影操作、血液透析、早產兒、急性期反應、急性呼 吸痛苦綜合征、腸局部缺血、糖尿病的心血管并發癥、嚴重燒傷、嚴 重的惡病質、雷諾氏病、和細胞膜ω-3脂肪酸不足有很高的價值。

可以用本發明等滲的脂質乳劑來制備用于治療上述疾病的藥物/ 藥用組合物。

本發明的脂質乳劑一律是水包油(o/w)乳劑,其中外部連續相由精 制的用于胃腸外目的的蒸餾水所組成。該類水包油(o/w)乳劑是通過將 MCT和魚油進行混合,然后乳化和滅菌來獲得的。將該脂質乳劑的pH 值調節至生理學可接受的值,優選地將pH調至約6.0至約9.0,更優 選地為約6.5至約8.5。正如從所描述的制備方法中看出的那樣,本發 明的乳劑是一種甘油三酯混合物的乳劑。在乳化前可以向該MCT/魚油 混合物中加入助劑和添加劑或可以在滅菌前將其加入到該乳劑中。

本發明等滲的脂質乳劑可以根據公知的標準操作用interization 來進行制備。常用的方法是首先將脂質、乳化劑和其它助劑和添加劑 進行混合,然后在分散的同時用水對其進行添補。水可任選地包含另 外的水溶性組分(例如甘油)。由此獲得的乳劑仍然包含直徑約10微米 的脂質顆粒。然后,必須通過附加的均化來進一步降低該乳劑的平均 顆粒大小,例如用高壓均化器來進行均化。對于胃腸外應用而言,優 選小于約1.0微米,特別是小于約0.8微米,最優選小于約0.5微米 的中等脂質小滴。本發明的脂質乳劑優選是可靜脈內注射的。因此, 本發明還涉及一種包含如上所屬的等滲脂質乳劑的藥用組合物,其優 選是用于注射到人或動物體內的藥用組合物。

本發明的脂質乳劑可被胃腸外給藥于有受損的組織或器官灌注或 增加的嚴重心律失常(例如心室纖維性顫動)風險或血管血栓形成或嚴 重的心律失常或逾常的炎性反應、急性呼吸困難綜合征的患者,或在 用血液透析進行治療的患者的透析期間進行給藥或用于迅速升高早產 兒腦和視網膜中的ω-3脂肪酸含量。本發明可用于血管再造操作前處 于手術前狀況或處于手術后狀況或患有炎性疾病的患者;此外,其還可 用于操作如腹部手術或器官移植后嚴重或持續的侵犯后代謝反應、和 多發性損傷、炎性疾病、燒傷、感染、即將發生的或顯現出的膿毒癥、 消瘦病。

將用下面的實施例來對本發明進行進一步的說明,但不應認為本發 明會受到這些實施例的限制。

實施例

下表表示了用于下面實施例脂質乳劑的各種油的脂肪酸組成(大 約的%):

???????????????????????????????????????表 脂肪酸 MCT油1) ????豆油2) ????紅花油3) ??魚油4) 6∶0 <2 -- -- ??-- 8∶0 64 -- -- ??-- 10∶0 34 -- -- ??-- 12∶0 <3 -- -- ??<1 14∶0 <1 -- -- ??5 16∶0 -- 11 7 ??10 16∶1 -- -- -- ??7 16∶2 -- -- -- ??1 16∶3 -- -- -- ??1 16∶4 -- -- -- ??3 18∶0 -- 4 3 ??1 18∶1 -- 22 14 ??10 18∶2??ω-6 -- 55 75 ??2 18∶3??ω-3 -- 8 <1 ??1 18∶4??ω-3 -- -- -- ??4 20∶0 -- <1 <1 ??-- 20∶1 -- <1 <1 ??2 20∶4??ω-6 -- -- -- ??2 20∶5??ω-3 -- -- -- ??28 22∶1 -- -- -- ??1 22∶4 -- -- -- ??<1 22∶5 -- -- -- ??3 22∶6??ω-3 -- -- -- ??13 ∑ω-6 -- 55 75 ??4 ∑ω-3 -- 8 <1 ??46 ω-6-與ω-3- 的比例 -- 7∶1 ≥75∶1 ??1∶12

1)中鏈甘油三酯,例如,Captex?355,Karlshamns商品。

2)豆油,例如,“Sojal”,Croda的商品。

3)紅花油,例如,“Saflorl”,Gustav?Heess的商品。

4)高純化的魚油,例如,Sanomega?S28GA,Nippon?Oil?and?Fats的商品。

包含MCT、魚油和乳化劑(每100mL乳劑約1.2g得自小雞蛋黃 的分級的磷脂)并任選地包含植物油的實施例中的脂質乳劑可以用制 備在水中的治療乳劑的標準工業方法來進行制備,其是通過用Ultra- Turrax將成分進行分散并在攪拌的同時用水性組分來對其進行補充。 用氫氧化鈉水溶液和/或油酸鈉將pH值調至pH?8.0至9.0。用高壓均 化器在400kg/cm2下來進行隨后的均化。在將其分散于適宜等級的玻 璃瓶中后,用公知的方法來進行熱滅菌。以總乳劑為基礎,每100mL 試驗乳劑具有20g的總脂質含量,其相當于約20%重量。該乳劑顆粒 的平均粒度為約300nm并且可以變化±20%。所有的乳劑都具有大約 相同的乳劑顆粒直徑。乳劑MLF?541、魚油100%、和MCT/魚油5∶5 不是本發明的乳劑,其僅用于進行比較。

材料和方法

在加到細胞培養物之前,將脂質制劑在血漿中在25℃下以250mg TG/dL(TG=甘油三酯)的終濃度培養45分鐘并通過短期的超-離心(30 分鐘;20,000g)將乳劑富含甘油三酯的顆粒(TGRP)進行分離。此外, 將HUVEC(人臍帶靜脈內皮細胞)用牛脂蛋白脂肪酶(8微克/mL,在DMEM 中)在室溫下培養30分鐘,然后將其進行洗滌(用包含3%BSA的 DMEM(Gibco)洗滌一次,用DMEM洗滌兩次)。

然后以500μg?TG/mL(50mg/dL)的終濃度向細胞培養介質(含 3%BSA)中加入TGRP。在37℃下培養4小時。在用胰蛋白酶-EDTA溶 液進行處理前將內皮細胞用0.02%包含BSA的DMEM洗滌一次并用 DMEM洗滌兩次。

用氣液色譜法對此前用薄層色譜法分離出來的液體組分(TG、CE[= 膽固醇酯]、PL)中的脂肪酸模式進行測定(Lepage?G.and?Roy?C.C.,J. Lipid?Res.(1986),27:114-120)。

結果

初步實驗

在第一套實驗中,我們對我們關于培養物中表皮細胞生長的體外模 型的再現性進行了試驗。實際上,在培養前必須形成能保證在器皿中 形成十分穩定和融合的單分子層(并能避免過度融合)的條件,并且必 須對內皮細胞生長期間脂肪酸組成的變化進行試驗。這一系列實驗證 明在5天期間HUVEC必須在包含10%血清的介質中進行培養以達到融 合,并且證明了然后,生長可以被一種在缺乏血清介質中的2天培養 所抑制,其確保了穩定的脂肪酸組成。

設計了第二套實驗方案以對達到ω-3?PUFA的顯著混合的培養時間 進行最優化。這些實驗表明,鑒于介質中50mg/dL的甘油三酯濃度(其 低于脂質輸入期間血漿甘油三酯的平均上升),在4小時內的培養導致 了內皮細胞磷脂相當大和近乎最大的變化。實際上,與4小時相比, 在20小時期間的培養沒有表現出大的另外的改變,但是導致了細胞內 甘油三酯含量增加并部分引起細胞死亡。

在用TGRP培養4小時后,除去包含脂質的介質并將代之以不含脂 肪的介質。然后將細胞再另外培養2小時或20小時以對內皮細胞中脂 肪酸模式的穩定性進行評估。在2小時和20小時后細胞磷脂中總ω-3 脂肪酸的含量仍然沒有改變。但是,在20小時后,發現ω-3PUFA的分 布輕微改變,其主要包括DPA(二十二碳五烯酸)的含量(EPA的消費) 增加。這些改變可能是由于發生于細胞膜磷脂中的延伸和去飽和途 徑。

乳劑甘油三酯對混入到細胞磷脂中的ω-3多不飽和脂肪酸的影響

如上所述的那樣對細胞進行培養,然后將其在不存在(對照細胞) 或存在兩種實驗性TGRP,即MCT/魚油8∶2和MCT/魚油5∶5的情況下 培養4小時,與MLF?541(公開的國際專利申請WO-A-97/19683, Lipoplus,B.Braun?Melsungen?AG,德國)和純魚油(FO?100%)乳 劑進行比較。

表1:在用TGRP培養4小時后內皮細胞磷脂的脂肪酸組成(平均值± SD,n=4) 脂肪酸模式 (重量%) EPA(C20:5ω-3) ???????????????Δ ?DPA(C22:5?ω-3) ????????????????Δ DHA(C22:6?ω-3) ?????????????????Δ 對照細胞 0.65±0.06 ?3.84±0.29 ?2.54±0.28 MLF?541 2.09±0.15 ?1.44 ?4.35±0.15 ?0.51 ?2.85±0.16 ?0.31 FO?100% 5.39±0.29 ?4.74 ?4.73±0.31 ?0.89 ?3.44±0.21 ?0.90 MCT/FO?8∶2 4.55±0.31 ?3.90 ?5.35±0.33 ?1.51 ?3.45±0.23 ?0.91 MCT/FO?5∶5 5.83±0.04 ?5.18 ?5.50±0.35 ?1.66 ?3.55±0.22 ?1.01

(FO=魚油)

通過用MCT/魚油8∶2進行培養所誘導的細胞磷脂內EPA的升高 分別表示了用MCT/魚油5∶5和純魚油所觀測到的75和82%的增加。 在誘導DPA(二十二碳五烯酸,C22:5?ω-3)和DHA增加方面MCT/魚油 8∶2至少與所有其它制劑一樣有效。

表2:相對于脂質制劑中ω-3脂肪酸含量而言內皮細胞磷脂中ω-3 PUFA的增加(Δ)(表示為重量%脂肪酸富集/魚油比例) 脂質乳劑 EPA(C20:5?ω-3) DPA(C22:5?ω-3) DHA(C22:6?ω-3) MLF?541 ????14.4 ????5.1 ????3.1 FO?100% ????4.7 ????0.9 ????0.9 MCT/FO?8∶2 ????19.5 ????7.6 ????4.5 MCT/FO?5∶5 ????10.4 ????3.3 ????2.02

考慮在不同試驗制劑中的各魚油含量,顯然MCT/魚油8∶2可比所 有其它制劑更有效地在細胞磷脂中混入EPA、DPA和DHA。

MLF?541在使內皮細胞富含ω-3脂肪酸方面也表現出顯著的功效, 而與其高魚油含量相比,純魚油和在較小程度上的MCT/魚油5∶5表現 出較差的功效。

表3:在用MLF?541、MCT/魚油8∶2或純魚油進行處理后內皮細胞膜 磷脂中的ω-3/ω-6脂肪酸比例(重量%) 脂質乳劑 ∑ω-3脂肪酸 ∑ω-6脂肪酸 ω-3/ω-6比例 無/對照細胞 ????6.8 ????11.6 ????0.581 MLF?541 ????9.4 ????18.5 ????0.506 FO?100% ????13.8 ????12.0 ????1.149 MCT/FO?8∶2 ????13.3 ????12.3 ????1.083

對于細胞磷脂中的ω-3/ω-6脂肪酸比例而言,MCT/魚油8∶2和 FO?100%使得該平衡增加了兩倍,而MLF?541既影響ω-3脂肪酸含量 又影響ω-6脂肪酸含量,因而基本沒有改變該比例。

與專利法要求進行說明和解釋的要求相一致,上面的說明書已經涉 及了本發明的特定實施方案。但是,可以對要求保護的脂質乳劑、用 于治療的方法和將所述脂質乳劑進行給藥的方法進行許多改進、變化 和修改,這對于本領域技術人員而言是顯而易見的,其不會脫離所要 保護的本發明的范圍和主旨。希望用下面的權利要求來包含所有該類 修改和變化。

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