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一種皮膚美容的方法以及其中使用的美容儀和美容霜.pdf

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一種 皮膚 美容 方法 以及 其中 使用
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摘要
申請專利號:

CN200410000029.6

申請日:

20040105

公開號:

CN1618480A

公開日:

20050525

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61N5/06,A61K7/48 主分類號: A61N5/06,A61K7/48
申請人: 倉勇,黃嵐
發明人: 倉勇,黃嵐
地址: 100011北京市西城區德外黃寺大街22號
優先權: CN200410000029A
專利代理機構: 北京北翔知識產權代理有限公司 代理人: 張廣育
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200410000029.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種結合光物理和生物化學的皮膚美容方法。該方法利用特定波長的低能量光波,按照特定的程序釋放時,能穿透面部皮膚表皮層,激活真皮層的纖維細胞產生膠原蛋白,并促進代謝殘余物質的清除。同時,被破壞的代謝平衡誘發皮膚內的自然修復機制,使光活化的結果不能保持。為此,本發明還包含一類以脂溶性的膠原酶抑制物為核心的外敷用品,它與上述光學儀器同步使用,可使皮膚內的膠原蛋白維持在高水平,從而達到面部皮膚去皺紋,增強彈性和消除眼袋和黑眼圈的長期效果。

權利要求書

1.一種皮膚美容儀,包括一系列發光二極管,其能夠產生特定頻率、波長和強度的單色光,所述單色光能夠激活皮膚真皮層的成纖維細胞的修復機制,所述修復機制使得膠原的合成增加。2.權利要求1的美容儀,其中所述發光二極管產生波長為590nm,630nm和660nm,頻率為1Hz-50Hz,強度為每平方厘米50微瓦到50毫瓦之間的單色光。3.權利要求1或2的美容儀,其中包括由共同電路控制的800到3000個發光二極管,所述發光二極管組成可調節的平面,每個發光點與皮膚表面的距離基本相同。4.權利要求3的美容儀,其中所述控制電路可以控制發光二極管產生的光的波長、頻率和強度。5.一種美容霜,其中含有膠原酶抑制劑和可用于化妝品的添加劑。6.權利要求5的美容霜,其中所述膠原酶抑制劑是具有以下結構的OL-1肽:Benzoyl-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH。7.一種皮膚美容方法,包括用權利要求1到4任一項的皮膚美容儀照射待處理的皮膚。8.權利要求7的方法,其中在照射之前,在待處理的皮膚部位涂擦權利要求5或6的生物活性霜。9.權利要求8的方法,其中照射參數設定為660nm,5Hz,1800Lux,5分鐘。10.權利要求8的方法,其中照射參數設定為590nm,10Hz,550Lux,1分鐘。

說明書

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技術領域:

本發明涉及生物技術領域,更具體地說,涉及一種用于直接照射 皮膚的光學儀器,一種具有生物活性的美容霜,以及以上兩者共同使用 美容皮膚的方法。

背景技術:

人的衰老不可逆轉,面部皮膚皺紋特別是眼角魚尾紋的出現往往 是衰老的第一外在標記;許多環境因素比如太陽光紫外線會顯著惡化皮 膚皺紋的密度和深度。現代美容手段致力于降低衰老的種種表現尺度, 特別是減少面部皮膚皺紋,其最終目標是通過調控皮膚真皮層的成纖維 細胞產生新的膠原蛋白(參看附圖一)。膠原蛋白是皮膚內最主要的結構 蛋白,占真皮層于重的75%以上。現代分子皮膚學研究證明皮膚的皺紋, 彈性,質地,光澤等在很大程度上決定于膠原蛋白水平的高低;隨著年 齡的增長或者皮膚的老化,人們皮膚內膠原蛋白的含量逐漸減少(參看 附圖二)。因此,促進膠原蛋白生成的多寡成為衡量眾多美容手段的有 效性的最重要的指標。

當前這些美容手段大體可歸類為生物激活和物理治療兩種。其中, 將含有生物活性的霜劑直接敷于皮膚表面的化學方法占據了主流大眾 市場,這些生物活性物質主要包括維生素A,C,E以及它們的衍生物,軟 骨多糖,a-和b-羥酸和其它抗氧化劑;而物理手段則常用于專業美容院 或診所里,主要包括機械磨皮,硅膠去皮以及日益普及的激光手術除 皺。另外,直接往皺紋密集的皮膚內注射純化的膠原蛋白或者肉毒素 (Botox)則是兩個極端的除皺手段,然而這些注射法經常會伴隨頭痛, 暈眩,眼沉以及可能的心血管后遺癥。

激光作為具有獨特的相干性和單色性的高能光源,其用于皮膚除 皺的原理是:激光發出高能量的光子,造成皮膚深層細胞的熱損傷或者 直接在表皮層引進創傷,從而激活皮膚內在的傷口修復功能,導致產生 包括膠原蛋白在內的許多傷口修復所必需的結構和調控蛋白。雖然產生 的膠原蛋白能夠改善皮膚的皺紋狀況,但是高能激光同時也會破壞許多 正常細胞組織,并釋放相當的有害皮膚健康的副產物。近來,一種以長 波(>550nm)為主的高強度脈沖光(Intense?Pulse?Light,IPL)被用來 替代激光治療面部皺紋。盡管高強度脈沖光對皮膚的傷害遠不及激光嚴 重,但它的工作能量太低,難以激活成纖維細胞生成修復皺紋的膠原蛋 白。所以,高強度脈沖光作為替代激光的光學療法并不成功,它在皮膚 除皺領域仍有很大爭議(Dermatological?Surgery?20:p835-843,2000; Lasers?in?Surgery?and?Medicine?26:p196-200,2000;Lasers?in Surgery?and?Medicine?30:82-85,2002;Lasers?in?Surgery?and Medicine?30:298-325,2002)。

激光用于除皺的局限性是顯而易見的:激光裝置極其昂貴,運作 需要大量能量,而且必須由專業醫務人員來操作;激光束一次能照射的 皮膚非常有限,給大規模皮膚均勻除皺帶來困難;治療會對皮膚組織造 成傷害,病人會感到嚴重不適或疼痛,并需要很長時間恢復;創傷性的 激光手術還可能引發傷口感染,愈后留下疤痕,不僅達不到美容的預期 目的,相反還可能在皮膚上遺留下永久破壞。除皺的效果優劣很大程度 上取決于接受治療者的個體差異,所以對于每個人來講,接受激光治療 皺紋需要承擔相當的風險。

如同激光,發光二極管發出的也是狹窄波長范圍內的單色光。盡 管發光二極管早已被廣泛應用于各種電子元件的發光裝置以及日用和 商用燈具上,它們在醫療領域的用途直到最近幾年才開始逐漸被人們認 識。這些用途主要包括促進傷口愈合,減輕疼痛,以及和光激活化學藥 物同步使用來治療癌癥。美國NASA的航天項目研究小組發現用發光二極 管發出的近紅外的單色光(主要波長包括680nm,730nm,880nm)直接照射 局部缺血性傷口,能夠大大縮短傷口愈合所需的時間(Journal?of Clinical?Laser?Medicine&Surgery?19:p305-314,2001)。他們將 幾十個單色的發光二極管排成平面序列,持續照射傷口,使得每平方厘 米皮膚在0。5-1小時內接受4-8焦耳的能量。這些發光二極管與高壓氧 氣同步使用效果尤佳。幾家美國公司正在積極開發紅光和紅外光二極管 在止痛上的應用,它們已經獲得美國食品和藥品管理局的首肯,很快將 有用來治療手,腕,和其它肌肉疼痛的發光二極管裝置推向市場。在所 謂的光動力療法中(Photodynamic?Therapy),發光二極管甚至可以成為 定點消除腫瘤細胞的工具。比如由羅氏(Roche)公司開發的Porphyrin可 以被發光二極管發出的680nm紅光激活,然后將獲得的能量傳遞給血液 里的氧氣分子,從而生成有害的單氧基團和游離基。這些單氧基團和游 離基會破壞周圍細胞內的蛋白質,脂類,核酸等重要組分。用發光二極 管激活聚集在腫瘤部位的Porphyrin,就可以非常特異性的殺死腫瘤細 胞,達到治療的目的。這種Porphyrin光動力療法在許多國家已被用來 治療膀胱癌,食道癌和肺癌,在美國正在臨床III期試驗中。

發光二極管之所以能夠成功地用于人體治療,主要因為科學研究 發現二極管發出的非相干性的單色光可以有效地穿透皮膚表皮到達真 皮層和更深層的體內組織。一項報道宣稱630-800nm范圍內的光子可以 進入人體皮膚內部達23厘米(p.552?Space?Technology?and Applications?International?Forum?200,edited?by?M.S.El-Genk, 2001)。進入體內的二極管的光能夠刺激細胞內部的能量工廠線粒體, 產生大量能量,從而加速各種修復機制,提高細胞活性和代謝,加快血 液循環,其結果是體內的有害物質和代謝副產物從受傷或衰老的組織內 被清除掉,同時促進生成的活性物質使組織得到更新。細胞內接受光能 的具體分子并不清楚,但科學家發現一些發色基團(Chromophores)和細 胞色素系統(Cytochrome?Systems)對紅光和紅外光有反應。

在二極管的單色光穿透皮膚的過程中,光能逐漸被各種細胞組織 吸收和損耗。大部份的被有效吸收的光子作用于真皮層的成纖維細胞 (參看附圖一)。成纖維細胞是皮膚的動力機器,生產各種皮膚調節成份 和主要結構蛋白比如膠原蛋白。從原理角度講,發光二極管的單色光不 僅僅可以促進成纖維細胞產生大量能量物質ATP,而且更重要的是能夠 起動膠原蛋白的生物合成。因此,用發光二極管的單色光替代激光來促 進皮膚生成膠原蛋白而修補皺紋是一個創新又極富挑戰性的工作。和激 光手術除皺相比,發光二極管除皺的優越性很多:它工作能量低,通過 激發成纖維細胞的潛能達到美容目的,對皮膚內外均無傷害;它使用方 便安全,光源壽命遠長于激光,并且價錢合理,易于家庭普及;更重要 的是,通過選擇恰當波長,具有生物調節功效的輸出強度和頻率,發光 二極管能夠達到傳統激光美容除皺的效果。

波長,強度和頻率的選擇和正確組合是決定發光二極管除皺裝置 有效性的關鍵。首先,只有特定波長的發光二極管光波能夠穿透表皮層 而最大限度地被成纖維細胞吸收,并轉化成能量,刺激細胞生成膠原蛋 白,而其它波長的光波即使能到達這些細胞也不會有效激活細胞內的光 敏蛋白。其次,只有狹窄范圍內的輸出強度具有生物調節的功效:強度 低于生物激活閾值的光波不能提供足夠的能量啟動成纖維細胞的修復 機制;而過高強度的光波則會在皮膚內主要轉化成熱能,并激發成纖維 細胞的保護機制,最終導致膠原蛋白合成的抑制。最后,發光二極管的 電磁光波在皮膚內的頻率只有與成纖維細胞的內在生物頻率發生共振 時,才能特異性地將光能傳送到成纖維細胞,并且最大限度地降低其它 細胞組織的激活所生成的無用甚至有害的副產品。

基于上述原理,這種發光二極管的程序光應該能夠有效活化各類 衰老皮膚。目前已知,皮膚衰老分為交叉并行的兩類:光衰老 (Photoaging)和生物衰老(Chronical?Aging)。光衰老主要來源于太陽 光的幅射,太陽紫外線刺激皮膚產生反應氧基團(ROS),ROS然后破壞皮 膚內的抗氧化防御系統,并激活膠原蛋白酶基因的表達;所以光衰老是 紫外線累積照射的結果,西方人(主要是白色人種)膚色淺,喜愛戶外活 動,崇尚日光浴和人工照黑(tanning),他們的皮膚衰老主要顯現為光 衰老。生物衰老則主要由個體遺傳因素決定:遺傳物質的變異和不穩定, 線粒體功能的衰退,以及染色體端粒(telomere)的磨損,都會促進皮膚 的內在老化和外部皺紋的形成;東方人(特別是黃色人種的城市女性)極 少將面部皮膚直接暴露在太陽光或任何紫外線之下,他們面部皮膚的皺 紋和其它老化特征絕大程度上來源于生物自然衰老。

東西方人皮膚衰老機制的差異提醒我們選用除皺美容的手段也要 考慮個體不同。甚至同是亞洲人種,光衰老和生物衰老的皮膚也要區別 對待。大量臨床研究顯示,雖然光衰老和生物衰老都會降低膠原蛋白的 合成并提高膠原酶的活性,但是對于相仿年齡的人,光衰老的皮膚膠原 蛋白的含量和合成遠低于生物衰老的皮膚,而膠原酶的活性卻遠比生物 衰老的皮膚要高。對于正常生物衰老的皮膚,無論是用化學霜劑還是用 物理調節包括發光二極管的光學手段,這些由皮膚外界刺激產生的大量 膠原蛋白并不能長久存留在皮膚內;相反,大量產生的膠原蛋白會破壞 皮膚內的膠原蛋白/膠原酶自然平衡,從而反饋誘導膠原酶的活性,結 果使這些新生成的膠原蛋白被清除掉,恢復到原有基礎水平。但是,對 于光衰老的皮膚,新合成的膠原蛋白并不能激活太多的膠原酶,因為該 類皮膚的基礎膠原酶活性已經達到足夠高的水平。因此,發光二極管的 光療可以有效地促進光衰老的皮膚合成并保留新的膠原蛋白;同樣的光 療雖能同樣促進生物衰老的皮膚合成新的膠原蛋白,維持這些新的膠原 蛋白卻需要抑制與之同步提高的膠原酶的活性。

我們成功地開發出一套新穎的美容除皺產品,用特別程序的光波 直接照射皮膚激活成纖維細胞產生大量膠原蛋白,同時將一種以膠原酶 抑制劑為基礎的光敏霜敷于照射部位以長期維持高水平的膠原蛋白,從 而達到美容除皺的效果。

發明內容:

I:光學部分

本發明揭示了只有特定波長的單色光以特定的頻率和強度釋放時 才能達到嫩化皮膚的效果。皮膚內的成纖維細胞是接受能量并利用能量 生成蛋白的動力工廠。成纖維細胞對不同波長的光波的吸收有很大差 異。通過一系列的體外細胞培養研究,本發明顯示成纖維細胞對于黃色 到紅色范圍內的單色可見光,特別是590nm,630nm和660nm的單色光, 有峰值吸收。附圖3顯示其中一個試驗結果。這里,我們將從35歲的黑 人婦女皮膚中分離出來的成纖維細胞進行細致的光波掃描,圖中顯示出 細胞對590nm,595nm和630nm波長的光的吸收遠高于背景的吸收。

本發明還揭示上述單色光只有以1Hz-50Hz之間,或者是每次20毫 秒到1秒之間,特別是5Hz,10Hz,和20Hz,或者是每次50毫秒,100毫 秒和200毫秒,的頻率釋放時才有效。附圖4顯示本發明所特別制造的LED (發光二極管)細胞圓盤裝置,其直徑和10cm細胞培養皿一樣大小,不 同波長的LED單色燈泡以點陣平面排列,其控制電路可以調節輸出光強 度,輸出頻率以及輸出光波的寬度。我們將生長在培養皿里的成纖維細 胞置于LED細胞圓盤下直接照射,然后收集處理后的細胞進行生化分析, 包括檢查細胞的各種膠原蛋白量的變化,膠原蛋白酶的量和活性的變 化,等等。通過調節不同波長的LED輸出頻率,我們發現只有本發明所 揭示的上述輸出頻率和特定波長的光結合,才能刺激成纖維細胞合成新 的膠原蛋白原(Procollagens),膠原蛋白原被細胞加工后成為膠原蛋 白,并分泌到皮膚真皮層從而維持皮膚的彈性和質量。

本發明進一步揭示上述指定頻率的單色光只有以每平方厘米皮膚 50微瓦到50毫瓦之間的輸出強度才能最大限度地活化皮膚。利用上述 LED細胞圓盤直接照射在培養皿里的成纖維細胞,通過調節不同波長的 LED輸出強度,我們發現只有本發明所揭示的上述輸出強度,結合上述 頻率和波長,才能最大限度的刺激成纖維細胞合成新的膠原蛋白原。附 圖5顯示特定組合的LED單色光能夠有效地刺激成纖維細胞產生皮膚真 皮層內的主要彈性蛋白-I型膠原蛋白原。在正常狀態下,細胞只生成基 礎水平的I型膠原蛋白原,維持現有皮膚的健康,如圖中Western分析C 行蛋白量所示。我們改變光波波長,輸出頻率,和使用強度,發現很多 組合都不能有效地提高細胞內的I型膠原蛋白原含量。只有非常精確的 組合,如圖5中所示的590nmLED光用10Hz,550Lux照射1分鐘(YH1)或者 660nm?LED光用5Hz,4000Lux照射5分鐘(RF5)能提高I型膠原蛋白原 含量10倍以上。

根據本發明所揭示的單色光波長,頻率和強度參數,我們把近 800-3000個同種類的LED燈泡連接并組裝成可調節的平面,所有的LED都 用共同的電路控制,鄰近的任何兩個LED之間的距離都是相等的。這樣 的LED平板可以根據所要活化皮膚部位而進行調整,最終保證每個LED光 源距離照射的皮膚表面都相對接近。這里我們主要顯示這樣的LED光板 能夠非常有效地改變眼睛周圍皮膚的皺紋和質地,但我們并不限制我們 的LED光用于其它部位皮膚。

本發明的一個主要應用實例是輕便家用型LED除皺美膚眼罩。附圖 5顯示兩種樣品的結構示意圖,主要包括密集的高級LED燈泡的點陣板塊 (板塊可以有1塊到20塊)和電路控制調節中心。每個LED發出本發明所 揭示的特定程序的單色光。裸露的LED點陣板塊背面的焊接電路和連接 電線整合進如附圖6所顯示弧形眼罩內,由此組合的LED眼罩可以用彈力 繩帶或者眼鏡架或者頭箍固定在眼鏡上方,如附圖6中的示范者所示。

本發明也可以用于其它部位的皮膚的除皺和改善,比如脖子,手 部,腳背,胸部,腹部等。附圖7顯示我們所設計并制造的LED手背除皺 嫩膚裝置,作為其中一個實例。在這個裝置中,近2000個同樣規格的LED 排列成手背弧形,當手背朝上放入裝置內后,每個發光點與皮膚表面的 距離保持均等,從而保證皮膚內的細胞受到一致刺激。

II:化學部分

無論通過什么美容手段,促進生成的大量膠原蛋白會打亂真皮層 內生化平衡,導致降解膠原蛋白的酶(膠原酶)的激活,從而使膠原蛋 白含量回到治療之前的基準水平。本發明以上所揭示的LED光學刺激也 不例外。本發明的LED光不僅僅提高膠原蛋白的生成,也會提高膠原酶 的增加,導致新產生的膠原蛋白不能長久保持在皮膚內。如附圖8所示, 用660nm,5Hz,4000Lux?LED光(RF1)或者660nm,5Hz,1800Lux?LED光 (RH1)照射成纖維細胞1分鐘,I型膠原酶(MMP-1)也被誘導產生(和沒有 光處理的細胞相比)。

為了維持通過外來因素刺激形成的膠原蛋白的高水平,達到美容 除皺的目的,必須抑制外來因素對膠原酶的激活作用。通過使用膠原蛋 白酶的特異性抑制劑,可以特異性抑制皮膚中的膠原酶的活性,維持外 來因素刺激生成的膠原蛋白的高水平,從而實現美容除皺。

我們發現一個特別的脂溶性的膠原酶抑制物OL-1,其為一種簡單 多肽,通過多肽合成器按照常規程序合成,具有以下結構: Benzoyl-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH。OL-1能夠有效地穿透皮膚表皮層, 到達真皮層的胞外基質(Extracellular?Matrix),識別并抑制膠原酶 的活性,從而使得光激活生成的膠原蛋白能夠較長期地穩定存在,最終 整合成為真皮層內的有效活性組分。OL-1本身在一定的濃度范圍 (1-25uM)內能夠有效地抑制膠原酶的活性,從而穩定已有的膠原蛋白, 并促進合成新的膠原蛋白。比較附圖9中的無處理細胞對照行(C)和與 OL-1共培養的細胞行(OL-1)的I型膠原蛋白原的含量,可以看出OL-1單 獨使用可以提高新蛋白的合成。我們將此膠原酶抑制物OL-1與維生素 A,E,及C和各種抗氧化成份混和在一起,制作成含有OL-1的美容 霜。該OL-1美容霜能夠抑制皮膚內的膠原酶的活性,從而增加膠原蛋 白的含量,實現美容除皺的目的。雖然OL-1美容霜主要和LED光學眼罩 協同使用,我們的實驗結果也清楚地顯示該美容霜獨立使用也能達到一 定的美膚療效。

III:光化學聯合部分

盡管本發明所揭示的膠原酶抑制物(OL-1)單獨能夠刺激成纖維細 胞生成新的膠原蛋白,但是OL-1和本發明所揭示的特定波長,頻率和強 度的LED單色光協同使用才能達到最優的效果,而且最重要的是,協同 使用的效果遠遠超過任何一種單一的方法,無論是以上所述的光學療法 還是化學療法。

當成纖維細胞接受660nm,5Hz,1800Lux的LED光照射5分鐘后, 新的膠原蛋白的生成只有少許的增加。這很可能反映了LED單色光刺激 不僅產生膠原蛋白,也同時產生將其降解的膠原酶,兩者達到平衡后表 現出無變化的凈結果,如附圖9中的RH5和C所示。然而,當本發明所揭 示的膠原酶抑制物OL-1加入以上所述的LED光所照射的成纖維細胞后, 這些細胞產生大量的膠原蛋白原(RH5+OL-1,附圖9),其含量達到單單 OL-1處理的10倍(OL-1),并超過單單LED光處理的40倍(RH5)。所以,在 體外細胞水平上,LED單色光和OL-1結合作用,能將膠原蛋白合成提高 到極高的水平。

我們用本發明所揭示的上述波長的LED制作成眼罩,以上述輸出頻 率和強度對20歲到55歲之間的婦女眼睛周圍的皮膚進行療效測試。使用 某些特定組合的家用型LED除皺美膚眼罩,協同使用含有本發明所揭示 的膠原酶抑制物OL-1的美容霜,50%的測試婦女在使用4到10次后觀察到 明顯的眼角皺紋減少,80%的測試婦女在使用3到11次后照射皮膚的彈性 和光澤有明顯的改進,70%的測試婦女在使用1到10次后黑眼圈和眼袋有 明顯的減輕或減少。測試采用了國際通用的雙盲(double-blinded)方 法。我們要求在每次治療之后,測試者和專業美容師單獨,無交流地評 估并記錄測試者的眼角皺紋,皮膚的彈性和光澤,以及黑眼圈和眼袋的 變化情況。對于任何一個測試者,只有測試者本人評估和專業美容師的 評估一致,我們才認為所記錄的變化是有效的。測試方法,步驟和參數, 參看下面的具體實施方式。

總之,本發明的方法結合了光學原理及生物化學原理,可以獲得 良好的美膚除皺效果。本發明的家用LED除皺美膚眼罩體積小,輕便, 使用簡單,易于家庭使用。

附圖說明

圖1:皮膚解剖圖。最外層的表皮層主要由角質細胞構成,起保護 作用。中間的真皮層富含成纖維細胞,該類細胞產生并分泌多種膠原蛋 白。I類和III類膠原蛋白是決定皮膚老化的主要成份。本發明的特定光 波可以穿透表皮層達到成纖維細胞并刺激膠原蛋白的生成。

圖2:皮膚衰老所伴隨的蛋白變化示意圖。隨著年齡的增加或者外 界環境(如紫外線)的傷害性的影響,真皮層內的膠原蛋白含量逐漸降 低,而膠原酶的活性和含量卻會上升。

圖3:成纖維細胞的光吸收圖譜。體外培養的人皮膚成纖維細胞以 不同的濃度均勻懸浮在磷酸緩沖液里,進行從300nm到1100nm之間的連 續光波吸收掃描(儀器:BioSpec-1601,SHIMADZU)。上圖顯示成纖維 細胞對590nm和595nm的光波的峰值吸收;下圖顯示成纖維細胞對 625-630nm的光波的峰值吸收。

圖4:顯示特定波長,頻率和強度的LED單色光能夠有效地刺激成 纖維細胞合成新的膠原蛋白。上圖顯示實驗所用的特制LED細胞圓盤裝 置和成纖維細胞實驗示意圖。該裝置可調頻率及強度。下圖顯示培養的 皮膚成纖維細胞接受一定的LED光刺激后產生I型膠原蛋白原 (Procollagen?Type?I)。肌動蛋白(Actin)的量用來作加樣控制。C: 無光照射;YH1:590nm?LED光用550Lux照射1分鐘;RF5:660nm?LED光 用4000Lux照射5分鐘。

圖5:本發明的光學裝置樣本示意圖。該裝置包括LED板塊,中心 控制儀,和電源接口。中心控制可調節發光頻率,波寬,和強度。LED 板塊可以進行多種組合。

圖6:本發明中的LED電路板塊的保護和應用外殼模型之一。由此 組裝的裝置可用于眼部周圍的皮膚,也可以用于脖子等身體其它部分的 皮膚。

圖7:本發明中的LED電路板塊的保護和應用外殼模型之二。由此 組裝的裝置可用于手背的皮膚的除皺和保護。

圖8:LED單色光刺激成纖維細胞產生降解膠原蛋白的I型膠原酶。 肌動蛋白的含量作為總蛋白的加樣對照。C:無光處理的細胞;RF1:660nm LED光用5Hz,4000Lux照射1分鐘;RF1:660nm?LED光用5Hz,1800Lux 照射1分鐘。抗人MMP-1的抗體AB19140來自Chemicon?international, 具體見

http://www.chemicon.com/Product/ProductDataSheet.asp?TXTSEARCH=mmp%2D1&ProductItem=AB19140

圖9:本發明的程序光和OL-1協同作用刺激成纖維細胞合成I 型膠原蛋白原。肌動蛋白的含量作為總蛋白的加樣對照。c:無光無抑 制物細胞對照;RH5:660nm,5Hz,1800Lux?LED光照射5分鐘;OL-1: OL-1加入培養的細胞;RH5+OL-1:660nm,5Hz,1800Lux?LED光照射5 分鐘后加入含有OL-1肽。抗I型膠原蛋白原的抗體SP1.D8來自

Developmetal?Studies?Hybridoma?Bank,具體參見

http://www.uiowa.edu/~dshbwww/spld8.html

具體實施方式

下面通過一些實施例來具體地說明本發明。

實施例1:體外細胞實驗方法和步驟

皮膚成纖維細胞(ATCC?No?CRL-1762)生長在標準Dulbecco’s改 良Eagle培養液(DMEM)(額外添加200mM?L-谷氨酰胺,50ug/ml慶大 霉素和10%小牛血清),生長條件是37℃,5%CO2。細胞的任何操作都 是在無菌環境里進行。當細胞在10cm平板上長滿(confluent)后,吸除 所有的培養液,并用5ml磷酸緩沖液(PBS)清洗掉殘留的培養液。然后 加入10ml?PBS覆蓋貼壁生長的細胞。將LED細胞專用圓盤調到如圖4的控 制板上的輸出強度,功率和波寬。把LED發光面朝下放在10cm平板上(如 附圖4右上圖所示),接通電源,打開開關,同時開始計時。

照射預定時間(如圖4,8,9)后,關掉開關,立即吸除PBS,代 之以10ml以上DMEM培養液。繼續培養細胞12小時后,收集細胞,把 細胞從圓盤上分離出來,利用細胞破碎液(50mM?Hepes,100mM?NaCl, 1%NP40)粉碎細胞,離心,取上清,抽提出所有的細胞內蛋白。將50ug 的總蛋白(利用Bradford?Assay測定蛋白質總量)用5-20%預制的SDS- 聚丙烯酰胺凝膠分離開。皮膚的一些重要蛋白,包括I型膠原蛋白原, III型膠原蛋白原,I型膠原酶等,用Western分析檢測,看家蛋白肌 動蛋白用來作用樣量對照。抗I型膠原蛋白原抗體SP1.D8來自the DeVelopmetal?Studies?Hybridoma?Bank,見

http://www.uiowa.edu/~dshbwww/spld8.html, 抗人MMP-1抗體AB19140來自Chemicon?international,參見 http://www.chemicon.com/Product/ProductDataSheet.asp?TXTSEARCH=mmp%2D1&ProductItem=AB19140

實施例2:家用型LED眼罩與OL-1美容霜美膚除皺試驗

一.試驗步驟

1.招募20-55歲眼角有皺紋或眼部皮膚狀況需要改進(包括眼袋, 黑眼圈等)的女士,按年齡分成多組;

2.每組測試一種波長的眼罩,對于每個波長組再分小組,每小組 接受不同頻率和不同時間和強度的組合的LED光照射治療;

3.每個治療者每周治療1次,一個療程為12周(療效通常在4周后才 明顯);

4.專業美容師和治療者獨立地分別每周一次記錄療效;

5.美容師用我們提供的相機拍攝記錄每個治療者的眼角皺紋變化 (與表格記錄同步);

6.測試結束后,統計各類指標的測試有效性;對于任何一個測試 者,只有測試者本人評估和專業美容師的評估一致,我們才認 為該項指標的變化是有效的。

二.家用型LED眼罩與OL-1美容霜的使用方法

1.用溫水仔細清洗眼睛周圍,特別是眼角的皮膚;

2.用手指在眼睛周圍,特別是眼角的皮膚上均勻地敷上一薄層本發 明的OL-1美容霜;

3.將眼罩的插頭接入控制器,將控制器的電源插頭接入電源插座;

4.將面板上的功率輸出調節旋鈕(Luminance)和輸出頻率選擇按鈕 (Frequency)都順時針方向轉到最大(5),亮度寬度調節旋鈕 (Width)逆時針方向轉到最小(1);

5.閉上眼睛,在眼瞼上貼上一次性眼球遮光片(可選擇),戴上家 用型LED眼罩;

6.打開電源開關,并且同時開始計時;

7.時間到,關調電源開關;

8.建議治療者不要清洗所敷的OL-1美容霜。

三.結果和典型案例。

以下受試者按照以下程序進行試驗。先涂OL-1美容霜在眼睛周 圍,然后利用LED紅光照射(LED波長660nm,強度1800Lux,頻率5Hz), 每次5分鐘,每周一次,一個療程12次。

按照說明書中所附記錄表格記錄療程中治療者皮膚狀況的任何變 化,包括眼角皺紋,眼周皮膚彈性/質地/毛孔,眼袋/黑眼圈等的變化, 無論好壞,用1-5數字注明其程度。1:差,2:較差,3:中等,4:較 好,5:好

案例1:杜女士,24歲

個人評估:眼角皺紋4次治療后從中等(3)變為較好(4);眼周皮 膚彈性/質地6次治療后從中等(3)變為較好(4),更多次治療后在較好 (4)和好(5)之間擺動;黑眼圈/眼袋6次治療后從中等(3)變為較好 (4),8次治療后從較好(4)變為好(5)。

專業評估:眼角皺紋2次治療后從中等(3)變為較好(4);眼周皮 膚彈性/質地4次治療后從中等(3)變為較好(4),更多次治療后在較好 (4)和好(5)之間擺動;黑眼圈/眼袋4次治療后從中等(3)變為較好 (4),更多次治療后在中等(3)和好(5)之間擺動。

案例2:鐘女士,27歲

個人評估:眼角皺紋4次治療后從中等(3)變為較好(4);眼周皮 膚彈性/質地8次治療后從中等(3)變為較好(4);黑眼圈/眼袋8次治療 后從中等(3)變為較好(4)。

專業評估:眼角皺紋3次治療后從中等(3)變為較好(4);眼周皮 膚彈性/質地8次治療后從中等(3)變為較好(4);黑眼圈/眼袋8次治療 后從中等(3)變為較好(4),9次治療后從較好(4)變為好(5)。

案例3:許女士,38歲

個人評估:眼角皺紋6次治療后從中等(3)變為較好(4);眼周皮 膚彈性/質地8次治療后從中等(3)變為較好(4);黑眼圈/眼袋10次治療 后從中等(3)變為較好(4)。

專業評估:眼角皺紋1次治療后從較差(2)變為中等(3),7次治療 后從中等(3)變為較好(4);眼周皮膚彈性/質地10次治療后從中等(3) 變為較好(4);黑眼圈/眼袋12次治療后無改進。

案例4:穆女士,26歲

個人評估:眼角皺紋12次治療后無改進;眼周皮膚彈性/質地5次 治療后從中等(3)變為較好(4),9次治療后從較好(4)變為好(5);黑 眼圈/眼袋5次治療后從較差(2)變為中等(3),9次治療后從中等(3)變 為較好(4),10次治療后從較好(4)變為好(5)。

專業評估:眼角皺紋12次治療后無改進;眼周皮膚彈性/質地5次 治療后從中等(3)變為較好(4),9次治療后從較好(4)變為好(5);黑 眼圈/眼袋5次治療后從較差(2)變為中等(3),9次治療后從中等(3)變 為較好(4),10次治療后從較好(4)變為好(5)。

???????????????????????????????評估記錄(專業美容師使用)

儀器編號(紅)或(橙)或(黃)

治療時間(五分鐘)或(十五分鐘)

治療者姓名或代號?_________________________________年齡__________________________________________ ????治療日期 ????(每周2-3次) ????眼角皺紋 ????眼周皮膚 ????彈性/質地/毛孔 ????眼袋/黑眼圈 ????其它 ????(請注明) ????起始 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周一 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周二 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周三 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周四 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周五 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周六 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周七 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周八 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周九 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周十 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周十一 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????周十二 ??___________ ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????(1)(2)(3)(4) ????(5) ????總評詁

注1:請根據經驗圈出治療者皮膚的相應狀況:1:差,2:較差,3:等,4:較好,5:好

注2:若治療者在療程中皮膚有其它任何變化,無論好壞,請注明,并用數字1~5標記其程度

注3:請于治療后每周作一次記錄,并請治療者填寫自我評詁表

注4:請不要將此記錄給治療者過目,以免影響她的自我評詁

美容師簽名____________

關于本文
本文標題:一種皮膚美容的方法以及其中使用的美容儀和美容霜.pdf
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