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山楂葉總黃酮小針劑及其制備方法.pdf

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山楂 黃酮 針劑 及其 制備 方法
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摘要
申請專利號:

CN200410085457.3

申請日:

20041019

公開號:

CN1634107A

公開日:

20050706

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/7048,A61K9/08,A61P9/00,A61P9/10 主分類號: A61K31/7048,A61K9/08,A61P9/00,A61P9/10
申請人: 長春三九生物制藥股份有限公司
發明人: 黃林青,張衛東,張川
地址: 130012吉林省長春市高新開發區火炬路1105號
優先權: CN200410085457A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200410085457.3

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種山楂葉總黃酮小針劑及其制備方法。該小針劑通過調節pH解決了山楂葉總黃酮溶解性差的問題;通過控制pH范圍和應用抗氧劑解決了山楂葉總黃酮穩定性差的問題;所得制劑穩定性好,生物利用度高,療效確切。本小針劑可以用于心腦血管疾病的治療。

權利要求書

1、一種山楂葉總黃酮小針劑,其由山楂葉總黃酮、PH調節劑、抗氧劑、滲透壓調節劑和注射用水組成。2、根據權利要求1所述的山楂葉總黃酮小針劑,其特征在于,其PH范圍控制在5.5~7.5,所述PH調節劑為NaOH、KOH、NaCO、Mg(OH)、CaHCO、NaHCO等之一種或幾種。3、根據權利要求1所述的山楂葉總黃酮小針劑,其特征在于,所述抗氧劑為焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、維生素C、硫脲等之一種或幾種。4、根據權利要求1所述的山楂葉總黃酮小針劑,其特征在于,所述滲透壓調節劑為NaCl、葡萄糖、甘油、KCl、硼酸等之一種或幾種。5、一種制備如權利要求1所述山楂葉總黃酮小針劑的方法,其包括如下步驟:c、稱取適量的山楂葉總黃酮、抗氧化劑、滲透壓調節劑,加入適量的一定溫度的注射用水溶解;d、然后加入適量的PH調節劑將上述溶液的pH值調整為5.5~7.5范圍內;c、加活性炭吸附,粗濾,檢測合格后,用微孔濾膜過濾,得澄明濾液,最后將濾液分裝,滅菌,包裝即可。

說明書

?

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域,具體涉及到一種用于治療心腦血管疾病 的山楂葉總黃酮小針劑及其制備方法。

背景技術

中藥山楂是一味常用的中藥,具有消積化滯、補脾健胃、活血化瘀 的功效。它的化學成分分為有機酸類和黃酮類,研究得出結論山楂活血 化瘀的主要成分是總黃酮類,而山楂葉中總黃酮的含量比較高。山楂葉 總黃酮作為活血化瘀的有效成分已經得到了大量實驗驗證。山楂葉總黃 酮具有廣泛的藥理活性,主要為:降壓、增加冠脈流量、強心等,臨床 已經廣泛用于心腦血管疾病的治療。

山楂葉的制劑用于臨床已經有20多年的歷史,多為口服制劑,起效 緩慢,不能適應心腦血管疾病患者發病時急救的需要。故我們考慮將山 楂葉總黃酮制備成注射劑,以解決心腦血管疾病患者發病時急救的需要。

山楂葉總黃酮的水溶性差,并顯酸性,不符合注射劑的要求,直接 將其制備成小針劑是不可行的。通過大量的實驗研究,我們將山楂葉總 黃酮先通過調節PH,解決其水溶性的問題,再通過確定其適當的PH范圍, 同時加入抗氧劑,解決其穩定性差的問題,最終制備出水溶性好、穩定 性高、療效確切的山楂葉總黃酮小針劑。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足,提供一種可用于治療心腦 血管疾病的水溶性好、質量穩定、成分明確的山楂葉總黃酮的小針劑。

為了實現本發明的目的,所述山楂葉總黃酮小針劑由山楂葉總黃酮、 PH調節劑、抗氧劑、滲透壓調節劑和注射用水組成。

PH調節劑可采用NaOH、KOH、Na2CO3、NaHCO3、CaHCO3、Mg(OH)2等 之一種或幾種,PH值控制在5.5-7.5范圍內。

抗氧劑可采用焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、維生素C、硫 脲等之一種或幾種。

滲透壓調節劑可采用NaCl、葡萄糖、甘油、KCl、硼酸等之一種或幾 種。

上述山楂葉總黃酮小針劑的制備方法如下:

a、稱取適量的山楂葉總黃酮、抗氧化劑、滲透壓調節劑,加入適量 的一定溫度的注射用水溶解;

b、然后加入適量的PH調節劑將上述溶液的pH值調整為5.5~7.5 范圍內;

c、加活性炭吸附,粗濾,檢測合格后,用微孔濾膜過濾,得澄明濾 液,最后將濾液分裝,滅菌,包裝即可。

本發明提出的山楂葉總黃酮小針劑,有效地解決了總黃酮水溶性差, 制成注射劑較困難的缺點,穩定性好,貯存期長,運輸和使用方便,并 可確保藥物的療效,可以直接肌肉注射或加入注射用生理鹽水或葡萄糖 中,以靜脈滴注的方式給藥。

具體實施方式

我們對山楂葉總黃酮的主要成分作了大量的基礎研究,得出山楂葉總 黃酮主要為牡荊素鼠李糖苷(5,7,4’-三羥基黃酮-8-C-β-D-葡萄糖基 (1→2)-β-D-鼠李糖苷)、牡荊素葡萄糖苷(5,7,4’-三羥基黃酮 -8-C-β-D-葡萄糖基(1→4)-β-D-葡萄糖苷)、咖啡酸、奎寧酸和綠原酸 及其可能的衍生物,這些成分由于酸性基團的存在而顯酸性,通過調節 PH,其均可以與堿性物質成鹽,所成的鹽具有良好的水溶性,有效地解 決了山楂葉總黃酮水溶性差的問題。主要成分成鹽后的結構如下:

式1牡荊素鼠李糖苷鹽

式2牡荊素葡萄糖苷鹽

式3咖啡酸鹽????????????????????????????????????????????????????????????式4奎寧酸鹽

式5綠原酸鹽

其中R=Na、K、Ca、Mg或其它可能的金屬離子

本發明中所述的山楂葉總黃酮鹽可以是鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽和其 它一些生理上可以接收的鹽。

山楂葉總黃酮在高PH條件下可以溶解,但其穩定性差,易分解而失 效。故我們通過實驗研究確定了既可保證其溶解性好,又可使之穩定不 被破壞的PH條件。最終確定的PH條件為PH5.5~7.5。

部分穩定性實驗結果如下:

將山楂葉總黃酮配成2%溶液,用NaOH調節不同的PH,沖氮氣10min, 灌封后100℃30min加速破壞,用HPLC測定其主要成分加速破壞前后的 含量變化,結果如下:

???????????????主要成分加速破壞后含量降低百分率(%)

PH????????????????3.5????4.5????5.5????6.5????7.5????8.5????9.5

牡荊素鼠李糖苷????4.7????2.6????2.1????3.2????3.0????8.5????23.5

牡荊素葡萄糖苷????13.5???2.5????1.8????0.9????2.6????11.3???43.0

咖啡酸????????????31.7???14.6???3.1????1.2????2.4????7.9????14.6

奎寧酸????????????87.2???20.3???4.0????1.2????3.1????5.7????35.9

綠原酸????????????27.7???14.9???2.6????0.6????1.8????2.9????6.3

實驗結果提示:在PH5.5-7.5范圍內,所檢查的各主要成分穩定性符 合注射劑的制備要求。故最終確定的PH條件為PH5.5~7.5。

山楂葉總黃酮中主要有效成分牡荊素鼠李糖苷、牡荊素葡萄糖苷、 咖啡酸和綠原酸等從結構上分析,均易被氧化,制備小針劑時應加入適 量的抗氧劑。

抗氧穩定性實驗結果如下:

將山楂葉總黃酮配成2%溶液,用NaOH調節PH至6.5,加入0.1%焦 亞硫酸鈉,灌封后100℃30min加速破壞,用HPLC測定其主要成分加速 破壞前后的含量變化,結果如下:

????????????主要成分加速破壞后含量降低百分率(%)

???????????????????????不含抗氧劑??????????????含抗氧劑

牡荊素鼠李糖苷????????????10.6????????????????????3.1

牡荊素葡萄糖苷????????????13.6????????????????????2.0

咖啡酸????????????????????6.9?????????????????????0.7

奎寧酸?????????????????2.0?????????????????1.9

綠原酸?????????????????8.2?????????????????3.6

實驗結果提示:加入抗氧劑可提高注射劑的穩定性。

小針劑需調節滲透壓。采用常用的NaCl、葡萄糖、甘油、KCl、硼酸 等滲透壓調節劑之一種或幾種。

實施例1

處方:

山楂葉總黃酮????????????????????????160克

NaOH???????????????????????????????適量

亞硫酸氫鈉??????????????????????????2克

NaCl???????????????????????????????18克

????????????????????????????????????制成1000支

制備方法:

取處方量的山楂葉總黃酮、NaCl和亞硫酸氫鈉,加1500ml70℃的注 射用水攪拌溶解,加入NaOH,調節pH為5.5-7.5。加2克活性炭吸附10min, 過濾,加70℃的注射用水定容至2000ml,0.22μm微孔濾膜精濾,分裝, 每支2ml,封口,滅菌,包裝即得。

實施例2

處方:

山楂葉總黃酮????????????????????????80克

NaHCO3?????????????????????????????適量

葡萄糖??????????????????????????????50克

維生素C?????????????????????????????4克

????????????????????????????????????制成1000支

制備方法:

稱取處方量的山楂葉總黃酮、葡萄糖和維生素C,加入750ml70℃的 注射用水攪拌溶解,加入NaHCO3,調節pH為5.5-7.5,測得溶液的pH為 7.2。再加入70℃的注射用水定容至1000ml,0.22μm微孔濾膜精濾,分 裝,每支1ml,封口,滅菌,包裝即得。

實施例3:

處方:

山楂葉總黃酮???????????????????????????80克

KOH???????????????????????????????????適量

焦亞硫酸鈉?????????????????????????????2克

NaCl??????????????????????????????????9克

???????????????????????????????????????制成1000支

制備方法:

稱取處方量的山楂葉總黃酮、焦亞硫酸鈉、NaCl,加入750ml70℃ 的注射用水攪拌溶解,加入KOH,調節pH為5.5-7.5,測得溶液的pH為 6.8,加70℃的注射用水定容至1000ml,0.22μm微孔濾膜精濾,分裝, 每支1ml,封口,滅菌,包裝即得。

山楂葉總黃酮小針劑的藥效學試驗,部分試驗結果記錄如下:

(一)山楂葉總黃酮對急性不完全性腦缺血模型大鼠腦梗塞體積的 影響

SD大鼠70只,♀♂各半,體重250~325g,隨機分為7組,每組10 只。參照文獻方法,動物稱重后以安定注射液和氯胺酮注射液各1ml/kg ip麻醉后仰臥位固定,頸部剪毛后行頸正中切口,分離出雙側頸總動脈 并穿線,穩定5min后一并結扎之,造成急性不完全性腦缺血模型,假手 術組動物只分離而不結扎頸總動脈。結扎后30min從舌下靜脈注入治療 藥物或GS。藥物劑量為:

山楂葉總黃酮高、中、低劑量組給藥劑量分別為20.0、10.0和5.0 mg/kg;

對照組丹參組注射劑量為7.5g生藥/kg的丹參注射液;

給藥體積均為5ml/kg,葡萄糖組注射同體積的5%葡萄糖注射液。

結扎后6h再以上法麻醉動物,放血處死動物,開顱取腦,剔除嗅腦、 小腦及腦干,從正中線剖開前腦,濾紙吸干水份后分別稱量腦濕重后按 以下程序分別進行處理:

腦梗塞重量的測定:采用NBT染色法[2,3]。將一側腦組織稱重后 置冰箱中速凍約15min,沿冠狀面將其切成厚度基本相同的5片,將其置 于臨用前以磷酸鹽緩沖液配制的0.3%NBT染色液中置37℃水浴中溫育 10min,正常腦組織染成棕黑色,梗塞腦組織顏色無明顯改變。將梗塞 區腦組織切下并稱重,計算梗塞組織重量占濕重的百分比,以此反映梗 塞組織體積的大小。

病理組織學檢查:將另一半未染色的腦組織用4%中性福爾馬林溶 液固定24h,冠狀切取大腦,常規脫水、石蠟包埋,切片厚5μm,HE染 色,光鏡觀察。

結果見表1:

????????????表1????山楂葉總黃酮對腦缺血大鼠腦梗塞體積的影響

?????????????劑量????動物????體重????腦組織濕重??????????????????梗塞重量

組??別????????????????????????????????????????????梗塞重量(g)

?????????????mg/kg???數量?????(g)????????(g)????????????????????百分比(%)

假手術組??????/???????10????295±29??677.1±55.3??0?????????????0

葡萄糖組??????/???????10????276±34??670.5±66.2??111.8±15.7???15.7±2.8

??????????????5.0?????10????269±32??658.0±47.5??83.1±12.5**??14.6±2.2

山楂葉總黃酮??10.0????10????274±26??663.4±48.1??77.7±10.2**??11.5±1.8**

??????????????20.0????10????282±31??669.2±62.0??64.4±10.1**??9.8±1.6**

丹參注射??????7500????10????286±27??661.4±51.0??75.3±11.9**??12.4±2.0**

注:與葡萄糖組比較:**P<0.01(P為概率,P小于0.05為小概率事件,在統計學上是有 意義的)

結果顯示,山楂葉總黃酮無論低、中、高劑量組均可降低腦梗塞重 量和梗塞重量百分比。

(二)山楂葉總黃酮對垂體后葉素致大鼠心肌缺血的作用

SD大鼠腹腔注射2%氯醛糖(60mg/kg)麻醉。仰臥固定,將針狀電 極插入四肢及胸前搏動處皮下。調節心電圖(ECG-6851C,上海光電醫 用電子儀器有限公司)靈敏度至1mv=10mm,紙速為50mm/秒。記錄胸前 導聯心電圖,如有ST-T波或心律失常等異常變化,則棄去不用。

大鼠在記錄正常心電圖后,被分到不同處理組。

對照組:20只,靜注5%葡萄糖注射液1ml/kg。

陽性對照組:20只,靜注丹參注射液量6克/kg。

山楂葉總黃酮大、中、小劑量組劑量為20、10、5mg/kg。

將待試藥物、葡萄糖注射液或丹參注射液按每100克體重給予1毫 升的容量,經小號頭皮注射針緩慢注射到大鼠尾靜脈中。恒量注射泵 (HL-2型,上海滬西分析儀器廠)控制輸注速度,使在30分鐘內注完, 模擬人體靜脈滴注給藥方式。

滴注結束后5分鐘,經尾靜脈注射垂體后葉素(上海禾豐制藥有限 公司,批號030501),劑量為0.5U/kg,注射速度為5秒。記錄注射后30 秒、1、2、3、5分鐘胸導聯心電圖。

判斷標準:注射后葉素后心電圖以ST段上升(1mv以上)和T波低 平、雙向、倒置為主。以此作為心肌缺血的指標,出現者計為陽性,不 夠標準者計為陰性。

統計學處理

以未出現心肌缺血動物數與各組總動物數之比作為心肌缺血陰性 率。將實驗組與對照組數據進行x2檢驗,比較相差的顯著性。結果靜脈 注射垂體后葉素后,胸導聯V3出現顯著的心肌缺血性心電圖變化,表現 為ST段上移,T波低平、雙向或倒置,還有心率減慢、傳導阻滯和心律 不齊。以ST段和T波變化最為典型和敏感。不同處理對垂體后葉素所致 心肌缺血的作用見表2。

對照組大鼠輸注5%葡萄糖注射液后,靜注垂體后葉素引起典型的心 肌缺血變化。

不同劑量的山楂葉總黃酮給藥后對抗垂體后葉素所致的心肌缺血陰 性率比對照組有顯著上升。

丹參注射液在設計劑量下,對部分大鼠的缺血性心電圖變化有改善 作用,與對照組無顯著差別。

表2??山楂葉總黃酮對垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血心電圖的影響

組別??????????劑量??????動物數????心肌缺血改善數????陰性率(%)

對照組????????10ml/kg?????20????????????1?????????????5.0

丹參注射液????6g/kg???????20????????????4?????????????20.0

大劑量????????20mg/kg?????20????????????8?????????????40.0**

中劑量????????10mg/kg?????20????????????6?????????????30.0**

小劑量????????5mg/kg??????20????????????6?????????????30.0*

*p<0.05,與對照組比較

總之,山楂葉總黃酮可以減輕不完全性腦缺血所造成的腦梗塞重量, 降低腦梗塞重量百分比。在大鼠注射垂體后葉素造成急性心肌缺血模型 上山楂葉總黃酮能夠顯著緩解缺血性心電圖改變,提示對于防治急性心 肌梗死和心絞痛等冠心病具有價值。

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