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一種中藥組合物及其制備方法和應用.pdf

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一種 中藥 組合 及其 制備 方法 應用
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摘要
申請專利號:

CN201010100298.5

申請日:

20100121

公開號:

CN102133336A

公開日:

20110727

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K36/898,A61P11/00,A61P31/16 主分類號: A61K36/898,A61P11/00,A61P31/16
申請人: 常州善美藥物研究開發中心有限公司
發明人: 顧書華,巢伯肪,席德治
地址: 213022 江蘇省常州市武進區高新技術產業開發區南區
優先權: CN201010100298A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201010100298.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種中藥組合物及其制備方法和其在制備防治感冒藥物中的應用,它是由黃芪、防風、藿香、白術、銀花、佩蘭、菖蒲原料藥制成。方中黃芪具有健脾補中、利水消腫、升陽舉陷、益胃固表、利尿、托毒生肌之功效,防風具有解表散風、勝濕止痛、祛風止痙的功效,藿香具有芳香化濕、祛暑解表之功效,白術具有補脾、益胃、燥濕、和中、安胎的功效,銀花具有抑菌、抗病毒、抗炎、解熱、調節免疫等作用,佩蘭具有芳香化濕和中、醒脾開胃、發表解暑之功效,菖蒲具有開竅、豁痰、理氣、活血、散風、去濕之功效。

權利要求書

1.一種中藥組合物,其包括作為活性成份的下列原料藥材或其活性提取物和可藥用的載體,所述原料藥材的重量份比為:黃芪2-50∶防風2-50∶藿香2-50∶白術2-50∶銀花2-50∶佩蘭2-50∶菖蒲2-50。2.權利要求1所述的中藥組合物,其中原料藥材的重量比為:黃芪5-20∶防風5-20∶藿香5-20∶白術5-20∶銀花5-20∶佩蘭5-20∶菖蒲5-20。3.權利要求2所述的中藥組合物,其中所述的原料藥材為:黃芪10克、防風10克、藿香10克、白術10克、銀花10克、佩蘭10克、菖蒲10克。4.權利要求1所述的中藥組合物,其中的所述的活性提取物是用水、乙醇或它們的混合物作為溶劑提取的。5.權利要求1~4任一項所述的中藥組合物,其特征在于是口服制劑。6.權利要求5所述的中藥組合物,其中所述的口服制劑是湯劑、片劑、顆粒劑、滴丸、丸劑或膠囊劑。7.制備權利要求1~6任一項所述中藥組合物的方法,其包括:a、將處方量的原料藥材投入提取罐內,加入選自水、乙醇或其混合物作為溶劑,回流,收集濾液,如此反復2-3次,過濾后濃縮,得到具有適當濃度的口服湯劑;或者b、將處方量的原料藥材投入提取罐內,加入選自水、乙醇或其混合物作為溶劑,回流,收集濾液,如此反復2-3次,過濾后濃縮得到活性提取物;將活性提取物與藥學上可接受的載體充分混合后制成片劑或膠囊。8.權利要求7的方法,其中還包括將方法b中得到的活性提取物進一步經醋酸乙酯和正丁醇分別萃取,制得精制提取物;然后按照精制提取物與聚乙二醇重量份數比為1∶1.0~2.0的比例將它們充分混合,制成滴丸。9.權利要求1~6任一項所述中藥組合物在制備防治感冒的藥物中的應用。10.權利要求9所述的應用,其特征在于所述感冒包括:風寒型感冒、風熱型感冒、暑濕型感冒、流行性感冒。11.權利要求10所述的應用,其特征在于所述流行性感冒包括:甲流感、人感豬流感、禽流感。

說明書

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技術領域

本發明涉及一種中藥組合物及其制備方法和其在制備治療防治感冒藥物中的應用。

背景技術

感冒,總體上分為普通感冒和流行感冒:普通感冒,祖國醫學稱″傷風″,包括風寒型感冒、風熱型感冒、暑濕型感冒,是由多種病毒引起的一種呼吸道常見病,其中30%-50%是由某種血清型的鼻病毒引起。普通感冒雖多發于初冬,但任何季節,如春天、夏天也可發生,不同季節的感冒的致病病毒并非完全一樣;流行性感冒,是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。病毒存在于病人的呼吸道中,在病人咳嗽、打噴嚏時經飛沫等傳染給別人,如甲流感、禽流感等。流感的傳染性很強,由于這種病毒容易變異,即使是患過流感的人,當下次再遇上流感流行,他仍然會感染,所以流感容易引起暴發性流行。一般在冬春季流行的機會較多,每次可能有20~40%的人會傳染上流感。世界衛生組織2009年10月30日公布了全球甲型H1N1流感疫情形勢最新報告。報告說,在過去的一周里,北美地區甲型H1N1流感死亡病例為636人,創自今年4月甲流暴發以來周死亡人數的最高紀錄。根據世衛組織2009年10月份最新統計,全球甲型流感病例超過44萬例,已有至少5712人死亡。

甲流感即甲型H1N1流感,又稱為A(H1N1)型流感,舊稱人感染豬流感。

(一)臨床癥狀

人感染甲流感后的早期癥狀與普通人流感相似,包括發熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發冷和疲勞等,有些還會出現腹瀉或嘔吐、肌肉痛或疲倦、眼睛發紅等。

部分患者病情可迅速進展,來勢兇猛、突然高熱、體溫超過39℃,甚至繼發嚴重肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細胞減少、腎功能衰竭、敗血癥、休克及Reye綜合征、呼吸衰竭及多器官損傷,導致死亡。

(二)體征

肺部體征常不明顯,部分患者可聞及濕羅音或有肺部實變體征等。

(三)預后

人感染豬流感的預后與感染的病毒亞型有關,大多預后良好;而感染H1N1者預后較差,病死率約為6%。

(四)胸部影像學

合并肺炎時肺內可見片狀影像。嚴重病例片狀影像范圍廣泛。

(五)治療

在一些國家對防治甲流感已經采取了有效措施,主要有兩類這樣的藥物:1)烷胺類(金剛烷胺和金剛乙胺);2)流感病毒神經氨酸酶抑制劑(奧司他韋和扎那米韋)。但是很大一部分甲流感病毒產生了對抗藥病毒藥物的耐藥,這限制了化學預防藥物和治療藥物的效力。所以迫切地需要尋找一種對防治甲流感不易產生耐藥性,療效好的藥物。

發明內容

本發明人多年從事治療感冒的中藥制劑研制和中醫臨床治療工作,在總結個人多年積累的臨床用藥經驗基礎上,結合中醫理論,閱讀了大量中醫中藥關于治療感冒的書籍,在防治感冒領域已經有了很大成績。

從甲流感2009年4月份在墨西哥爆發,在這段時間內本發明人對甲流感進行了大量的試驗研究,得出將一定量的黃芪、防風、藿香、白術、銀花、佩蘭、菖蒲混合,除了對普通感冒有防治效外,對防治流感,尤其是甲流感有獨特的療效。為此,本發明人進行了大量的嘗試性試驗,在保證療效的前提下,進一步完善了各味中藥的不同配比,終于完成了本發明的試驗,自行研制出了無毒副作用,服用方便的既能治療感冒,又防治甲流感、禽流感的中藥組合物。因此,

本發明的目的之一在于公開了一種中藥組合物。

本發明的目的之二在于公開了防治感冒的中藥組合物的制備方法。

本發明的目的之三在于公開了防治甲流感的中藥組合物的制備方法。

本發明的目的之四在于公開了組合物在制備防治流感藥物方面,尤其是在甲流感、禽流感方面的應用。

本發明詳細的技術方案如下:本發明公開了一種中藥組合物,其特征在于,其包括作為活性成份的下列重量份數的原料藥材或其活性提取物和可藥用的載體,所述原料藥材包括:

黃芪2-50∶防風2-50∶藿香2-50∶白術2-50∶銀花2-50∶佩蘭2-50∶菖蒲2-50。

本發明優選的組合物中各原料藥材重量為:

黃芪5-20克、防風5-20克、藿香5-20克、白術5-20克、銀花5-20克、佩蘭5-20克、菖蒲5-20克。

本發明更加優選的組合物中各原料藥材重量為:

黃芪10克、防風10克、藿香10克、白術10克、銀花10克、佩蘭10克、菖蒲10克。

本發明優選藥材為:黃芪、防風、廣藿香、麩炒白術、金銀花、佩蘭、石菖蒲。

在本發明的一個優選實例中,將所述的原料藥材用常規溶劑提取,制成活性提取物。優選的常規溶劑選自水、乙醇及它們的混合物。

本發明的中藥組合物可以是腸道給藥和非腸道給藥的任何劑型,優選將原料藥材或其活性提取物與任何一種或幾種藥學上可接受的載體充分混合制成口服制劑。優選的口服制劑是湯劑、片劑、顆粒劑、滴丸、丸劑或膠囊劑。

本發明還公開了防治感冒,尤其是甲流感的中藥組合物的制備方法,包括:

a、將處方量的原料藥材投入提取罐內,加入選自水,乙醇或其混合物作為溶劑,回流,收集濾液,如此反復2-3次,過濾后濃縮,得到適當濃度可藥用的湯劑;或者

b、將處方量的原料藥材投入提取罐內,加入選自水,乙醇或其混合物作為溶劑,回流,收集濾液,如此反復2-3次,過濾后濃縮得到活性提取物;將活性提取物與藥學上可接受的載體充分混合后制成片劑或膠囊。

當用乙醇和水的混合物作為提取溶劑時,乙醇的濃度為55~95%(V/V)。

在本發明的一個優選實例中,將上述方法b中得到的活性提取物進一步經醋酸乙酯和正丁醇分別萃取制得精制提取物,然后按照精制提取物與聚乙二醇重量份數比為1∶1.0~2.0的比例充分混合制成滴丸。

本發明所選用的各味中藥材的功效如下:

黃芪性溫,味甘。補氣固表,托毒排膿,利尿,生肌。用于氣虛乏力、久瀉脫肛、自汗、水腫、子官脫垂、慢性腎炎蛋白尿、糖尿病、瘡口久不愈合。

防風辛甘,溫。入膀胱、肺、脾經。發表,祛風,勝濕,止痛。治外感風寒,頭痛,目眩,項強,風寒濕痹,骨節酸痛,四肢攣急,破傷風。

藿香辛,微溫。入肺、脾、胃經。快氣,和中,辟穢,祛濕。治感冒暑濕,寒熱,頭痛,胸脘痞悶,嘔吐泄瀉,瘧疾,痢疾,口臭。

白術苦甘,溫。入脾、胃經。補脾,益胃,燥濕,和中,安胎。治脾胃氣弱,不思飲食,倦怠少氣,虛脹,泄瀉,痰飲,水腫,黃疸,濕痹,小便不利,頭暈,自汗,胎氣不安。

銀花甘,寒。入肺、胃經。清熱,解毒。治溫病發熱,熱毒血痢,癰瘍,腫毒,瘰疬,痔漏。

佩蘭辛,平。入脾、胃經。清暑,辟穢,化濕,調經。治感受暑濕,寒熱頭痛,濕邪內蘊,脘痞不饑,口甘苔膩,月經不調。

菖蒲辛、溫、無毒。入心、肝、脾經。開竅,豁痰,理氣,活血,散風,去濕。主治癲癇,痰厥,熱病神昏,健忘,氣閉耳聾,心胸煩悶,胃痛,腹痛,風寒濕痹,癰疽腫毒,跌打損傷。

方解:本方用于防治感冒,尤其是流感,如甲流感、禽流感,主治身體虛弱不能固表之證。衛虛腠理不密,則易為風邪所襲,固易于感冒。治宜益氣健脾實衛、祛風御邪、固表止汗。方中黃芪甘溫,內可大補脾肺之氣,外可益衛固表止汗;白術具有健脾益氣之功;防風走表而散風御邪。三藥合用使氣旺表實則汗不外泄,固表而不留邪,同時外邪亦很難內侵,三藥為君藥。配藿香、佩蘭以芳香化濁、辟穢加強固表御邪之力為臣藥。金銀花清熱解毒,石菖蒲理氣活血、開竅散風祛濕為佐使藥。對于表虛自汗或體虛易于感冒者用之有益氣固表、扶正祛邪之功。

加減運用:氣虛者加黨參,扶元益氣;脾胃虛者加茯苓、薏苡仁;血虛甚者加歸身、丹參養血通脈;陰虛甚者加北沙參、珠兒參、西洋參滋養陰液。

本發明所述的中藥組合物,具有防治感冒的作用,對防治打噴嚏、鼻塞、流涕、發熱、頭痛、乏力等癥狀有很好的療效。其中感冒包括:風寒型感冒、風熱型感冒、暑濕型感冒、流行性感冒,流行性感冒包括:甲流感、禽流感等。該中藥組合物除了對防治感冒有作用,對防治流行性感冒:甲流感及甲流感后遺癥療效甚佳。

本發明所述的中藥組合物,可將上述各藥材與任何一種或幾種藥學上可接受的藥用載體混合制成口服制劑。例如湯劑、片劑、顆粒劑、滴丸、丸劑或膠囊劑等等。例如將上述諸味藥材混合共研細末,分別裝入膠囊,每次10克,日2-4次。特殊的情況可根據患者的病情適當的加以調節。

本發明所述的一種或幾種藥學上可接受的藥用載體包括:常規的稀釋劑、填充劑(如乳糖、阿司帕坦、木糖醇、聚乙二醇),粘合劑(淀粉、微晶纖維素),崩解劑(如羧甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素),潤滑劑(如滑石粉、硬脂酸鎂),濕潤劑(如丙二醇、乙醇),穩定劑(EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、乙醇胺、碳酸氫鈉、煙酰胺)。還可以包括:磷酸鎂、硬脂酸鎂、滑粉糖、乳糖、果膠、丙二醇、干淀粉、聚山梨酯-80、糊精、淀粉、明膠、纖維素類物質等等。例如甲基纖維素、微晶纖維素、低熔點石蠟、聚乙二醇、甘露醇、可可脂或適量硬脂酸鎂等等。

具體實施方式

下面的實施例可以幫助本領域的技術人員更全面的理解本發明。但不以任何方式限制本發明,本發明實施例中的份數可以根據實際的需要加以選擇為克或公斤及其他用量單位。

實施例1

【處方】黃芪10份、防風10份、藿香10份、白術10份、銀花10份、佩蘭10份、菖蒲10份。

【制法】將上述處方量的藥材投入提取罐內,加水煎煮2小時,收集濾液,反復2次,過濾后,混合所有的濾液,棄去殘渣,濃縮制成2000ml的湯劑,分2-3次/天服用。連續服用2天,第3天不適癥狀得到緩解。

實施例2

【處方】黃芪10份、防風10份、藿香10份、白術10份、銀花10份、佩蘭10份、菖蒲10份。

【制法】將上述藥材用85%(V/V)乙醇提取2次,每次用1500ml,提取1~2小時。獲得提取物然后加入淀粉55g,混勻,干燥。另加淀粉85g,木糖醇125g,阿司帕坦0.6g,混合均勻,粉碎成細粉,用60%乙醇制顆粒,干燥;加入硬脂酸鎂適量,混合均勻,壓制成1000片,每片重1g。

實施例3

【處方】黃芪10份、防風10份、藿香10份、白術10份、銀花10份、佩蘭10份、菖蒲10份。

【制法】以上幾味中藥材,粉碎成細粉,混勻,過篩,干燥,裝膠囊,即得。

實施例4

【處方】黃芪10份、防風10份、藿香10份、白術10份、銀花10份、佩蘭10份、菖蒲10份。

【制法】藥材提取:按照上述處方量用70%重量的乙醇和水混合物回流提取2次,每次用2100ml乙醇和水的混合物提取1小時,濾液濃縮成浸膏,加250ml水,使浸膏成混懸液,再用醋酸乙酯和正丁醇分別萃取2次,每次250ml,萃取液過濾合并后濃縮至干成為精制提取物。取基質24.9g聚乙二醇6000、54.2g聚乙二醇4000、6.9g甘油置容器中,于水浴上加熱到80℃,待全部熔融后,加入精制提取物21.5g,攪拌至溶解,均勻。將配制好的藥液轉移至貯液瓶中,密閉并保溫在80℃,調節液滴定量閥門,滴入25℃的甲基硅油中,將形成的滴丸瀝盡并擦除甲基硅油,經干燥,即得。

實施例5

黃芪10份、防風10份、藿香10份、白術10份、銀花10份、佩蘭10份、菖蒲10份。將各組分粉碎,過篩混合均勻,然后加入3.5%的蜂蜜制成丸劑。

實施例6

黃芪10份、防風10份、藿香10份、白術10份、銀花10份、佩蘭10份、菖蒲10份。

按照上述實施例3的方法制得精制提取物,然后與其它藥材混合均勻,加可壓性淀粉3g、硬脂酸鎂2.5g,混合均勻,40%乙醇造粒,壓片包薄膜衣。

實施例7

中藥組合物對小鼠甲流感的防治作用

1.實驗方法

1.1動物分組

SPF級NIH小鼠,雌雄各半,體重13~15g。將小鼠隨機分為正常對照組、甲流感對照組、中藥組合物組(10mg/kg·天)、中藥組合物組(100mg/kg·天),每組15只。

1.2動物模型制備

中藥組合物組于感染甲流感前10天開始灌胃給藥,正常對照組與甲流感對照組在這10天中給予同體積同頻率蒸餾水灌胃。

給藥10天后,除正常對照組外,其他各組小鼠在乙醚輕度麻醉下感染甲1亞型流感病毒FM1鼠肺適應株15個LD50。

2.指標測定

1)肺部感染指標:感染96小時后觀察小鼠體態特征。處死小鼠,稱體重后取肺稱質量,逐個算出肺指數值(肺指數=肺質量/體重×100%)和肺指數抑制率(肺指數抑制率=(模型對照組平均肺指數-實驗組平均肺指數)/模型對照組平均肺指數×100%)。

2)感染小鼠死亡率和存活時間:逐日觀察小鼠發病情況和記死亡數、存活時間,計算死亡率(各組死亡數/各組總數×100%),共觀察15天。

3數據處理方法:所得數據用x±s表示,t-test進行統計學處理。

4.結果

4.1正常對照組小鼠皮毛有光澤,反應靈敏,活動正常,體重持續增加。甲流感對照組小鼠體毛稀疏,失去光澤,反應遲鈍,活動減少,飲食飲水量減少,消瘦。給藥組小鼠基本沒有甲流感對照組的癥狀。

4.2中藥組合物大劑量組肺指數與甲流感對照組比較有顯著性差異(P<0.01),

肺指數抑制率也顯著提高(P<0.01)結果見表1。

表1對甲1型流感病毒FM1株致小鼠病毒性肺炎的影響(x±s)

??組別??N??平均體重(g)??肺指數??肺指數抑制率(%)??正常對照組??15??18.6±0.75??0.76±0.15??-??甲流感對照??組??15??12.7±0.39??1.59±0.18**??-??中藥組合物??組10mg/kg??15??17.7±0.54??0.99±0.32??35.7

??中藥組合物??組100mg/kg??15??18.3±0.49??0.86±0.17#??60.9##

**表示與正常對照組比,P<0.01;##表示與模型對照組比,P<0.01

4.3甲流感對照組在感染后第5天逐漸出現反應遲鈍,活動減少,飲食飲水量減少,消瘦的癥狀,第8~10天開始死亡。中藥組合物小劑量組與大劑量組死亡率顯著下降(P<0.05),存活時間也顯著延長(P<0.01)。結果見表2。

表2對小鼠感染甲1亞型流感病毒FM1株的死亡保護作用

??組別??死亡數(只)??死亡率(%)??平均存活時間(天)??甲流感對照組??11??73.3??8.69??中藥組合物組??(10mg/kg)??2??13.3#??-??中藥組合物組??(100mg/kg)??0??0??-

與模型對照組比,#表示P<0.05,##表示P<0.01

5.結論

中藥組合物組合物能有效防治抗甲1亞型流感病毒FM1株所致的小鼠病毒性肺炎,顯著降低模型鼠的死亡率,并能延長存活時間。

實施例8

中藥組合物對流感病毒肺適應株小鼠模型的影響

1.實驗方法

1.1動物分組

SPF級NIH小鼠,雌雄各半,體重13~15g。將小鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、中藥組合物組(10mg/kg·天)、中藥組合物組(100mg/kg·天),每組15只。

1.2動物模型制備

用藥組于感染前1天開始灌胃給藥,中藥組合物組(10mg/kg·天),中藥組合物組(100mg/kg·天),連續5天,而正常對照組、模型對照組給予同體積同頻率蒸餾水灌胃。

給藥5天后,除正常對照組外,其他各組小鼠在乙醚輕度麻醉下感染甲1亞型流感病毒FM1鼠肺適應株15個LD50(甲1亞型流感病毒FM1株由中國醫學科學院醫藥生物技術研究所提供,鼠肺適應3代以增強毒力再經雞胚尿囊腔接種,制備新鮮毒種,測定其半數致死量(LD50)后-70℃凍存備用)。

2.指標測定

1)肺部感染指標:感染96小時后觀察小鼠體態特征。處死小鼠,稱體重后取肺稱質量,逐個算出肺指數值(肺指數=肺質量/體重×100%)和肺指數抑制率(肺指數抑制率=(模型對照組平均肺指數-實驗組平均肺指數)/模型對照組平均肺指數×100%)。

2)感染小鼠死亡率和存活時間:逐日觀察小鼠發病情況和記死亡數、存活時間,計算死亡率(各組死亡數/各組總數×100%),共觀察15天。

3.數據處理方法:所得數據用x±s表示,t-test進行統計學處理。

4.結果

4.1正常對照組小鼠皮毛有光澤,反應靈敏,活動正常,體重持續增加。模型組小鼠體毛稀疏,失去光澤,反應遲鈍,活動減少,飲食飲水量減少,消瘦。藥物治療組小鼠較模型組上述癥狀減輕。

4.2中藥組合物大劑量組肺指數與模型對照組比較有顯著性差異(P<0.01),肺指數抑制率也顯著提高(P<0.01)結果見表3。

表3對甲1型流感病毒FM1株致小鼠病毒性肺炎的影響(x±s)

??組別??N??平均體重(g)??肺指數??肺指數抑制率(%)??正常對照組??15??18.6±0.75??0.76±0.15??-??模型對照組??15??12.7±0.39??1.59±0.18**??-??中藥組合物??組10mg/kg??15??14.7±0.61??1.55±0.57??15.1??中藥組合物??組100mg/kg??15??16.5±0.53??1.04±0.96#??29.0##

**表示與正常對照組比,P<0.01;##表示與模型對照組比,P<0.01

4.3模型組在感染后第5天逐漸出現反應遲鈍,活動減少,飲食飲水量減少,消瘦的癥狀,第8~10天開始死亡。中藥組合物小劑量組癥狀改善不明顯,大劑量組死亡率顯著下降(P<0.05),存活時間也顯著延長(P<0.01)。結果見表4。

表4對小鼠感染甲1亞型流感病毒FMI株的死亡保護作用

??組別??死亡數(只)??死亡率(%)??平均存活時間(天)??模型對照組??11??73.3??8.69??中藥組合物組??(10mg/kg)??8??53.3#??10.03

??中藥組合物組??(100mg/kg)??5??33.3##??14.65#

與模型對照組比,#表示P<0.05,##表示P<0.01

5.結論

中藥組合物組合物能有效對抗甲1亞型流感病毒FM1株所致的小鼠病毒性肺炎,顯著降低模型鼠的死亡率,并能延長存活時間。

實施例9

中藥組合物組對抗甲1亞型流感病毒致狗腎傳代細胞(MDCK)病變的體外實驗

1.實驗方法

在甲1亞型流感病毒感染后的狗腎傳代細胞中加入用細胞維持液稀釋的不同濃度的藥物,對照組為病毒唑組,母液濃度為3mg/ml;中藥組合物組母液濃度為5mg/ml,第一濃度為母液稀釋4倍,再用培養液做3倍系列稀釋成8個稀釋梯度,如1∶4、1∶12、1∶36、1∶108、1∶324、1∶972、1∶2916、1∶8748.

2.指標測定.

2.1藥物半數毒性濃度(TD50)、最大無毒濃度(TD0)

將MDCK細胞接種于96孔培養板,每孔0.1ml,細胞數約為5*105,37℃、5%CO2培養。培養24小時后形成單細胞層,之后感染甲型流感病毒,吸附2小時。加入用細胞維持液稀釋的藥物(見上)。繼續培養72小時。72小時后,顯微鏡觀察細胞形態,并用噻唑藍(MTT)比色法在590nm波長處測定吸光度A值,計算細胞存活率、藥物半數毒性濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)。每個劑量藥物加入5孔,同時設正常細胞對照組和空白組。細胞存活率(%)=(實驗孔A值/對照孔A值)×100%

2.2半數抑制濃度(IC50)、選擇指數(SI)

將MDCK細胞接種于96孔培養板,24小時后感染甲型流感病毒,吸附2小時。加入上述稀釋液,同時設細胞對照孔和病毒對照孔,觀察24小時細胞病變程度(CPE),計算對病毒的半數抑制濃度(IC50)、選擇指數SI(TD50/IC50)。

3.結果

SI值越高抑制作用越強。中藥組合物組SI值高于對照組,顯示中藥組合物組對流感病毒所致的細胞病變有一定的抑制作用。見表5。

表5對狗腎細胞保護作用

??組別??第一濃度??TD50??TD0??IC50??SI??對照組??1∶4??1∶6.9??1∶16??1∶16??2.3??中藥組合??物組??1∶4??1∶108??1∶324??1∶648??6.0

4.結論

甲流中藥組合物對流感病毒所致的狗腎傳代細胞病變有一定的抑制作用。

實施例10

中藥組合物治療普通感冒

劉某,乍冷乍熱、頭疼惡心、口苦無味、不思飲食、四肢酸軟、小便赤黃、大便秘結。診斷為感冒。

處方:黃芪10克、防風10克、藿香10克、白術10克、銀花10克、佩蘭10克、菖蒲10克

治療:每天煎煮兩次,分早晚兩次服用,服用兩天后癥狀明顯減輕,聯系七天后痊愈。

實施例11

中藥組合物治療禽流感

王某,初期發熱、流涕、鼻塞、咳嗽,服用普通感冒藥七天后癥狀未見緩解,第八天出現眼結膜炎,體溫為39℃,第九天出現單側肺炎。診斷為禽流感。

處方:黃芪10克、防風10克、藿香10克、白術10克、銀花10克、佩蘭10克、菖蒲10克

治療:每天煎煮兩次,分早晚兩次服用,服用兩天后癥狀明顯減輕,連續服用兩周后痊愈。

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