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一種卷葉黃精的組培快繁方法.pdf

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一種 黃精 組培快繁 方法
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摘要
申請專利號:

CN201810688972.2

申請日:

20180628

公開號:

CN108541594A

公開日:

20180918

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 廣西壯族自治區農業科學院農產品質量安全與檢測技術研究所
發明人: 勞水兵,劉麗輝,莫仁甫,覃國新,周其峰,楊玉霞,何潔,吳玉東
地址: 530007 廣西壯族自治區南寧市西鄉塘區大學東路174號
優先權: CN201810688972A
專利代理機構: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 代理人: 朱志寬
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201810688972.2

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明屬于植物組織培養技術領域,尤其是一種卷葉黃精的組培快繁方法。一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:(1)外植體的選擇與消毒、(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗、(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養、(4)叢生芽壯苗培養、(5)生根培養和(6)煉苗移栽。本發明的組織快繁方法在短時間內可以培養出大量可供大秒栽培的卷葉黃精幼苗,顯著提高了卷葉黃精種苗的繁殖系數和種苗質量,可以實現了規模化生產,以滿足生產上的需要。

權利要求書

1.一種卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,包括如下步驟:(1)取卷葉黃精側芽作為外植體,置于第一培養基中培養,得無菌試管苗;(2)將步驟(1)得到的無菌試管苗置于第二培養基中培養,得試管苗叢生芽;(3)將步驟(2)得到的試管叢生芽置于第三培養基中培養,得健壯植株;(4)將步驟(3)得到的健壯植株置于第四培養基中培養,得完整帶根苗;(5)將步驟(4)得到的完整帶根苗連同培養瓶一起放入25℃的環境中,打開培養瓶蓋,向培養瓶內添加自來水,煉苗4-7天,待完整帶根苗的表面角質形成后取出,洗凈根部培養基后移栽至椰糠基質中。2.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,步驟(1)中,將外植體置入第一培養基之前,對外植體進行消毒處理,所述消毒處理的具體步驟包括:(a)將外植體置入體積分數為1.5-3%的洗潔精水溶液中浸泡3-7min,取出后用線狀自來水沖洗15-30min;(b)將步驟(a)得到的外植體置入特制消毒劑中浸泡8-10min,取出后用無菌水沖洗3-5次;其中,所述特制消毒劑為在質量分數為0.1%的升汞溶液中添加吐溫-20得到,每100mL質量分數為0.1%的升汞溶液添加的吐溫-20的量為2-3滴。3.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,步驟(1)中所述的第一培養基包括:MS、1.0-2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤、0.1-0.3mg/L的吲哚乙酸、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的瓊脂。4.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,步驟(2)中所述的第二培養基包括:MS、1.0-5.0mg/L的甲硫達嗪、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸、0.2-1.0mg/L的激動素、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂。5.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,步驟(3)中所述的第三培養基包括:MS、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、0.5-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂。6.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,步驟(4)中所述的第四培養基包括:1/2MS、0.5-2.0mg/L的萘乙酸、8-12g/L蔗糖和5g/L的瓊脂。7.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于:在第一培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天;在第二培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天;在第三培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天;在第四培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天。8.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,在所述的第一培養基、所述第二培養基、所述第三培養基和所述第四培養基中的培養時間分別為25-35天、35-45天、25-35天和25-35天。9.根據權利要求1所述的卷葉黃精的組培快繁方法,其特征在于,所述第一培養基、所述第二培養基、所述第三培養基和所述第四培養基的初始pH值均為5.5-6.0。

說明書

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域,尤其是一種卷葉黃精的組培快繁方法。

背景技術

卷葉黃精(Polygonatumcirrhifolium),屬于百合科(Liliaceae)黃精屬(Ploygonatum)多年生草本植物,為常用藥食同源中藥,藏名譯音“可口梨”。性味甘平,具有補氣養陰、降血壓、降血糖、降血脂、潤肺、益腎、健脾等功效,被譽為“長生不老和延年益壽”藥。漢朝的《神農本草經》、明朝的《本草綱目》和藏醫名著《晶珠本草》均有其藥膳食補功效的記載。黃精主要含有多糖、皂甙、生物堿、氨基酸、木脂素、黃酮、酚類、蒽醌等多種化學成分。

本發明采用組織培養的方法,能快速、有效地提高卷葉黃精種苗的繁殖效率和質量,實現卷葉黃精優質種苗的工廠化育苗,滿足生產上的需要。但鮮有相關報道

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解,而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

針對現有技術的不足,本發明提供一種卷葉黃精的組培快繁方法,本發明的方法采用四種特制的培養基進行組織培養,可有效提高卷葉黃精種苗的繁殖速度和質量,實現優質卷葉黃精種苗的工廠化育苗。

本發明是通過以下技術方案來實現的:

一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:

(1)取卷葉黃精側芽作為外植體,置于第一培養基中培養,得無菌試管苗;

(2)將步驟(1)得到的無菌試管苗置于第二培養基中培養,得試管苗叢生芽;

(3)將步驟(2)得到的試管叢生芽置于第三培養基中培養,得健壯植株;

(4)將步驟(3)得到的健壯植株置于第四培養基中培養,得完整帶根苗;

(5)將步驟(4)得到的完整帶根苗連同培養瓶一起放入25℃的環境中,打開培養瓶蓋,向培養瓶內添加自來水,煉苗4-7天,待完整帶根苗的表面角質形成后取出,洗凈根部培養基后移栽至椰糠基質中。

作為優選,步驟(1)中,將外植體置入第一培養基之前,對外植體進行消毒處理,所述消毒處理的具體步驟包括:

(a)將外植體置入體積分數為1.5-3%的洗潔精水溶液中浸泡3-7min,取出后用線狀自來水沖洗15-30min;

(b)將步驟(a)得到的外植體置入特制消毒劑中浸泡8-10min,取出后用無菌水沖洗3-5次;其中,所述特制消毒劑為在質量分數為0.1%的升汞溶液中添加吐溫-20得到,每100mL質量分數為0.1%的升汞溶液添加的吐溫-20的量為2-3滴。

作為優選,步驟(1)中所述的第一培養基包括:MS、1.0-2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤、0.1-0.3mg/L的吲哚乙酸、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的瓊脂。

作為優選,步驟(2)中所述的第二培養基包括:MS、1.0-5.0mg/L的甲硫達嗪、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸、0.2-1.0mg/L的激動素、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂。

作為優選,步驟(3)中所述的第三培養基包括:MS、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、0.5-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂。

作為優選,步驟(4)中所述的第四培養基包括:1/2MS、0.5-2.0mg/L的萘乙酸、8-12g/L蔗糖和5g/L的瓊脂。

作為優選,在第一培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天;

在第二培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天;

在第三培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天;

在第四培養基中培養的培養條件:培養溫度為23-27℃,光照強度為1200-1800lux,光照時間為8-10小時/天。

作為優選,在所述的第一培養基、所述第二培養基、所述第三培養基和所述第四培養基中的培養時間分別為25-35天、35-45天、25-35天和25-35天。

作為優選,所述第一培養基、所述第二培養基、所述第三培養基和所述第四培養基的初始pH值均為5.5-6.0。

與現有技術相比,本發明具有如下有益效果:

(1)本發明采用四種針對性強的第一培養基、第二培養基、第三培養基和第四培養基進行組織培養,在短時間內可以培養出大量可供大秒栽培的卷葉黃精幼苗,顯著提高了卷葉黃精種苗的繁殖系數和種苗質量,可以實現了規模化生產,以滿足生產上的需要。

(2)本發明首先用第一培養基進行外植體初代誘導獲得無菌試管苗,然后用第二培養基進行無菌試管苗叢生芽快速繁殖培養分化出大量叢生芽獲得試管叢生芽,隨后用第三培養基進行叢生芽壯苗培養獲得健壯的植株,最后用第四培養基進行生根培養獲得完整帶根苗,四種培養基環環相扣,配合緊密,極大提高了卷葉黃精成苗率。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明的具體實施方式進行詳細描述,但應當理解本發明的保護范圍并不受具體實施方式的限制。

除非另有其它明確表示,否則在整個說明書和權利要求書中,術語“包括”或其變換如“包含”或“包括有”等等將被理解為包括所陳述的元件或組成部分,而并未排除其它元件或其它組成部分。

實施例1

一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:

(1)外植體的選擇與消毒:取卷葉黃精側芽作為外植體,依次用2%洗潔精水溶液泡5min、線狀自來水沖洗15min、添加了2滴吐溫-20的100mL0.1%升汞消毒8min、無菌水沖洗3次,最后用消毒濾紙除去表面水分,得到外植體,其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水;

(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體置于MS培養基中,在培養溫度為23℃,光照強度1500lux,光照時間為8小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗,其中MS培養基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于花MS繁殖培養基中,在培養溫度23℃、光照強度1500lux,光照時間為8小時/天的條件下培養40天得到試管苗叢生芽,其中MS繁殖培養基中添加了1.0mg/L的甲硫達嗪TDZ、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數為15.6。

(4)叢生芽壯苗培養:將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養基中,在培養溫度23℃,光照強度1500lux,光照時間為8小時/天的條件下培養30天得到健壯植株,其中MS壯苗培養基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(5)生根培養:將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中在培養溫度23℃、光照強度1500lux,光照時間為8小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗,其中1/2MS生根培養基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(6)煉苗移栽:將所述完整帶根苗在室溫為25℃的室內打開瓶蓋,瓶內加30ml自來水,煉苗4天,表面角質形成后將苗取出,洗凈根部培養基立即移栽到滅過菌的椰糠基質中。

實施例2

一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:

(1)外植體的選擇與消毒:取卷葉黃精側芽作為外植體,依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗30min、添加了3滴吐溫-20的100mL0.1%升汞消毒10min、無菌水沖洗5次,最后用消毒濾紙除去表面水分,得到外植體,其中的蒸餾水;

(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體置于MS培養基中,在培養溫度為27℃,光照強度1500lux,光照時間為10小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗,其中MS培養基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8;

(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中,在培養溫度27℃、光照強度1500lux,光照時間為10小時/天的條件下培養40天得到試管苗叢生芽,其中MS繁殖培養基中添加了3.0mg/L的甲硫達嗪TDZ、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數為23.2。

(4)叢生芽壯苗培養:將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養基中,在培養溫度27℃,光照強度1500lux,光照時間為10小時/天的條件下培養30天得到健壯植株,其中MS壯苗培養基中添加0.2mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(5)生根培養:將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中在培養溫度27℃、光照強度1500lux,光照時間為10小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗,其中1/2MS生根培養基中添加1.0mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(6)煉苗移栽:將所述完整帶根苗在室溫為25℃的室內打開瓶蓋,瓶內加30ml自來水,煉苗7天,表面角質形成后將苗取出,洗凈根部培養基立即移栽到滅過菌的椰糠基質中。

實施例3

一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:

(1)外植體的選擇與消毒:取卷葉黃精側芽作為外植體,依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗20min、添加了3滴吐溫-20的100mL0.1%升汞消毒9min、無菌水沖洗4次,最后用消毒濾紙除去表面水分,得到外植體,其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水;

(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體置于MS培養基中,在培養溫度為25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗,其中MS培養基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中,在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養40天得到試管苗叢生芽,其中MS繁殖培養基中添加了2.5mg/L的甲硫達嗪TDZ、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數為27.1。

(4)叢生芽壯苗培養:將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養基中,在培養溫度25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到健壯植株,其中MS壯苗培養基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(5)生根培養:將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗,其中1/2MS生根培養基中添加0.8mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(6)煉苗移栽:將所述完整帶根苗在室溫為25℃的室內打開瓶蓋,瓶內加30ml自來水,煉苗5天,表面角質形成后將苗取出,洗凈根部培養基立即移栽到滅過菌的椰糠基質中。

實施例4

一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:

(1)外植體的選擇與消毒:取卷葉黃精側芽作為外植體,依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗20min、添加了3滴吐溫-20的100mL0.1%升汞消毒9min、無菌水沖洗4次,最后用消毒濾紙除去表面水分,得到外植體,其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水;

(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體置于MS培養基中,在培養溫度為25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗,其中MS培養基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中,在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養40天得到試管苗叢生芽,其中MS繁殖培養基中添加了2.5mg/L的甲硫達嗪TDZ、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數為35.2。

(4)叢生芽壯苗培養:將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養基中,在培養溫度25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到健壯植株,其中MS壯苗培養基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(5)生根培養:將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗,其中1/2MS生根培養基中添加0.8mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(6)煉苗移栽:將所述完整帶根苗在室溫為25℃的室內打開瓶蓋,瓶內加30ml自來水,煉苗5天,表面角質形成后將苗取出,洗凈根部培養基立即移栽到滅過菌的椰糠基質中。

實施例5

一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:

(1)外植體的選擇與消毒:取卷葉黃精側芽作為外植體,依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗20min、添加了3滴吐溫-20的100mL0.1%升汞消毒9min、無菌水沖洗4次,最后用消毒濾紙除去表面水分,得到外植體,其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水;

(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體置于MS培養基中,在培養溫度為25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗,其中MS培養基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中,在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養40天得到試管苗叢生芽,其中MS繁殖培養基中添加了2.5mg/L的甲硫達嗪TDZ、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數為37.5。

(4)叢生芽壯苗培養:將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養基中,在培養溫度25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到健壯植株,其中MS壯苗培養基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(5)生根培養:將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗,其中1/2MS生根培養基中添加0.8mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(6)煉苗移栽:將所述完整帶根苗在室溫為25℃的室內打開瓶蓋,瓶內加30ml自來水,煉苗5天,表面角質形成后將苗取出,洗凈根部培養基立即移栽到滅過菌的椰糠基質中。

實施例6

一種卷葉黃精的組培快繁方法,包括如下步驟:

(1)外植體的選擇與消毒:取卷葉黃精側芽作為外植體,依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗20min、添加了3滴吐溫-20的100mL0.1%升汞消毒9min、無菌水沖洗4次,最后用消毒濾紙除去表面水分,得到外植體,其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水;

(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體置于MS培養基中,在培養溫度為25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗,其中MS培養基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養:將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中,在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養40天得到試管苗叢生芽,其中MS繁殖培養基中添加了2.5mg/L的甲硫達嗪TDZ、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數為25.4。

(4)叢生芽壯苗培養:將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養基中,在培養溫度25℃,光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到健壯植株,其中MS壯苗培養基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(5)生根培養:將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中在培養溫度25℃、光照強度1500lux,光照時間為9小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗,其中1/2MS生根培養基中添加0.8mg/L的萘乙酸NAA、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂,培養基的pH值為5.8。

(6)煉苗移栽:將所述完整帶根苗在室溫為25℃的室內打開瓶蓋,瓶內加30ml自來水,煉苗5天,表面角質形成后將苗取出,洗凈根部培養基立即移栽到滅過菌的椰糠基質中。

為了更好地說明本發明的實施效果,發明人提供比較實驗如下:

比較例1

在對外植體進行消毒處理之前,不將外植體用海綿包裹,然后進行變溫變壓處理,其余參數與實例6中的完全相同,工藝過程也完全相同。

比較例2

在配制第二培養基時,控制甲硫達嗪的含量為0.1mg/L。其余參數與實例6中的完全相同,工藝過程也完全相同。

按照實施例1、實施例2、實施例3、實施例4、實施例5、實施例6、比較例1和比較例2中的方案分別對卷葉黃精進行組織培養,統計叢生芽增殖系數。

然后,將一塊大田分為8塊區域,將實施例1-6及比較例1和比較例2的椰糠基質中的完整帶根苗分別移栽到8塊區域中,并統計成苗率。

表1叢生芽增殖系數和成苗率測定

處理 叢生芽增殖系數 成苗率(%) 實施例1 15.6 87% 實施例2 23.2 85% 實施例3 27.1 85% 實施例4 35.2 95% 實施例5 37.5 96% 實施例6 25.4 98% 比較例1 8.0 73% 比較例2 5.3 76%

從表1可知,按照實施例1-6及比較例1和比較例2中的技術方案進行組織培養,與比較例1和比較例2相比,本發明的實施例1-6中方法的叢生芽增殖系數和成苗率均有較大的提高。而且,實施例6中由于對外植體進行變溫變壓處理,其叢生芽增殖系數和成苗率均高于比較例1,實施例6在配制第二培養基時,由于控制甲硫達嗪的含量為1mg/L,其叢生芽增殖系數和成苗率均高于比較例2。因此,進行變溫變壓處理與第二培養基中合適的甲硫達嗪的含量均能明顯提高叢生芽增殖系數和成苗率。

綜上所述,本發明的組織快繁方法在短時間內可以培養出大量可供大秒栽培的卷葉黃精幼苗,顯著提高了卷葉黃精種苗的繁殖系數和種苗質量,可以實現了規模化生產,以滿足生產上的需要。

前述對本發明的具體示例性實施方案的描述是為了說明和例證的目的。這些描述并非想將本發明限定為所公開的精確形式,并且很顯然,根據上述教導,可以進行很多改變和變化。對示例性實施例進行選擇和描述的目的在于解釋本發明的特定原理及其實際應用,從而使得本領域的技術人員能夠實現并利用本發明的各種不同的示例性實施方案以及各種不同的選擇和改變。本發明的范圍意在由權利要求書及其等同形式所限定。

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本文標題:一種卷葉黃精的組培快繁方法.pdf
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