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一種水稻PTC1基因缺失突變體及其分子鑒定方法和應用.pdf

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一種 水稻 PTC1 基因 缺失 突變體 及其 分子 鑒定 方法 應用
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申請專利號:

CN201711365193.0

申請日:

20171218

公開號:

CN108243963A

公開日:

20180706

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有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H5/00,A01H6/46,C12N15/11,C12Q1/6895 主分類號: A01H5/00,A01H6/46,C12N15/11,C12Q1/6895
申請人: 海南波蓮水稻基因科技有限公司
發明人: 黃培勁,龍湍,李京琳,李新鵬,曾翔,吳永忠
地址: 570125 海南省海口市紫荊路2-1號紫荊信息公寓26A
優先權: CN201711365193A
專利代理機構: 北京路浩知識產權代理有限公司 代理人: 王文君;陳征
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法律狀態
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CN201711365193.0

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法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種水稻PTC1基因缺失突變體及其應用。本發明將秈稻品種93?11經鈷60輻射誘變引起水稻基因組第9染色體上,從第15324556位堿基到第15583926位堿基共259370個堿基缺失,該缺失片段包含整個PTC1基因,該缺失基因突變體命名為ptc1?1664,缺失片段兩端核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示,該缺失位點可以通過核苷酸序列如SEQ?ID?No.2?4所示的分子標記來鑒定,該突變體引起水稻隱性雄性核不育,可用于制備隱性雄性核不育的轉基因水稻,在水稻種質資源的遺傳改良育種中作用重大。本發明還提供了該突變體的分子標記鑒定方法及其在育種制種中的應用。

權利要求書

1.一種水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664,其為水稻基因組版本ASM465v1第9染色體上,從第15324556位堿基開始到第15583926位堿基共259370個堿基缺失,該缺失片段包含整個PTC1基因。2.如權利要求1所述水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664,其缺失片段兩端側翼核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。3.權利要求1或2所述的水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664在制備轉基因植物中的應用。4.權利要求1或2所述的水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664在制備隱性雄性核不育的轉基因水稻中的應用。5.權利要求1或2所述的水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664在水稻改良育種、制種中的應用。6.檢測權利要求1或2所述的水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664的分子標記,其特征在于,該分子標記是由以下引物組合擴增得到,所述引物組合含有3條引物,其核苷酸序列分別為:上游引物1664_F1:CATCTCGCAGTTTACATGCAG,下游引物1664_R1:AGTCTACTCGAGCTACTACCG,下游引物1664_R2:CCATCTGAAACTAGTACTCCCA。7.權利要求6所述的分子標記在制備隱性雄性核不育的轉基因水稻中的應用。8.檢測權利要求1或2所述的水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664的方法,其特征在于,通過下述引物組合擴增待檢植物基因組DNA,并檢測擴增產物:所述引物組合的核苷酸序列為:上游引物1664_F1:CATCTCGCAGTTTACATGCAG,下游引物1664_R1:AGTCTACTCGAGCTACTACCG,下游引物1664_R2:CCATCTGAAACTAGTACTCCCA,如果用上述引物組合擴增出的產物為811bp,則標志著該待檢植物PTC1基因型為野生型;如果擴增產物為546bp,則標志著該待檢植物PTC1基因型為ptc1-1664突變體;如果擴增產物為546bp、811bp兩條帶型,則標志著該待檢植物PTC1基因型為野生型和ptc1-1664突變體的雜合基因型。

說明書

技術領域

本發明屬于植物分子生物學領域,具體涉及一種水稻PTC1基因 缺失突變體ptc1-1664及其分子鑒定方法和應用。

背景技術

植物雄性不育突變是自然界中十分普遍的現象,至少己在43個 科、162個屬的617個物種中發現了雄性不育突變體。在遺傳上植物 雄性不育分為細胞核雄性不育,細胞質雄性不育和細胞核細胞質互作 雄性不育三大類:1)細胞核雄性不育由細胞核基因突變產生,有顯 性突變和隱性突變,有孢子體基因突變和配子體基因突變。顯性突變 和配子體基因突變只能通過雌配子遺傳,隱性突變既可通過雌配子也 可通過雄配子進行遺傳,而且遵循孟德爾定律。目前已克隆了一些孢 子體隱性核不育基因,如擬南芥的ms2,玉米的ms45和水稻的mil1 等;一些配子體隱性核不育基因也被克隆,如擬南芥的兩個小孢子有 絲分裂異常的突變體sidecar pollen和gemini pollen;玉米上還克隆了 一個孢子體顯性核不育基因MS44;2)細胞質雄性不育則是由細胞 質基因控制,并沒有相對應的核恢復基因,屬母性遺傳;3)細胞核 細胞質互作雄性不育由細胞質基因和細胞核基因共同控制,其實質是 細胞質與細胞核遺傳物質不和的結果。不育細胞質是一些由突變線粒 體基因引起,但有相對應的核恢復基因,能抑制不育細胞質基因。不 育細胞質基因可產生一種新的蛋白質,夠影響線粒體正常功能。在育 恢復基因方面,目前水稻中已經克隆了Rf-1,Rf-2,Rf-4,Rf-5等基 因。

水稻是我國的民族產業,雜交水稻對提高我國糧食產量發揮了重 要作用。目前,我國雜交水稻累計種植面積超過45億畝,雜交水稻 種植面積已經占到全國水稻種植面積的55%左右。雜種水稻是選用兩 個遺傳背景不同,同時性狀又能互補的水稻品種,通過雜交產生具有 雜種優勢的第一代雜交種用于生產。雜交水稻具有明顯的雜種優勢現 象,主要表現在生長旺盛,根系發達,穗大粒多,抗逆性強等方面。 雜交水稻比常規稻增產達30%。目前我國種植的雜交水稻可分為三系 法雜交稻和兩系法雜交稻。三系法雜交稻(三系雜交稻)就是生產這 種雜交稻需要三個水稻品系來完成:水稻質核互作雄性不育系、水稻 細胞質雄性不育保持系和水稻細胞質雄性不育恢復系。水稻質核互作 雄性不育系(簡稱不育系,代號A)有野敗型,紅蓮型等多種細胞質 類型。水稻細胞質雄性不育保持系(簡稱保持系,代號B)是用來繁 殖不育系一種水稻。其細胞核基因型與不育系相同,但含有可育細胞 質基因,可產生可育花粉,能夠自交結實。由于保持系的核基因不含 恢復基因,因此它給不育系授粉產生的后代也是不育的。水稻細胞質 雄性不育恢復系(簡稱恢復系,代號R)攜帶恢復基因,能夠修復細 胞質雄性不育性,與不育系雜交產生的雜種(即雜交稻)正常可育。 三系育種法存在感病、品質差、育種效率低等問題。因受恢保關系的 制約,95%的水稻資源不能用于雜交育種。兩系法雜交稻利用光溫敏 核不育突變體,其在長日高溫條件下表現雄性不育,可進行雜交制種, 短日低溫條件下表現雄性可育,可以自交繁殖。與三系法相比,兩系 法具有顯著的優越性:不育系與恢復系配組自由,選配優良組合幾率 大;不育系可一系兩用。但是兩系法不育系易受光溫環境影響,育種 風險巨大。比如在制種期間遇上低溫,不育系將轉為可育,產生自交 種子,影響雜交種子的純度;有的兩系雜交種遇上高溫則不育,影響 結實率,導致減產。因此,尋找新的雄性不育制種方法依然是作物育 種上的重要研究課題。

通過自然突變體鑒定和人工誘變比如物理輻射,化學處理,組織 培養等方法,人們在水稻上獲得了多種新的不育突變體。ptc1突變體 就是其中之一。其突變體的花藥明顯變小、變白,不產生成熟花粉粒。 該突變體由PTC1基因第二外顯子上一個T堿基插入引起。PTC1基 因有3個外顯子和兩個內含子,編碼一個680個氨基酸的PHD鋅指 蛋白,是水稻絨氈層細胞程序性死亡的重要調控因子。PTC1在水稻 花藥發育第8、9階段的絨氈層細胞和小孢子中特異表達,調控著絨 氈層細胞的發育及降解。在PTC1的缺失突變體植株中,絨氈層細胞 無限制擴增及增大,導致絨氈層細胞降解延遲;小孢子從四分體脫落 后,烏氏體形成異常,導致花粉壁發育缺陷,引起完全雄性不育。

發明內容

本發明的目的是提供一種水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664 及其分子鑒定方法和應用。

本發明首先對秈稻品種93-11種子(M0代)進行鈷60輻射誘變 處理,種植處理的種子獲M1代植株;M1代植株自交產生種子(為 M2代),種植M2代植株,對M2代植株進行形態學,組織學和遺傳學 鑒定,篩選不育植株;然后對不育植株進行基因測序和DNA序列分 析,在分子水平上進行驗證。最后獲得純合不育單株,并用于雜交育 種和生物技術研究。

本發明提供的水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664,其為水稻基 因組(基因組版本ASM465v1)第九染色體上,從第15324556位堿基開 始到第15583926位堿基共259370個堿基缺失,該缺失片段包含整個 PTC1基因。

進一步地,水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664,其相對于野生 型缺失片段兩端核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本發明提供了水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664在制備轉基因 植物中的應用。

本發明提供了水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664在制備隱性 雄性核不育的轉基因水稻中的應用。

本發明提供了水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664在水稻改良 育種、制種中的應用。

本發明還提供了檢測水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664的分 子標記,該分子標記是由以下引物組合的引物擴增獲到,所述引物組 合含有3條引物,其核苷酸序列分別為:

上游引物1664_F1:CATCTCGCAGTTTACATGCAG(如SEQ ID NO.2所示)

下游引物1664_R1:AGTCTACTCGAGCTACTACCG(如SEQ ID NO.3所示)。

下游引物1664_R2:CCATCTGAAACTAGTACTCCCA(如SEQ ID NO.4所示)。

本發明提供了上述分子標記在制備隱性雄性核不育的轉基因水 稻中的應用。

本發明提供了上述分子標記在水稻種質資源改良中的應用。

一種檢測水稻PTC1基因缺失突變體ptc1-1664的方法,通過下 述引物組合擴增待檢植物基因組DNA,并用瓊脂糖電泳檢測:

所述引物對的核苷酸序列為:

上游引物1664_F1:CATCTCGCAGTTTACATGCAG(如SEQ ID NO.2所示)

下游引物1664_R1:AGTCTACTCGAGCTACTACCG(如SEQ ID NO.3所示)。

下游引物1664_R2:CCATCTGAAACTAGTACTCCCA(如SEQ ID NO.4所示)。

如果用上述引物組合擴增出的產物為811bp,則標志著該待檢植 物PTC1基因型為野生型;如果擴增產物為546bp,則標志著該待檢 植物PTC1基因型為ptc1-1664突變體;如果擴增產物為546bp、811bp 兩條帶型,則標志著該待檢植物PTC1基因型為野生型和ptc1-1664 突變體的雜合基因型。

本發明的有益效果在于:

(1)本發明提供了一種新的水稻隱性核雄性不育突變體,為發 展新的雄性不育制種方法奠定了材料基礎。

(2)本發明的水稻ptc1-1664突變體只影響雄性育性,造成雄 性完全不育,但對雌性育性和其它農藝性狀沒有影響。

(3)因輻射誘變造成與野生型相比有259370bp的染色體片段 缺失,采用實驗室常用的瓊脂糖電泳就能開展分子檢測,即能夠實現 鑒別,不需要特別的檢測技術和方法。

(4)本發明的水稻PTC1基因突變體ptc1-1664可直接用于雜交 組合選育和不育系改良,經濟價值巨大。

附圖說明

圖1是實施例2中ptc1-1664突變體和野生型的株型與穗型照片。

圖2是實施例3中ptc1-1664突變體的花藥體式顯微鏡照片與顯 微鏡照片。

圖3是實施例6中ptc1-1664突變體染色體缺失位點示意圖。

圖4是實施例7中ptc1-1664×93-11組合F2群體中可育株和不育 株染色體片段缺失位點的PCR產物的電泳照片。

圖5是實施例8的雜交轉育的技術路線圖。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明,但不用來限制本發明的范圍。在不 背離本發明精神和實質的情況下,對本發明方法、步驟或條件所作的 修改或替換,均屬于本發明的范圍。

若未特別指明,實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟 知的常規手段。

實施例1鈷60輻射誘變突變體庫

選用秈稻骨干親本品種93-11作為輻射處理的材料,該品種已完 成了全基因組測序,對水稻分子育種十分有利。

2013年夏,于長沙鈷60(60Co)輻射93-11種子(M0代)10公 斤,7月種植于海南臨高田間,分單株收獲M1代種子,共收獲約6500 份種子。選取M1代種子3200個株系,每個株系種植50棵單株。2014 年春季,種植于海南臨高田間。移栽后,在分蘗期、孕穗期、抽穗期、 開花期、灌漿期等經過仔細觀察田間性狀,篩查株型、穗型、育性、 產量等各種類型突變體,對各類型突變體單株收種保存作為特殊突變 體。每個株系收6個單株,共19200個單株作為突變體庫資源保存。

實施例2 M2代種植與性狀觀察

M1代植株自交產生種子,種植M2代,在M2代抽穗、開花期間, 在田間對花藥的形態進行觀察,選取顏色淺白、形態小、花粉量小等 表現異常的花藥在顯微鏡下進行進一步鏡檢。在編號為1664的家系 中發現4株育性異常的植株,該突變體在營養生長、抽穗期、穗型均 與野生型沒有明顯區別,圖1為該突變體植株與野生型植株的株型 (圖1的A)和穗型(圖1的B)對比照片,但花藥比野生型小,顏 色淺黃,結實率很低,被選作候選突變體材料進行下一步研究。

實施例3花粉鏡檢,自交,異交

通過數碘染著色與不著色花粉比例,統計花粉育性。在體式顯微 鏡下觀察1664突變體小花形態,發現雌蕊與野生型無明顯區別,花 藥比野生型小,顏色較淺(圖2的A、B圖)。田間采集開花期小花, 用鑷子取出花藥,在碘-碘化鉀溶液(0.6%KI,0.3%I2,w/w)中輕 輕擠壓花藥,滴在載玻片上,蓋上蓋玻片,在顯微鏡下觀察花粉碘染 情況并拍照(圖2的C、D圖)。野生型花粉多而染成藍黑色,而突 變體則看不到花粉粒。

同一家系野生型植株套袋自交后正常結實,而1664突變體不結 實。用93-11和中花11為突變體授粉,均可正常結實,得到F1代種 子。表明該突變體為雄性不育突變體,雌性不受影響。

對F1代自交得到F2代種子,種植F2代植株510株,將花藥碘染 后在顯微鏡下觀察,其中382株花粉正常碘染,且正常自交結實,196 株無花粉,且自然結實率低,符合3:1分離,表明該不育性狀由單個 隱性基因控制。

實施例4葉片采樣與DNA提取

采用CTAB法提取水稻葉片DNA,具體方法如下:稱取約0.1g 葉片,放入離心管,加入600μL CTAB提取緩沖液,5μL RNase A, 震蕩分散,65℃水浴0.5hr,其間輕搖2-3次;加入等體積氯仿/Tris- 飽和酚(1:1,v/v),混勻,輕搖10min;4℃10000rpm離心20min; 轉移上清至新管,加入1/10體積的3M乙酸鈉(pH值5.2)、0.6-1 倍體積的冷異丙醇;輕搖混勻,至絮狀沉淀出現;4℃10000rpm離 心10min;棄去上清,用體積百分含量70%乙醇洗沉淀2次;風 干,加入50μL 1×TE溶解沉淀,-20℃保存。用Nanodrop2000檢測 DNA濃度,稀釋至10ng/L用作PCR模板。

實施例5 PCR反應與產物回收

參考93-11基因組的列,在缺失片段最鄰近的已知片段序列設計 一組熱不對稱PCR引物,擴增1664突變體DNA。

用于擴增缺失片段側翼序列的引物對序列見下表1:

表1用于擴增缺失片段側翼序列的引物對序列

引物對名稱 引物序列 1664sp1_F GCACACTGCACGGCGACGTTTAGG 1664sp2_F ACGATGGACTCCAGTCTGGCTGCCGTGGGAATTAGAGCAT 1664sp3_F CCCTCCAGGAGATTGTCTAAAATTGACTTT 1664AC1_R ACGATGGACTCCAGAG 1664LAD1_R ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCVNNNGGAA 1664LAD2_R ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCVVNVNNNCCAA

PCR反應體系為:1μL 10×反應緩沖液,0.25μL dNTP,0.25μL 正向引物和0.25μL反向引物,0.5U Taq酶,1μL 10ng/μL模板DNA, 加超純水將總體積補至10μL。PCR反應分三步進行:第一步使用引 物對1664sp1_F、1664LAD1_R和1664LAD2_R,模板DNA為ptc1-1664基因組DNA,反應程序為:93℃預熱2min,95℃變性1min, 然后執行以下循環:94℃變性30s,60℃復性1min,72℃延伸3min, 10個循環;接著94℃變性30s,20℃復性2min,72℃延伸3min,再 執行以下循環:94℃變性20s,58℃復性1min,72℃延伸3min,25 個循環;循環結束后72℃補充延伸5min,結束反應。

第二步使用引物對1664sp2_F和1664AC1_R,模板DNA為反應 1產物40倍稀釋液,反應程序為:執行以下循環94℃變性20s,65℃ 復性1min,72℃延伸3min,1個循環,然后再執行以下循環:94℃ 變性20s,68℃復性1min,72℃延伸3min,94℃變性20s,68℃復性 1min,72℃延伸3min,94℃變性20s,50℃復性1min,72℃延伸3min, 13個循環;循環結束后72℃補充延伸5min,結束反應。

第三步使用引物對1664sp3_F和1664AC1_R,模板DNA為反應 1產物10倍稀釋液,反應程序為:94℃變性20s,68℃復性1min, 72℃延伸3min,94℃變性20s,68℃復性1min,72℃延伸3min,94℃ 變性20s,50℃復性1min,72℃延伸3min,6-7個循環;循環結束后 72℃補充延伸5min,結束反應。配置1.5%瓊脂糖凝膠,在5V/cm 電場下電泳30min;采用市面DNA凝膠回收試劑盒回收反應2的PCR 產物。

實施例6 DNA序列分析

將回收所得的反應2的PCR產物DNA采用ABI3730測序儀進 行測序,測序引物分別使用正向引物與反向引物。使用DNA序列分 析軟件DNAman6.0對雙向測序結果進行拼接,拼接后序列如SEQ ID NO.1所示。將SEQ ID NO.1序列與水稻基因組序列(基因組版本 ASM465v1)進行比對,結果顯示:SEQ ID NO.1第1到1149位堿基 與第九染色體第15323406到第15324555位堿基完全匹配,而第1150 到第2225位堿基與第九染色體第15583927到15585003位堿基完全 匹配,表明1664突變體在第9染色體上第15324556位堿基到第15583926位堿基,共259370個堿基發生了缺失。該缺失區間包含了 水稻PTC1整個基因,故將該突變體基因命名為PTC1-1664(參見圖 3,虛線部分表示缺失的片段,箭頭處表示缺失片段中包含著整個 PTC1基因)。

實施例7突變位點分子標記設計與共分離驗證

根據實施例6中得到的突變位點兩側的序列設計3條基因特異引 物:正向引物1664_F1,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;反向引 物1664_R1,其核苷酸序列如SEQ IDNO.3和1664_R2,其核苷酸序 列如SEQ ID NO.4所示。其中1664_R2位于缺失片段上。

如果用上述引物組合擴增出的產物為811bp,則標志著該待檢植 物PTC1基因型為野生型;如果擴增產物為546bp,則標志著該待檢 植物PTC1基因型為ptc1-1664突變體;如果擴增產物為546bp、811bp 兩條帶型,則標志著該待檢植物PTC1基因型為野生型和ptc1-1664 突變體的雜合基因型。

在實施例3中獲得的有表型分離的M3群體中,隨機選取野生型 和突變體表型的植株,提取葉片DNA,與93-11基因組DNA一起, 分別用上述引物對進行擴增。PCR反應體系為:10×反應緩沖液1μ L,dNTP 0.25μL,引物1664_F1、1664_R1和1664_R2各0.25μL, Taq酶0.5U,10ng/μL模板DNA 1μL,加超純水將總體積補至10 μL。PCR反應程序為:95℃變性3min,然后執行以下循環:95℃變 性20s,53-58℃復性20s,72℃延伸30s,35個循環。擴增產物在 1.5%瓊脂糖凝膠中,5V/cm電場下電泳30min,在凝膠成像系統中記 錄電泳圖像。結果見圖4,表型為野生型植株擴增產物的電泳帶型全 部為野生型93-11或雜合型帶型,突變體擴增產物的電泳帶型全部與 1664(ptc1)帶型相同。這一結果表明實施例6中所述突變位點與隱 性核雄性不育基因是共分離的。這一結果結合該突變體的突變表型、 突變位點,以及已發表文獻中的表型描述,可推斷1664突變體的雄 性不育表型是由實施例6中所述的突變造成的。

實施例8突變基因的雜交轉育

可按圖5的步驟將ptc1-1664的不育基因PTC1通過雜交轉育到 其它水稻遺傳背景中:

①雜交:

以ptc1-1664為母本,與受體水稻材料為父本雜交獲得F1種子;

②第一輪回交:

F1播種后獲得F1植株,將F1植株與輪回親本進行雜交,獲得BC1種子;

②BC1不育基因選擇(前景選擇):

播種BC1種子,獲得不少于500株幼苗,在幼苗期采集各單株葉 片,以實施例4中所述方法提取DNA,以SEQ ID NO.2-4所示的引 物(1664_F1和1664_R1、1664_R2)進行擴增和電泳,選取基因型 為雜合的單株繼續種植,棄去純合野生型的單株;

③BC1背景選擇:

采用一組(例如100個,或200個等)在ptc1-1664和輪回親本 之間存在多態的,且在基因組上均勻分布的分子標記(可以是但不限 于SSR、SNP、EST、RFLP、AFLP、RAPD、SCAR等類型標記), 對步驟③中選出的單株進行鑒定,選取與輪回親本相似度高(例如大 于88%相似度,或2%中選率等)的材料;

⑤第二輪回交:用步驟④中選出的單株為父本,為輪回親本授粉, 獲得BC2種子;

⑥BC2的前景與背景選擇:對選出的材料重復步驟③至步驟④的 操作,選出與輪回親本相似度高于選擇標準(如相似度大于98%,或 2%中選率等)的BC2代植株;

⑦自交獲得BC2F2種子:對步驟⑥中選出的BC2植株進行自交, 獲得BC2F2種子;

⑧BC2F2的前景選擇:將步驟⑦中獲得的BC2F2種子播種,獲得500株以上幼苗,在幼苗期采集葉片,以實施例4中所述方法提取 DNA,以實施例7中所列的引物組合(1664_F1和1664_R1、1664_R2) 進行擴增和電泳,選出帶型為純合突變體和雜合型的單株繼續栽培, 丟棄純合野生型的單株;

⑨BC2F2的背景選擇及應用:將步驟⑧中選出的單株按照步驟④ 的方法進行背景篩選,選出100%背景純合的單株。如果中選單株的 1664_F1和1664_R1、1664_R2引物組合帶型為純合突變體,則該單 株為我們的最終目標材料,可進一步與輪回親本雜交保存材料,或與 其它水稻材料進行雜交。如果中選單株是雜合帶型,可直接用于保存 種質,或通過自交獲得不育株用于雜交育種或制種。

以上所述僅是本發明的優選實施方式,應當指出,對于本技術領 域的普通技術人員來說,在不脫離本發明技術原理的前提下,還可以 做出若干改進和潤飾,這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。

序列表

<110> 海南波蓮水稻基因科技有限公司

<120> 一種水稻PTC1基因缺失突變體及其分子鑒定方法和應用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2225

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

tgatgcatga actatgaaaa caaactactt ggtggcttct tgatttttgt atcatgagtt 60

ccgctggact ctgccgagcg ttcctctaat ctctatctag aaatggcttc aaatcaattg 120

gatattgaaa aaatggcttt cagatgttgg taaagttaac aaagaaaacg atctttaatg 180

atgttcatat aggttgatgt gtaattttca attcagtttc catggaacag ctttgagaaa 240

tgagagtcac gagacccata tcatcttaat attctgattt gcttctggca aaagattcat 300

tacgtggtca actaattatc acaatatgtt ctacatccat ttgtgtgtag aactctttaa 360

atacatgtgc tagcaatgag tatcattttt tttatagata aaatatttat ataaaacccg 420

acctctacag caagatggat gtacacggcc aatagttata ggccttgttt agatctcaaa 480

aaattttagt caaaaacatc atatcaaatg tttagacaca tatatggggc attaaatatg 540

ggaaaaaacc aattacacag tttacatgta aattgcgaaa cgaatctttt gagtttaatt 600

acgccatggt ttgacaatgt gatgctatag taaaaatttg ctaataacgg attgattagg 660

tttaataaat tcatctcgca gtttacatgc agaatctgta atttattttg ttattagttt 720

acgtttaata cttcaaatgt gtgttcgtat acttcaaaaa ctttacaccc aaaaatgtgt 780

gtccgtatgc ttcaaaaact ttacacccaa agaattaaac acatccatag gatatgaaag 840

tgttcagctt tcttgttcgg ttttcccgaa taaaccgaga attggatacg catggtacgg 900

aggtggcaca ggccgcgtcc gcacactgca cggcgacgtt taggctggct gccgtgggaa 960

ttagagcatc ccaatatttc attcccaaaa ttatttttat gggaatgcta aacaaaattt 1020

gatgtgctaa aatattgatc cctccaggag attgtctaaa attgactttc taaaattaaa 1080

aatgggccct ctacgaaacc accaactgaa ttttatttcc gtctctccct ctgagaaatc 1140

acggtcacgg tctccctccg ttctccctcc tcgctccgtc tcctccccct agctttcggt 1200

agtagctcga gtagactccc cgtagctagc cggcgccgcc ccaaccgttg tcttcgctcg 1260

ccgtgtgctc gccgccatcg ccgcccgagc tccgtagcgc cgctcgtcgc cggcctcgct 1320

cggcaaagtt ccacccaatc cgacgctagc gtcgagttcc cgaagccgcg taagtgctct 1380

caccgccggg aatcgacccc tcgtggcctc gtcgccgttt ccctcttctc ccgccgccgg 1440

ttgccgccgc cgcaatccgc cgccatcgag caacctccgg cgaatccgag ccgttggctc 1500

gtctcccctt gtcctgtaca accgccccgt gcgctcgctc ttgcccgtac cgccgtggtt 1560

cgctccgccg ctcgccgccg ccgcccgccg tccattcgcg gctgggtcgt cgtctacctc 1620

ccgccggcct gcgtggctgc cacgtaggcg ccacgtcggc gccagctcag ccgagaccgg 1680

ataagccgac ccggccagcc gcttcctccg atcctccccg tgtgcgtggt ccgcggtgag 1740

ccgtgaggct gcgcgtgggc cgccgtatcc gttcctccgt gaaccgcgcg cgtgcaccgc 1800

gtcccagccc cgcccgcgcg cgtgcgccgc atactccttc cgcacggtga gccgagccgc 1860

tgacaagcgg gtcccacccg ggaccgcgcg tggtgagccc ggtccaccgg actctctctc 1920

ctccctcccg cgcgcgcgca agcttgggcc gtaatgggcc ggccggccca tttagttcgg 1980

ccggtccgtt ccaattccct tgggccgcgc cttagccgcc caaggaaaag tccacaatcc 2040

ctccctcttt tcttttcctt tttctttttc aaaaaaaaag gatttaatta aatccttttc 2100

ctttagacca aaaatccaat aatcttagaa attcaatatc ttcccaaccg taaatccgtt 2160

tgactccgtt caacttccaa aattcctcaa atctcgagat ctatctaatg gcacgcttag 2220

aggtc 2225

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<212> DNA

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acgatggact ccagagcggc cgcvvnvnnn ccaa 34

關于本文
本文標題:一種水稻PTC1基因缺失突變體及其分子鑒定方法和應用.pdf
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