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一種液體發酵及配方劑型制備多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的方法.pdf

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一種 液體 發酵 配方 劑型 制備 多粘類 芽孢 桿菌 生物農藥 可濕性粉劑 方法
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摘要
申請專利號:

CN201711160746.9

申請日:

20171120

公開號:

CN108244140A

公開日:

20180706

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01N63/02,A01N25/14,A01P3/00 主分類號: A01N63/02,A01N25/14,A01P3/00
申請人: 上海萬力華生物科技有限公司
發明人: 陳晨,曠文豐,許瀅,陳娟,吳紫燕,毛偉力
地址: 201203 上海市浦東新區張江高科技園區郭守敬路351號1號樓620室
優先權: CN201711160746A
專利代理機構: 上海申新律師事務所 代理人: 竺路玲
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法律狀態
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CN201711160746.9

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法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種液體發酵及配方劑型制備多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的方法,其所采用的多粘類芽孢桿菌發酵液,解決了傳統液體發酵芽孢轉化率低的問題,芽孢轉化率超過98%;且本發明生產的多粘類芽孢桿菌發酵液為活性多粘芽孢菌體,抵御外界不良環境能力強,壽命長,因此可長時間儲存,貨架期長,發酵工藝適合于產業化生產;以及該多粘類芽孢桿菌母藥與多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的生產配制方法,工藝簡單,芽孢回收率達到98%以上,采用多種芽孢保護工藝,使產品貨架期超過18個月,具有商業運用價值。

權利要求書

1.一種多粘類芽孢桿菌發酵液的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:步驟11,將菌種接于培養基中,恒溫培養;步驟12,將培養后的菌種轉移至培養液進行搖瓶培養,得到種子液;步驟13,向發酵罐中投入培養液,高溫高壓滅菌,然后將步驟12中得到的種子液倒入到發酵罐中,加壓通入無菌空氣進行發酵,得多粘類芽孢桿菌發酵液。2.根據權利要求1所述的多粘類芽孢桿菌發酵液的制備方法,其特征在于,按重量百分比計,所述步驟12和步驟13中培養液由以下組分配制而成:3.一種多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:步驟21,采用如權利要求1或2制得的多粘類芽孢桿菌發酵液和絮凝劑、干燥保護劑、分散載體混合,得到含固量5-20%的固液混合物;步驟22,將固液混合物在0.05-0.3Mpa壓力下經過濾得到含有多粘芽孢桿菌的濾餅;步驟23,將濾餅在80-150℃進風溫度、引風機風量1000-30000立方每小時、每小時3Kg-300Kg的進料速度下,經過閃蒸干燥,制得多粘類芽孢桿菌母藥。4.根據權利要求3所述的多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥的制備方法,其特征在于,所述步驟21中,固液混合物各組分質量百分比為:多粘類芽孢桿菌發酵液82-95.5%,絮凝劑1-5%;干燥保護劑0.5-3%;分散載體3-10%。5.根據權利要求3所述的多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥的制備方法,其特征在于,所述步驟21中,絮凝劑選自氯化鐵、海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚丙烯酰胺、殼聚糖、豆漿中的一種或多種;所述干燥保護劑選自蔗糖,麥芽糊精、海藻糖、甘油、脫脂奶粉中的一種或幾種;所述分散載體選自白炭黑、硅藻土、輕質碳酸鈣、蛭石粉、玉米淀粉、珍珠巖粉中的一種或幾種。6.根據權利要求3所述的多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥的制備方法,其特征在于,所述步驟23制得的多粘類芽孢桿菌母藥中芽孢含量為50億-200億cfu/g,水活度為0.7-0.8。7.一種多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:采用如權利要求3-6制得的多粘類芽孢桿菌母藥和助懸劑、紫外保護劑、潤濕劑、分散劑、保濕劑、載體按照以下質量百分比混合而得:8.根據權利要求7所述的多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的制備方法,其特征在于,所述助懸劑選自硅酸鎂鋁、黃原膠、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、卡波姆中的一種或多種;所述紫外保護劑選自葉酸、脫脂奶粉、抗壞血酸中的一種或兩種;所述潤濕劑選自丁基萘磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、木質素磺酸鹽、異丙基萘磺酸鈉、烷基芳基磺酸鈉等中的一種或多種;所述分散劑選自磷酸酯、磺酸鹽類、烷基萘磺酸鹽縮聚物、羧酸鹽高分子、聚羧酸鹽高分子改性樹脂、烷基硫酸鹽、改性烷基磺酸鹽、烷基萘磺酸縮聚物鈉鹽、萘磺酸鹽(縮聚物)類、聚羧酸鹽高分子分散劑、多苯乙烯苯醚磷酸酯分散劑、萘磺酸鹽甲醛縮合物、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物磺酸鹽、木質素磺酸鹽(例如木質素磺酸鈉SDS等)、馬來酸-丙烯酸共聚物鈉鹽、烷基磺基琥珀酸鹽等中的一種或多種;所述保濕劑選自甘油、α-吡咯烷酮羧酸鈉、三甲基甘氨酸、甲殼素、泛酰醇等中的一種或多種;所述載體選自膨潤土、高嶺土、滑石粉、碳酸鈣、陶土、硅藻土、白炭黑、葉蠟石、凹凸棒土、碳酸氫鉀、麥芽糊精等中的一種或多種。9.一種如權利要求7-8任一項所述方法制備的多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑。10.一種如權利要求9所述的多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑在植物病害防治中的應用。

說明書

技術領域

本發明涉及一種制備生物農藥的方法,尤其涉及一種液體發酵及配方劑型制 備多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的方法。

背景技術

植物病害是制約植物安全生長的主要障礙之一,目前防治方法主要是噴施化 學藥劑。蔬菜作物生長期短,頻繁使用化學藥劑存在農藥殘留的風險,研制和使 用生物農藥能減少化學藥劑的使用量。對植物病原菌具有拮抗作用的微生物是研 制生物農藥的主要來源,這類微生物種類繁多、分布廣泛,即使同一種微生物由 于分布于不同地區,其拮抗作用強弱或機制也有一定差異。挖掘生防微生物資源, 首先是用目標病菌廣泛篩選拮抗菌,這是生物防治研究領域的基礎工作。

多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)是芽孢桿菌科(Bacillaceae)類芽孢桿 菌屬(Paenibacillus)的革蘭氏陽性細菌,在劃入類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)之前又 稱Bacilluspolymyxa。多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)的細胞呈桿狀, (0.5-2.5)μmX(1.2~10.0)μm,G+C含量為40%~50%;利用周生鞭毛運動,在膨 大孢子囊中產生橢圓型芽孢;最適生長pH為7,最適溫度為28~30℃;兼性厭 氧,分解葡萄糖和其他糖類產酸,有時產氣,在營養瓊脂上無可溶性色素,應用 前景廣闊。

傳統農業中化學農藥的過量使用不僅會增加農藥殘留量,同時導致了許多作 物病蟲害的抗藥性,并對土壤、水體及生態環境造成污染。隨著社會的進步,人 們生活水平的提高,對食品安全的意識不斷加強,在這種情況下應用高效、廣譜、 安全、無毒的有益微生物進行植物疫病的防治越來越受到人們的重視。多粘類芽 孢桿菌產生的多肽類抗菌物質對植物病原真菌具有很好的拮抗活性,且性質比較 穩定,可用于多種植物病害的生物防治。因此,多粘類芽孢桿菌是一類極具開發 前景和應用價值的生防細菌。

目前國內對多粘類芽孢桿菌的研究主要集中在菌種的篩選、分離鑒定、抑菌 效果以及對發酵液化學成分的分析,而對于多粘類芽孢桿菌的發酵培養方面還罕 見報道。

發明內容

本發明為解決現有技術中的上述問題,提出一種液體發酵及配方劑型制備多 粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的方法。

本發明提供了一種液體發酵制備多粘芽孢桿菌生物農藥的方法,相對于現有 的液體發酵技術生產的多粘類芽孢桿菌制劑,本發明生產的多粘芽孢的活性孢子 粉,產品貨架期長而且工藝簡單、設備投資小。

同時本發明提供了一種新的液體發酵培養液,解決了傳統液體發酵芽孢轉化 率低的問題。該培養基包括了碳源、氮源、無機鹽,其中所述碳源選自可溶性淀 粉、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、玉米淀粉中的一種或多種;所述氮源選自豆餅粉、 大豆粉、棉籽餅粉、酵母膏中的一種或多種;所述無機鹽包含磷酸氫二鉀、硫酸 鎂、碳酸鈣、氯化鈉中的一種或多種。

此外,本發明還提供了一種采用上述方法制備的多粘芽孢桿菌生物農藥可濕 性粉劑。

為實現上述目的,本發明采用以下技術方案:

本發明的第一個方面是提供一種多粘類芽孢桿菌發酵液的制備方法,具體包 括如下步驟:

步驟11,將菌種接于培養基中,恒溫培養;

步驟12,將培養后的菌種轉移至培養液進行搖瓶培養,得到一級種子液;

步驟13,向發酵罐中投入培養液,高溫高壓滅菌,然后將步驟2中得到的 種子液倒入到發酵罐中,加壓通入無菌空氣進行發酵,得多粘類芽孢桿菌發酵液。

進一步地,在所述的多粘類芽孢桿菌發酵液的制備方法中,按重量百分比計, 所述步驟12和步驟13中培養液由以下組分配制而成:

進一步優選地,在所述的多粘類芽孢桿菌發酵液的制備方法中,按重量百分 比計,所述步驟12和步驟13中培養液由以下組分配制而成:

進一步地,所述菌種為是多粘類芽孢桿菌P1,分類命名為:多粘類芽孢桿 菌Paenibacilluspolymyxa,其已于2017年1月9日保藏于中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC),保藏號為CGMCCNo.13554。

進一步地,步驟11中采用的“培養基”和步驟12、13中采用的““培養液”, 在沒有特別說明的情況下,本領域技術人員可根據不同菌種采用現有技術進行選 擇和配制。

進一步優選地,所述的多粘類芽孢桿菌發酵液的制備方法,具體包括如下步 驟:

步驟11,將菌種接于培養基中,恒溫培養;

步驟12,將培養后的菌種轉移至培養液進行搖瓶培養,得到一級種子液;

步驟13,配制所述培養液并投入中級發酵罐中,高溫高壓滅菌;發酵罐保 持正壓,冷卻至35~37℃,倒入步驟2得到的一級種子液,35~37℃、0.4~0.5kg 壓力、1500~1800L/h空氣流量和150~180rpm轉速下進行發酵,得多粘類芽孢桿 菌發酵液。

進一步優選地,所述中級發酵罐指的是大于1L而小于1噸規格的發酵罐, 所述規格為本技術領域公知常識。

進一步較為優選地,步驟13中,中級發酵罐發酵方法為:55L培養液投入 75L規格的發酵罐中,高溫高壓滅菌;發酵罐保持正壓,冷卻至37℃,倒入步驟2得到的一級種子液,35~37℃、0.4~0.5kg壓力、1500~1800L/h空氣流量和 150~180rpm轉速下進行發酵,獲得多粘芽孢菌體。

進一步優選地,所述高溫高壓滅菌優選為121℃溫度、15磅壓力下滅菌25 分鐘。

進一步優選地,在所述高溫高壓滅菌前,向所述發酵罐內投入消泡劑;如, 在所述75L規格發酵罐中消泡劑加入體積優選為50ml。

本發明的第二個方法還提供了一種多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥的制備方 法,具體包括如下步驟:

步驟21,采用如上述方法制得的多粘類芽孢桿菌發酵液和絮凝劑、干燥保 護劑、分散載體混合,得到含固量5-20%的固液混合物;

步驟22,將固液混合物在0.05-0.3Mpa壓力下經過板框壓濾得到含有多粘芽 孢桿菌的濾餅;

步驟23,將濾餅在80-150℃進風溫度、引風機風量1000-30000立方每小時、 每小時3Kg-300Kg的進料速度下,經過閃蒸干燥,制得多粘類芽孢桿菌母藥。

進一步地,述步驟21中,固液混合物各組分質量百分比為:多粘類芽孢桿 菌發酵液82-95.5%,絮凝劑1-5%;干燥保護劑0.5-3%;分散載體3-10%。

進一步地,所述步驟21中,所述絮凝劑選自氯化鐵、海藻酸鈉、羧甲基纖 維素、聚丙烯酰胺、殼聚糖、豆漿中的一種或多種,優為兩種混合使用。

進一步地,所述步驟21中,所述干燥保護劑選自蔗糖,麥芽糊精、海藻糖、 甘油、脫脂奶粉中的一種或幾種混合。

進一步地,所述步驟21中,所述分散載體選自白炭黑、硅藻土、輕質碳酸 鈣、蛭石粉、玉米淀粉、珍珠巖粉中的一種或幾種。

進一步優選地,所述硅藻土顆粒大小優選為700目,所述硅藻土與所述多粘 類芽孢桿菌發酵液體積比優選為1:1。

進一步優選地,所述步驟22中過濾采用板框壓濾機過濾分離。

進一步優選地,所述步驟23中閃蒸干燥的進口溫度為65-100℃,出口溫度 為40-60℃。

進一步地,所述步驟23制得的多粘類芽孢桿菌母藥中芽孢含量為50億-200 億cfu/g,水活度為0.7-0.8。

本發明的第三個方面是提供一種多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑的制 備方法,具體包括如下步驟:采用上述方法制得的多粘類芽孢桿菌母藥和助懸劑、 紫外保護劑、潤濕劑、分散劑、保濕劑、載體按照以下質量百分比混合而得:

進一步地,所述助懸劑選自硅酸鎂鋁、黃原膠、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維 素、卡波姆中的一種或多種;所述紫外保護劑為葉酸、脫脂奶粉、抗壞血酸中的 一種或兩種。

進一步地,所述潤濕劑選自丁基萘磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺 酸鈉、木質素磺酸鹽、異丙基萘磺酸鈉、烷基芳基磺酸鈉等中的一種或多種。

進一步地,所述分散劑選自磷酸酯、磺酸鹽類、烷基萘磺酸鹽縮聚物、羧酸 鹽高分子、聚羧酸鹽高分子改性樹脂、烷基硫酸鹽、改性烷基磺酸鹽、烷基萘磺 酸縮聚物鈉鹽、萘磺酸鹽(縮聚物)類、聚羧酸鹽高分子分散劑、多苯乙烯苯醚 磷酸酯分散劑、萘磺酸鹽甲醛縮合物、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物磺酸鹽、木 質素磺酸鹽(例如木質素磺酸鈉SDS等)、馬來酸-丙烯酸共聚物鈉鹽、烷基磺 基琥珀酸鹽等中的一種或是多種。

進一步地,所述保濕劑選自甘油、α-吡咯烷酮羧酸鈉、三甲基甘氨酸、甲殼 素、泛酰醇等中的一種或多種。

進一步地,所述載體選自膨潤土、高嶺土、滑石粉、碳酸鈣、陶土、硅藻土、 白炭黑、葉蠟石、凹凸棒土、碳酸氫鉀、麥芽糊精等中的一種或多種。

本發明的第四個方面是提供一種采用上述方法制備的多粘類芽孢桿菌生物 農藥可濕性粉劑。

本發明的第五個方面是提供一種如所述的多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性 粉劑在植物病害防治中的應用。

本發明采用上述技術方案,與現有技術相比,具有如下技術效果:

本發明提供了一種液體發酵及配方劑型制備多粘類芽孢桿菌生物農藥的方 法,其所采用的多粘類芽孢桿菌發酵液,解決了傳統液體發酵芽孢轉化率低的問 題,使用該方法每毫升發酵液芽孢產量在極短的時間內達到40億芽孢個以上, 且芽孢轉化率超過98%;相對于液體發酵的現有技術生產的多粘芽孢菌體,本發 明生產的多粘類芽孢桿菌發酵液為活性多粘芽孢菌體,抵御外界不良環境能力 強,壽命長,因此可長時間儲存,貨架期長,發酵工藝適合于產業化生產;

此外,還提供了多粘類芽孢桿菌母藥與多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑 的生產配制方法,其方法工藝簡單,芽孢回收率達到98%以上,采用多種芽孢保 護工藝,使產品貨架期超過18個月,具有商業運用價值。

附圖說明

圖1為實施例1培養液優化前(基礎培養基)的產孢情況;

圖2為實施例1培養液優化后的產孢情況。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發明進行詳細和具體的介紹,以使更好的理解本發 明,但是下述實施例并不限制本發明范圍。

實施例1培養液的優化

本實施例在基礎培養基(蛋白胨:38.4g/L,淀粉:39g/L,七水硫酸鎂:1.05g/L, 磷酸氫二鉀:1.7g/L,葡萄糖:10g/L)的基礎上考察了幾種常用碳、氮源和無機 鹽對多粘類芽孢桿菌產芽孢的影響。在培養液中使用不同碳源對多粘類芽孢桿菌 的活菌數和芽孢量的影響見表1;在培養基中使用不同氮源對多粘類芽孢桿菌的 活菌數和芽孢量的影響見表2。

表1不同碳源對多粘類芽孢桿菌活菌數及芽孢量的影響

表2不同氮源對多粘類芽孢桿菌活菌數及芽孢量的影響

由上述表1、表2可見,可溶性淀粉和蔗糖是較為合適的碳源,豆餅粉和棉 籽餅粉是較為合適的氮源。在上述單因子試驗之后,對碳源、氮源及無機鹽的濃 度作了進一步的篩選,得出較為合適的比例,即可溶性淀粉1%~3%;酵母提取 物0.1%~0.5%;棉籽餅粉1~3%;磷酸氫二鉀0.1~0.3%;硫酸鎂0.02%-0.08%。 用經過優化的培養液進行發酵,培養48小時,芽孢率能達到98%以上。

圖1為培養液優化前(基礎培養基)的產孢情況;

圖2為培養液優化后的產孢情況;

注:圖1和圖2中,灰色桿狀的為菌體,黑色的為芽孢。

實施例2多粘類芽孢桿菌發酵液的制備

在實施例1培養液的基礎上進行以下操作:

多粘類芽孢桿菌無菌條件下接種于土豆汁培養基的平皿內,然后將平皿放入 恒溫培養箱中,在35~37℃培養3-5天。本實施例所采用的多粘類芽孢桿菌是多 粘類芽孢桿菌P1,其已于2017年1月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員 會普通微生物中心(簡稱CGMCC),保藏號為CGMCCNo.13554。土豆汁的培養基 組分如下:

將培養后的多粘類芽孢桿菌在無菌操作下轉移到有300ml培養液的1L搖瓶 中,將搖瓶放在搖床上,35~37℃、200rpm轉速條件下培養2天,培養結束后得 到一級種子液。所述培養液主要組分如下(根據實施例1的結果):

配制相同的培養液,將培養液投入到發酵罐中,并加入消泡劑,然后進行高 溫(121℃)高壓(15磅)滅菌,滅菌時間25分鐘。發酵罐保持正壓,待冷卻 到28℃時降低空氣流量,在火焰口倒入得到的一級種子液,35~37℃、0.4~0.5kg 壓力、1500~1800L/h空氣流量和150~180rpm轉速下進行發酵,獲得多粘類芽孢 桿菌發酵液。

實施例3多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥與多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉 劑的制備

將實施例2制得的多粘類芽孢桿菌發酵液500L與10Kg海藻酸鈉、10Kg殼 聚糖、10Kg蔗糖、20Kg甘油、10Kg白炭黑、30Kg硅藻土充分混合固液混合物;

固液混合物在0.2Mpa壓力下經過板框壓濾得到含有多粘芽孢桿菌的濾餅;

濾餅在進風溫度120℃、引風機風量8000m3/小時、進料速度25Kg/小時的條 件下,經過閃蒸干燥,得到多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥。在該多粘類芽孢桿菌 生物農藥母藥中芽孢含量為200億cfu/g,含水量15%。

將20Kg上述制得的多粘類芽孢桿菌生物農藥母藥與增懸劑、紫外保護劑、 潤濕劑、分散劑按照以下質量百分比投入錐形混勻器:

經過錐形混勻器充分混合30min后,得到多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉 劑,檢測檢結果如表3。

表3多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑控制項目指標

注:在無特殊說明情況下,本發明計量單位wt%均指的是質量百分含量。

實施例4多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑對草莓苗期炭疽病的田間防治 試驗

按實施例3配制的多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑進行草莓苗期炭疽 病的防治試驗。試驗設在金山草莓種植園區,試驗時間為2016年6月-8月。試 驗設置150g/畝、300g/畝、600g/畝,共三個劑量,以常規處理—多種化學農藥(吡 唑醚菌酯、咪鮮胺、噁唑菌酮·硅唑)交替噴施及清水處理作為對照,試驗小區 設在8m*60m的大棚內,大棚內有4條壟,每壟約100棵草莓苗。每條壟分5 個小區,共試驗3條壟,每條壟為一個試驗重復,共3個重復。施藥時間分別為: 6月24日,7月05日,7月14日,7月30日,共施4次。施藥前各處理的田間 管理等基本一致。6月24日第一次施藥進行一次病指統計,7月21日、8月5 日進行第二、三次藥后病指統計,每小區隨機統計20株草莓苗,分別調查葉片、 葉柄和匍匐莖發病情況,記載病害級數,計算病情指數。

(病情分級標準:0級,無病斑;l級,病斑占整個器官(葉片、葉柄、葡匐 莖)面積的5%以下;3級,病斑占整個器官面積的6%~10%;5級,病斑占整個 器官面積的11%~25%;7級,病斑占整個器官面積的26%~50%;9級,病斑 占整個器官面積的50%以上。)表4為最后一次(8月5日)病指調查的數據。

表4:多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑防治草莓炭疽病試驗結果

處理 病指 防效(%) 150克/畝多粘類芽孢桿菌WP 36.11b 47.86b 300克/畝多粘類芽孢桿菌WP 17.59a 74.60a 600克/畝多粘類芽孢桿菌WP 23.52a 66.04a 化學處理 35.18b 49.20b 空白處理 69.26c /

注:表5中同列數據后不同小寫字母表示差異顯著(P≦0.05,鄧肯新復極 差法)

實施例4的結果表明:多粘類芽孢桿菌WP300克/畝和600克/畝處理的防效 無顯著性差異,但是均顯著性的高于150克/畝處理以及化藥處理的防效,300 克/畝的處理為防治設施大棚草莓炭疽病的最佳濃度。

實施例5多粘類芽孢桿菌可濕性粉劑對馬鈴薯早疫病的田間防治試驗

按實施例3配制多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑,進行馬鈴薯早疫病的 田間防治試驗。試驗設在馬鈴薯早疫病連年發生的孫橋農業園06號蔬菜大棚內, 試驗時間為2017年3月-5月。試驗設置125g/畝、250g/畝、500g/畝,共三個劑 量,以25%嘧菌酯懸浮劑和清水處理作為對照,每個處理設三個重復,共15個 小區,每個小區面積為10m2。第一次施藥:4月11日;第二次施藥:4月27 日;第三次施藥:5月4日;于末次藥后10天進行早疫病病情指數調查。(分 級標準為0級:無病;1級:病斑面積占整個葉面積的5%以下;3級:病斑面積 占整個葉面積的6-10%;5級:病斑面積占整個葉面積的11-25%;7級:病斑面 積占整個葉面積的25-50%;9級:病斑面積占整個葉面積的50%以上),試驗 結果見表5。

表5多粘類芽孢桿菌生物農藥可濕性粉劑防治馬鈴薯早疫病試驗結果

處理 病指 防效 125克/畝多粘類芽孢桿菌WP 17.1ab 64.55%a 250克/畝多粘類芽孢桿菌WP 8.4ab 82.54%a 500克/畝多粘類芽孢桿菌WP 3.9a 89.40%a 25%嘧菌酯 36.6ab 16.34%b 空白對照 43.8b -

實施例5的結果表明:末次藥后10天,多粘類芽孢桿菌3個處理的病情指 數明顯低于化學對照和空白對照,且在125克/畝的用量下即對馬鈴薯早疫病具 有良好的防治效果。

綜上,采用本發明所述培養液進行液體發酵,解決了傳統液體發酵技術中難 以生成芽孢的難題;而且本發明上述方法制備的產品均為活性芽孢粉粉,芽孢壽 命長,抵御外界不良影響能力強,因此,本發明制備的產品質量穩定,儲存時間 長,貨架期長。

以上對本發明的具體實施例進行了詳細描述,但其只是作為范例,本發明并 不限制于以上描述的具體實施例。對于本領域技術人員而言,任何對本發明進行 的等同修改和替代也都在本發明的范疇之中。因此,在不脫離本發明的精神和范 圍下所作的均等變換和修改,都應涵蓋在本發明的范圍內。

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