鬼佬大哥大
  • / 7
  • 下載費用:30 金幣  

用于樹莓組織培養的增殖培養基及其配制方法和應用.pdf

關 鍵 詞:
用于 組織培養 增殖 培養基 及其 配制 方法 應用
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
摘要
申請專利號:

CN201810013428.8

申請日:

20180108

公開號:

CN108243957A

公開日:

20180706

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 江蘇農林職業技術學院
發明人: 仇學文,許建民,岳冰,殷悅
地址: 212400 江蘇省鎮江市句容市文昌東路19號
優先權: CN201810013428A
專利代理機構: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 代理人: 王艷麗;許丹丹
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201810013428.8

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種用于樹莓組織培養的增殖培養基及其配制方法和應用。所述的基礎培養基為改良MS培養基,該改良MS培養基為調整MS培養基中七水合硫酸鎂、乙二胺四乙酸二鈉、七水合硫酸亞鐵的濃度得到,調整后,七水合硫酸鎂的濃度為720~760mg/L,乙二胺四乙酸二鈉濃度為70~80mg/L,七水合硫酸亞鐵的濃度為52~57mg/L。本發明還提供該培養的配制方法和應用。本發明對MS培養基的配方進行改良,使得樹莓在幼苗期的生長過程中,葉片顏色更加健康,葉綠素合成明顯加倍,光合作用效率明顯增加,幼苗生長的更加健康粗壯,這大大提高了后期樹莓組培苗的移栽,馴化的成活率。

權利要求書

1.一種用于樹莓組織培養的增殖培養基,包括基礎培養基,其特征在于,所述的基礎培養基為改良MS培養基,該改良MS培養基為調整MS培養基中七水合硫酸鎂、乙二胺四乙酸二鈉、七水合硫酸亞鐵的濃度得到,調整后,七水合硫酸鎂的濃度為720~760mg/L,乙二胺四乙酸二鈉濃度為70~80mg/L,七水合硫酸亞鐵的濃度為52~57mg/L。2.根據權利要求1所述的用于樹莓組織培養的增殖培養基,其特征在于,七水合硫酸鎂的濃度為735~745mg/L,乙二胺四乙酸二鈉濃度為73~76mg/L,七水合硫酸亞鐵的濃度為54~56mg/L。3.根據權利要求1所述的用于樹莓組織培養的增殖培養基,其特征在于,組成為:基礎培養基+0.8~1.2mg/L6-芐氨基嘌呤+0.1~0.2mg/L萘乙酸+30~32g/L糖+6.5~7.5g/L瓊脂。4.根據權利要求3所述的用于樹莓組織培養的增殖培養基,其特征在于,糖為蔗糖。5.一種用于樹莓組織培養的培養基的配制方法,其特征在于,包括:(1)配制權利要求1~4任一項所述的改良MS培養基;(2)改良MS培養基中加入配方量的糖、瓊脂、萘乙酸和6-芐氨基嘌呤后滅菌。6.根據權利要求1~4任一項所述的培養基在樹莓組織培養中的應用。7.根據權利要求6所述的應用,其特征在于,包括:將樹莓無菌苗接種于所述的培養基上進行培養,培養條件為:溫度23~27℃,光照強度2800~3000Lux,每日光照時間為16~18小時。

說明書

技術領域

本發明涉及組織培養,尤其涉及一種用于樹莓組織培養的培養基及其配制方法和應用。

背景技術

樹莓是一種高產出的經濟林木,現實需要大面積種植,因此,需要對樹莓苗木進行組培快繁。現有的樹莓苗木組培繁殖方法是在實驗室進行組織培養、快速繁殖,形成生根的快繁苗木,將進行組織培養的試管蓋打開,進行室內瓶內煉苗2-3天,再在溫室或網室把試管苗木移栽到營養缽內的基質中30天以上,并用遮陰網遮陰、保濕,成活后的苗木再移栽到苗圃田,再進行短時間的遮陰保濕,成活生長為所需的經濟苗木。

現在常用的樹莓培養基配方一般為MS培養基+1mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g糖/L+7g瓊脂/L,ph為5.7。每升培養基里有:大量元素:1900mg硝酸鉀,1650mg硝酸銨,370mg七水合硫酸鎂,170mg磷酸二氫鉀,440mg二水合氯化鈣;鐵鹽:37.3mg乙二胺四乙酸二鈉,27.8mg七水合硫酸亞鐵;微量元素:22.3mg四水合硫酸錳,8.6mg七水合硫酸鋅,6.2mg硼酸,0.83mg碘化鉀,0.25mg七水合鉬酸鈉,0.025mg五水合硫酸銅,0.025mg六水合氯化鈷;有機元素:2mg甘氨酸,0.5mg維生素B6,0.1mg維生素B1,0.5mg煙酸,100mg肌醇;激素:1mg6-芐氨基嘌呤,0.1mg萘乙酸。此配方的缺點在于樹莓組培苗在生長期間,幼苗葉片為淡綠色,經過測量,葉綠素合成明顯不足,幼苗柔弱無力,自身光合作用效率極低,不利于后續組培苗馴化繁苗等操作,此配方后期苗木馴化的成活率僅為60%左右,使得樹莓組培苗生產供應方蒙受巨大損失。

發明內容

發明目的:本發明提供了一種用于樹莓組織培養的增殖培養基,旨在解決樹莓組培苗在培養基生長中,葉片顏色偏淡,葉綠素合成不足,種苗柔弱無力,光合作用效率低下的問題,提高樹莓組培苗馴化過程中的成活率。

技術方案:本發明所述的用于樹莓組織培養的增殖培養基,包括基礎培養基,所述的基礎培養基為改良MS培養基,該改良MS培養基為調整MS培養基中七水合硫酸鎂、乙二胺四乙酸二鈉、七水合硫酸亞鐵的濃度得到,調整后,七水合硫酸鎂的濃度為720~760mg/L,乙二胺四乙酸二鈉濃度為70~80mg/L,七水合硫酸亞鐵的濃度為52~57mg/L。

優選的,七水合硫酸鎂的濃度為735~745mg/L,乙二胺四乙酸二鈉濃度為73~76mg/L,七水合硫酸亞鐵的濃度為54~56mg/L。更優選的,七水合硫酸鎂的濃度為740mg/L,乙二胺四乙酸二鈉濃度為74.6mg/L,七水合硫酸亞鐵的濃度為55.6mg/L

具體的,所述的用于樹莓組織培養的增殖培養基的組成為:基礎培養基+0.8~1.2mg/L 6-芐氨基嘌呤+0.1~0.2mg/L萘乙酸+30~32g/L糖+6.5~7.5g/L瓊脂。

本發明還提供了一種用于樹莓組織培養的增殖培養基的配制方法,包括:

(1)配制所述的改良MS培養基;

(2)改良MS培養基中加入配方量的糖、瓊脂、6-芐氨基嘌呤和萘乙酸后滅菌。

本發明還提供了所述的培養基在樹莓組織培養中的應用。

所述的應用包括:將樹莓無菌苗接種于所述的培養基上進行培養,培養條件為:溫度23~27℃,光照強度2800~3000Lux,每日光照時間為16~18小時。

與現有技術相比,本發明的有益效果為:本發明對MS培養基的配方進行改良,將七水合硫酸鎂,乙二胺四乙酸二鈉,四水合硫酸亞鐵的使用量進行適當改進,使得樹莓在幼苗期的生長過程中,葉片顏色更加健康,葉綠素合成明顯加倍,光合作用效率明顯增加,幼苗生長的更加健康粗壯,這大大提高了后期樹莓組培苗的移栽,馴化的成活率,最高可達到95%。此改進配方也極大的控制了污染率,使污染率降到了1.12%以下。

具體實施方式

下面結合具體實施例,進一步闡明本發明,應理解這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍,在閱讀了本發明之后,本領域技術人員對本發明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權利要求所限定的范圍。

實施例1

1、本實施例培養基的配方為:

改進MS培養基+1mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+31g/L糖+7g/L瓊脂,ph為5.7。每一升培養基的具體組成為:

大量元素:1900mg硝酸鉀,1650mg硝酸銨,720mg七水合硫酸鎂(七水硫酸鎂),170mg磷酸二氫鉀,440mg二水合氯化鈣;

鐵鹽:71mg乙二胺四乙酸二鈉,52mg七水合硫酸亞鐵;

微量元素:22.3mg四水合硫酸錳,8.6mg七水合硫酸鋅,6.2mg硼酸,0.83mg碘化鉀,0.25mg七水合鉬酸鈉,0.025mg五水合硫酸銅,0.025mg六水合氯化鈷;

有機元素:2mg甘氨酸,0.5mg維生素B6,0.1mg維生素B1,0.5mg煙酸,100mg肌醇;

激素:1mg6-芐氨基嘌呤,0.1mg萘乙酸;

其他:瓊脂7g,蔗糖31g。

2、培養基的配置包括以下步驟:

(1)配制改良MS培養基:

(11)50倍大量元素母液的配制:分別稱取82.5g硝酸銨、95g硝酸鉀、36g七水合硫酸鎂,然后用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅰ;

稱取22g二水氯化鈣,用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅱ;

稱取8.5g磷酸二氫鉀,用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅲ;

使用時配制每升培養基取母液Ⅰ,母液Ⅱ,母液Ⅲ各20ml;

(12)100倍的微量元素母液的配制:稱取2.23g硫酸錳,0.86g硫酸鋅,0.0025g硫酸銅,0.025g鉬酸鈉,0.62g硼酸,0.0025g氯化鈷,0.083g碘化鉀用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅳ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅳ;

(13)100倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取7.1g乙二胺四乙酸二鈉,加200ml蒸餾水進行溶解,再稱取5.2g硫酸亞鐵加入溶解,溶解時需要用電熱爐加熱,當溶液呈淺棕色透明液體時,停止加熱,加蒸餾水定容至1000mL,配成母液Ⅴ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅴ;

(14)100倍的有機成分母液的配制:稱取0.05g煙酸,0.01g鹽酸硫胺素,0.05g鹽酸吡哆醇,10g肌醇,0.2g甘氨酸,用蒸餾水溶解后混合定容至1000ml,配成母液Ⅵ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅵ;

(2)激素母液的配制:稱取50mg NAA,先用5ml體積濃度95%的酒精溶解,然后加水定容至50ml,配成1mg·mL-1的NAA母液,使用時配制每升培養基取0.1mLNAA母液;稱取50mg 6-BA,先用5ml 0.1mol·L-1NaOH溶解,然后加水定容至50mL,配成1mg·mL-1的6-BA母液,使用時配制每升培養基取1mL6-BA母液;

(3)按上述步驟(11)至步驟(14)中配制每升培養基的用量加入后,再加入瓊脂7g,蔗糖31g,6-BA母液1mL,NAA母液0.1mL,加熱溶解后定容至1L,用0.lmol·L-1鹽酸或氫氧化鈉調pH值至5.7,再分裝培養基,滅菌。

3、將原保存的樹莓無菌苗在超凈臺上接種至本實施例配制好的滅菌的培養基上,在光照強度3000Lux的條件下培養,培養條件為:溫度23-27℃,每日光照時間為16小時。

在本實施例培養基上培養3-7d,明顯看出樹莓葉片顏色由原本的淡綠色逐漸轉化為深綠色,30d內,可以觀察出樹莓幼苗明顯變得粗壯有力,統計得到污染率為0.9%,,原配方(將本申請改良MS更換為普通MS)污染率為1.7%;后期以與在原配方中生長的樹莓共同馴化煉苗,原配方下生長的組培苗成活率為59%,該配方下生長的組培苗成活率為89%。

實施例2

1、本實施例培養基的配方為:

改進MS培養基+0.8mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+30g/L糖+6.7g/L瓊脂,ph為5.7。每一升培養基的具體組成為:

大量元素:1900mg硝酸鉀,1650mg硝酸銨,740mg七水合硫酸鎂,170mg磷酸二氫鉀,440mg二水合氯化鈣;

鐵鹽:74.6mg乙二胺四乙酸二鈉,55.6mg七水合硫酸亞鐵;

微量元素:22.3mg四水合硫酸錳,8.6mg七水合硫酸鋅,6.2mg硼酸,0.83mg碘化鉀,0.25mg七水合鉬酸鈉,0.025mg五水合硫酸銅,0.025mg六水合氯化鈷

有機元素:2mg甘氨酸,0.5mg維生素B6,0.1mg維生素B1,0.5mg煙酸,100mg肌醇;

激素:1mg6-芐氨基嘌呤,0.15mg萘乙酸;

其他:瓊脂6.7g,蔗糖30g。

2、培養基的配置包括以下步驟:

(1)配制改良MS培養基:

(11)50倍大量元素母液的配制:分別稱取82.5g硝酸銨、95g硝酸鉀、37g七水合硫酸鎂,然后用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅰ;

稱取22g二水氯化鈣,用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅱ;

稱取8.5g磷酸二氫鉀,用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅲ;

使用時配制每升培養基取母液Ⅰ,母液Ⅱ,母液Ⅲ各20ml;

(12)100倍的微量元素母液的配制:稱取2.23g硫酸錳,0.86g硫酸鋅,0.0025g硫酸銅,0.025g鉬酸鈉,0.62g硼酸,0.0025g氯化鈷,0.083g碘化鉀用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅳ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅳ;

(13)100倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取7.46g乙二胺四乙酸二鈉,加200ml蒸餾水進行溶解,再稱取5.56g硫酸亞鐵加入溶解,溶解時需要用電熱爐加熱,當溶液呈淺棕色透明液體時,停止加熱,加蒸餾水定容至1000mL,配成母液Ⅴ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅴ;

(14)100倍的有機成分母液的配制:稱取0.05g煙酸,0.01g鹽酸硫胺素,0.05g鹽酸吡哆醇,10g肌醇,0.2g甘氨酸,用蒸餾水溶解后混合定容至1000ml,配成母液Ⅵ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅵ;

(2)激素母液的配制:稱取50mg NAA,先用5ml體積濃度95%的酒精溶解,然后加水定容至50ml,配成1mg·mL-1的NAA母液,使用時配制每升培養基取0.1mLNAA母液;稱取50mg 6-BA,先用5ml 0.1mol·L-1NaOH溶解,然后加水定容至50mL,配成1mg·mL-1的6-BA母液,使用時配制每升培養基取1mL6-BA母液;

(3)按上述步驟(11)至步驟(14)中配制每升培養基的用量加入后,再加入瓊脂6.7g,蔗糖30g,6-BA母液0.8mL,NAA母液0.15mL,加熱溶解后定容至1L,用0.lmol·L-1鹽酸或氫氧化鈉調pH值至5.7,再分裝培養基,滅菌

3、將原保存的樹莓無菌苗在超凈臺上接種至本實施例配制好的滅菌的培養基上,在光照強度3000Lux的條件下培養,培養條件為:溫度23-27℃,每日光照時間為16小時。

在本實施例培養基上培養2-4d內明顯看出樹莓葉片顏色由原本的淡綠色逐漸轉化為深綠色,30d內,可以觀察出樹莓幼苗明顯變得粗壯有力,統計得到污染率為1.02%,原配方污染率為2.03%;后期以與在原配方中生長的樹莓共同馴化煉苗,原配方下生長的組培苗成活率為57%,該配方下生長的組培苗成活率為95%。

實施例3

1、本實施例培養基的配方為:

改進MS培養基+0.9mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+32g/L糖+6.5g/L瓊脂,ph為5.7。每一升培養基的具體組成為:

大量元素:1900mg硝酸鉀,1650mg硝酸銨,760mg七水合硫酸鎂,170mg磷酸二氫鉀,440mg二水合氯化鈣;

鐵鹽:80mg乙二胺四乙酸二鈉,57mg七水合硫酸亞鐵;

微量元素:22.3mg四水合硫酸錳,8.6mg七水合硫酸鋅,6.2mg硼酸,0.83mg碘化鉀,0.25mg七水合鉬酸鈉,0.025mg五水合硫酸銅,0.025mg六水合氯化鈷;

有機元素:2mg甘氨酸,0.5mg維生素B6,0.1mg維生素B1,0.5mg煙酸,100mg肌醇;

激素:1mg6-芐氨基嘌呤,0.2mg萘乙酸;

其他:瓊脂6.5g,蔗糖32g。

2、培養基的配置包括以下步驟:

(1)配制改良MS培養基:

(11)50倍大量元素母液的配制:分別稱取82.5g硝酸銨、95g硝酸鉀、38g七水合硫酸鎂,然后用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅰ;

稱取22g二水氯化鈣,用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅱ;

稱取8.5g磷酸二氫鉀,用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅲ;

使用時配制每升培養基取母液Ⅰ,母液Ⅱ,母液Ⅲ各20ml;

(12)100倍的微量元素母液的配制:稱取2.23g硫酸錳,0.86g硫酸鋅,0.0025g硫酸銅,0.025g鉬酸鈉,0.62g硼酸,0.0025g氯化鈷,0.083g碘化鉀用蒸餾水溶解后定容至1000ml,配成母液Ⅳ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅳ;

(13)100倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取8g乙二胺四乙酸二鈉,加200ml蒸餾水進行溶解,再稱取5.7g硫酸亞鐵加入溶解,溶解時需要用電熱爐加熱,當溶液呈淺棕色透明液體時,停止加熱,加蒸餾水定容至1000mL,配成母液Ⅴ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅴ;

(14)100倍的有機成分母液的配制:稱取0.05g煙酸,0.01g鹽酸硫胺素,0.05g鹽酸吡哆醇,10g肌醇,0.2g甘氨酸,用蒸餾水溶解后混合定容至1000ml,配成母液Ⅵ,使用時配制每升培養基取10ml母液Ⅵ;

(2)激素母液的配制:稱取50mg NAA,先用5ml體積濃度95%的酒精溶解,然后加水定容至50ml,配成1mg·mL-1的NAA母液,使用時配制每升培養基取0.1mLNAA母液;稱取50mg 6-BA,先用5ml 0.1mol·L-1NaOH溶解,然后加水定容至50mL,配成1mg·mL-1的6-BA母液,使用時配制每升培養基取1mL6-BA母液;

(3)按上述步驟(11)至步驟(14)中配制每升培養基的用量加入后,再加入瓊脂6.5g,蔗糖32g,6-BA母液0.9mL,NAA母液0.2mL,加熱溶解后定容至1L,用0.lmol·L-1鹽酸或氫氧化鈉調pH值至5.7,再分裝培養基,滅菌。

3、將原保存的樹莓無菌苗在超凈臺上接種至本實施例配制好的滅菌的培養基上,在光照強度3000Lux的條件下培養,培養條件為:溫度23-27℃,每日光照時間為16小時。

在本實施例培養基上培養2-6d內樹莓葉片顏色由原本的淡綠色逐漸轉化為深綠色,30d內,可以觀察出樹莓幼苗明顯變得粗壯有力,統計得到污染率為0.86%,原配方污染率為1.65%;后期以與在原配方中生長的樹莓共同馴化煉苗,原配方下生長的組培苗成活率為56%,該配方下生長的組培苗成活率為93%。

關于本文
本文標題:用于樹莓組織培養的增殖培養基及其配制方法和應用.pdf
鏈接地址:http://www.wwszu.club/p-6914383.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
鬼佬大哥大