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一種提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的方法.pdf

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一種 提高 免疫 低下 模型 小鼠 非特 異性 免疫力 方法
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摘要
申請專利號:

CN201711352050.6

申請日:

20171215

公開號:

CN108244031A

公開日:

20180706

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01K67/02,A23K20/147,A23K50/50 主分類號: A01K67/02,A23K20/147,A23K50/50
申請人: 中國水產科學研究院東海水產研究所
發明人: 黃艷青,陸建學,龔洋洋,黃洪亮,劉志東,李子牛
地址: 200090 上海市楊浦區軍工路300號
優先權: CN201711352050A
專利代理機構: 上海順華專利代理有限責任公司 代理人: 陸林輝
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201711352050.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及模型動物領域,具體是一種提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的方法,包括以下步驟:a)制作南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs):將南極磷蝦肉糜采用堿性蛋白酶酶解至酶解液的水解度為32?36%,干燥后制成所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs);b)給免疫低下模型小鼠灌胃步驟a的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs),灌胃量為20?60g/kg,灌胃周期為14?28天。本發明優點在于:提供了一種能有效提高改善免疫低下動物的非特異性免疫力,且解決其免疫低下引發的后續健康問題的方法。

權利要求書

1.一種提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的方法,其特征在于,包括以下步驟:a)制作南極磷蝦蛋白肽混合物:將南極磷蝦肉糜采用堿性蛋白酶酶解至酶解液的水解度為32-36%,干燥后制成所述的南極磷蝦蛋白肽混合物;b)給免疫低下模型小鼠灌胃步驟a的南極磷蝦蛋白肽混合物,灌胃量為20-60g/kg,灌胃周期為14-28天。2.根據權利要求1所述的提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的方法,其特征在于,所述的步驟a制作南極磷蝦蛋白肽混合物的步驟為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:1-1:3的比例加入超純水攪拌混勻,調至pH9.5±0.5,加入600-1000U/g堿性蛋白酶,50-55℃水浴中酶解2-4h,沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物。3.根據權利要求1所述的提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的方法,其特征在于,所述的步驟b用環丙酰胺對小鼠進行免疫缺陷造模,注射環丙酰胺一周后的小鼠經檢測符合免疫低下模型動物標準。4.南極磷蝦蛋白肽混合物在制備提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的食品或藥物中的應用,其特征在于,所述的南極磷蝦蛋白肽混合物是將南極磷蝦肉糜采用堿性蛋白酶酶解至酶解液的水解度為32-36%,干燥后制成。5.根據權利要求4所述的南極磷蝦蛋白肽混合物在制備提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的食品或藥物中的應用,其特征在于,所述的南極磷蝦蛋白肽混合物的制備方法為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:1-1:3的比例加入超純水攪拌混勻,調至pH9.5±0.5,加入600-1000U/g堿性蛋白酶,50-55℃水浴中酶解2-4h,沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物。6.一種提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的食品或藥物,其特征在于,所述的食品或藥物中包括南極磷蝦蛋白肽混合物,所述的南極磷蝦蛋白肽混合物是將南極磷蝦肉糜采用堿性蛋白酶酶解至酶解液的水解度為32-36%,干燥后制成。7.根據權利要求6所述的提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的食品或藥物,其特征在于,所述的南極磷蝦蛋白肽混合物的制備方法為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:1-1:3的比例加入超純水攪拌混勻,調至pH9.5±0.5,加入600-1000U/g堿性蛋白酶,50-55℃水浴中酶解2-4h,沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物。

說明書

技術領域

本發明涉及模型動物領域,具體地說,是一種免疫低下模型小鼠免疫力提高的方法。

背景技術

免疫系統(immune system)最大的功能在于維護機體健康,由免疫器官、免疫組織、免疫細胞和免疫分子組成,能及時發現并清除異物、阻止外來病原微生物等入侵。因此,免疫功能的高低直接影響到生物體的抗病能力。免疫功能低下或亢進都會對自身器官或組織產生傷害。根據發病原因,免疫功能低下可分為原發性和繼發性兩類,而壓力過大、營養不良、疲勞過度或者病原生物感染等都可能會引起繼發性免疫力低下。目前常用的免疫增強劑有蜂膠、胸腺素、中藥提取物等。但目前利用生物活性肽作為提高免疫低下動物免疫力的研究不多。

生物活性肽是源于蛋白質的多功能化合物。近年來的研究表明,具有生物活性的肽多由25個氨基酸通過肽鍵以不同組成和排列方式構成。生物活性肽易消化吸收,可促生長,提高動物機體特異性和非特異性免疫能力,提高成活率,還有抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂等作用,食用安全性極高,是當前國際食品界最熱門的研究課題和極具發展前景的功能因子。水產動物的生長環境與陸生動物不同,在長期的生物進化過程中,具有與陸生動物不同的基因結構,經過生物酶解處理后的產物蘊含大量具有不同生物學功能的肽段。南極磷蝦隸屬節肢動物門、甲殼綱、磷蝦目,我們通常所說的南極磷蝦一般指南極大磷蝦(Euphausia superba Dana),廣泛分布于環南極水域,其營養價值豐富,資源蘊藏量巨大,最新估計的現存量在5億噸左右,是可供人類利用的海洋動物資源中蘊藏量最為豐富的一種,也是地球上資源蘊藏量最大的海洋漁業種類,被視為人類潛在的、重要的后備蛋白庫。目前,磷蝦資源處于未充分開發狀態,尚有巨大的開發利用潛力。研究表明,南極磷蝦蛋白質酶解液將富含多種必需氨基酸,尤其是賴氨酸和谷氨酸,還富含生物活性肽。關于磷蝦肽,目前多見作為水產動物,如真鯛、三文魚、淡水虹鱒魚餌料的研究。以南極磷蝦為原料,以南極磷蝦蛋白為原料,開發制備具有提高免疫力的功能性保健食品原料或者特殊營養強化劑,不僅可滿足人們對食品的營養要求更能滿足人們對食品的保健方面的要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能有效提高改善免疫低下動物的非特異性免疫力,且解決其免疫低下引發的后續健康問題的方法。

本發明解決上述問題的技術方案如下:通過給免疫功能低下動物膳食中補充南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的方式來提高免疫低下模型小鼠免疫力,具體通過給免疫低下模型小鼠進行灌胃一定量的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的方式來實現。

本發明的第一方面,提供一種提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的方法,包括以下步驟:

a)制作南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs):將南極磷蝦肉糜采用堿性蛋白酶酶解至酶解液的水解度為32-36%,干燥后制成所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs);

b)給免疫低下模型小鼠灌胃步驟a的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs),灌胃量為20-60g/kg,灌胃周期為14-28天。

本發明選擇上述酶解液的水解度是以體外抗氧化活性的結果為參考依據的。水解度越高,表示蛋白質大分子被酶解成小片段的程度越高,根據文獻報告,有生物學功能的多肽分子量范圍大多在2-10KDa,如果水解程度過高,有生物學功能的多肽會被進一步水解成游離氨基酸,反而使其生物學功能降低。發明人做過不同水解度的肽液的體外抗氧化活性的實驗結果也證實了這一點。

優選的,所述的步驟a制作南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的步驟為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:1-1:3的比例加入超純水攪拌混勻,調至合適pH(9.5±0.5),加入600-1000U/g堿性蛋白酶,50-55℃水浴中進行酶解(2-4h),沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)。

在本發明的一個優選實施方式中,所述的步驟a制作南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的步驟為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:1的比例加入超純水攪拌混勻,調至合適pH(9.5±0.5),加入600U/g堿性蛋白酶,52℃水浴中進行酶解4h,沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)。其中酶解液的水解度為32.4%。

在本發明的另一個優選實施方式中,所述的步驟a制作南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的步驟為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:3的比例加入超純水攪拌混勻,調至合適pH(9.5±0.5),加入1000U/g堿性蛋白酶,55℃水浴中進行酶解2h,沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)。其中酶解液的水解度為35.6%。

優選的,所述的步驟b用環丙酰胺對小鼠進行免疫缺陷造模,注射環丙酰胺一周后的小鼠經檢測符合免疫低下模型動物標準。

本發明的第二方面,提供南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)在制備提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的食品或藥物中的應用,所述的南極磷蝦蛋白肽混合物是將南極磷蝦肉糜采用堿性蛋白酶酶解至酶解液的水解度為32-36%,干燥后制成。

優選的,所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的制備方法為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:1-1:3的比例加入超純水攪拌混勻,調至合適pH(9.5±0.5),加入600-1000U/g堿性蛋白酶,50-55℃水浴中進行酶解(2-4h),沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物。

本發明的第三方面,提供一種提高免疫低下模型小鼠非特異性免疫力的食品或藥物,所述的食品或藥物中包括南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs),所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)是將南極磷蝦肉糜采用堿性蛋白酶酶解至酶解液水解度為32-36%,干燥后制成。

優選的,所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的制備方法為:將冰凍南極磷蝦解凍絞成磷蝦肉糜,按照原料與水1:1-1:3的比例加入超純水攪拌混勻,調至合適pH(9.5±0.5),加入600-1000U/g堿性蛋白酶,50-55℃水浴中酶解2-4h,沸水浴滅酶10min,冷卻至室溫,300目篩絹過濾除渣,濾液冷凍凍干或者噴霧干燥,制得所述的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)。

本發明優點在于:

1、本發明提供了一種能有效提高改善免疫低下動物的非特異性免疫力,且解決其免疫低下引發的后續健康問題的方法;

2、本發明從單核-巨噬細胞功能方面研究免疫低下模型小鼠免疫力提高的方法,研究南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)是否具有提高免疫低下模型小鼠的非特異性免疫力,從而實現開發南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)為人類功能性保健食品原料或者特殊營養強化劑可能。開發南極磷蝦蛋白肽制品不僅可滿足人們對食品的營養要求,更能滿足人們對食品的保健方面的要求。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明提供的具體實施方式作詳細說明。

實施例1

一種提高免疫力低下小鼠非特異性免疫力的方法

(1)南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的制備

冰凍南極磷蝦——解凍——絞成磷蝦肉糜——按照原料與水1:1的比例加入超純水攪拌混勻——調至合適pH(9.5±0.5)——加入600U/g堿性蛋白酶——52℃水浴中進行酶解4h——沸水浴滅酶10min——冷卻至室溫——300目篩絹過濾除渣——濾液冷凍凍干或者噴霧干燥——南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs);其中酶解液的水解度為32.4%。

(2)利用環磷酰胺(80mg·kg-1,ip)制造免疫低下昆明種小鼠模型,經檢測符合免疫低下模型動物標準。免疫低下模型小鼠分兩組,一組小鼠每天灌胃步驟1中制備的南極磷蝦多肽粉(KPPs)(20g/kg)1次(免疫低下處理實驗組),另一組灌胃等量生理鹽水(免疫低下處理對照組),同時以正常免疫狀態的小鼠每天灌胃等量生理鹽水作為正對照(免疫正常組)。所有實驗小鼠按照實驗動物管理條例中的規定進行飼喂和管理。

(3)對各實驗組小鼠每天的攝食及狀態做好觀察和記錄,灌胃14天時采樣。灌胃南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的免疫低下處理的實驗組小鼠(免疫低下處理實驗組)的非特異性免疫力(單核-巨噬細胞功能)恢復,其碳廓清吞噬指數α略高于正常免疫狀態的正常組小鼠(免疫正常組),差異不顯著,灌胃南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的免疫低下處理的實驗組小鼠(免疫低下處理實驗組)的碳廓清吞噬指數α顯著高于免疫低下處理對照組小鼠(免疫低下處理對照組)的碳廓清吞噬指數α。具體數據見表1。

表1灌胃14天后昆明種小鼠單核-巨噬細胞功能檢測

注:同一列數字上標字母不同表示差異顯著,字母相同表示無統計學差異。

實施例2

一種提高免疫力低下小鼠非特異性免疫力的方法

(1)南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的制備

冰凍南極磷蝦——解凍——絞成磷蝦肉糜——按照原料與水1:3的比例加入超純水攪拌混勻——調至合適pH(9.5±0.5)——加入1000U/g堿性蛋白酶——55℃水浴中進行酶解2h——沸水浴滅酶10min——冷卻至室溫——300目篩絹過濾除渣——濾液噴霧干燥——南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs);其中酶解液的水解度為35.6%。

(2)利用環磷酰胺(80mg·kg-1,ip)制造免疫低下ICR小鼠模型,經檢測符合免疫低下模型動物標準。免疫低下模型小鼠分兩組,一組小鼠每天灌胃步驟1中制備的南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)(60g/kg)1次(免疫低下處理實驗組),另一組灌胃等量生理鹽水(免疫低下處理對照組),同時以正常免疫狀態的小鼠每天灌胃等量生理鹽水作為正對照(免疫正常組)。所有實驗小鼠按照實驗動物管理條例中的規定進行飼喂和管理。記錄每天各組小鼠的攝食量,觀察其攝食行為。

(3)灌胃周期為28天。灌胃南極磷蝦蛋白肽混合物(KPPs)的免疫低下處理的實驗組小鼠(免疫低下處理實驗組)的非特異性免疫力(單核-巨噬細胞功能)恢復,其碳廓清吞噬指數α顯著高于正常免疫狀態的正常組小鼠(免疫正常組)和灌胃生理鹽水的免疫低下處理對照組小鼠(免疫低下處理對照組)的碳廓清吞噬指數α,而灌胃生理鹽水的免疫低下處理的對照組小鼠的碳廓清吞噬指數α最低。具體數據見表2。

表2灌胃28天后ICR雄性小鼠單核-巨噬細胞功能檢測

注:同一列數字上標字母不同表示差異顯著,字母相同表示無統計學差異。

以上已對本發明創造的較佳實施例進行了具體說明,但本發明創造并不限于所述實施例,熟悉本領域的技術人員在不違背本發明創造精神的前提下還可做出種種的等同的變型或替換,這些等同的變型或替換均包含在本申請權利要求所限定的范圍內。

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