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制備 積雪草 提取物 方法
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申請專利號:

CN201180043552.5

申請日:

20110902

公開號:

CN103124560A

公開日:

20130529

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K36/23,A61P31/00 主分類號: A61K36/23,A61P31/00
申請人: 納圖瑞克斯有限公司
發明人: C·杜瓦爾
地址: 法國阿維尼翁
優先權: 1057179
專利代理機構: 北京市中咨律師事務所 代理人: 胡晨曦;黃革生
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201180043552.5

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及制備精制的積雪草提取物的方法,所述提取物包含羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物。該方法包括:通過吸附樹脂;用包含至少30%重量的醇溶劑的洗脫劑洗脫;和使用包含水和醇溶劑的溶劑混合物進行重結晶的步驟。

權利要求書

1.制備精制的包含羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物的方法,該方法包括以下步驟:α)將包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的水溶液通過吸附樹脂,β)將所述吸附樹脂用包含至少30%重量的醇溶劑和任選的水的洗脫劑洗脫,和重結晶的步驟,該步驟使用包含水和醇溶劑的溶劑混合物,所述醇溶劑優選地選自乙醇、甲醇和丁醇,由此得到所述精制的積雪草提取物。2.根據權利要求1的方法,其中在步驟α)之前進行以下步驟:a)將積雪草的地上部分使用水或包含至少10%重量的水和任選的醇溶劑的溶劑混合物進行提取,由此獲得包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的水溶液。3.根據權利要求1或2任一項的方法,其中在步驟β)之后進行以下步驟:b)將步驟β)后獲得的洗脫液通過脫色樹脂,由此得到脫色的水相,c)將脫色的水相濃縮,由此獲得包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的積雪草提取物。4.根據權利要求3的方法,其中重結晶步驟包括以下步驟:d)將步驟c)得到的提取物溶解在達到40℃-70℃的溫度的包含水和醇溶劑的溶劑混合物中,由此得到溶液,e)將步驟d)得到的溶液的溫度降低到-20℃至30℃,由此得到冷卻的混合物,f)將冷卻的混合物過濾,由此得到濾液,g)濃縮濾液,由此得到精制的包含按提取物總重量計超過50%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物。5.制備純化的包含羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物的方法,該方法包括使用包含水和醇溶劑的溶劑混合物將根據權利要求1-4任一項的方法所得到的精制提取物進行純化的步驟。6.根據權利要求5的方法,其中所述純化步驟包括以下步驟:h)向根據權利要求1-4任一項的方法所得到的精制提取物中加入達到溫度25℃-65℃的包含醇溶劑和任選的水的溶劑混合物,由此得到溶液,i)將溶液的溫度降低到-20℃到30℃,由此得到冷卻的混合物,j)將冷卻的混合物過濾,由此得到濾液,k)濃縮濾液,由此得到純化的包含按提取物總重量計超過90%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物。

說明書

本發明涉及制備積雪草(Centella?asiatica)提取物的方法,所述提取物包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物。

積雪草屬于傘形科(Apiaceae),具體而言是天胡荽亞科。該植物是已知的,并且已經被傳統醫學使用了3000年以上。對于它的愈合、鎮靜、止痛、抗抑郁和抗微生物特性,是很令人感興趣的。

積雪草的活性化合物是五環三萜類,其為三萜苷配基類的形式:積雪草酸(式I)和羥基積雪草酸(式II),或者為三萜異苷類的形式:積雪草皂苷(式III)、羥基積雪草苷(式IV)和Terminoloside(式V)。

Terminoloside是羥基積雪草苷的位置異構體,并且具有相同的糖鏈,即葡萄糖-葡萄糖-鼠李糖鏈。Terminoloside的萜環與Terminolic?acid的萜環結構相當。

根據發明人的知識,目前還沒有檢測到積雪草皂苷的異構體。但是,可以假定存在積雪草皂苷的位置異構體,其具有與存在于羥基積雪草苷和Terminoloside之間的類似的異構現象。

積雪草的雜苷類,積雪草皂苷和羥基積雪草苷,是該植物中分別形成積雪草酸和羥基積雪草酸的儲備形式的糖復合物。

三萜分子由于其調節和激活膠原合成的活性而令人關注。從積雪草中提取的苷配基和雜苷類特別是促進1型和3型膠原合成。這些活性物質主要用于促進愈合和治療靜脈功能不全的藥物方面。它們也用于化妝品方面,作為抗皺紋和抗蜂窩組織劑。在現有技術中更普遍應用的積雪草的活性化合物是積雪草酸和羥基積雪草酸以及積雪草皂苷。

由于羥基積雪草苷在水中非常易溶,其通常在常規的脂溶性活性物質提取方法的過程中被清洗的水所帶走。

國際申請WO?2004/062678提供了制備積雪草提取物的方法,所述提取物包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物,該方法包括通過液/液萃取、隨后濃縮所得的水-醇相并連續過濾來選擇性去脂的步驟,該順序用于從羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物中提取出積雪草皂苷。但是,羥基積雪草苷使一部分積雪草皂苷增溶,這部分殘余的積雪草皂苷需要通過硅膠色譜來取出,而硅膠色譜是成本較高的純化技術,在工業規模生產上并不常見。

令人驚奇地,發明人開發了新的提取方法,用于制備包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的積雪草提取物。在該方法中,發明人使用了新的步驟來純化包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的溶液。

本發明涉及在吸附樹脂上通過的步驟在制備包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的積雪草提取物中的應用。

本發明方法中使用的吸附樹脂有利地是適合于吸附積雪草中包含的三萜雜苷類的樹脂,例如苯乙烯-二乙烯基苯或者酚醛(formo-phenolic)型吸附樹脂。

本發明還涉及制備包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的積雪草提取物的方法,該方法包括以下步驟:

α)將包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的水溶液通過吸附樹脂,和

β)將所述吸附樹脂用包含至少30%重量的醇溶劑和任選的水的洗脫劑洗脫。

在本說明書的范圍內,術語“醇溶劑”是指包含至少一個-OH醇官能團的溶劑,例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇、甘油,更特別是甲醇和乙醇。

在步驟α)期間,將包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的溶液通過吸附樹脂,使這些三萜異苷類能優先吸附。

在步驟β)中使用的洗脫劑任選地是未稀釋的醇溶劑,或者有利的是醇溶劑和水的混合物,優選包含50%-80%的醇溶劑,優選60%-70%的醇溶劑。

在該方法的一個有利的備選方案中,在步驟α)之前進行步驟a),用于通過水或包含至少10%重量的水和任選的醇溶劑的溶劑混合物來提取積雪草的地上部分,由此獲得包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的水溶液。

在本說明書的范圍內,術語“積雪草的地上部分”是指積雪草葉,其由具有不超過5cm的葉柄的葉片組成。

使用該植物的地上部分有利地從積雪草植物中提取活性物質,主要目的是為了不破壞其根部,因此能夠使這種多年生植物自然更新。

在本發明的方法的一個有利的備選方案中,提取步驟包括浸軟步驟,在此期間,所述地上部分在攪拌下在水中或在包含水和任選的醇溶劑的溶劑混合物中被浸軟。

在本說明書的范圍內,“溶劑混合物”特別是指至少兩種溶劑的混合物,優選兩種溶劑的混合物,例如水和一種醇溶劑。

浸軟是使用水或包含至少10%重量的水和任選的醇溶劑的溶劑混合物,在通常為20-90℃、優選50-70℃的溫度下、尤其是50℃左右的溫度下,以[積雪草]:[溶劑混合物]為1:2到1:20的比例,有利地進行通常20-180分鐘的時間。

所得到的浸軟混合物通常進行過濾,獲得包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的水溶液。該過濾一般通過連續過濾來進行,通常使用600μm、100μm和25μm孔隙率的濾器。

在本發明的方法的一個備選方案中,在上述提取步驟后獲得的水溶液任選地進行濃縮以減少進行處理的體積,得到包含2%-25%的干物資的濃縮溶液。

所得到的濃縮溶液任選地被堿化,有利地通過加入強無機堿來實現,例如固體或水溶液形式的堿性氫氧化物,例如氫氧化鋰LiOH、氫氧化鈉NaOH或氫氧化鉀KOH,生石灰CaO,熟石灰Ca(OH)2,以便將濃縮溶液的pH調節到優選為8-12的pH值。所述強無機堿優選地選自NaOH、KOH和CaO。

加入強堿通常能夠使金屬和其他容易與強堿反應的物質發生沉淀,并通過過濾除去。一般來說,沉淀或絮凝的蛋白質和樹脂狀化合物隨后通過過濾從堿化的混合物中除去。

在上述過濾步驟后得到的濾液可以接著任選地被酸化,有利地通過加入強無機酸來酸化,例如磷酸H3PO4、鹽酸HCl、硝酸HNO3、硫酸H2SO4、高氯酸HClO4、氫溴酸HBr,或加入有機酸,例如帶有一個或多個-COOH羧酸官能團的芳族或非芳族的有機化合物,例如甲酸、乙酸、苯甲酸、檸檬酸或碳酸。該酸化步驟適合于將濾液的pH調節到優選為5-7的pH值。所述強無機酸優選地選自H3PO4和HCl。所述有機酸優選地選自檸檬酸或碳酸。

所形成的鹽和沉淀的化合物一般通過過濾從酸化的混合物中除去。

在該方法的一個有利的備選方案中,步驟β)之后進行以下步驟:

b)將步驟β)后獲得的洗脫液通過脫色樹脂,由此得到脫色的水相,和

c)將脫色的水相真空濃縮,由此獲得包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的積雪草提取物。

優選地,所得到的混合物由羥基積雪草苷、25%-65%的Terminoloside和20%-40%的積雪草皂苷組成。

優選地,所得到的提取物包含按提取物總重量計的25%重量-65%重量的Terminoloside和羥基積雪草苷的混合物,以及20%-40%重量的積雪草皂苷。

在本發明的方法的一個有利的備選方案中,在步驟β)后得到的洗脫液首先用活性炭處理。加入活性炭通常可以通過固定脂肪酸或氧化產物使洗脫液脫色。

該洗脫液(任選地用活性炭處理過)隨后可以通過蒸餾醇溶劑來濃縮。濃縮的洗脫液接著例如過濾除去在水相中的不溶化合物。一部分積雪草皂苷通常在洗脫液濃縮期間沉淀,隨后通常通過過濾分離。

在步驟b)期間,將在步驟β)中獲得的洗脫液(任選地用活性炭處理過、任選地被濃縮和過濾)通過脫色樹脂例如強陰離子苯乙烯-氯化物型樹脂來脫色。

在本發明的方法的一個有利的備選方案中,脫色的水相接著任選地連續通過陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂來處理,以便從水相除去溶解的鹽和不希望的化合物。有利地,所用的陽離子樹脂是具有磺酸酯型官能團的強陽離子樹脂。有利地,所用的陰離子樹脂是具有季銨型官能團的強陰離子樹脂。在本發明的方法范圍內,離子交換樹脂的順序是重要的,以便提高殘余的酸性部分的固定。雖然如此,但也可以按照需要逆轉該順序。

連續通過陽離子和陰離子樹脂可以有利地重復進行,或者甚至可以將脫色的水相通過所述樹脂的混合床來進行。

在步驟c)期間,將脫色的水相(任選地通過陽離子和陰離子樹脂進行處理)進行真空濃縮,所得濃縮物通常真空干燥或噴霧干燥。可以有利地通過使用切向過濾膜技術在有機或無機膜上進行濃縮,使用具有200kDa到100kDa的截斷閾值的介質(即,使用具有200-100,000g/mol的分子量的分子)。

在步驟c)之后,獲得通常包含按提取物總重量計為25%重量-65%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物以及20%重量-40%重量的積雪草皂苷的積雪草提取物。

在步驟c)之后,獲得通常包含按提取物總重量計為25%重量-65%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物。

在步驟c)之后,獲得通常包含按提取物總重量計為20%重量-40%重量的積雪草皂苷的積雪草提取物。

在本發明的范圍內,術語“積雪草皂苷”是指根據式III的化學分子,任選地處于與任何其齊墩果烷型異構體的混合物中。

本發明還涉及制備精制的包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的積雪草提取物的方法,該方法包括使用包含水和醇溶劑的溶劑混合物將按照上述方法獲得的提取物重結晶的步驟。

適合于重結晶步驟的醇溶劑的例子包括乙醇、甲醇和丁醇或其混合物。

在本說明書的范圍內,術語“精制的積雪草提取物”是指包含按提取物總重量計超過50%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物。

所述提取物通常包含按提取物總重量計低于15%重量的積雪草皂苷。

本發明的方法的重結晶步驟適合于除去積雪草皂苷的主要部分,因此增加了在所得精制的提取物中羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的含量。

重結晶純化技術是基于化合物在溶劑中的熱和冷溶解度的差異。固體化合物的溶解度通常隨著溫度上升。因此,當在熱溶劑中溶解時,可以通過將溶液冷卻到其過飽和狀態而誘導其重結晶。因此,重結晶包括將待純化的固體化合物置于一般在沸點下的溶劑或溶劑混合物中,隨后冷卻溶液,誘導固體結晶,隨后過濾分離。溶質也可以通過蒸發溶劑濃縮而沉淀。

更具體而言,重結晶步驟包括以下步驟:

d)將根據上述方法的步驟c)得到的提取物溶解在達到40℃-70℃的溫度的包含水和醇溶劑的溶劑混合物中,由此得到溶液,

e)將步驟d)得到的溶液溫度降低到-20℃至30℃,由此得到冷卻的混合物,

f)將冷卻的混合物過濾,由此得到濾液,

g)濃縮濾液,由此得到精制的包含羥基積雪草苷、Terminoloside和積雪草皂苷的混合物的積雪草提取物。

在本發明的范圍內,重結晶溶劑混合物是包含水和醇溶劑的溶劑混合物。特別有利的重結晶溶劑混合物包含70%的水和30%的醇溶劑,優選乙醇或甲醇,優選達到55℃-65℃的溫度,尤其是60℃左右。

重結晶溶劑混合物任選地達到沸騰,以使待純化的提取物溶解。

在步驟c)后得到的提取物溶解期間,通常將溶劑混合物逐滴加入,以便能夠在全部提取物溶解之時停止加入溶劑。

接著將所得溶液冷卻,以便誘導積雪草皂苷結晶。溫度的降低通常是緩慢的和逐步的,有利地歷經1-250小時,優選100-250小時,以便增加所形成的積雪草皂苷晶體的純度,因此在這些晶體中未捕獲Terminoloside和羥基積雪草苷,這能夠降低這些化合物在母液中的含量。冷卻的混合物的溫度通常為-10℃到10℃,優選-5℃到5℃。

冷卻的混合物包括了形成的晶體和特別包含Terminoloside和羥基積雪草苷的母液,將混合物過濾,除去在所達到的溫度下不溶的結晶和/或沉淀的固體化合物。所分離的晶體通常含有超過75%的積雪草皂苷,可以再使用。

所述濾液,也稱為母液,將其通過蒸餾濃縮,并且通常真空干燥。

獲得了積雪草的精制提取物,其通常包含按提取物總重量計超過50%重量、或超過60%、或超過70%的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物。

該提取物還包含按提取物總重量計低于15%重量、或低于10%的積雪草皂苷。

本發明還涉及制備純化的包含羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物的方法,該方法包括使用包含水和醇溶劑的溶劑混合物將上述方法的步驟g)所得的精制提取物純化的步驟。

在本說明書的范圍內,術語“純化的積雪草提取物”是指包含按提取物總重量計超過90%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物。該提取物通常包含按提取物總重量計低于6%重量的積雪草皂苷。

本發明的方法的純化步驟通常能夠除去超過40%或超過50%比例的在精制的積雪草提取物中包含的積雪草皂苷。

根據本發明的一個備選的實施方案,所述純化步驟包括以下步驟:

h)向上述方法的步驟g)所得的精制提取物中加入達到溫度25℃-65℃的包含醇溶劑和任選的水的溶劑混合物,由此得到溶液,

i)將溶液的溫度降低到-20℃到30℃,由此得到冷卻的混合物,

j)將冷卻的混合物過濾,由此得到濾液,

k)濃縮濾液,由此得到純化的包含羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物。

在步驟h)期間向上述方法的步驟g)所得的精制提取物中加入的溶劑混合物有利地包含至少85%重量的醇溶劑,優選至少95%。該溶劑混合物有利地達到30℃-50℃的溫度,尤其是45℃左右的溫度。

在步驟g)所得的提取物溶解期間,通常將溶劑混合物逐滴加入,以便能夠在全部提取物溶解之時停止加入溶劑。

接著將所得溶液冷卻,通常是緩慢的和逐步的,有利地歷經1-250小時,優選達到-15℃到15℃,優選-10℃到0℃,尤其是約-5℃。

冷卻的混合物包括了形成的晶體和特別包含Terminoloside和羥基積雪草苷的母液,將混合物過濾,除去在所達到的溫度下不溶的結晶和/或沉淀的固體化合物。所得濾液,也稱為母液,將其通過蒸餾濃縮,并且通常真空干燥。

在本發明的方法的純化步驟后,純化的積雪草提取物通常包含按提取物總重量計超過90%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物。該提取物還包含按提取物總重量計低于6%重量的積雪草皂苷。

該純化步驟可以有利地重復2-3次,以提高純化的積雪草提取物中的羥基積雪草苷和Terminoloside的含量。重復該純化步驟能夠達到按提取物總重量計超過95%重量或甚至超過98%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物,以及按提取物總重量計低于3%重量或低于1%重量的積雪草皂苷。

步驟g)所得的精制的積雪草提取物和步驟k)所得的純化的積雪草提取物可以任選地通過硅膠制備色譜進行后續純化,以便提高其各自的羥基積雪草苷和Terminoloside含量。該色譜步驟使用作為洗脫溶劑的包含醇溶劑和水的溶劑混合物來進行。

在本說明書的范圍內,在制備色譜期間使用的洗脫劑通常是極性溶劑。有利地,該溶劑是水和醇溶劑例如乙醇的混合物,優選包含水和乙醇以1:1的比例(50%水和50%乙醇)。

在本發明的范圍內,在制備色譜期間使用的固定相是非極性的固定相。有利地,所述固定相由接枝的非極性的硅石組成。所述非極性的接枝側鏈有利地具有2-18個碳原子,更有利地是12-18個碳原子。

本發明還涉及制備純化的包含羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物的方法,所述方法包括以下步驟:

a)將積雪草的地上部分使用水或包含至少10%重量的水和任選的醇溶劑的溶劑混合物進行提取,由此得到溶液,

α)將所述溶液通過吸附樹脂,

β)將所述吸附樹脂用包含至少30%重量的醇溶劑和任選的水的洗脫劑洗脫,由此得到洗脫液,

b)將洗脫液通過脫色樹脂,由此得到脫色的水相,

c)將脫色的水相濃縮,由此獲得提取物,

d)將步驟c)得到的提取物溶解在達到40℃-70℃的溫度的包含水和醇溶劑的溶劑混合物中,由此得到溶液,

e)將步驟d)得到的溶液的溫度降低到-20℃至30℃,由此得到冷卻的混合物,

f)將冷卻的混合物過濾,由此得到濾液,

g)濃縮濾液,由此得到精制的提取物,

h)向上述方法的步驟g)所得的精制提取物中加入達到溫度25℃-65℃的包含醇溶劑和任選的水的溶劑混合物,由此得到溶液,

i)將溶液的溫度降低到-20℃到30℃,由此得到冷卻的混合物,

j)將冷卻的混合物過濾,由此得到濾液,

k)濃縮濾液,由此得到純化的包含羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的積雪草提取物。

實施例

實施例1

制備積雪草的粗提取物

將1公斤的積雪草葉(切下的葉)浸沒在20升加熱到70℃的水中。將混合物在攪拌下使之浸軟2小時,通過在逐步增加孔隙率(600μm、隨后100μm、隨后25μm)的濾器上連續過濾來過濾該混合物。

這產生了16.2升的粗制液體提取物,包含2%干物質,具有按干物質總重量計為11.8%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及10.9%重量的積雪草皂苷的滴度。

制備半精制的積雪草提取物

將粗制液體提取物通過RES-00820(Burgundy)型吸附樹脂,并且所述樹脂接著用由70%乙醇和30%水(v/v)組成的洗脫劑洗脫。

將回收的乙醇洗脫液通過RES-01541(Burgundy)型陰離子脫色樹脂,并將脫色相通過蒸餾脫醇并真空濃縮,由此得到脫色的水性濃縮液。將該濃縮液冷凍干燥。

這產生了70g半精制的提取物,具有按提取物總重量計為47.2%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及37.4%重量的積雪草皂苷的滴度。

制備精制的積雪草提取物

將半精制的提取物溶解在達到溫度60℃的包含70%水和30%甲醇的溶液中。在所述提取物完全溶解后,將溶液溫度歷經240小時降低到溫度5℃(低溫恒溫器,隨后儲存在冷藏庫中)。

將所得冷卻的混合物過濾,將濾液通過蒸餾脫醇并真空濃縮,由此得到精制的水性濃縮液。接著將該濃縮液冷凍干燥。

這產生了45g精制的提取物,具有按提取物總重量計為67.2%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及低于10%重量(4.5%)的積雪草皂苷的滴度。

制備純化的積雪草提取物

將精制的提取物溶解在達到溫度45℃的包含5%水和95%甲醇的溶液中。在所述提取物完全溶解后,將溶液溫度歷經120小時降低到溫度5℃。

將所得冷卻的混合物過濾,將濾液通過蒸餾脫醇并真空濃縮,由此得到純化的水性濃縮液。接著將該濃縮液冷凍干燥。

這產生了20g純化的提取物,具有按提取物總重量計超過90%重量(91.2%)的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及低于6%重量(3.1%)的積雪草皂苷的滴度。

實施例2

制備積雪草的粗提取物

將1公斤的積雪草葉(切下的葉)浸沒在15升加熱到50℃的70%體積的乙醇中。將混合物在攪拌下使之浸軟2小時,通過在逐步增加孔隙率(600μm、隨后100μm、隨后25μm)的濾器上連續過濾來過濾該混合物。

接著將濾液通過蒸餾脫醇,將濃縮的濾液過濾。

這產生了3.7升的粗制液體提取物,包含9%干物質,具有按干物質總重量計為11.2%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及8.6%重量的積雪草皂苷的滴度。

制備半精制的積雪草提取物

將粗制液體提取物通過RES-00408(Burgundy)型吸附樹脂,并且所述樹脂接著用由60%乙醇和40%水(v/v)組成的洗脫劑洗脫。

將回收的乙醇洗脫液接著蒸餾脫醇,并通過RES-01953(Burgundy)型陰離子脫色樹脂,隨后通過RES-01747(Burgundy)型陽離子交換樹脂,隨后通過RES-02056(Burgundy)型陰離子交換樹脂。將所得的脫色且去離子化的相真空濃縮,由此得到脫色且去離子化的水性濃縮液。將該濃縮液冷凍干燥(任選地用噴霧干燥替換)。

這產生了60g半精制的提取物,具有按提取物總重量計為47.2%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及27.4%重量的積雪草皂苷的滴度。

制備精制的積雪草提取物

將半精制的提取物溶解在達到溫度60℃的包含70%水和30%甲醇的溶液中。在所述提取物完全溶解后,將溶液溫度歷經240小時降低到溫度5℃(低溫恒溫器,隨后儲存在冷藏庫中)。

將所得冷卻的混合物過濾,將濾液通過蒸餾脫醇并真空濃縮,由此得到精制的水性濃縮液。接著將該濃縮液冷凍干燥。

這產生了35g精制的提取物,具有按提取物總重量計為67.5%重量的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及13.2%重量的積雪草皂苷的滴度。

制備純化的積雪草提取物

將精制的提取物溶解在達到溫度45℃的包含5%水和95%甲醇的溶液中。在所述提取物完全溶解后,將溶液溫度歷經120小時降低到溫度5℃。

將所得冷卻的混合物過濾,將濾液通過蒸餾脫醇并真空濃縮,由此得到純化的水性濃縮液。接著將該濃縮液冷凍干燥。

這產生了20g純化的提取物,具有按提取物總重量計超過90%重量(91.5%)的羥基積雪草苷和Terminoloside的混合物的滴度以及低于6%重量(4.6%)的積雪草皂苷的滴度。

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