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促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法.pdf

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促進 百合 鱗莖 快速 膨大 發育 方法
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摘要
申請專利號:

CN201710090503.6

申請日:

20170220

公開號:

CN106613996A

公開日:

20170510

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 宜春學院
發明人: 李潤根,盧其能,融花珍
地址: 336000 江西省宜春市學府路576號
優先權: CN201710090503A
專利代理機構: 宜春贛西專利代理事務所 代理人: 謝年鳳
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710090503.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,采用龍牙百合組織培養中誘導鱗莖發育的方法,以龍牙百合鱗片作為種片進行誘導發育種球,其包括1)龍牙百合鱗片叢芽增殖,2)鱗莖誘導,3)小鱗莖膨大制籽球。誘導鱗莖快速發育的方法,以龍牙百合鱗片作為種片進行誘導發育種球,優化了龍牙百合小鱗莖快速膨大,并生根的培養基,從而為食用龍牙百合試管苗規模化生產提供技術保證。以適應龍牙百合及龍牙百合種球或籽球的規模化生產的需要。大大降低龍牙百合種植成本。

權利要求書

1.一種促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,采用龍牙百合組織培養中誘導鱗莖發育的方法,以龍牙百合鱗片作為種片進行誘導發育種球,其特征是包括1)龍牙百合鱗片叢芽增殖,2)鱗莖誘導,3)小鱗莖膨大制籽球;所述1)叢芽增殖是將干凈的龍牙百合鱗片,用醇溶液處理,再用消毒溶液浸泡處理一定時間,然后用水沖洗,晾干,最后接種于叢芽增殖培養基中進行叢芽增殖培養;控制叢芽增殖培養條件為:培養周期為25-35天,培養溫度為20-30℃,先暗培養10-20天,形成龍牙百合鱗片叢芽,控制龍牙百合鱗片叢芽生長5-10天后,進行光培養,控制光培養的光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,控制叢芽增殖培養2次以上,制成叢生芽苗。2.根據權利要求1所述促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,其特征是所述2)鱗莖誘導,是將1)龍牙百合鱗片叢芽增殖,制成的叢生芽苗,除去芽苗葉片,得叢生芽苗體,將叢生芽苗體接種于鱗莖誘導培養基中,進行鱗莖的誘導增殖培養,誘導增殖培養條件為:采用光培養,控制培養周期為30-40天,培養溫度為20-30℃,培養光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,得分化小鱗莖。3.根據權利要求1所述促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,其特征是所述3)小鱗莖膨大制籽球,是將2)所得的分化小鱗莖,切割并去除葉片后,移植到F1培養基中進行小鱗莖膨大培養,使小鱗莖膨大生長并生根,控制小鱗莖膨大培養條件為:培養周期為50-70天,培養溫度為20-30℃,采用避光全黑暗培養,控制小鱗莖膨大培養進行2次以上,即制得籽球;所述F1培養基其組成組分為包含1-2倍的MS培養基、1.0-5.0g/L的多效唑、0.2-0.8mg/L的萘乙酸、60-120g/L的蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和5.5-10.5g/L的瓊脂,pH=5.6-6.2。4.根據權利要求1所述促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,其特征是1)所述醇溶液處理是用質量濃度為70-80Wt%的乙醇溶液對龍牙百合鱗片消毒處理20-30秒鐘;所述消毒溶液浸泡處理是用濃度為0.1%的升汞溶液浸泡處理10-15分鐘。5.根據權利要求1所述促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,其特征是所述用水沖洗是使用無菌水沖洗2-4次。6.根據權利要求1所述促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,其特征是所述作為種片進行誘導發育是進行鱗莖的誘導形成及增殖。

說明書

技術領域:

本發明涉及農業植物栽培領域的百合栽培方法,特別是一種促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法。

背景技術:

百合是百合科百合屬(學名:Lilium)多年生草本球莖植物。龍牙百合是我國三大食用百合主栽品種之一,久負盛名,是食用、藥用、觀賞百合中的名特優品種,也是營養價值最好的品種之一。其鱗莖呈球形,一般橫徑4-6厘米,鱗片披針形,白色,曝曬時呈黃白色或稍帶粉紅色。淀粉含量高,營養豐富,味淡不苦,地上莖高約90~120厘米,葉散生,倒披針形。花乳白色有香氣,其鱗莖可食用兼藥用。據醫藥典籍《金匱要略》、《本草綱目》、《中國藥典》記載,百合有潤肺止咳、寧心安神、理脾健胃、補中益氣、利大小便、解無名腫毒及止血等功效。現代醫學研究證明,百合含有的秋水仙堿、秋水仙胺等對人體細胞有絲分裂有明顯的抑制作用,抑制癌細胞及急性痛風等,均有明顯療效。百合還可以提練葡萄糖和奎寧等藥品。其鱗莖個頭大、片長、肉厚、心實、色澤白、味道美、營養豐富、藥效明顯,經江西檢測站檢測,每百克百合中含水份65%,碳水化含物23.8%,總膳食纖維5.9%,其中果膠4.8%、蛋白質4%、脂肪0.1%、水分1.1%、鈣0.9%、鐵0.09%、熱量132千卡。因此,百合是集食品、藥品于一身的綠色保健食品。

龍牙百合被人們稱為“南方人參”、“食中珍品”。目前,國內通過組織培養快速繁殖龍牙百合種苗的報道較多,但多數側重于龍牙百合不同外植體對百合再生效果的研究,或是百合試管內結鱗莖及小鱗莖移栽成活的研究。有關龍牙百合小鱗莖快速膨大并生根培養基優化等方面的研究較少。

如何提供一種完善的食用龍牙百合快繁技術方案,通過優化龍牙百合小鱗莖快速膨大,并生根的培養基,從而為食用龍牙百合試管苗規模化生產提供技術保證。以適應龍牙百合及龍牙百合種球或籽球的規模化生產的需要。

發明內容:

本發明提供一種促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,采用龍牙百合鱗片經組織培養,誘導鱗莖快速發育的方法,以龍牙百合鱗片作為種片進行誘導發育種球,優化了龍牙百合小鱗莖快速膨大,并生根的培養基,從而為食用龍牙百合試管苗規模化生產提供技術保證。以適應龍牙百合及龍牙百合種球或籽球的規模化生產的需要。大大降低龍牙百合種植成本。

本發明公開一種促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,采用龍牙百合組織培養中誘導鱗莖發育的方法,以龍牙百合鱗片作為種片進行誘導發育種球,其包括1)龍牙百合鱗片叢芽增殖,2)鱗莖誘導,3)小鱗莖膨大制籽球;所述1)叢芽增殖是將干凈的龍牙百合鱗片,用醇溶液處理, 再用消毒溶液浸泡處理一定時間,然后用水沖洗,晾干,最后接種于叢芽增殖培養基中進行叢芽增殖培養;控制叢芽增殖培養條件為:培養周期為25-35天,培養溫度為20-30℃,先暗培養10-20天,形成龍牙百合鱗片叢芽,控制龍牙百合鱗片叢芽生長5-10天后,進行光培養,控制光培養的光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗 , 控制叢芽增殖培養2次以上,制成叢生芽苗。

本發明所述促進龍牙百合組培鱗莖快速膨大發育的方法,所述2)鱗莖誘導,優選是將1)制成叢生芽苗除去芽苗葉片,得叢生芽苗體,將叢生芽苗體接種于鱗莖誘導培養基中,進行鱗莖的誘導增殖培養,誘導增殖培養條件為:采用光培養,控制培養周期為30-40天,培養溫度為20-30℃,培養光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,得分化小鱗莖。

進一步的,是所述3)小鱗莖膨大制籽球,是將2)所得的分化小鱗莖,切割并去除葉片后,移植到F1培養基中進行小鱗莖膨大培養,使小鱗莖膨大生長并生根,控制小鱗莖膨大培養條件為:培養周期為50-70天,培養溫度為20-30℃,采用避光全黑暗培養,控制小鱗莖膨大培養進行2次以上,即制得籽球;所述F1培養基其組成組分為包含1-2倍的MS培養基、1.0-5.0g/L的多效唑、0.2-0.8mg/L的萘乙酸、60-120g/L的蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和5.5-10.5g/L的瓊脂,pH=5.6-6.2。

優選,是1)所述醇溶液處理是用質量濃度為70-80%的乙醇溶液對龍牙百合鱗片消毒處理20-30秒鐘;所述消毒溶液浸泡處理是用濃度為0.1%的升汞溶液浸泡處理10-15分鐘。

所述用水沖洗是使用無菌水沖洗2-4次。

所述作為種片進行誘導發育是進行鱗莖的誘導形成及增殖。

本發明采用上述方法,經反復試驗,即使用叢芽增殖培養基和生根的培養基及F1培養基,特別是經F1培養基培養60天后,可以使龍牙百合鱗莖由64.00mg/個增加到237.60 mg/個,凈增重173.60mg/個;由97.20mg/個增加到315.20mg/個凈增重218.00mg/個;由142.40mg/個356.90mg/個凈增重214.50mg/個,并且籽球的生根良好。

本發明一種促進龍牙百合組培鱗莖膨大發育的方法,或者為利用龍牙百合鱗片誘導發育制籽球,具體來講為一種促進龍牙百合組織培養中誘導鱗莖發育的方法。本發明通過改善龍牙百合組培快繁技術,即叢芽增殖、小鱗莖的誘導、小鱗莖的膨大并生根三個階段促使其鱗莖膨大發育生長。操作過程與培養試管苗類似,培養完成后獲得具有膨大的鱗莖,可作為生產用的繁殖原始材料直接移入大田種植,大幅度提高了繁殖系數,縮短了龍牙百合的生長周期,可大大節約百合或龍牙百合種植成本,提高種植效益的特點,能滿足龍牙百合產業化、規模化栽培用種需求。有利于龍牙百合的廣泛種植和推廣,具有良好的經濟效益和社會效益。

具體實施方式:

下面結合具體實例對本發明作進一步說明。

本發明所述各物料均可通過市售獲得,或者通過現有技術方法制備得到。

本發明一種龍牙百合鱗片誘導發育制籽球的方法,采用龍牙百合組織培養中誘導鱗莖發育的方法,以龍牙百合鱗片作為種片進行誘導發育種球,其包括1)龍牙百合鱗片叢芽增殖,2)鱗莖誘導,3)小鱗莖膨大制籽球;所述1)叢芽增殖是將干凈的龍牙百合鱗片,用醇溶液處理,再用消毒溶液浸泡處理,然后用水沖洗,晾干,最后接種于叢芽增殖培養基中進行叢芽增殖培養;控制叢芽增殖培養條件為:培養周期為25-35天,培養溫度為20-30℃,先暗培養10-20天,形成龍牙百合鱗片叢芽,控制龍牙百合鱗片叢芽生長5-10天后,進行光培養,控制光培養的光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,控制叢芽增殖培養2次以上,制成叢生芽苗。

本發明方法促進龍牙百合組培鱗莖膨大發育的方法,如龍芽百合原料為百合鱗球。通過對種球鱗片的培養誘導叢生芽萌發及高頻增殖制成叢生芽苗,再以叢生芽苗為材料誘導其發育形成鱗莖或叫小鱗莖,調節培養基對小鱗莖進行膨大發育并生根培養,最終形成龍牙百合組培鱗莖膨大發育的“三步”法 組培技術方案。

具體按下述方法進行,包括如下三步即三階段:

1)第一階段,龍牙百合鱗片叢芽增殖:將剝取龍牙百合外、中層干凈的鱗片,用自來水沖洗晾干后,使用質量濃度為75%的乙醇浸泡消毒30秒鐘,再用0.1%的升汞溶液浸泡消毒殺菌10-12分鐘,然后用無菌水沖洗3次后晾干,將上述晾干的鱗片接種到適宜的培養基進行培養,即叢芽增殖培養基中進行叢芽增殖培養,控制培養條件為:培養周期為30天,培養溫度為25℃,先暗培養,待叢芽形成并生長7天后轉入光培養,光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,該階段培養即叢芽增殖培養基中進行叢芽增殖培養進行2次以上形成叢生芽苗;

2)第二階段,鱗莖誘導或叫小鱗莖的誘導:將第一階段所得的叢生芽苗切割除去葉片,將余下的芽體轉接到適宜培養基,即接種到鱗莖誘導培養基中,進行鱗莖的誘導增殖培養,進行鱗莖的誘導形成及增殖,培養條件為:培養周期為30-40天,培養溫度為25℃,培養光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,得分化小鱗莖;

3)第三階段,小鱗莖的膨大并生根:將第二階段所得的分化小鱗莖切割下來,并切除葉片,將其移植到F1培養基中,以培養基F1為鱗莖膨大發育培養基,進行小鱗莖的膨大生長并生根,控制培養條件為:培養周期為60天,培養溫度為25℃,避光全黑暗培養,所述F1培養基包含1-2倍的MS培養基、1.0-5.0g/L多效唑、0.2-0.8mg/L萘乙酸、60-120g/L蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和5.5-10.5g/L瓊脂,pH=5.6-6.2;該階段培養進行2次以上。

實施例

下述實施例中使用的培養基除已公開的外,未說明之處均是使用現有技術市場上市售的應用于本發明技術方面的培養基,而如叢芽增殖培養基同樣可以使用F1培養基。

1)將剝取龍牙百合外、中層干凈、無病斑的鱗片作種片,用自來水沖洗晾干后,使用75%乙醇浸泡消毒30秒鐘,再用0.1%的升汞溶液浸泡10-12分鐘,然后用無菌水沖洗3次后晾干,將上述晾干的鱗片接種到適宜的培養基進行培養,培養條件為:培養周期為30天,培養溫度為25℃,先暗培養,待叢芽形成并生長7天后轉入光培養,光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,該階段培養進行2次以上形成叢生芽苗;

2)將步驟1)得的叢生芽苗切割除去葉片,將余下的芽體轉接到適宜培養基,進行鱗莖的誘導形成及增殖,培養條件為:培養周期為30-40天,培養溫度為25℃,培養光照強度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗,得分化小鱗莖;

3)將步驟2)所得所得的分化小鱗莖切割下來,并切除葉片,將其移植到F1培養基,以F1培養基為鱗莖膨大發育培養基,進行小鱗莖的膨大生長并生根,培養條件為:培養周期為60天,培養溫度為25℃, 避光全黑暗培養,所述F1培養基包含1-2倍的MS培養基、1.0-5.0g/L多效唑、0.2-0.8mg/L萘乙酸、60-120g/L蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和5.5-10.5g/L瓊脂,pH=5.6-6.2;進行結球和生根培養150天,待籽球重量達到2-3g時,進行清洗后置于溫度3-5℃下,經40天的低溫春化,移至室外種植。

經本發明上述方法利用龍牙百合鱗片誘導發育制的籽球,均可達到上述檢測增重要求。即可達到滿足了龍牙百合產業化、規模化的生產要求,為食用龍牙百合試管苗規模化生產提供技術保障。可大幅度提高了龍牙百合種植效益。

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