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一種注射用載納米粒的微球系統及其制備方法.pdf

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一種 注射 納米 系統 及其 制備 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310076159.7

申請日:

20130311

公開號:

CN103127002B

公開日:

20150318

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K9/16,A61K9/19,A61K47/42,A61K47/36,A61K47/34,A61K31/475,A61K31/573,A61P19/02,A61P29/00 主分類號: A61K9/16,A61K9/19,A61K47/42,A61K47/36,A61K47/34,A61K31/475,A61K31/573,A61P19/02,A61P29/00
申請人: 南京中醫藥大學
發明人: 陳志鵬,王建,劉丹,陳軍,蔡寶昌
地址: 210029 江蘇省南京市鼓樓區漢中路282號
優先權: CN201310076159A
專利代理機構: 南京知識律師事務所 代理人: 汪旭東
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310076159.7

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了一種注射用載納米粒的微球系統,藥物包裹于納米粒中,再將納米粒包裹在微球中,納米粒材料選自白蛋白、殼聚糖和聚乳酸-羥基乙酸聚合物中的一種,微球材料選自殼聚糖或聚乳酸-羥基乙酸聚合物。本發明還提供了上述微球系統的制備方法,納米粒采用去溶劑化-乳化交聯法、交聯法或雙乳化法制備,將制得的納米粒進一步采用雙乳化法或噴霧干燥法制備得到微球。本發明所述載納米粒的微球系統不會引起排異反應,可以用于注射給藥,可適應不同藥物的性質,進一步的增強了緩釋作用及其可控性,還可以通過對內外兩層材料的修飾,實現分級逐次靶向的作用。

權利要求書

1.?一種注射用載納米粒的微球系統,藥物包裹于納米粒中,再將納米粒包裹在微球中,其特征在于納米粒材料為殼聚糖,微球材料為殼聚糖,所述藥物為可的松,所述納米粒采用交聯法制備,將制得的納米粒進一步采用噴霧干燥法制備得到微球,所述納米粒采用交聯法制備包括以下步驟:取殼聚糖醋酸溶液,加入可的松,在勻速攪拌的過程中加入一定量的交聯劑,除去游離可的松,凍干制得納米粒,所述殼聚糖分子量為2~800KDa,殼聚糖醋酸溶液濃度為0.15~15mg/mL,藥物的濃度為0.2~20mg/ml,所述的交聯劑為多聚磷酸鈉類,濃度為0.15~15mg/mL;殼聚糖與交聯劑的使用量為10:1~1:1;所述微球采用噴霧干燥法包括以下步驟:取殼聚糖醋酸溶液,加入可的松納米粒,加入交聯劑,勻速攪拌一定時間,噴霧干燥,制得載納米粒的微球,所述殼聚糖分子量為2~800KDa,殼聚糖醋酸溶液濃度為0.2%~2%;交聯劑為醛類,濃度為0.1%~10%,噴霧干燥氣壓在10~100?mL/h,進口溫度為80~140度,蠕動泵速度為5%~50%。2.如權利要求1所述的微球系統,其特征在于所述納米粒粒徑范圍為100-500nm,微球的粒徑范圍為1-30μm。3.如權利要求1所述的微球系統,其特征在于所述納米粒材料與微球材料質量比為1:1~1:15。4.如權利要求1-3之一項所述的微球系統,其特征在于所述納米粒采用交聯法制備時使用的交聯劑為三聚磷酸鈉。5.如權利要求1-3之一項所述的微球系統,其特征在于所述微球采用噴霧干燥法制備時使用的交聯劑為戊二醛。

說明書

技術領域

本發明涉及藥物制劑領域,具體涉及一種注射用載納米粒的微球系統及其制備方法。

背景技術

本發明為一種注射用載納米粒的微球系統,其主要用途是包裹馬錢子堿、可的松或氫化可的松等小分子抗炎藥物,通過關節腔注射,達到治療關節炎的目的。

載納米粒的微球系統是一種新興劑型,主要作為基因或多肽的載體。Mayank?D.Bhavsar等人用聚(ε-己內酯)為原料,采用雙乳化法制備了納米粒微球口服系統(Nanoparticles-in-microspheres?oral?system,NiMOS)用于傳遞DNA,防止DNA被胃腸道消化(Mayank?D.Bhavsar,Mansoor?M.Amiji,Gastrointestinal?distribution?and?in?vivo?gene?transfection?studies?with?nanoparticles-in-microsphere?oral?system(NiMOS).Journal?of?Controlled?Release?119(2007)339-348)。這種劑型也用于作為免疫抑制藥和生物堿類藥物的載體,如Alf?Lamprecht等人研制了靶向結腸的pH敏感的他克莫司納米粒微球(Alf?Lamprecht,Hiromitsu?Yamamoto,A?pH-sensitive?microsphere?system?for?the?colon?delivery?of?tacrolimus?containing?nanoparticles.Journal?of?Contrlled?Realease?104(2005)337-346)、呂維玲等人制備了氫溴酸東莨菪堿納米粒微球(呂維玲、胡晉紅、等,氫溴酸東莨菪堿納米粒-微球系統的研制.藥學學報2010,5(7):914-919)。上述納米粒微球在內的各種納米粒微球系統均用于口服給藥,應用范圍較窄。

注射給藥途徑目前仍是釋放大分子(如肽類和蛋白質)、易代謝(如首過代謝和某些理化性質嚴重影響生物利用度)和治療指數狹窄(如一些抗癌藥)等藥物最有效和常用的劑型。然而,普通注射劑需頻繁給藥給病人帶來不便和疼痛等。采用長效注射劑不僅可克服之,提高藥物療效,節省醫療費用,而且還有助于將更多的新藥推上市場。

目前上市的注射用的長效制劑以微球、納米粒和脂質體居多,如強生公司的利培酮長效注射劑和加拿大先靈公司上市的聚乙二醇化鹽酸多柔比星脂質體注射劑。微球和納米粒均是注射給藥的主要劑型,具有生物相容性好,所用材料可生物降解等特點。但是微球和納米粒均有不同程度的缺陷。例如微球藥物的突釋作用明顯,對于一些小分子藥物緩釋作用較差,而納米粒易聚集、不穩定。

申請號為CN200410082694.4的中國專利文獻“含干擾素α-1b的注射用緩釋微球及其制備方法”公開了一種干擾素α-1b的注射用緩釋微球及其制備方法。該專利解決了干擾素α-1b的緩釋微球的制備。干擾素α-1b屬于大分子藥物。大分子藥物從載體材料中擴散,主要受分子間作用力及載體材料形成的網格大小的影響。一般情況下,大分子藥物與載體材料之間的分子間作用力比小分子藥物與載體材料之間的分子間作用力大,而且大分子藥物比小分子藥物更難通過載體材料形成的網格,所以大分子藥物做成緩釋制劑更加簡單。抑制小分子藥物的擴散主要依靠其與載體材料之間的分子間作用力,但不同類型的藥物與同一種載體材料之間的分子間作用力不同的,這就要求不同類型的藥物所使用的載體材料不同。本發明中采用的材料對于抑制馬錢子堿、可的松和氫化可的松具體較理想的作用。現存文獻中,緩釋劑型多用于大分子藥物,而自然界中小分子藥物居多,故本發明具有較高的價值。

發明內容

本發明針對現有技術不足,提供了一種包封率高,緩釋效果好的注射用載納米粒的微球系統及其制備方法。

本發明具體技術方案如下:

一種注射用載納米粒的微球系統,藥物包裹于納米粒中,再將納米粒包裹在微球中,納米粒材料選自白蛋白、殼聚糖和聚乳酸-羥基乙酸聚合物中的一種,微球材料選自殼聚糖或聚乳酸-羥基乙酸聚合物。

上述納米粒粒徑范圍為100-500nm,微球的粒徑范圍為1-30μm。

上述納米粒材料與微球材料質量比為1:1~1:15,優選納米粒材料與微球材料殼聚糖比為1:1-1:10或者優選納米粒材料與聚乳酸-羥基乙酸聚合物比為1:3-1:15。

本發明所述的微球系統可用于抗炎藥物的緩控釋劑型,優選馬錢子堿、可的松或氫化可的松。

本發明還提供了上述微球系統的制備方法,納米粒采用去溶劑化-乳化交聯法、交聯法或雙乳化法制備,將制得的納米粒進一步采用雙乳化法或噴霧干燥法制備得到微球。

本發明所述納米粒采用去溶劑化-乳化交聯法制備,包括以下步驟:取pH4~12的牛血清白蛋白水溶液,加入含有藥物的無水乙醇溶液,勻速攪拌,繼續加入適量無水乙醇脫水,加入交聯劑,勻速分散一定時間,除去有機溶劑和游離藥物,凍干制得納米粒;

優選牛血清白蛋白水溶液濃度為10~200mg/mL,藥物的無水乙醇溶液濃度為2~40mg/mL。牛血清白蛋白水溶液和藥物的無水乙醇溶液的體積比優選為2:5,勻速攪拌的速度為100~1000rpm,攪拌時間為1~120min。

上述去溶劑化-乳化交聯法中交聯劑為醛類,優選戊二醛,優選濃度為0.01%~2%。勻速分散速度為100~1000rpm,時間為1~1200min。

或者,所述納米粒采用交聯法制備,包括以下步驟:取殼聚糖醋酸溶液,加入藥物,在勻速攪拌的過程中加入交聯劑,除去游離藥物,凍干制得納米粒;

殼聚糖分子量為2~800KDa,殼聚糖醋酸溶液濃度為0.15~15mg/mL,藥物的濃度為0.2~20mg/ml。

勻速攪拌速度為100~800rpm。

所述的交聯劑為多聚磷酸鈉類,優選三聚磷酸鈉,其濃度為0.15~15mg/mL。

殼聚糖與交聯劑的使用量為10:1~1:1。

或者,所述納米粒采用雙乳化法制備,包括以下步驟:取聚乳酸-羥基乙酸聚合物二氯四烷溶液適量,加入藥物的水溶液,用細胞粉碎儀超聲一定時間,加入到一定濃度的聚乙二醇溶液中,得到混合溶液,再用高速勻質分散機分散一定時間,除去有機溶劑和游離藥物,凍干得納米粒;

聚乳酸-羥基乙酸聚合物分子量為6000Da,優選聚乳酸與羥基乙酸的質量比為50:50。

所述微球采用雙乳化法包括以下步驟:取聚乳酸-羥基乙酸聚合物二氯四烷溶液適量,加入藥物納米粒的水溶液,用細胞粉碎儀超聲一定時間,加入到聚乙二醇溶液中,得到混合溶液,再用高速勻質分散機分散一定時間,除去有機溶劑,離心得微球,凍干制得載納米粒的微球;

聚乳酸-羥基乙酸聚合物分子量為6000Da,優選聚乳酸與羥基乙酸的質量比為50:50。

聚乳酸-羥基乙酸聚合物二氯甲烷溶液,濃度為5~200mg/mL。藥物的水溶液濃度為10~100mg/mL。

細胞粉碎儀超聲時間為20~200s。

聚乙二醇溶液,濃度為0.1%~10%。

聚乳酸-羥基乙酸聚合物:聚乙二醇在1:1~1:2。

高速分散勻質機分散轉速為1000~23000rpm,優選高速均質分散機在納米粒和微球的制備過程中,轉速分別為15000-23000rpm和1000-10000rpm,時間為60~600s。

或者,所述微球采用噴霧干燥法包括以下步驟:取殼聚糖醋酸溶液,加入藥物納米粒,加入交聯劑,勻速攪拌一定時間,噴霧干燥,制得載納米粒的微球。

殼聚糖分子量為2~800KDa,殼聚糖醋酸溶液,其特征在于濃度為0.2%~2%。

交聯劑為醛類,優選戊二醛,濃度為0.1%~10%。

勻速攪拌轉速為10~1000rpm,攪拌時間為10~120min。

噴霧干燥,氣壓在10~100mL/h,進口溫度為80~140度,蠕動泵速度為5%~50%。

本發明的優點在于:第一,因為采用了生物相容性較好的牛血清白蛋白、殼聚糖或PLGA做為原料,所以不會引起排異反應,可以用于注射給藥。第二,本系統可以采用不同的載體材料,以適應不同藥物的性質。第三,本系統結合納米粒和微球兩種劑型,進一步的增強了緩釋作用及其可控性。第四,本系統還可以通過對內外兩層材料的修飾,實現分級逐次靶向的作用。

附圖說明

圖1為本發明所述載納米粒的微球系統突釋和釋放曲線圖。

圖2為本發明所述載納米粒的微球系統掃描電鏡外觀形態圖。

具體實施方式

以下通過實施例說明本發明的具體步驟,但不受實施例限制。

在本發明中所使用的術語,除非另有說明,一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。

下面結合具體實施例并參照數據進一步詳細描述本發明。應理解,這些實施例只是為了舉例說明本發明,而非以任何方式限制本發明的范圍。

在以下實施例中,未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。

實施例1

取100mg?BSA溶于2ml去離子水中溶解,0.1mol/l的NaOH調pH=9;取20mg馬錢子堿溶于3ml無水乙醇中,在快速攪拌的同時向白蛋白溶液中滴加馬錢子堿的無水乙醇溶液,分散30min后,繼續滴加2ml無水乙醇溶液脫水,加入1000ul?0.25%戊二醛水溶液,繼續攪拌固化10小時,于35℃(35-40)旋轉蒸發去除有機溶劑。凍干。配制1%(v/v)醋酸溶液,將CS溶于醋酸中0.5%(w/v)。將Brucine-BSA-Nps按照1:1的比例(BSA:CS)邊攪拌邊加入到CS醋酸溶液中。分散1h,邊攪拌邊按10:1的比例加入1%(v/v)戊二醛(CS:戊二醛),固化1h。噴干。氣壓40ml/h,進口溫度120℃,蠕動泵速度20%。

實施例2

取100mg?BSA溶于2ml去離子水中溶解,0.1mol/l的NaOH調PH=9;取20mg可的松溶于3ml無水乙醇中,在快速攪拌的同時向白蛋白溶液中滴加馬錢子堿的無水乙醇溶液,分散30min后,繼續滴加2ml無水乙醇溶液脫水,加入1000ul?0.25%戊二醛水溶液,繼續攪拌固化10小時,于35℃(35-40)旋轉蒸發去除有機溶劑。凍干。稱取納米粒36mg溶于水200μL中,作為內水相;另按輔料比1:1的比例取PLGA(PLA:PGA=50:50,Mr=6000)溶于二氯甲烷4mL中作為油相,探頭超聲,充分乳化后按1:1(PLGA:PVA)加入1%PVA溶液,以1000r/min的轉速乳化3min,磁子500rpm攪拌1h,靜置待表機氣泡基本消失后,離心后用蒸餾水洗滌3次,收集微球,冷凍干燥,即得。

實施例3

稱取氫化可的松36mg溶于水200μL中,作為內水相;另取PLGA(PLA:PGA=50:50,Mr=6000)330mg溶于二氯甲烷4mL中作為油相,探頭超聲,充分乳化后按1:2(PLGA:PVA)加入1%PVA溶液,以9000r/min的轉速乳化3min,磁子500rpm攪拌1h,靜置待表機氣泡基本消失后,冷凍干燥。配制1%(v/v)醋酸溶液,將CS溶于醋酸中0.5%(w/v)。將納米粒按照1:10的比例(PLGA:CS)邊攪拌邊加入到CS醋酸溶液中。分散1h,邊攪拌邊按1:1(CS:戊二醛)加入1%(v/v)戊二醛,固化1h。噴干。氣壓40ml/h,進口溫度120℃,蠕動泵速度20%。

實施例4

稱取氫化可的松36mg溶于水200μL中,作為內水相;另取PLGA(PLA:PGA=50:50,Mr=6000)330mg溶于二氯甲烷4mL中作為油相,探頭超聲,充分乳化后按1:1(PLGA:PVA)加入1%PVA溶液,以15000r/min的轉速乳化3min,磁子500rpm攪拌1h,靜置待表機氣泡基本消失后,冷凍干燥。稱取納米粒36mg溶于水200μL中,作為內水相;另取按輔料比1:15PLGA(PLA:PGA=50:50,Mr=6000)溶于二氯甲烷4mL中作為油相,探頭超聲,充分乳化后按1:2(PLGA:PVA)加入1%PVA溶液,以10000r/min的轉速乳化3min,磁子500rpm攪拌1h,靜置待表機氣泡基本消失后,離心后用蒸餾水洗滌3次,收集微球,冷凍干燥,即得。

實施例5

室溫下制備殼聚糖的1%醋酸溶液,pH值為4~5,用0.22μm濾紙過濾。TPP溶于雙蒸水,pH值為7~8,用0.22μm濾紙過濾。取殼聚糖醋酸溶液4mL,加入可的松20mg和適量TPP溶液直至有乳光出現。凍干。將納米粒按照1:5的比例(BSA:CS)邊攪拌邊加入到CS醋酸溶液中。分散1h,邊攪拌邊按5:1(CS:戊二醛)加入1%(v/v)戊二醛,固化1h。噴干。氣壓40ml/h,進口溫度120℃,蠕動泵速度20%。

實施例6

室溫下制備殼聚糖的1%醋酸溶液,pH值為4~5,用0.22μm濾紙過濾。TPP溶于雙蒸水,pH值為7~8,用0.22μm濾紙過濾。取殼聚糖醋酸溶液4mL,加入馬錢子堿20mg與適量TPP溶液直至有乳光出現。凍干。稱取納米粒36mg溶于水200μL中,作為內水相;另按1:9(CS:PLGA)取PLGA(PLA:PGA=50:50,Mr=6000)溶于二氯甲烷4mL中作為油相,探頭超聲,充分乳化后按1:1.5(PLGA:PVA)加入1%PVA溶液,以5000r/min的轉速乳化3min,磁子500rpm攪拌1h,靜置待表機氣泡基本消失后,離心后用蒸餾水洗滌3次,收集微球,冷凍干燥,即得。

實施例7

稱取馬錢子堿20mg溶于水200μL中,作為內水相;另取PLGA(PLA:PGA=50:50,Mr=6000)330mg溶于二氯甲烷4mL中作為油相,探頭超聲,充分乳化后按1:1.5(PLGA:PVA)加入1%PVA溶液,以23000r/min的轉速乳化3min,磁子500rpm攪拌1h,靜置待表機氣泡基本消失后,冷凍干燥。稱取納米粒36mg溶于水200μL中,作為內水相;另取按輔料比1:9PLGA(PLA:PGA=50:50,Mr=6000)溶于二氯甲烷4mL中作為油相,探頭超聲,充分乳化后按1:2(PLGA:PVA)加入1%PVA溶液,以10000r/min的轉速乳化3min,磁子500rpm攪拌1h,靜置待表機氣泡基本消失后,離心后用蒸餾水洗滌3次,收集微球,冷凍干燥,即得。

實施例8載納米粒的微球系統粒徑的測定

試驗樣品:根據本發明實施例1、2、3、4、5、6、7方法制備的微球。

實驗儀器:激光粒徑測定儀

實驗方法:稱取適當實驗樣品,使用激光粒度測定儀進行測定。

結果如表1所示。

載納米粒的微球系統粒徑的測定結果顯示本發明所述納米粒粒徑范圍為100-500nm,微球的粒徑范圍為1-30μm。

表1載納米粒的微球系統粒徑的測定結果

實施例9載納米粒的微球系統載藥量和包封率的測定

試驗樣品:根據本發明實施例1、2、3、4、5、6、7方法制備的微球。

實驗試劑:NaOH、HCL和乙腈

實驗儀器:高效液相色譜儀、渦旋儀、離心機、超聲清洗機

實驗方法:精密稱取實驗樣品約10mg,加入10mL?0.1M?HCL溶液中,超聲3h,進高效液相色譜儀測定樣品。

實驗結果如表2所示。結果表明,各種微球的包封率均能達到85%以上,說明組成微球的這些材料對于所選藥物具有良好的吸附及包裹作用。

表2載納米粒的微球系統載藥量和包封率的測定結果

? 實施例1 實例例2 實施例3 實施例4 實施例5 實施例6 實施例7 載藥量 2.34% 3.27% 5.31% 2.41% 6.54% 4.65% 3.01 包封率 87.36% 94.57% 96.32% 88.62% 89.69% 92.58% 86.42

實施例10載納米粒的微球系統突釋和釋放曲線的測定

試驗樣品:根據本發明實施例1、2、3、4、5、6、7方法制備的微球。

實驗試劑:PBS溶液

實驗儀器:高效液相色譜儀、渦漩儀、離心機、水浴振蕩器

實驗方法:精密稱取含藥微球10mg置10mL離心管中,加入10mL緩沖液,置于恒溫水浴振蕩器中,在100rpm振蕩速度,37℃±0.5℃溫度條件下進行微球的體外釋放度測定。

取樣方法:分別在0.5、1、1.5、2、4、6、8、12、24、36、48、60、72、84、96、120h取出5mL溶液,并補充同等體積的PBS溶液。

結果如圖1所示。結果表明,這些材料具有較好的的抑制突釋的作用和良好的緩釋作用。

實施例11載納米粒的微球系統外觀形態的考察

試驗樣品:根據本發明實施例1、2、3、4、5、6、7方法制備的微球。

實驗儀器:掃描電鏡

實驗方法:取微球少許灑于樣品臺上用導電膠固定后噴金,用掃描電鏡觀察形態。結果如圖2所示。

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