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一種干眼動物模型的建立方法.pdf

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一種 動物 模型 建立 方法
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摘要
申請專利號:

CN201710094351.7

申請日:

20170221

公開號:

CN106857274A

公開日:

20170620

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01K1/03 主分類號: A01K1/03
申請人: 廈門大學
發明人: 李煒,李三明,劉祖國,寧可,郭俞利,周晶
地址: 361000 福建省廈門市思明南路422號
優先權: CN201710094351A
專利代理機構: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 代理人: 張松亭;姜謐
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710094351.7

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種干眼動物模型的建立方法,其所用裝置包括一盒狀本體和一蓋設在盒狀本體上的上蓋,盒狀本體內裝有適量對鼠類不產生化學損害的液體,液體的深度不超過鼠類的體長,液面以上設有供鼠類站立的至少一支撐桿;上蓋上設有一固體食物放置區和一喂水區,以供鼠類正常飲食;具體包括如下步驟:(1)將鼠類實驗動物放在支撐桿上,蓋好上蓋,放置固體食物和飲用水,并定期更換所述液體;(2)使上述鼠類實驗動物在該裝置中每天站立,站立的時間即為睡眠剝奪時間,站立結束后將該鼠類實驗動物放入普通飼養籠中休息連續重復該步驟,即可得干眼動物模型。本發明制作簡單,可重復性高,模型穩定。

權利要求書

1.一種干眼動物模型的建立方法,其特征在于:其所用裝置包括一盒狀本體和一蓋設在盒狀本體上的上蓋,盒狀本體內裝有適量對鼠類不產生化學損害的液體,液體的深度不超過鼠類的體長,液面以上設有供鼠類站立的至少一支撐桿;上蓋上設有一固體食物放置區和一喂水區,以供鼠類正常飲食;具體包括如下步驟:(1)將鼠類實驗動物放在支撐桿上,蓋好上蓋,放置固體食物和飲用水,并定期更換所述液體;(2)使上述鼠類實驗動物在該裝置中每天站立1~24h,站立的時間即為睡眠剝奪時間,站立結束后將該鼠類實驗動物放入普通飼養籠中休息,休息期間保持安靜,避免打擾鼠類實驗動物休息,連續重復該步驟1~100d,即可得干眼動物模型。2.如權利要求1所述的建立方法,其特征在于:所述支撐桿的橫截面為圓形,直徑為0.01~10cm。3.如權利要求1所述的建立方法,其特征在于:所述支撐桿的材質為木質、竹制、塑料、鐵質或不銹鋼。4.如權利要求1所述的建立方法,其特征在于:所述支撐桿相對所述盒狀本體固定。5.如權利要求1所述的建立方法,其特征在于:所述液體為水。6.如權利要求5所述的建立方法,其特征在于:所述液體為普通自來水、純水或超純水。7.如權利要求1所述的建立方法,其特征在于:所述液面于支撐桿的距離為1~5cm。8.如權利要求1所述的建立方法,其特征在于:所述步驟(1)的定期更換的時間為1~2d。

說明書

技術領域

本發明屬于醫用動物模型技術領域,具體涉及一種干眼動物模型的建立方法。

背景技術

干眼是指由于淚液質和量及動力學的異常而導致淚膜不穩定和/或眼表面的異常,并伴有眼部不適癥狀的一類疾病。干眼可以分為:蒸發過強型干眼、水液缺乏型干眼、粘蛋白異常型干眼、淚液動力學異常型干眼及混合型干眼。臨床調查顯示,干眼是目前常見的眼表疾病,并可繼發引起角膜炎、角膜新生血管以及角膜潰瘍等,嚴重影響人們的生活質量和工作效率。干眼發病的共同病理生理特征有眼表上皮屏障破壞、淚液減少、結膜杯狀細胞減少、眼表上皮鱗狀上皮化生等。由于干眼發病機制復雜且具有多樣性,目前關于干眼的發病機制、診斷和治療的一系列基礎以及臨床問題尚有待進一步深入研究。

動物模型的建立是研究干眼的發病機制,探索治療方法的有效且實用的手段。目前已經報道的干眼動物模型的建立方法包括:通過營養因素、環境因素、毒性物質、藥物作用、改變動物性激素分泌水平、去除淚腺或眼表的神經支配、誘導淚腺產生自身免疫反應、手術摘除淚腺以及轉基因動物等。這些干眼動物模型的建立往往需要較高的技術條件或較長的時間,并且變異性較大。不同動物模型的使用均具有一定的局限性,與臨床實際情況有一定差距。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術缺陷,提供一種干眼動物模型的建立方法。

本發明的技術方案如下:

一種干眼動物模型的建立方法,其所用裝置包括一盒狀本體和一蓋設在盒狀本體上的上蓋,盒狀本體內裝有適量對鼠類不產生化學損害的液體,液體的深度不超過鼠類的體長,液面以上設有供鼠類站立的至少一支撐桿;上蓋上設有一固體食物放置區和一喂水區,以供鼠類正常飲食;具體包括如下步驟:

(1)將鼠類實驗動物放在支撐桿上,蓋好上蓋,放置固體食物和飲用水,并定期更換所述液體;

(2)使上述鼠類實驗動物在該裝置中每天站立1~24h,站立的時間即為睡眠剝奪時間,站立結束后將該鼠類實驗動物放入普通飼養籠中休息,休息期間保持安靜,避免打擾鼠類實驗動物休息,連續重復該步驟1~100d,即可得干眼動物模型。

在本發明的一個優選實施方案中,所述支撐桿的橫截面為圓形,直徑為0.01~10cm。

在本發明的一個優選實施方案中,所述支撐桿的材質為木質、竹制、塑料、鐵質或不銹鋼。

在本發明的一個優選實施方案中,所述支撐桿相對所述盒狀本體固定。

在本發明的一個優選實施方案中,所述液體為水。

進一步優選的,所述液體為普通自來水、純水或超純水。

在本發明的一個優選實施方案中,所述液面于支撐桿的距離為1~5cm。

在本發明的一個優選實施方案中,所述步驟(1)的定期更換的時間為1~2d。

本發明的有益效果:

1、本發明讓鼠類實驗動物站在離水面較近的支撐桿上,動物需要用一定的腳握力才能在支撐桿上保持平衡,在動物進入快速動眼睡眠時,全身肌緊張性下降,隨即從支撐桿上滑落,使得面部沾到或浸到支撐桿下方的水面而突然驚醒,此行為可反復發生,選擇性破壞了動物的快速動眼睡眠,造成睡眠剝奪。

2、本發明制作簡單,可重復性高,模型穩定。

3、本發明建立的干眼動物模型可以嚴格控制睡眠缺乏的時間,利于干眼病程的研究,且誘導因素單一可控,可避免其他影響因素對實驗結果產生影響。

4、本發明在模型誘導過程中,模型動物逐漸出現眼表上皮屏障破壞的特征性改變:包括角膜上皮細胞減少(通過HE染色、熒光素鈉著色等方法證明)、細胞排列紊亂、細胞連接減少(通過細胞連接標志物的免疫組織化學等方法證明)、上皮細胞增殖能力降低(通過細胞增殖能力標志物的免疫組織化學等方法證明)。

5、本發明在模型誘導過程中,模型動物結膜上皮細胞、角膜上皮細胞逐漸出現鱗狀上皮化生的病理學特征改變:包括細胞正常分化標志物如結膜上皮特異性標志物角蛋白K19表達降低,并出現異常分化標志物的陽性表達,如皮膚上皮細胞特異性標志物角蛋白K10的表達。

6、本發明在模型誘導過程中,模型動物結膜上皮細胞中的杯狀細胞逐漸減少,可以用特異性標志物MUC5AC免疫組織染色證實。

8、本發明在模型誘導過程中,模型動物角膜上皮細胞表層出現凋亡細胞,且其數量逐漸增加。

9、本發明在模型誘導過程中,模型動物水性淚液分泌隨時間延長而逐漸減少。

10、本發明建立的模型的用途在于通過睡眠缺乏誘導干眼模型,有利于干眼發病機制的研究;用于對干眼治療相關藥物及方案進行篩選、鑒定;用于睡眠剝奪或睡眠缺乏相關疾病的病理機制以及治療方面的研究。

附圖說明

圖1為本發明所用裝置的結構示意圖。

圖2為本發明實施例1中睡眠剝奪不同時間后小鼠眼表的熒光染色圖。

圖3為本發明實施例1中睡眠剝奪不同時間后小鼠的水性淚液分泌情況圖。

圖4為本發明實施例1中睡眠剝奪不同時間后小鼠的角膜上皮表面掃描電鏡照片。

圖5為本發明實施例1中睡眠剝奪不同時間后小鼠的角膜上皮細胞凋亡檢測圖。

圖6為本發明實施例1中睡眠剝奪不同時間后小鼠的角膜上皮細胞表型檢測圖。

具體實施方式

以下通過具體實施方式結合附圖對本發明的技術方案進行進一步的說明和描述。

實施例1:

一種干眼動物模型的建立方法,其所用裝置(如圖1所示)包括一盒狀本體和一蓋設在盒狀本體上的上蓋,盒狀本體內裝有適量水,水的深度不超過鼠類的體長,水面以上1~5cm設有供小鼠站立的二支撐桿(相對所述盒狀本體固定);上蓋上設有一固體食物放置區和一喂水區,以供小鼠正常飲食;具體包括如下步驟:

(1)將小鼠放在支撐桿上,蓋好上蓋,放置固體食物和飲用水,并每隔1~2d更換水,以保持清潔;

(2)使小鼠在該裝置中每天站立,站立的時間即為睡眠剝奪時間,每天下午13:00-17:00站立結束后將該鼠類實驗動物放入普通飼養籠中休息4h,休息期間保持安靜,避免打擾小鼠休息,其余時間均進行睡眠剝奪,睡眠剝奪不同時間后,如1天,3天,5天等,給小鼠進行眼表熒光染色、淚液分泌檢測、淚膜破裂時間檢測,判斷小鼠干眼情況,即可得干眼動物模型。

具體結果如圖2至圖6所示,圖2為睡眠剝奪不同時間后小鼠眼表的熒光染色,提示隨著睡眠剝奪時間的延長,小鼠角膜上皮的熒光著色越來越多。圖3為睡眠剝奪不同時間后小鼠的水性淚液分泌情況,提示睡眠剝奪2天后,小鼠的水性淚液分泌即下降近50%,并維持在低分泌水平。圖4為睡眠剝奪不同時間后小鼠的角膜上皮表面掃描電鏡觀察,提示隨著睡眠剝奪時間的延長,小鼠角膜上皮表面的微絨毛越來越短且越來越稀少。圖5為睡眠剝奪不同時間后小鼠的角膜上皮細胞凋亡檢測,提示隨著睡眠剝奪時間的延長,小鼠角膜上皮細胞的凋亡呈增加趨勢。圖6為睡眠剝奪不同時間后小鼠的角膜上皮細胞表型檢測,提示隨著睡眠剝奪時間的延長,小鼠角膜上皮細胞K10的表達逐漸增強,表現為鱗狀上皮化生。

以上所述,僅為本發明的較佳實施例而已,故不能依此限定本發明實施的范圍,即依本發明專利范圍及說明書內容所作的等效變化與修飾,皆應仍屬本發明涵蓋的范圍內。

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