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一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法.pdf

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一種 根莖 增重 明顯 三倍 體育 方法
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摘要
申請專利號:

CN201610224421.1

申請日:

20160412

公開號:

CN105660421A

公開日:

20160615

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00,A01H1/08 主分類號: A01H4/00,A01H1/08
申請人: 周常
發明人: 周常
地址: 325000 浙江省溫州市甌海區郭溪鎮宋岙底村垅東路107號
優先權: 201610146050X
專利代理機構: 北京富天文博興知識產權代理事務所(普通合伙) 代理人: 劉壽椿
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201610224421.1

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法,包括以下步驟:種子萌發;重力場誘變處理;定向繼代育種;收集得到的菘藍種子經種子萌發處理,得到菘藍幼芽,分為A、B兩組,對A組幼芽,經γ射線源輻照處理,用秋水仙堿溶液對A組幼芽進行染色體加倍處理,篩選四倍體幼芽;而B組則二倍體幼芽;待A組幼芽和B組幼芽進行移栽處理,分別得到A組四倍體植株和B組二倍體植株;以A組四倍體植株為母本,B組二倍體植株為父本,進行有性雜交,即得。本發明育種得到的三倍體植株具有多倍體和雜交種的雙重優勢,且高度不育,固定了雜種優勢,遺傳形狀可以通過保持系得以連續傳承,沒有后代分離的問題。

權利要求書

1.一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法,其特征在于,包括以下步驟:步驟I,種子萌發:精選菘藍種子,用消毒水清洗3次~5次,然后在35℃~50℃熱水中浸泡1h~2h,撈出,移植到液體營養培養基中,在溫度為25℃~30℃、培養基轉速為15r/min~30r/min的條件下進行暗培養,出芽后,在溫度為28℃~33℃、光照強度為2500lx~3200lx的條件下每天光照培養13h~16h,直至得到芽長為5mm~8mm的菘藍幼芽;步驟II,重力場誘導:將經步驟I得到的菘藍幼芽移植到重力場中,進行重力場誘變育種處理,連續誘導3天~5天,篩選根須茂盛、根莖增重明顯的誘變菘藍幼苗,再移入MS培養基中,培養20天~30天,得到誘變菘藍植株;步驟III,定向繼代育種:將經步驟II篩選過的誘變菘藍植株移栽到大田中,給予正常光照、水分及田間管理,使用人工自花授粉方式繁殖培育,定向繼代育種3代~4代,選出根須茂盛、根莖增重明顯的植株,收集得到菘藍種子;步驟IV,多倍體誘導:步驟III收集得到的菘藍種子經步驟I所述的種子萌發處理,得到菘藍幼芽,分為A、B兩組,對A組幼芽,使用γ射線源進行輻照處理,并使用濃度為450mg/L~550mg/L的秋水仙堿溶液對A組幼芽進行染色體加倍處理,并通過用流式細胞儀進行倍性分析,篩選出2n=28的四倍體幼芽;而B組則為不進行加倍處理的2n=14的二倍體幼芽;步驟V,移栽:將經步驟IV處理的A組幼芽和B組幼芽,分別移栽至MS固體培養基中,給予正常光照和水分培養條件,待幼芽生根定型以后按照組別分別移植到大田中正常生長,分別得到根須茂盛、根莖增重明顯的A組四倍體植株和B組二倍體植株;步驟VI,三倍體育種:將B組二倍體植株進行人工自花授粉,確保種子性狀穩定延續,為保持系,以A組四倍體植株為母本,B組二倍體植株為父本,使用人工異花授粉方式,進行有性雜交,即得根莖增重明顯的三倍體菘藍種子。2.根據權利要求1所述的育種方法,其特征在于,步驟I中,所述消毒水的成分及其配比分別為:次氯酸鈉:二氧化氯=5:1~1:1。3.根據權利要求1所述的育種方法,其特征在于,步驟I中,所述液體營養培養基的成分及濃度為:Co(NH)、300mg/L~500mg/L,KSO、100mg/L~150mg/L,KNO、120mg/L~180mg/L,(NH)HPO、150mg/L~250mg/L,CaCl、50mg/L~80mg/L,ZnSO、50mg/L~100mg/L,NaCl、15mg/L~50mg/L,MgCl、80mg/L~100mg/L,FeCl、20mg/L~50mg/L,Mg(BO)、180mg/L~300mg/L,維生素A、20mg/L~50mg/L,葉酸、10mg/L~30mg/L,煙酰胺、50mg/L~150mg/L,維生素E、20mg/L~60mg/L,苯丙酰胺、100mg/L~180mg/L,半胱氨酸、50mg/L~80mg/L,酪氨酸、30mg/L~80mg/L,甘氨肽、100mg/L~300mg/L,亮氨酸、30mg/L~100mg/L,乳糖、8000mg/L~10000mg/L,蔗糖、5000mg/L~8000mg/L,瓊脂、10000mg/L~20000mg/L。4.根據權利要求3所述的育種方法,其特征在于,所述液體營養培養基的成分及最佳濃度為:Co(NH)、350mg/L,KSO、130mg/L,KNO、150mg/L,(NH)HPO、230mg/L,CaCl、60mg/L,ZnSO、70mg/L,NaCl、30mg/L,MgCl、90mg/L,FeCl、30mg/L,Mg(BO)、270mg/L,維生素A、30mg/L,葉酸、25mg/L,煙酰胺、120mg/L,維生素E、35mg/L,苯丙酰胺、140mg/L,半胱氨酸、60mg/L,酪氨酸、40mg/L,甘氨肽、240mg/L,亮氨酸、60mg/L,乳糖、9500mg/L,蔗糖、6500mg/L,瓊脂、14000mg/L。5.根據權利要求4所述的育種方法,其特征在于,所述液體營養培養基的pH為4.5~6.0。6.根據權利要求1所述的育種方法,其特征在于,步驟II中,所述重力場誘變育種處理的重力場強度為80g~190g。7.根據權利要求1所述的育種方法,其特征在于,步驟IV中,所述輻照處理具體為:使用能量強度為0.85MeV~3.5MeV的γ射線源對A組幼芽輻照2h~4h,連續誘導2天~4天。8.根據權利要求7所述的育種方法,其特征在于,所述γ射線源的劑量率為2000倫琴/小時~8000倫琴/小時。9.根據權利要求1所述的育種方法,其特征在于,步驟IV中,所述染色體加倍處理的時間為48h~72h。

說明書

技術領域

本發明涉及菘藍的育種領域,具體涉及一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法。

背景技術

菘藍是一種常用中藥材,全株均可人藥。其根的中藥名叫板藍根,具有清熱、涼血和解毒之功效,臨床上主要用于治療流感、腮腺炎、乙腦、肝炎等多種疾病。其葉的中藥名叫大青葉,內含有靛藍和靛玉紅,近年來發現靛玉紅有治療慢性粒細胞白血病的作用。因此培育菘藍具有很高的經濟價值和藥用價值。

為了提高板藍根的藥用成分含量,近年來對于菘藍的育種方法研究層出不窮,包括雜交育種、單倍體育種、多倍體育種、物理誘變育種、化學誘變育種、轉基因育種等方法。雜交育種最為廣泛,但存在制種繁瑣、育種年限長、耗費大量人力物力等缺陷。單倍體育種主要采用人工誘導的方法對菘藍花藥、根莖等組織進行培養,取得分化組織,進而形成完整植株,但往往存在存活率低、操作繁瑣等問題。多倍體育種得到的植株大多具有形態巨大、有效成分含量高等特點。誘變育種采用物理誘變和化學誘變的手段破壞植物基因的完整性,使植物產生突變,從而篩選有特殊突變的突變體,但存在突變率低、突變方向難以掌控等問題。轉基因育種主要通過技術手段改變菘藍基因構型序列或者引入外源物種基因,使菘藍獲得其原本不存在的特性,如抗蟲性、抗霉變等優秀性能,但目前轉基因植物由于其存在潛在的遺傳風險性,很難證明對人體的安全性,社會的接受度低,很難推廣。

而采用四倍體菘藍與二倍體菘藍雜交育種,得到三倍體菘藍的育種方法來培育菘藍種子具有很好的優勢。菘藍作為一種藥用植物,入藥成分集中根部和葉系。而三倍體植株具有多倍體和雜交種的雙重優勢,大多具有形態巨大、有效成分含量高等特點,且高度不育,固定了雜種優勢,遺傳形狀可以通過保持系得以連續傳承,沒有后代分離的問題。由此可見,使用多倍體育種技術培養菘藍種子天生自帶優勢。

中國專利CN201110198906.5公開了一種菘藍根外植體器官發生方法,包括毛狀根的形成、分化不定芽、生根,具體選取在MS固體培養基上繼代培養的菘藍試管苗根或10天~15天的無菌種子苗幼根,切成長度為0.5cm~1.0cm的根段,作為培養外植體;外植體接種于液體分化培養基上進行培養,誘導形成毛狀根。但是該專利的菘藍培育方法對環境要求較高,成本較高,難以大規模量產,很難推廣。

中國專利CN201410110703.X公開了菘藍12C6+離子束輻射育種方法,包括以下步驟:(1)依據育種目標選擇了兩類親本材料:一是從地方品種中選出的抗逆性較強的地方種質;二是從安徽菘藍種質中選出育種系;(2)將兩類親本材料進行正反交后篩選留種;(3)種子用溫水浸泡后,干燥或自然風干,得到干燥的種子;(4)將籽粒飽滿的干燥的種子浸泡后涼去表面水跡,以12C6+離子束照射樣品,得到輻照種子;(5)將輻照種子種植于田間,形成第一代群體,以原始親本為對照精選200個變異單株;(6)將變異單株繼續種植,從第二代單株收獲留種,并連續留種選育至三~四代;(7)對優良突變品系進行鑒定試驗。但是該專利的育種方法的突變率低,成活率低,需要大量的種子進行離子束誘變,人力物力耗費極大。

因此,在大量實驗的基礎上,將幾種育種方法結合起來,才能更好的縮短育種年限、提高育種品質,得到根莖增重明顯的三倍體菘藍品種。

發明內容

本發明針對上述問題,提供一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法。

本發明解決上述問題所采用的技術方案是:

一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法,包括以下步驟:

步驟I,種子萌發:精選菘藍種子,用消毒水清洗3次~5次,然后在35℃~50℃熱水中浸泡1h~2h,撈出,移植到液體營養培養基中,在溫度為25℃~30℃、培養基轉速為15r/min~30r/min的條件下進行暗培養,出芽后,在溫度為28℃~33℃、光照強度為2500lx~3200lx的條件下每天光照培養13h~16h,直至得到芽長為5mm~8mm的菘藍幼芽;

步驟II,重力場誘導:將經步驟I得到的菘藍幼芽移植到重力場中,進行重力場誘變育種處理,連續誘導3天~5天,篩選根須茂盛、根莖增重明顯的誘變菘藍幼苗,再移入MS培養基中,培養20天~30天,得到誘變菘藍植株;

步驟III,定向繼代育種:將經步驟II篩選過的誘變菘藍植株移栽到大田中,給予正常光照、水分及田間管理,使用人工自花授粉方式繁殖培育,定向繼代育種3代~4代,選出根須茂盛、根莖增重明顯的植株,收集得到菘藍種子;

步驟IV,多倍體誘導:步驟III收集得到的菘藍種子經步驟I所述的種子萌發處理,得到菘藍幼芽,分為A、B兩組,對A組幼芽,使用γ射線源進行輻照處理,并使用濃度為450mg/L~550mg/L的秋水仙堿溶液對A組幼芽進行染色體加倍處理,并通過用流式細胞儀進行倍性分析,篩選出2n=28的四倍體幼芽;而B組則為不進行加倍處理的2n=14的二倍體幼芽;

步驟V,移栽:將經步驟IV處理的A組幼芽和B組幼芽,分別移栽至MS固體培養基中,給予正常光照和水分培養條件,待幼芽生根定型以后按照組別分別移植到大田中正常生長,分別得到根須茂盛、根莖增重明顯的A組四倍體植株和B組二倍體植株;

步驟VI,三倍體育種:將B組二倍體植株進行人工自花授粉,確保種子性狀穩定延續,為保持系,以A組四倍體植株為母本,B組二倍體植株為父本,使用人工異花授粉方式,進行有性雜交,即得根莖增重明顯的三倍體菘藍種子。

進一步地,步驟I中,消毒水的成分及其配比分別為:次氯酸鈉:二氧化氯=5:1~1:1。

進一步地,步驟I中,液體營養培養基的成分及濃度為:Co(NH2)2、300mg/L~500mg/L,K2SO4、100mg/L~150mg/L,KNO3、120mg/L~180mg/L,(NH4)2HPO4、150mg/L~250mg/L,CaCl2、50mg/L~80mg/L,ZnSO4、50mg/L~100mg/L,NaCl、15mg/L~50mg/L,MgCl2、80mg/L~100mg/L,FeCl2、20mg/L~50mg/L,Mg(BO2)2、180mg/L~300mg/L,維生素A、20mg/L~50mg/L,葉酸、10mg/L~30mg/L,煙酰胺、50mg/L~150mg/L,維生素E、20mg/L~60mg/L,苯丙酰胺、100mg/L~180mg/L,半胱氨酸、50mg/L~80mg/L,酪氨酸、30mg/L~80mg/L,甘氨肽、100mg/L~300mg/L,亮氨酸、30mg/L~100mg/L,乳糖、8000mg/L~10000mg/L,蔗糖、5000mg/L~8000mg/L,瓊脂、10000mg/L~20000mg/L。

更進一步地,液體營養培養基的成分及最佳濃度為:Co(NH2)2、350mg/L,K2SO4、130mg/L,KNO3、150mg/L,(NH4)2HPO4、230mg/L,CaCl2、60mg/L,ZnSO4、70mg/L,NaCl、30mg/L,MgCl2、90mg/L,FeCl2、30mg/L,Mg(BO2)2、270mg/L,維生素A、30mg/L,葉酸、25mg/L,煙酰胺、120mg/L,維生素E、35mg/L,苯丙酰胺、140mg/L,半胱氨酸、60mg/L,酪氨酸、40mg/L,甘氨肽、240mg/L,亮氨酸、60mg/L,乳糖、9500mg/L,蔗糖、6500mg/L,瓊脂、14000mg/L。

更進一步地,步驟I中,所述液體營養培養基的pH為4.5~6.0。

進一步地,步驟II中,重力場誘變育種處理的重力場強度為80g~190g。

進一步地,步驟IV中,輻照處理具體為:使用能量強度為0.85MeV~3.5MeV的γ射線源對A組幼芽輻照2h~4h,連續誘導2天~4天。

更進一步地,γ射線源的劑量率為2000倫琴/小時~8000倫琴/小時。

進一步地,步驟IV中,染色體加倍處理的時間為48h~72h。

本發明的優點是:

1.本發明采用物理誘導與多倍體育種技術聯合育種,得到的種子產量豐富、顆粒飽滿、形狀規則,生長出來的三倍體菘藍植株矮粗壯實、根系繁茂、性狀優良,有效成分含量高,體現出三倍體植株根莖膨大的優良特性,且高度不育,固定了雜種優勢,沒有后代分離的問題;

2.本發明采用強重力場物理誘導方法能夠有效誘使根部向豎直縱深方向發育,并且葉片部分進行充分的光合作用為根部膨大發育提供了必要的能量來源與物質積累;

3.本發明采用的液體培養基,富含菘藍發育所必須的多種無機鹽、維生素、氨基酸、多肽、酰胺等物質,并且含有大量的糖分作為能量物質,對于促進幼苗的萌發與繁殖起到了重要的促進作用,同時該液體培養基做法簡單、使用便捷,能夠針對特定需求而廣泛調節,適用性好,營養價值高,無毒無害。

具體實施方式

以下對本發明的實施例進行詳細說明,但是本發明可以由權利要求限定和覆蓋的多種不同方式實施。

實施例1

一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法

包括以下步驟:

步驟I,種子萌發:精選菘藍種子,用次氯酸鈉:二氧化氯為5:1的消毒水清洗3次,然后在35℃熱水中浸泡1h,撈出,移植到液體營養培養基中,在溫度為25℃、培養基轉速為15r/min的條件下進行暗培養,出芽后,在溫度為28℃、光照強度為2500lx的條件下每天光照培養13h,直至得到芽長為5mm的菘藍幼芽。其中液體營養培養基的成分及濃度為:Co(NH2)2、300mg/L,K2SO4、100mg/L,KNO3、120mg/L,(NH4)2HPO4、150mg/L,CaCl2、50mg/L,ZnSO4、50mg/L,NaCl、15mg/L,MgCl2、80mg/L,FeCl2、20mg/L,Mg(BO2)2、180mg/L,維生素A、20mg/L,葉酸、10mg/L,煙酰胺、50mg/L,維生素E、20mg/L,苯丙酰胺、100mg/L,半胱氨酸、50mg/L,酪氨酸、30mg/L,甘氨肽、100mg/L,亮氨酸、30mg/L,乳糖、8000mg/L,蔗糖、5000mg/L,瓊脂、10000mg/L。其中液體營養培養基的pH為4.5。

步驟II,重力場誘導:將經步驟I得到的菘藍幼芽移植到重力場中,在重力場強度為80g的條件下,進行重力場誘變育種處理,連續誘導3天,篩選根須茂盛、根莖增重明顯的誘變菘藍幼苗,再移入MS培養基中,培養20天,得到誘變菘藍植株。

步驟III,定向繼代育種:將經步驟II篩選過的誘變菘藍植株移栽到大田中,給予正常光照、水分及田間管理,使用人工自花授粉方式繁殖培育,定向繼代育種3代,選出根須茂盛、根莖增重明顯的植株,收集得到菘藍種子。

步驟IV,多倍體誘導:步驟III收集得到的菘藍種子經步驟I所述的種子萌發處理,得到菘藍幼芽,分為A、B兩組,對A組幼芽,使用能量強度為0.85MeV的γ射線源對A組幼芽輻照2h,連續誘導2天,并使用濃度為450mg/L的秋水仙堿溶液對A組幼芽進行染色體加倍處理48h,并通過用流式細胞儀進行倍性分析,篩選出2n=28的四倍體幼芽;而B組則為不進行加倍處理的2n=14的二倍體幼芽。其中γ射線源的劑量率為2000倫琴/小時。

步驟V,移栽:將經步驟IV處理的A組幼芽和B組幼芽,分別移栽至MS固體培養基中,給予正常光照和水分培養條件,待幼芽生根定型以后按照組別分別移植到大田中正常生長,分別得到根須茂盛、根莖增重明顯的A組四倍體植株和B組二倍體植株。

步驟VI,三倍體育種:將B組二倍體植株進行人工自花授粉,確保種子性狀穩定延續,為保持系,以A組四倍體植株為母本,B組二倍體植株為父本,使用人工異花授粉方式,進行有性雜交,即得根莖增重明顯的三倍體菘藍種子。

實施例2

一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法

包括以下步驟:

步驟I,種子萌發:精選菘藍種子,用次氯酸鈉:二氧化氯為1:1的消毒水清洗5次,然后在50℃熱水中浸泡2h,撈出,移植到液體營養培養基中,在溫度為30℃、培養基轉速為30r/min的條件下進行暗培養,出芽后,在溫度為33℃、光照強度為3200lx的條件下每天光照培養16h,直至得到芽長為8mm的菘藍幼芽。其中液體營養培養基的成分及濃度為:Co(NH2)2、500mg/L,K2SO4、150mg/L,KNO3、180mg/L,(NH4)2HPO4、250mg/L,CaCl2、80mg/L,ZnSO4、100mg/L,NaCl、50mg/L,MgCl2、100mg/L,FeCl2、50mg/L,Mg(BO2)2、300mg/L,維生素A、50mg/L,葉酸、30mg/L,煙酰胺、150mg/L,維生素E、60mg/L,苯丙酰胺、180mg/L,半胱氨酸、80mg/L,酪氨酸、80mg/L,甘氨肽、300mg/L,亮氨酸、100mg/L,乳糖、10000mg/L,蔗糖、8000mg/L,瓊脂、20000mg/L。其中液體營養培養基的pH為6.0。

步驟II,重力場誘導:將經步驟I得到的菘藍幼芽移植到重力場中,在重力場強度為190g的條件下,進行重力場誘變育種處理,連續誘導5天,篩選根須茂盛、根莖增重明顯的誘變菘藍幼苗,再移入MS培養基中,培養30天,得到誘變菘藍植株。

步驟III,定向繼代育種:將經步驟II篩選過的誘變菘藍植株移栽到大田中,給予正常光照、水分及田間管理,使用人工自花授粉方式繁殖培育,定向繼代育種4代,選出根須茂盛、根莖增重明顯的植株,收集得到菘藍種子。

步驟IV,多倍體誘導:步驟III收集得到的菘藍種子經步驟I所述的種子萌發處理,得到菘藍幼芽,分為A、B兩組,對A組幼芽,使用能量強度為3.5MeV的γ射線源對A組幼芽輻照4h,連續誘導4天,并使用濃度為550mg/L的秋水仙堿溶液對A組幼芽進行染色體加倍處理72h,并通過用流式細胞儀進行倍性分析,篩選出2n=28的四倍體幼芽;而B組則為不進行加倍處理的2n=14的二倍體幼芽。其中γ射線源的劑量率為8000倫琴/小時。

步驟V,移栽:將經步驟IV處理的A組幼芽和B組幼芽,分別移栽至MS固體培養基中,給予正常光照和水分培養條件,待幼芽生根定型以后按照組別分別移植到大田中正常生長,分別得到根須茂盛、根莖增重明顯的A組四倍體植株和B組二倍體植株。

步驟VI,三倍體育種:將B組二倍體植株進行人工自花授粉,確保種子性狀穩定延續,為保持系,以A組四倍體植株為母本,B組二倍體植株為父本,使用人工異花授粉方式,進行有性雜交,即得根莖增重明顯的三倍體菘藍種子。

實施例3

一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法

包括以下步驟:

步驟I,種子萌發:精選菘藍種子,用次氯酸鈉:二氧化氯為3:1的消毒水清洗4次,然后在43℃熱水中浸泡1.5h,撈出,移植到液體營養培養基中,在溫度為28℃、培養基轉速為23r/min的條件下進行暗培養,出芽后,在溫度為31℃、光照強度為2850lx的條件下每天光照培養15h,直至得到芽長為6.5mm的菘藍幼芽。其中液體營養培養基的成分及濃度為:Co(NH2)2、350mg/L,K2SO4、130mg/L,KNO3、150mg/L,(NH4)2HPO4、230mg/L,CaCl2、60mg/L,ZnSO4、70mg/L,NaCl、30mg/L,MgCl2、90mg/L,FeCl2、30mg/L,Mg(BO2)2、270mg/L,維生素A、30mg/L,葉酸、25mg/L,煙酰胺、120mg/L,維生素E、35mg/L,苯丙酰胺、140mg/L,半胱氨酸、60mg/L,酪氨酸、40mg/L,甘氨肽、240mg/L,亮氨酸、60mg/L,乳糖、9500mg/L,蔗糖、6500mg/L,瓊脂、14000mg/L。其中液體營養培養基的pH為5.5。

步驟II,重力場誘導:將經步驟I得到的菘藍幼芽移植到重力場中,在重力場強度為135g的條件下,進行重力場誘變育種處理,連續誘導4天,篩選根須茂盛、根莖增重明顯的誘變菘藍幼苗,再移入MS培養基中,培養25天,得到誘變菘藍植株。

步驟III,定向繼代育種:將經步驟II篩選過的誘變菘藍植株移栽到大田中,給予正常光照、水分及田間管理,使用人工自花授粉方式繁殖培育,定向繼代育種4代,選出根須茂盛、根莖增重明顯的植株,收集得到菘藍種子。

步驟IV,多倍體誘導:步驟III收集得到的菘藍種子經步驟I所述的種子萌發處理,得到菘藍幼芽,分為A、B兩組,對A組幼芽,使用能量強度為2.2MeV的γ射線源對A組幼芽輻照3h,連續誘導3天,并使用濃度為500mg/L的秋水仙堿溶液對A組幼芽進行染色體加倍處理60h,并通過用流式細胞儀進行倍性分析,篩選出2n=28的四倍體幼芽;而B組則為不進行加倍處理的2n=14的二倍體幼芽。其中γ射線源的劑量率為5000倫琴/小時。

步驟V,移栽:將經步驟IV處理的A組幼芽和B組幼芽,分別移栽至MS固體培養基中,給予正常光照和水分培養條件,待幼芽生根定型以后按照組別分別移植到大田中正常生長,分別得到根須茂盛、根莖增重明顯的A組四倍體植株和B組二倍體植株。

步驟VI,三倍體育種:將B組二倍體植株進行人工自花授粉,確保種子性狀穩定延續,為保持系,以A組四倍體植株為母本,B組二倍體植株為父本,使用人工異花授粉方式,進行有性雜交,即得根莖增重明顯的三倍體菘藍種子。

實驗例

對實施例1~3所制的三倍體植株和普通市售菘藍植株的根莖指標(主根長度、根須數目、莖部直徑、根莖干重)和植株高度、有效成分含量等指標進行測試,測試結果如表1所示。

表1三倍體植株測試結果

結論:實施例制備得到植株的主根平均長度為65mm,根須平均直徑為6.4mm,莖部直徑平均為27mm,根莖部平均干重為7.3g,植株平均高度為86.3cm,所含有效成分平均值為3.78%,相對于普通市售菘藍植株分別提高了50.3%,51.6%,43.9%,69.0%,74.0%和40.6%。通過三倍體育種方法得到的菘藍植株具有明顯的優勢,適合于大面積推廣播種。

以上僅為本發明的優選實施例而已,并不用于限制本發明,對于本領域的技術人員來說,本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內,所作的任何修改、等同替換、改進等,均應包含在本發明的保護范圍之內。

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