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一種人參葉芽誘導培養基及培養方法.pdf

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一種 人參 葉芽 誘導 培養基 培養 方法
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摘要
申請專利號:

CN201610011309.X

申請日:

20160109

公開號:

CN105660393A

公開日:

20160615

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 佛山市金藍領教育科技有限公司
發明人: 何志鏗
地址: 528000 廣東省佛山市禪城區同華東一路40號二層之八
優先權: CN201610011309A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201610011309.X

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種人參葉芽誘導培養基和培養方法,屬于人參組織培養技術領域,培養基以MS培養基為基礎培養基,并添加有2ip(異戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、瓊脂粉、白砂糖,培養方法包括外植體處理、接種、暗培養和常規培養四個步驟,本發明提供的人參葉芽誘導培養基及培養方法具有誘導率高、褐化率低的優點。

權利要求書

1.一種人參葉芽誘導培養基,其特征在于,其以MS培養基為基礎培養基,并添加有2ip(異戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、瓊脂粉、白砂糖。2.根據權利要求1所述的一種人參葉芽誘導培養基,其特征在于,2ip(異戊烯腺嘌呤)的濃度為2-8mg/L,NAA(萘乙酸)的濃度為0.6-1.0mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的濃度為0.6-1.5mg/L、瓊脂粉的濃度為8-12g/L、白砂糖的濃度為25-35g/L。3.根據權利要求1所述的一種人參葉芽誘導培養基,其特征在于,2ip(異戊烯腺嘌呤)的濃度為4-6mg/L,NAA(萘乙酸)的濃度為0.7-0.9mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的濃度為0.9-1.2mg/L、瓊脂粉的濃度為9-11g/L、白砂糖的濃度為28-32g/L。4.根據權利要求1至3其中之一所述的一種人參葉芽誘導培養基,其特征在于,所述的人參葉芽誘導培養基的pH值為5.5-6.5。5.根據權利要求4所述的一種人參葉芽誘導培養基,其特征在于,所述的人參葉芽誘導培養基的pH值為5.8。6.一種人參葉芽誘導培養方法,其特征在于,其包括以下步驟:S10外植體處理:從生長健康的人參母株上采集正常生長的葉芽作為外植體,進行外植體消毒,切塊;S20接種:將步驟S10中取得的外植體塊接種到人參葉芽誘導培養基中,每塊外植體相互間隔1-1.5厘米;S30暗培養:將步驟S20接種完畢的人參外植體塊置于黑暗環境中培養2-3天,培養溫度為23-27℃;S40常規培養:暗培養結束后將人參外植體塊置于人工氣候箱中進行培養,培養條件如下,光照時間為12/12小時(光照/黑暗),光照強度為1800-2200lux,培養溫度為23-27℃。7.根據權利要求6所述的一種人參葉芽誘導培養方法,其特征在于,所述的步驟S10還包括以下子步驟:步驟S11消毒:將采集回來的花芽用自來水沖洗干凈,用濃度為74-76%酒精浸泡30秒,取出,用無菌水沖洗3-4次,再使用濃度為0.1-0.12%的升汞液浸泡5-10分鐘,浸泡期間不斷輕輕搖晃,在用無菌水沖洗3-4次;步驟S12外植體切塊:將與升汞液接觸的傷口部分切除,并將剩下部分切成3-5毫米見方的外植體塊。

說明書

技術領域

本發明屬于人參組織培養技術領域,特別是涉及一種人參葉芽誘導培養基,還涉及一種人參葉芽誘導培養方法。

背景技術

人參是被子植物門雙子葉植物綱離瓣花亞綱五加科,多年生草本植物,生長于密林,多分布于黑龍江、吉林、遼寧和河北北部深山中,含有10多種人參皂甙,以及人參快醇、多種氨基酸和維生素,是名貴的中草藥材。

人參的快速繁殖多采用組織培養技術,然而現有的組織培養技術外植體誘導率低,已不能滿足日常生產、科研以及物種保護的要求。

發明內容

基于現有技術存在上述問題,本發明提供一種人參葉芽誘導培養基,其以MS培養基為基礎培養基,并添加有2ip(異戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、瓊脂粉、白砂糖,還提供一種人參葉芽誘導培養誘導培養方法,其包括外植體處理、接種、暗培養和常規培養四個步驟,本發明提供的人參葉芽誘導培養基及培養方法具有誘導率高、褐化率低的優點。

一種人參葉芽誘導培養基,其以MS培養基為基礎培養基,并添加有2ip(異戊烯腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、瓊脂粉、白砂糖,2ip(異戊烯腺嘌呤)可以促進細胞分裂分化,配合NAA(萘乙酸)可以更好地誘導葉芽形成愈傷組織,PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚類物質的專一性吸附劑,吸附人參葉芽分泌的酚類物質,可以抑制褐化。

2ip(異戊烯腺嘌呤)的濃度為2-8mg/L,NAA(萘乙酸)的濃度為0.6-1.0mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的濃度為0.6-1.5mg/L、瓊脂粉的濃度為8-12g/L、白砂糖的濃度為25-35g/L。

2ip(異戊烯腺嘌呤)的濃度為4-6mg/L,NAA(萘乙酸)的濃度為0.7-0.9mg/L、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的濃度為0.9-1.2mg/L、瓊脂粉的濃度為9-11g/L、白砂糖的濃度為28-32g/L。

人參葉芽誘導培養基的pH值為5.5-76.5。

人參葉芽誘導培養基的pH值為5.8,微酸性的培養環境更適合人參葉芽誘導,也可以抑制酚類物質發生氧化反應,組成人參愈傷組織褐化死亡。

一種人參葉芽誘導培養方法,其包括以下步驟:

S10外植體處理:從生長健康的人參母株上采集正常生長的葉芽作為外植體,進行外植體消毒,切塊;

S20接種:將步驟S10中取得的外植體塊接種到人參葉芽誘導培養基中,每塊外植體相互間隔1-1.5厘米;

S30暗培養:將步驟S20接種完畢的人參外植體塊置于黑暗環境中培養2-3天,培養溫度為23-27℃;

S40常規培養:暗培養結束后將人參外植體塊置于人工氣候箱中進行培養,培養條件如下,

光照時間為12/12小時(光照/黑暗),光照強度為1800-2200lux,培養溫度為23-27℃。

步驟S10還包括步驟以下子步驟:

步驟S11消毒:將采集回來的花芽用自來水沖洗干凈,用濃度為74-76%酒精浸泡30秒,取出,用無菌水沖洗3-4次,再使用濃度為0.1-0.12%的升汞液浸泡5-10分鐘,浸泡期間不斷輕輕搖晃,在用無菌水沖洗3-4次;

步驟S12外植體切塊:將與升汞液接觸的傷口部分切除,并將剩下部分切成3-5毫米見方的外植體塊。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步描述。

實施例一:配制人參葉芽誘導培養基

根據表1所示的MS培養基配方以及表2所示的人參葉芽誘導培養基配方,制備本發明所述的人參葉芽誘導培養基。

用天平分別稱取MS培養基中的各成分以及2ip、NAA、PVP、瓊脂粉、白砂糖,置于三角瓶中,加入適量純化水,攪拌溶解,定容至1000mL,并調節pH值至5.8。將三角瓶封口,置于高壓滅菌鍋中,于121℃滅菌21min,然后于超凈工作臺中,將人參葉芽誘導培養基分裝至組織培養瓶中,自然冷卻,待其凝固后將組織培養瓶封口,備用。

表1MS培養基的成分及其用量。

表2人參葉芽誘導培養基的成分及其用量。

實施例二:本發明所述的人參葉芽誘導培養基的測試

根據表1所示的MS培養基配方以及表3所示的人參葉芽誘導培養基配方,參照實施例一所述的培養基制備方法,分別制備各試驗組、對照組的人參葉芽誘導培養基。

表3人參葉芽誘導培養基。

從生長健康的人參母株上采集正常生長的葉芽作為外植體,將采集回來的花芽用自來水沖洗干凈,置于超凈工作臺中,用濃度為75%酒精浸泡30秒,取出,用無菌水沖洗4次,再使用濃度為0.1%的升汞液浸泡8分鐘,浸泡期間不斷輕輕搖晃,再用無菌水沖洗4次,將與升汞液接觸的傷口部分切除,并將剩下部分切成5毫米見方的外植體塊。

將外植體塊接種到上述制備好的各試驗組、對照組的人參葉芽誘導培養基中,每塊外植體相互間隔1.2厘米,接種完畢后將人參外植體塊置于黑暗環境中培養2天,培養溫度為25℃。

暗培養結束后將人參外植體塊置于人工氣候箱中進行培養,培養條件如下:光照時間為12/12小時(光照/黑暗),光照強度為2000lux,培養溫度為25℃,培養25天后統計誘導率和褐化率,統計結果如表4所示。

表4人參葉芽誘導培養基測試結果。

注:表中綜合評分y=誘導率b*0.7-褐化率a*0.3。

由表4的試驗結果可知,采用本發明所述的人參葉芽誘導培養基,能夠顯著提高人參葉芽誘導率,并降低其褐化率。從對照組3和試驗組5對比可以看出PVP對人參葉芽誘導組織培養具有一定的抑制褐化的作用,可以將褐化率降低到15%以下;從對照組1、2和試驗組5比較可以看出2ip和NAA配合使用比單獨使用任何一種具有更好的促進效果;同時從試驗結果可以看出PVP的用量超過0.1mg/L后抑制褐化效果不會隨著用量增多而增加;2ip和NAA的用量太多不僅不會造成更好的誘導促進效果,反而因用量太多而影響促進誘導作用。

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