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一種組培金線蓮培養基及其制備方法和應用.pdf

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一種 組培金線蓮 培養基 及其 制備 方法 應用
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摘要
申請專利號:

CN201610055520.1

申請日:

20160127

公開號:

CN105660401A

公開日:

20160615

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 漳州市萌得爾農業科技有限公司
發明人: 潘裕添,陳金妹,黃家福,潘曉明,詹杏熔
地址: 363111 福建省漳州市龍海市程溪鎮改革166號
優先權: CN201610055520A
專利代理機構: 福州智理專利代理有限公司 代理人: 康永輝
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201610055520.1

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種組培金線蓮培養基及其制備方法和應用,一種組培金線蓮培養基,每1000ml所述的組培金線蓮培養基包括0*MS~1*MS基本培養基母液、10~1000μL食用菌罐藏加工預煮液、10~50g蔗糖、50~250g香蕉、6g~8g瓊脂、1.0g~2.0g活性炭,余量為蒸餾水,本發明的優點在于:解決了食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水的排放問題,使食用菌加工企業達到廢水零排放,減少污水處理成本;本發明的培養基能促進組培金線蓮生根發芽,還能縮短組培金線蓮生長周期,食用菌罐藏加工預煮液的使用減少了人工合成激素在組培金線蓮中的應用,使組培金線蓮成為一種綠色有機食品。

權利要求書

1.一種組培金線蓮培養基,包括香蕉、蔗糖、瓊脂以及活性炭,其特征在于:它還包括0*MS~1*MS培養基母液以及食用菌罐藏加工預煮液;每1000ml所述的組培金線蓮培養基包括0*MS~1*MS基本培養基母液、10~1000μL食用菌罐藏加工預煮液、10~50g蔗糖、50~250g香蕉、6g~8g瓊脂、1.0g~2.0g活性炭,余量為蒸餾水,其中0*MS表示不加入基本培養基母液。2.根據權利要求1所述的組培金線蓮培養基的制備,其特征在于:每1000毫升的有機培養基制備步驟如下:(1)制備食用菌罐藏加工預煮液,并量取10~1000μL的食用菌罐藏加工預煮液待用;(2)按照配制0*MS~1*MS基本培養基所需的各種母液的體積,量取MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS鐵鹽母液以及MS有機物母液待用;(3)將步驟(1)中量取的食用菌罐藏加工預煮液與步驟(2)中量取的MS培養基母液進行混合后溶解于蒸餾水中;(4)稱取50~250g香蕉以及1.0g~2.0g活性炭,并將香蕉碾成泥后加入步驟(3)中所得的溶液中,攪拌混勻,之后加入稱好的活性炭,攪拌均勻;(5)在燒杯中加入200~300mL的蒸餾水,將蒸餾水加熱至80~90℃后加入稱好的6g~8g瓊脂,邊攪拌邊加熱至沸騰后瓊脂溶解,待瓊脂溶解之后,繼續加入稱好的10~50g蔗糖,邊攪拌邊加熱至蔗糖溶解,然后將得到的瓊脂與蔗糖的混合溶液加入步驟(4)所得的混合溶液中,攪拌均勻后加蒸餾水定容至1000毫升并加入酸堿調節劑將PH值調至5.0-6.0;(6)將步驟(5)所得到的培養基分裝于組培瓶中,進行高溫高壓滅菌,之后冷卻凝固即可。3.根據權利要求2所述的組培金線蓮培養基的制備,其特征在于:所述食用菌罐藏加工預煮液的制備方法如下:a.收集食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水;b.將收集來的食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水進行離心,離心機的轉速控制在11500-12500rpm之間,離心溫度為15-25℃,離心時間為10-20min,離心之后取上清液;c.將所得的上清液利用降膜蒸發器,降膜蒸發濃縮,得濃縮液;d.在濃縮液中添加變性劑,對濃縮液進行變性,其中所述的變性劑為80~100%的乙醇,且所加入的乙醇與濃縮液的體積比為2:1~6:1;e.對變性后的濃縮液進行過濾,收集濾液;f.將濾液進行旋轉蒸發除去乙醇;g.將旋轉蒸發后所得的溶液利用5-10K的濾膜進行切向流過濾,收集濾出液;h.將步驟g中所得的濾出液進行旋轉蒸發濃縮,濃縮至溶液折光率達到35~55%即可。4.根據權利要求2所述的組培金線蓮的有機培養基的制備,其特征在于:步驟(5)中所述的酸堿調節劑為0.1-0.5mol/L的NaOH溶液或0.1-0.5mol/L的HCl溶液。5.根據權利要求2所述的組培金線蓮培養基的制備,其特征在于:步驟(6)中高溫高壓滅菌的溫度控制在121-125℃,壓力控制在111-115千帕,滅菌時間為15-20分鐘。6.根據權利要求1所述的組培金線蓮培養基的應用,其特征在于:用于培育金線蓮。

說明書

技術領域

本發明涉及一種組培金線蓮培養基及其制備方法和應用。

背景技術

金線蓮(Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl)是蘭科開唇蘭屬地生型多年生草本植物,在我國主要分布于亞熱帶地區,即福建、廣東、廣西、浙江、江西、海南、云南、四川、貴州以及西藏南部等省區。金線蓮是我國傳統的珍貴藥材,可全草入藥,味甘微苦、性平微寒,具有清熱解毒、潤肺止咳和祛風利濕等功效,因此受到醫藥行業的廣泛重視。由于野生資源日趨枯竭,金線蓮已被列為福建省瀕危藥用植物加以保護。但其種子在自然條件下萌發率極低,所以利用人工繁殖對其進行搶救性的保存。目前金線蓮的人工繁殖主要是靠組織培養育苗后進行大田移栽,組織培養的金線蓮大都是利用植物生長激素進行調節促進其生長,然而利用生長激素來調節金線蓮組織培養的傳統方法是不可持續性發展的,存在成本高,影響食品安全等諸多問題,加之,在如今高速的社會發展下,綠色有機食品逐漸成為主流產品,原有的金線蓮組織培養基以及培養方法,已經跟不上人們對綠色食品追求的腳步了。因此,有必要研究出一種綠色環保、無公害且能加速金線蓮生長的培養基來培育金線蓮,以便于達到促進金線蓮快速繁殖的目的,來滿足廣大的市場需求,同時又能夠使培育出的金線蓮達到綠色有機的要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種環保、無公害且能加速金線蓮生長的組培金線蓮培養基及其制備方法和應用。

本發明的目的通過如下技術方案實現:一種組培金線蓮培養基,包括香蕉、蔗糖、瓊脂以及活性炭,它還包括0*MS~1*MS培養基母液以及食用菌罐藏加工預煮液;每1000ml所述的組培金線蓮培養基包括0*MS~1*MS基本培養基母液、10~1000μL食用菌罐藏加工預煮液、10~50g蔗糖、50~250g香蕉、6g~8g瓊脂、1.0g~2.0g活性炭,余量為蒸餾水,其中0*MS表示不加入基本培養基母液。

所述的組培金線蓮培養基的制備,每1000毫升的有機培養基制備步驟如下:

(1)制備食用菌罐藏加工預煮液,并量取10~1000μL的食用菌罐藏加工預煮液待用;

(2)按照配制0*MS~1*MS基本培養基所需的各種母液的體積,量取MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS鐵鹽母液以及MS有機物母液待用;

(3)將步驟(1)中量取的食用菌罐藏加工預煮液與步驟(2)中量取的MS培養基母液進行混合后溶解于蒸餾水中;

(4)稱取50~250g香蕉以及1.0g~2.0g活性炭,并將香蕉碾成泥后加入步驟(3)中所得的溶液中,攪拌混勻,之后加入稱好的活性炭,攪拌均勻;

(5)在燒杯中加入200~300mL的蒸餾水,將蒸餾水加熱至80~90℃后加入稱好的6g~8g瓊脂,邊攪拌邊加熱至沸騰后瓊脂溶解,待瓊脂溶解之后,繼續加入稱好的10~50g蔗糖,邊攪拌邊加熱至蔗糖溶解,然后將得到的瓊脂與蔗糖的混合溶液加入步驟(4)所得的混合溶液中,攪拌均勻后加蒸餾水定容至1000毫升并加入酸堿調節劑將PH值調至5.0-6.0;

(6)將步驟(5)所得到的培養基分裝于組培瓶中,進行高溫高壓滅菌,之后冷卻凝固即可。

所述食用菌罐藏加工預煮液的制備方法如下:

a.收集食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水;

b.將收集來的食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水進行離心,離心機的轉速控制在11500-12500rpm之間,離心溫度為15-25℃,離心時間為10-20min,離心之后取上清液;

c.將所得的上清液利用降膜蒸發器,降膜蒸發濃縮,得濃縮液;

d.在濃縮液中添加變性劑,對濃縮液進行變性,其中所述的變性劑為80~100%的乙醇,且所加入的乙醇與濃縮液的體積比為2:1~6:1;

e.對變性后的濃縮液進行過濾,收集濾液;

f.將濾液進行旋轉蒸發除去乙醇;

g.將旋轉蒸發后所得的溶液利用5-10K的濾膜進行切向流過濾,收集濾出液;

h.將步驟g中所得的濾出液進行旋轉蒸發濃縮,濃縮至溶液折光率達到35~55%即可。

步驟(5)中所述的酸堿調節劑為0.1-0.5mol/L的NaOH溶液或0.1-0.5mol/L的HCl溶液。

步驟(6)中高溫高壓滅菌的溫度控制在121-125℃,壓力控制在111-115千帕,滅菌時間為15-20分鐘。

所述的組培金線蓮培養基的應用,將組培金線蓮培養基用于培育金線蓮。較之現有技術而言,本發明的優點在于:1)食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水往往會富含一些營養物質如氨基酸、礦物質、糖類等,如果將這些廢水經處理后在排放,不僅需要昂貴的污水處理成本,而且造成了一定的資源浪費。本發明將食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水進行處理后,得到食用菌罐藏加工預煮液,將其與MS培養基母液及其他添加物復配制成培金線蓮培養基,將食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水變廢為寶、解決了食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水的排放問題,使食用菌加工企業達到廢水零排放,減少其污水處理成本;2)本發明將食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水進行處理后所得的食用菌罐藏加工預煮液,來取代傳統植物生長調節劑,即能為金線蓮提供除MS培養基以外的營養,同時能促進組培金線蓮生根發芽,還能縮短組培金線蓮生長周期,食用菌罐藏加工預煮液的使用減少了人工合成激素在組培金線蓮中的應用,使組培金線蓮成為一種綠色有機食品;3)本發明制備組培金線蓮培養基的原料易得且價格低廉;4)本發明制備組培金線蓮培養基的制備方法簡單,適用于工業化生產;5)本發明制得的組培金線蓮培養基具有良好的抑菌效果,使得在培育金線蓮的培養基中無需加入殺菌劑,進一步保證了金線蓮的品質。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明內容進行詳細說明:

實施例一:MS母液的配制

1.MS大量元素母液(20X)稱取20升量溶解在1L蒸餾水中。

2.MS微量元素母液(200X)

稱取200升量溶解在1L蒸餾水中。

3.MS鐵鹽母液(200X)

稱取200升量溶解在1L蒸餾水中。

4.MS有機物母液(200X)

稱取200升量溶解在1L蒸餾水中。

實施例二:組培金線蓮培養基的制備

1L組培金線蓮培養基(1)1/2*MS+250μL的食用菌罐藏加工預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭、(2)MS+1000μL的食用菌罐藏加工預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭、(3)1/4*MS+10μL的食用菌罐藏加工預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭的具體制備方法如下:

1.1L組培金線蓮的有機培養基(1/2*MS+250μL的食用菌罐藏加工預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭)的制備,每1000毫升的有機培養基制備步驟如下:

(1)制備食用菌罐藏加工預煮液,并量取250μL的食用菌罐藏加工預煮液待用;

(2)按照配制1/2*MS基本培養基所需的各種母液的體積,依次量取:

MS大量元素母液25mL

MS微量元素母液2.5mL

MS鐵鹽母液2.5mL

MS有機物母液2.5mL待用;

(3)將步驟(1)中量取的食用菌罐藏加工預煮液與步驟(2)中量取的MS培養基母液進行混合后溶解于蒸餾水中;

(4)稱取100g香蕉以及1.5g活性炭,并將香蕉碾成泥后加入步驟(3)中所得的溶液中,攪拌混勻,之后加入稱好的活性炭,攪拌均勻;

(5)在燒杯中加入200mL的蒸餾水,將蒸餾水加熱至80℃后加入稱好的7g瓊脂,邊攪拌邊加熱至沸騰后瓊脂溶解,待瓊脂溶解之后,繼續加入稱好的30g蔗糖,邊攪拌邊加熱至蔗糖溶解,然后將得到的瓊脂與蔗糖的混合溶液加入步驟(4)所得的混合溶液中,攪拌均勻后加蒸餾水定容至1000毫升并加入0.1mol/L的NaOH將PH值調至5.0;

(6)將步驟(5)所得到的培養基分裝于組培瓶中,進行高溫高壓滅菌,之后冷卻凝固即可,其中高溫高壓滅菌溫度控制在121℃,壓力控制在111千帕,滅菌時間為15分鐘。

其中,食用菌罐藏加工預煮液的制備方法如下:

a.收集食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水;

b.將收集來的食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水進行離心,離心機的轉速控制在11500rpm,離心溫度為15℃,離心時間為10min,離心之后取上清液;

c.將所得的上清液利用降膜蒸發器,降膜蒸發濃縮,得濃縮液;

d.在濃縮液中添加變性劑,對濃縮液進行變性,其中所述的變性劑為80%的乙醇,且所加入的乙醇與濃縮液的體積比為2:1;

e.對變性后的濃縮液進行過濾,收集濾液;

f.將濾液進行旋轉蒸發除去乙醇;

g.將旋轉蒸發后所得的溶液利用5K的濾膜進行切向流過濾,收集濾出液;

h.將步驟g中所得的濾出液進行旋轉蒸發濃縮,濃縮至溶液折光率達到35%即可。

2.1L組培金線蓮的有機培養基(MS+1000μL的食用菌罐藏加工預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭)的制備,每1000毫升的有機培養基制備步驟如下:

(1)制備食用菌罐藏加工預煮液,并量取1000μL的食用菌罐藏加工預煮液待用;

(2)按照配制1*MS基本培養基所需的各種母液的體積,依次量取:

MS大量元素母液50mL

MS微量元素母液5mL

MS鐵鹽母液5mL

MS有機物母液5mL待用;

(3)將步驟(1)中量取的食用菌罐藏加工預煮液與步驟(2)中量取的MS培養基母液進行混合后溶解于蒸餾水中;

(4)稱取250g香蕉以及2.0g活性炭,并將香蕉碾成泥后加入步驟(3)中所得的溶液中,攪拌混勻,之后加入稱好的活性炭,攪拌均勻;

(5)在燒杯中加入300mL的蒸餾水,將蒸餾水加熱至90℃后加入稱好的8g瓊脂,邊攪拌邊加熱至沸騰后瓊脂溶解,待瓊脂溶解之后,繼續加入稱好的50g蔗糖,邊攪拌邊加熱至蔗糖溶解,然后將得到的瓊脂與蔗糖的混合溶液加入步驟(4)所得的混合溶液中,攪拌均勻后加蒸餾水定容至1000毫升并加入0.5mol/L的NaOH將PH值調至6.0;

(6)將步驟(5)所得到的培養基分裝于組培瓶中,進行高溫高壓滅菌,之后冷卻凝固即可,其中高溫高壓滅菌溫度控制在125℃,壓力控制在115千帕,滅菌時間為20分鐘。

其中,食用菌罐藏加工預煮液的制備方法如下:

a.收集食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水;

b.將收集來的食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水進行離心,離心機的轉速控制在12000rpm,離心溫度為20℃,離心時間為15min,離心之后取上清液;

c.將所得的上清液利用降膜蒸發器,降膜蒸發濃縮,得濃縮液;

d.在濃縮液中添加變性劑,對濃縮液進行變性,其中所述的變性劑為80%的乙醇,且所加入的乙醇與濃縮液的體積比為3:1;

e.對變性后的濃縮液進行過濾,收集濾液;

f.將濾液進行旋轉蒸發除去乙醇;

g.將旋轉蒸發后所得的溶液利用8K的濾膜進行切向流過濾,收集濾出液;

h.將步驟g中所得的濾出液進行旋轉蒸發濃縮,濃縮至溶液折光率達到50%即可。

3.1L組培金線蓮的有機培養基(1/4*MS+10μL的食用菌罐藏加工預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭)的制備,每10毫升的有機培養基制備步驟如下:

(1)制備食用菌罐藏加工預煮液,并量取10μL的食用菌罐藏加工預煮液待用;

(2)按照配制1/4*MS基本培養基所需的各種母液的體積,依次量取:

MS大量元素母液12.5mL

MS微量元素母液1.25mL

MS鐵鹽母液1.25mL

MS有機物母液1.25mL待用;

(3)將步驟(1)中量取的食用菌罐藏加工預煮液與步驟(2)中量取的MS培養基母液進行混合后溶解于蒸餾水中;

(4)稱取50g香蕉以及1.0g活性炭,并將香蕉碾成泥后加入步驟(3)中所得的溶液中,攪拌混勻,之后加入稱好的活性炭,攪拌均勻;

(5)在燒杯中加入250mL的蒸餾水,將蒸餾水加熱至85℃后加入稱好的6g瓊脂,邊攪拌邊加熱至沸騰后瓊脂溶解,待瓊脂溶解之后,繼續加入稱好的10g蔗糖,邊攪拌邊加熱至蔗糖溶解,然后將得到的瓊脂與蔗糖的混合溶液加入步驟(4)所得的混合溶液中,攪拌均勻后加蒸餾水定容至1000毫升并加入0.1mol/L的HCl將PH值調至5.5;

(6)將步驟(5)所得到的培養基分裝于組培瓶中,進行高溫高壓滅菌,之后冷卻凝固即可,其中高溫高壓滅菌溫度控制在122℃,壓力控制在113千帕,滅菌時間為18分鐘。

其中,食用菌罐藏加工預煮液的制備方法如下:

a.收集食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水;

b.將收集來的食用菌罐藏加工過程中所產生的工業廢水進行離心,離心機的轉速控制在12500rpm,離心溫度為25℃,離心時間為20min,離心之后取上清液;

c.將所得的上清液利用降膜蒸發器,降膜蒸發濃縮,得濃縮液;

d.在濃縮液中添加變性劑,對濃縮液進行變性,其中所述的變性劑為80%的乙醇,且所加入的乙醇與濃縮液的體積比為6:1;

e.對變性后的濃縮液進行過濾,收集濾液;

f.將濾液進行旋轉蒸發除去乙醇;

g.將旋轉蒸發后所得的溶液利用10K的濾膜進行切向流過濾,收集濾出液;

h.將步驟g中所得的濾出液進行旋轉蒸發濃縮,濃縮至溶液折光率達到55%即可。

按照上述制備方法或原理,制備以下60組(A1~A20;B1~B20;C1~C20)培養基(每種培養基的體積均為1L):

一、以0*MS,1/4*MS,1/2*MS,MS分為四大組處理,食用菌罐藏加工預煮液的取量分別為0μL,250μL,500μL,1000μL,2000μL,另外蔗糖30g、香蕉100g、瓊脂7g、1.5g活性炭。其中0*MS表示未加入基本培養基母液。

(一)0*MS處理

A1:0*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A2:0*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A3:0*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A4:0*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A5:0*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

(二)1/4*MS處理

A6:1/4*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A7:1/4*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A8:1/4*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A9:1/4*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A10:1/4*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

(三)1/2*MS處理

A11:1/2*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A12:1/2*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A13:1/2*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A14:1/2*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A15:1/2*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

(四)MS處理

A16:MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A17:MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A18:MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A19:MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

A20:MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+30g蔗糖+100g香蕉+7g瓊脂+1.5g活性炭

二、以0*MS,1/4*MS,1/2*MS,MS分為四大組處理,食用菌罐藏加工預煮液的取量分別為0μL,250μL,500μL,1000μL,2000μL,另外蔗糖10g、香蕉50g、瓊脂6g、活性炭1.0g。

(一)0*MS處理

B1:0*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B2:0*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B3:0*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B4:0*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B5:0*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

(二)1/4*MS處理

B6:1/4*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B7:1/4*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B8:1/4*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B9:1/4*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B10:1/4*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

(三)1/2*MS處理

B11:1/2*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B12:1/2*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B13:1/2*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B14:1/2*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B15:1/2*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

(四)MS處理

B16:MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B17:MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B18:MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

B19:MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+10g活性炭

B20:MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+10g蔗糖+50g香蕉+6g瓊脂+1.0g活性炭

三、以0*MS,1/4*MS,1/2*MS,MS分為四大組處理,食用菌罐藏加工預煮液的取量分別為0μL,250μL,500μL,1000μL,2000μL,另外蔗糖50g、香蕉250g、瓊脂8g、2.0g活性炭。

(一)0*MS處理

C1:0*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C2:0*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C3:0*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C4:0*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C5:0*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

(二)1/4*MS處理

C6:1/4*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C7:1/4*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C8:1/4*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C9:1/4*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C10:1/4*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

(三)1/2*MS處理

C11:1/2*MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C12:1/2*MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C13:1/2*MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C14:1/2*MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C15:1/2*MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

(四)MS處理

C16:MS+0μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C17:MS+250μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C18:MS+500μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C19:MS+1000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

C20:MS+2000μL蘑菇罐藏預煮液+50g蔗糖+250g香蕉+8g瓊脂+2.0g活性炭

將上述制得的60組培金線蓮培養基(A1~A20;B1~B20;C1~C20)用于金線蓮的培育;

一、不同培養基對芽誘導的培養

選取優質的臺灣種金線蓮無菌材料,在超凈臺無菌環境下,用剪刀去除根和葉片,將莖干截成長2.5cm帶一個節的莖段。接種在A1-A20組培金線蓮培養基上,調節PH為5.8。實驗共設20個處理,每個處理接6瓶,每瓶接種4個節段。將接好的培養瓶放置在恒溫室內,保持室溫25±1℃,光照10h/d,光照強度800~1000Lux。每隔一個月對發芽情況度進行統計(分化率=發芽莖段數/接種莖段總數),及時處理發霉的培養瓶,測得的實驗結果見表1。

表1不同培養基對莖段發芽的影響

注:表1為接種90d時發芽情況。+表示芽細小,顏色黃綠;++表示芽細小,顏色墨綠;+++表示芽粗壯,顏色墨綠;++++表示芽粗壯,顏色墨綠,有叢芽生長。

從表1數據中的A1-A5培養基培育的金線蓮莖段發芽數據可知,當沒有加入基本培養基母液時,隨著食用菌罐藏加工預煮液濃度的增加,金線蓮莖段的發芽總數不斷的增加,分化率以及增殖倍數也逐漸增加,可見食用菌罐藏加工預煮液既可以為金線蓮莖段發芽提供所需的營養,同時能促進組培金線蓮發芽。

A6-A10培養基培育的金線蓮莖段發芽數據可知,當加入1/4*MS基本培養基母液后,為金線蓮莖段提供了發芽所需要的營養,但是,該營養仍然不能夠完全滿足金線蓮莖段發芽所需,因此隨著食用菌罐藏加工預煮液濃度的增加,金線蓮莖段的發芽總數不斷的增加,分化率以及增殖倍數也逐漸增加,當食用菌罐藏加工預煮液的濃度增加到1000μL/L時,已經能夠滿足金線蓮莖段發芽的營養所需,且也能很好的促進金線蓮莖段的發芽,之后如果繼續增加食用菌罐藏加工預煮液的濃度,金線蓮莖段發芽數反而降低,說明高濃度的食用菌罐藏加工預煮液將會對金線蓮莖段的發芽具有一定的抑制作用。

A11-A15培養基培育的金線蓮莖段發芽數據可知,當加入1/2*MS基本培養基母液后,已經能夠很好的滿足金線蓮莖段發芽對營養的需求,因此食用菌罐藏加工預煮液的濃度只需達到250μL/L,便能夠很好的促進金線蓮莖段的發芽,且金線蓮莖段的發芽數以及增殖倍數達到最大值,之后如果繼續提高食用菌罐藏加工預煮液的濃度,金線蓮莖段發芽數反而降低。

A16-A20培養基培育的金線蓮莖段發芽數據可知,當加入MS基本培養基母液后,已經能夠很好的滿足金線蓮莖段發芽對營養的需求,因此食用菌罐藏加工預煮液的濃度只需達到250μL/L,便能夠很好的促進金線蓮莖段的發芽,但是此時的發芽數不及A12的發芽數。由此可知A12培養基的效果最佳,最能夠促進金線蓮莖段的發芽。

發明人還將金線蓮莖段接種在B1-B20以及C1-C20組培金線蓮培養基上,得到的實驗數據與表1的大體相同,但是利用B1-B20以及C1-C20組培金線蓮培養基培養的金線蓮莖段的發芽數仍不及A12培養基所培養的金線蓮莖段,由此可知蔗糖、香蕉、瓊脂以及活性炭的濃度對金線蓮莖段發芽的影響不大。

二、不同培養基對根生長的影響

選取長勢良好且長勢盡量接近的金線蓮苗,在超凈臺無菌環境下,將苗的基部下端(約2cm長)切去,再轉接到A11-A15培養基上,調節PH為5.8。實驗共設5個處理,每個處理接種4瓶,每瓶接種6株。將接好的培養瓶放置在恒溫室內,保持室溫25±1℃,光照10h/d,光照強度1800Lux。培養60d后統計發根數和根生長狀況。結果見表2

表2不同培養基對生根的影響

由表2的數據可知,當食用菌罐藏加工預煮液的濃度適中時能夠促進金線蓮生根,且接種在A12培養基上的組培苗發根條數最多,總數為98條,生根率達到了4.08,實驗還發現當食用菌罐藏加工預煮液濃度低時,金線蓮苗的根系細長,根毛較多,根顏色為乳白色。當食用菌罐藏加工預煮液濃度達到1500μL/L以上時,根系變得粗壯,根長度伸長慢,根毛減少,跟顏色為黃綠色明顯老化,除此之外,金線蓮根尖容易壞死影響根的生長。

三、不同培養基對金線蓮幼苗生長的影響

選取長勢良好且長勢盡量接近的臺灣種金線蓮小苗,在超凈臺無菌環境下,將小苗接種到A11-A15、B11-B15、C11-C15培養基上,調節PH為5.8。實驗共設15個處理,每個處理接種4瓶,每瓶接種6株(同一瓶接種的小苗長勢盡量接近)。將接好的培養瓶放置在恒溫室內,保持室溫25±1℃,光照10~12h/d,光照強度1500~2000Lux。統計生長3個月后的平均株高、平均單株新增葉片數以及平均單株鮮重。

另外,選取長勢良好且長勢盡量接近的福建種金線蓮小苗,在超凈臺無菌環境下,將小苗接種到A11-A15、B11-B15、C11-C15培養基上,調節PH為5.8。實驗共設15個處理,每個處理接種4瓶,每瓶接種6株(同一瓶接種的小苗長勢盡量接近)。將接好的培養瓶放置在恒溫室內,保持室溫25±1℃,光照10~12h/d,光照強度1500~2000Lux。統計生長3個月后的平均株高、平均單株新增葉片數以及平均單株鮮重。實驗結果見表3:

表3不同培養基對金線蓮幼苗生長的影響

從表3中A12-A15培養基的數據與A11培養基的數據、B12-B15培養基的數據與B11培養基的數據以及C12-C15培養基的數據與C11培養基的數據相比較可知,加有適當濃度的食用菌罐藏加工預煮液的培養基與普通的培養基(不加食用菌罐藏加工預煮液的培養基如A11、B11、C11)相比,加有食用菌罐藏加工預煮液的培養基更能促進金線蓮的生長,能明顯縮短組培金線蓮生長周期,且A12培養基的效果最佳,為最優培養基。另外A11-A15培養基的數據與B11-B15培養基的數據、C11-C15培養基的數據相比可知,蔗糖、香蕉、瓊脂以及活性炭的濃度對金線蓮的生長有一定的影響,但是影響不大。另外,經觀察加有適當濃度的食用菌罐藏加工預煮液的培養基所培育的金線蓮相比普通培養基所培育的金線蓮植株更茁壯,葉片舒展、厚實,且顏色更鮮艷。

為了驗證本發明的培養基是否適合用于其他植物的培養,發明人還將本發明的60組(A1~A20;B1~B20;C1~C20)培養基用于蘿卜、花椰菜、西紅柿、藍莓等植物的培育,發現蘿卜、花椰菜、西紅柿與傳統培養基(即不含預煮液的培養基)對比,長勢差異不明顯,藍莓與傳統培養基對比,長勢無差異,說明本發明培養基的使用是有針對性的,并不一定適合所有植物的培育或上述培養基的組分配比關系并不適合其他植物的培育。

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