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吡唑 衍生物
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摘要
申請專利號:

CN201280027873.0

申請日:

20120606

公開號:

CN103596567A

公開日:

20140219

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有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/4245,C07D413/12,C07D413/14,A61P25/00 主分類號: A61K31/4245,C07D413/12,C07D413/14,A61P25/00
申請人: 霍夫曼-拉羅奇有限公司
發明人: 吉多·加利,塞德里克·蓋拉馬拉,羅杰·諾克羅斯,菲利普·普天利格納
地址: 瑞士巴塞爾
優先權: 11169217.4
專利代理機構: 中科專利商標代理有限責任公司 代理人: 賀衛國;柳春琦
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201280027873.0

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法律狀態類型:

摘要

本發明涉及下式的化合物,其中R1是氫或苯基,任選被鹵素,CN或低級烷氧基或由鹵素取代的低級烷氧基取代;R2是氫或低級烷基;R3是氫或低級烷基,或是苯基,其任選被一個或多個取代基取代,所述取代基選自鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷氧基,或是吡啶基,其任選被鹵素或由鹵素取代的低級烷基取代,或是嘧啶基,其任選被由鹵素取代的低級烷基取代,或是吡嗪基,其任選被鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷基取代;R4是氫,低級烷基或苯基;Z是鍵,-CH2-或-O-;或其藥學上合適的酸加成鹽。現在發現式IA和IB化合物對痕量胺相關受體(TAAR),尤其是TAARl具有良好的親和性。該化合物可以用于治療抑郁癥、焦慮癥、雙相型障礙、注意缺陷多動障礙(ADHD)、應激相關障礙、精神病性精神障礙如精神分裂癥、神經病如帕金森病、神經變性疾病如阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、高血壓、精神藥物濫用和代謝性疾病如進食障礙、糖尿病、糖尿病并發癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩態紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節律障礙以及心血管疾病。

權利要求書

1.一種下式化合物其中R是氫或苯基,其任選被鹵素,CN或低級烷氧基或由鹵素取代的低級烷氧基取代;R是氫或低級烷基;R是氫或低級烷基或是苯基,其任選被一個或多個取代基取代,所述取代基選自鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷氧基,或是吡啶基,其任選被鹵素或由鹵素取代的低級烷基取代,或是嘧啶基,其任選被由鹵素取代的低級烷基取代,或是吡嗪基,其任選被鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷基取代;R是氫,低級烷基或苯基;Z是鍵,-CH-或-O-;或其藥學上合適的酸加成鹽。2.根據權利要求1的式IA-1化合物,其中R是氫,鹵素,CN或低級烷氧基或由鹵素取代的低級烷氧基;R是氫或低級烷基;R是氫或低級烷基;Z是鍵,-CH-或-O-;n是1或2;如果n=2,則各個R可以彼此獨立地定義;或其藥學上合適的酸加成鹽。3.根據權利要求1或2中任一項的式IA-1化合物,其中所述化合物為:(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(3-氰基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(3-氰基苯基)-4-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-5-(3-氰基-4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,或(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺。4.根據權利要求1的式IB-1化合物,其中R是氫,鹵素,CN或低級烷氧基或由鹵素取代的低級烷氧基;R是氫或低級烷基;R是氫或低級烷基;Z是鍵,-CH-或-O-;n是1或2;如果n=2,則各個R可以彼此獨立地定義;或其藥學上合適的酸加成鹽。5.根據權利要求1或4中任一項的式IB-1化合物,其中所述化合物為:(S)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-4-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(2-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氯苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-甲氧基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(4-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(R)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(外消旋)3-(3-氰基苯基)-N-(4-(吡咯烷-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,(S)-3-(3-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺,或(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺。6.根據權利要求1的式IA-2化合物,R是氫;R是氫或低級烷基;R是苯基,其任選被一個或多個取代基取代,所述取代基選自鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷氧基,或是吡啶基,其任選被鹵素或由鹵素取代的低級烷基取代,或是嘧啶基,其任選被由鹵素取代的低級烷基取代,或是吡嗪基,其任選被鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷基取代;Z是鍵,-CH-或-O-;或其藥學上合適的酸加成鹽。7.根據權利要求1或6中任一項的式IA-2化合物,其中所述化合物是:(S)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(R)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(5-氯吡啶-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(4-氰基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(R)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(6-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(5-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,(S)-1-(5-氰基吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺,或(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺。8.根據權利要求1的式IB-2化合物,其中R是氫;R是氫或低級烷基;R是氫,低級烷基或苯基;Z是鍵,-CH-或-O-;或其藥學上合適的酸加成鹽。9.權利要求1或8中任一項的化合物,其中所述化合物是:(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺。10.一種制備如權利要求1-9中任一項所限定的式IA或IB化合物的方法,所述方法包括:a)從下式化合物斷裂掉N-保護基團,成為下式化合物,其中PG是選自-C(O)O-叔丁基的N-保護基團,并且其他定義如權利要求1中所述,并且如果需要,將所獲得的化合物轉化為藥用酸加成鹽。11.通過根據權利要求10所述的方法制備的根據權利要求1-9中任一項的化合物。12.一種藥物組合物,所述藥物組合物包含根據權利要求1-9中任一項所述的化合物和藥用載體和/或輔藥。13.一種藥物組合物,所述藥物組合物包含根據權利要求1-9中任一項所述的化合物和藥用載體和/或輔藥,所述藥物組合物用于治療抑郁癥、焦慮癥、雙相型障礙、注意缺陷多動障礙(ADHD)、應激相關障礙、精神病性精神障礙、精神分裂癥、神經病、帕金森病、神經變性疾病、阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、高血壓、精神藥物濫用、代謝性疾病、進食障礙、糖尿病、糖尿病并發癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩態紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節律障礙,以及心血管疾病。14.根據權利要求1-9中任一項所述的化合物,所述化合物作為治療活性物質使用。15.根據權利要求1-9中任一項所述的化合物,所述化合物作為治療活性物質用于治療抑郁癥、焦慮癥、雙相型障礙、注意缺陷多動障礙(ADHD)、應激相關障礙、精神病性精神障礙、精神分裂癥、神經病、帕金森病、神經變性疾病、阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、高血壓、精神藥物濫用、代謝性疾病、進食障礙、糖尿病、糖尿病并發癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩態紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節律障礙,以及心血管疾病。16.根據權利要求1-9中任一項所述的化合物用于制備藥物的用途,所述藥物用于治療性和/或預防性治療抑郁癥、焦慮癥、雙相型障礙、注意缺陷多動障礙(ADHD)、應激相關障礙、精神病性精神障礙、精神分裂癥、神經病、帕金森病、神經變性疾病、阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、高血壓、精神藥物濫用、代謝性疾病、進食障礙、糖尿病、糖尿病并發癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩態紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節律障礙,以及心血管疾病。17.如上所述的本發明。

說明書

本發明涉及下式化合物,

其中

R1是氫或苯基,其任選被鹵素,CN或低級烷氧基或由鹵素取代的低級烷氧基取代;

R2是氫或低級烷基;

R3是氫或低級烷基或是

苯基,其任選被一個或多個取代基取代,所述取代基選自鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷氧基,或是

吡啶基,其任選被鹵素或由鹵素取代的低級烷基取代,或是

嘧啶基,其任選被由鹵素取代的低級烷基取代,或是

吡嗪基,其任選被鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷基取代;

R4是氫,低級烷基或苯基;

Z是鍵,-CH2-或-O-;

或其藥學上合適的酸加成鹽。

本發明包括所有的外消旋混合物,所有它們相應的對映體和/或旋光異構體。此外,本發明還包括式IA和IB化合物的所有互變異構形式。

現在發現式IA和IB化合物對痕量胺相關受體(TAAR),尤其是TAAR1具有良好的親和性。化合物可以用于以下各項的治療:抑郁癥、焦慮癥、雙相型障礙、注意缺陷多動障礙(ADHD)、應激相關障礙、精神病性精神障礙如精神分裂癥、神經病如帕金森病、神經變性疾病如阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、高血壓、精神藥物濫用和代謝性疾病如進食障礙、糖尿病、糖尿病并發癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩態紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節律障礙、以及心血管疾病。

對于可以結合至腎上腺素受體的化合物報道的一些生理效應(即心血管效應、低血壓、鎮靜誘導)(WO02/076950,WO97/12874或EP0717037)在用于治療如上所述的中樞神經系統疾病的藥物的情況下可能被認為是不適宜的副作用。因此,適宜的是獲得與腎上腺素受體比較對于TAAR1受體具有選擇性的藥物。本發明的目標物對TAAR1受體顯示超過腎上腺素受體的選擇性,尤其是與人類和大鼠α1和α2腎上腺素受體比較的良好選擇性。

經典的生物胺(血清素,去甲腎上腺素,腎上腺素,多巴胺,組胺)在中樞和外周神經系統中作為神經傳遞介質發揮重要的作用[1]。它們的合成和儲存,以及它們在釋放后的降解和再吸收被嚴格的調節。已知生物胺水平的不平衡在很多病理情況下是造成改變的腦功能的原因[2-5]。第二類的內源胺化合物,即通常所說的痕量胺(TA)與經典的生物胺在結構、新陳代謝和亞細胞定位方面顯著地重疊。TA包括p-酪胺、β-苯基乙胺、色胺和章魚胺,并且它們在哺乳動物神經系統中以通常比經典的生物胺低的水平存在[6]。

它們的調節異常與多種精神病學疾病相關,如精神分裂癥和抑郁癥[7],以及其他情況如注意缺陷多動障礙、偏頭痛、帕金森病、精神藥物濫用和進食障礙[8,9]。

長期以來,TA特異性受體僅被猜測是基于人類和其他哺乳動物的CNS中解剖學上離散的高親和性TA結合部位[10,11]。因此,TA的藥理學作用被認為是經由眾所周知的經典生物胺的機制通過如下而介導:或者通過引起它們的釋放、抑制它們的再吸收或通過與它們的受體體系“交叉反應”[9,12,13]。隨著近來GPCR新家族的數個成員,即痕量胺相關受體(TAAR)的識別,該觀點明顯地改變[7,14]。在人類中存在9種TAAR基因(包括3種擬基因)并且在小鼠中存在16種基因(包括1種擬基因)。TAAR基因不含有內含子(有一個例外,TAAR2含有1個內含子)并且在相同的染色體節段上位于彼此相連的位置。受體基因的系統發育關系,與深入的GPCR藥效團相似性比較和藥理學數據一致,提出這些受體形成三個不同的亞族[7,14]。TAAR1在人類與嚙齒類之間高度保留的四種基因(TAAR1-4)的第一亞類中。TA經由Gα活化TAAR1。TA的調節異常顯示有助于多種疾病的病因學,所述多種疾病如抑郁癥、精神病性精神障礙、注意缺陷多動障礙、精神藥物濫用、帕金森病、偏頭痛、進食障礙和代謝性疾病,并且因此TAAR1配體對于這些疾病的治療具有很高的潛在可能。

因此,對于增加關于痕量胺相關受體的知識存在廣泛的興趣。

所使用的參考文獻:

1Deutch,A.Y.和Roth,R.H.(1999)Neurotransmitters.于Fundamental?Neuroscience(第2版)(Zigmond,M.J.,Bloom,F.E.,Landis,S.C.,Roberts,J.L和Squire,L.R.編輯)中,第193-234頁,Academic?Press;

2Wong,M.L.和Licinio,J.(2001)Research?and?treatment?approaches?to?depression.Nat.Rev.Neurosci.2,343-351;

3Carlsson,A.等(2001)Interactions?between?monoamines,glutamate,and?GABA?in?schizophrenia:new?evidence.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.41,237-260;

4Tuite,P.和Riss,J.(2003)Recent?developments?in?the?pharmacological?treatment?of?Parkinson′s?disease.Expert?Opin.Investig.Drugs12,1335-1352;

5Castellanos,F.X.和Tannock,R.(2002)Neuroscience?of?attention-deficit/hyperactivity?disorder:the?search?for?endophenotypes.Nat.Rev.Neurosci.3,617-628;

6Usdin,Earl;Sandler,Merton;編輯,Psychopharmacology?Series,第1卷:Trace?Amines?and?the?Brain.[Proceedings?of?a?Study?Group?at?the14th?Annual?Meeting?of?the?American?College?of?Neuropsychoparmacology,San?Juan,Puerto?Rico](1976);

7Lindemann,L.和Hoener,M.(2005)A?renaissance?in?trace?amines?inspired?by?a?novel?GPCR?family.Trends?in?Pharmacol.Sci.26,274-281;

8Branchek,T.A.和Blackburn,T.P.(2003)Trace?amine?receptors?as?targets?for?novel?therapeutics:legend,myth?and?fact.Curr.Opin.Pharmacol.3,90-97;

9Premont,R.T.等(2001)Following?the?trace?of?elusive?amines.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98,9474-9475;

10Mousseau,D.D.和Butterworth,R.F.(1995)A?high-affinity[3H]tryptamine?binding?site?in?human?brain.Prog.Brain?Res.106,285-291;

11McCormack,J.K.等(1986)Autoradiographic?localization?of?tryptamine?binding?sites?in?the?rat?and?dog?central?nervous?system.J.Neurosci.6,94-101;

12Dyck,L.E.(1989)Release?of?some?endogenous?trace?amines?from?rat?striatal?slices?in?the?presence?and?absence?of?a?monoamine?oxidase?inhibitor.Life?Sci.44,1149-1156;

13Parker,E.M.和Cubeddu,L.X.(1988)Comparative?effects?of?amphetamine,phenylethylamine?and?related?drugs?on?dopamine?efflux,dopamine?uptake?and?mazindol?binding.J.Pharmacol.Exp.Ther.245,199-210;

14Lindemann,L.等(2005)Trace?amine?associated?receptors?form?structurally?and?functionally?distinct?subfamilies?of?novel?G?protein-coupled?receptors.Genomics85,372-385。

本發明的目標是式IA和IB的新化合物和它們的藥用鹽,它們用于制備藥物的用途,所述藥物用于治療與痕量胺相關受體的生物學功能相關的病癥,它們的制備,以及基于根據本發明的化合物的用于病癥的控制或預防中的藥物,所述病癥如抑郁癥、焦慮癥、雙相型障礙、注意缺陷多動障礙、應激相關障礙、精神病性精神障礙如精神分裂癥、神經病如帕金森病、神經變性疾病如阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、精神藥物濫用和代謝性疾病如進食障礙、糖尿病、糖尿病并發癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩態紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節律障礙、以及心血管疾病。

使用本發明的化合物的優選適應證是抑郁癥、精神病性精神障礙、帕金森病、焦慮癥和注意缺陷多動障礙(ADHD)和糖尿病。

如本文所使用的,術語“低級烷基”表示含有1至7個碳原子的飽和直鏈或支鏈基團,例如,甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、2-丁基、叔丁基等。優選的烷基是具有1-4個碳原子的基團。

如本文所使用的,術語“低級烷氧基”表示其中烷基殘基如上面所定義并且其經由氧原子連接的基團。

術語″鹵素″表示氯,碘,氟和溴。

如本文所使用的,術語″由鹵素取代的低級烷氧基″表示如上定義的烷氧基,并且其中至少一個氫原子被鹵素代替。

術語“藥用酸加成鹽”包括與無機和有機酸的鹽,所述無機和有機酸如鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、甲酸、富馬酸、馬來酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、對甲苯磺酸等。

本發明的一個實施方案是式IA-1化合物,

其中

R是氫,鹵素,CN或低級烷氧基或由鹵素取代的低級烷氧基;

R2是氫或低級烷基;

R3是氫或低級烷基;

Z是鍵,-CH2-或-O-;

n是1或2;如果n=2,則各個R可以彼此獨立地定義;

或其藥學上合適的酸加成鹽,例如以下化合物:

或其藥學上合適的酸加成鹽,例如以下化合物:

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(3-氰基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(3-氰基苯基)-4-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-5-(3-氰基-4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺或

(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺.

本發明的另一實施方案是式IB-1化合物,

其中

R是氫,鹵素,CN或低級烷氧基或由鹵素取代的低級烷氧基;

R2是氫或低級烷基;

R4是氫或低級烷基;

Z是鍵,-CH2-或-O-;

n是1或2;如果n=2,則各個R可以彼此獨立地定義;

或其藥學上合適的酸加成鹽,例如以下化合物:

(S)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-4-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(2-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(R)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(R)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(R)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(R)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氯苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(R)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-甲氧基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(4-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(R)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(外消旋)3-(3-氰基苯基)-N-(4-(吡咯烷-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

(S)-3-(3-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺或

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺。

本發明的一個實施方案是式IA-2化合物,

R1是氫

R2是氫或低級烷基;

R3是苯基,其任選被一個或多個取代基取代,所述取代基選自鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷氧基,或是

吡啶基,其任選被鹵素或由鹵素取代的低級烷基取代,或是

嘧啶基,其任選被由鹵素取代的低級烷基取代,或是

吡嗪基,其任選被鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷基取代;

Z是鍵,-CH2-或-O-;

或其藥學上合適的酸加成鹽,例如以下化合物:

(S)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(R)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(5-氯吡啶-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(4-氰基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(R)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(6-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(5-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺

(S)-1-(5-氰基吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺或

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺。

本發明的另一實施方案是式IB-2化合物,

其中

R1是氫;

R2是氫或低級烷基;

R4是氫,低級烷基或苯基;

Z是鍵,-CH2-或-O-;

或其藥學上合適的酸加成鹽,例如以下化合物

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺。

本發明的式IA和IB化合物及其藥用鹽可以通過本領域中已知的方法制備,例如,通過下述的方法制備,所述方法包括:

a)從下式化合物斷裂掉N-保護基團

成為下式化合物,

其中PG是選自-C(O)O-叔丁基的N-保護基團,并且其他定義如上所述,并且

如果需要,將所獲得的化合物轉化為藥用酸加成鹽。

本發明的式IA和IB化合物的制備可以按順序或會聚合成路線進行。本發明的化合物的合成在下面的方案1至3和對54個具體實施例的描述中示出。用于進行反應和所得產物純化所需的技能是本領域技術人員已知的。除非相反地指出,在以下方法的描述中使用的取代基和符號具有之前在本文中給出的意義。

更詳細地,式IA和IB化合物可以通過下面給出的方法,通過實施例中給出的方法或通過類似的方法制備。用于單獨的反應步驟的適當的反應條件是本領域技術人員已知的。反應順序不限于方案1至3中給出的順序,然而,根據原材料和它們相應的反應活性,可以自由地改變反應步驟的順序。原材料是可商購的或可以通過與下面給出的方法相似的方法制備,通過說明書中或實施例中引用的參考文獻中描述的方法制備,或通過本領域已知的方法制備。

一般程序

方案1

取代基如上所述。

步驟A:酰胺形成可以如下完成:通過胺2和酰基氯化合物3-A-2之間在鹵代溶劑中如二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚類溶劑如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME,在有機堿如三乙胺或N,N-二異丙基乙胺存在下的偶聯反應。合適的胺2的實例包括N-保護的嗎啉衍生物如2-a[CAS1002726-96-6],哌啶衍生物如2-b[CAS875798-79-1],吡咯烷衍生物如2-c[CAS908334-28-1]。

優選的條件是三乙胺在THF中在室溫歷時18小時。

備選地,酰胺形成可以如下完成:通過胺2和羧酸3-A-1之間在偶聯劑如DCC,EDC,TBTU,HBTU或HATU存在下,在有機堿如三乙胺,N,N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉存在下,在鹵代溶劑如DMF,二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚類溶劑如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME中的偶聯反應。

優選的條件是HBTU與N-甲基嗎啉在DMF中在60℃歷時18小時。

步驟B:BOC?N-保護基的除去可以如下進行:用無機酸如HCl,H2SO4或H3PO4或有機酸如CF3COOH,CHCl2COOH,HOAc或對甲苯磺酸,在溶劑如CH2C12,CHCl3,THF,二噁烷,MeOH,EtOH或H2O中,在0至80℃。

優選的條件是HCl在二噁烷中在60℃歷時1-20h。

方案2

方法條件與對于方案1所述相同。

方案3

其中

Y是鹵素,R2是氫或低級烷基;R3是苯基,其任選被一個或多個取代基取代,所述取代基選自鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷氧基,或是吡啶基,其任選被鹵素或由鹵素取代的低級烷基取代,或是嘧啶基,其任選被由鹵素取代的低級烷基取代,或是吡嗪基,其任選被鹵素,氰基或由鹵素取代的低級烷基取代;并且Z是鍵,-CH2-或-O-;

步驟A:酰胺6的形成可以如下完成:通過胺2和1H-吡唑-3-甲酸5之間使用選擇性偶聯劑如氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓在溶劑如甲醇,乙醇或異丙醇中在0℃至50℃的溫度歷時1h至24小時的偶聯反應。

優選的條件是使用氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓在甲醇中在0℃歷時1h,接著在室溫攪拌18小時。

合適的胺2的實例包括N-保護的嗎啉衍生物如2-a[CAS1002726-96-6],哌啶衍生物如2-b[CAS875798-79-1],吡咯烷衍生物如2-c[CAS908334-28-1]。

步驟B:C-N鍵形成可以如下完成:通過在鈀或銅催化劑,配體和堿存在下在溶劑如二噁烷,DME,THF,甲苯,DMF和DMSO中賊升高的溫度,例如使用鈀-催化的Buchwald-Hartwig反應將芳基鹵7或雜芳基鹵7用吡唑6處理。

優選的條件是,根據van?Leeuwen和同事的程序(Tetrahedron.Lett.1999,40,3789-3790)的變化,催化的三(二亞芐基丙酮)二鈀氯仿復合物,催化的9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基膦基)呫噸(xantphos)和碳酸銫在二噁烷中,在100℃加熱的密封管中過夜。

在歸因于吸電子取代基的存在,優選由于三氟甲基的存在,使芳基鹵7或雜芳基鹵7活化而利于進行親核取代的情況下,與吡唑6的偶聯可以如下實現:通過使這些化合物在堿如二異丙基乙胺,三乙胺,碳酸鉀或氫化鈉存在下在溶劑如異丙醇,二噁烷,二甲亞砜,二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺中在50℃至140℃之間的溫度反應1小時至24小時。

優選的條件是將6和7的混合物與碳酸鉀在二甲基乙酰胺中在120℃加熱20小時。

步驟C:酰胺形成可以如下完成:通過胺2和酰基氯化合物8a之間在鹵代溶劑如二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚類溶劑如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME中,在有機堿如三乙胺或N,N-二異丙基乙胺存在下的偶聯反應。

優選的條件是三乙胺在THF中在室溫歷時18小時。

備選地,酰胺形成可以如下完成:通過胺2和羧酸8b之間在偶聯劑如DCC,EDC,TBTU,HBTU或HATU存在下,在有機堿如三乙胺,N,N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉存在下,在鹵代溶劑如DMF,二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚類溶劑如二乙醚,二噁烷,THF,DME或TBME中的偶聯反應。

優選的條件是HBTU與N-甲基嗎啉在DMF中在60℃歷時18小時。

步驟D:BOC?N-保護基的除去可以如下進行:用無機酸如HCl,H2SO4或H3PO4或有機酸如CF3COOH,CHCl2COOH,HOAc或對甲苯磺酸,在溶劑如CH2C12,CHCl3,THF,二噁烷,MeOH,EtOH或H2O中在0至80℃。

優選的條件是HCl在二噁烷中在60℃歷時1-20h。

與方案3中所述的相同的一般程序可以用于式IB-2化合物的制備。

化合物的分離和純化

如果需要,本文所描述的化合物和中間體的分離和純化可以通過任意合適的分離或純化程序完成,如例如,過濾,萃取,結晶,柱色譜,薄層色譜,厚層色譜,制備型低壓或高壓液相色譜或這些程序的組合。合適的分離和離析程序的詳細描述可以通過參考在下面在本文中的制備和實施例而得到。然而,當然也可以使用其他等價的分離或離析程序。手性的式I化合物的外消旋混合物可以使用手性HPLC分離。

式IA和IB化合物的鹽

式IA和IB化合物是堿性的并且可以轉化為相應的酸加成鹽。該轉化通過用至少化學計量的合適的酸處理完成,所述酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等,以及有機酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等。典型地,將游離堿溶解在惰性有機溶劑如二乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等中,并且將酸加入相似的溶劑中。將溫度保持在0℃至50℃之間。所得到的鹽自發地沉淀或可以用極性較小的溶劑使其從溶液析出。

堿性的式IA和IB化合物的酸加成鹽可以通過用至少化學計量當量的合適的堿如氫氧化鈉或氫氧化鉀、碳酸鉀、碳酸氫鈉、氨等處理,轉化為相應的游離堿。

實施例1

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

a)(S)-2-(4-(5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯

在25mL圓底燒瓶中,將(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(100mg,359μmol,Eq:1.00),3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(87.9mg,467μmol,Eq:1.3)(CAS-1134-49-2),N-甲基嗎啉(109mg,118μl,1.08mmol,Eq:3)和HBTU(204mg,539μmol,Eq:1.5)與DMF(3.75m1)合并。將反應混合物在60℃攪拌16.5小時。將混合物傾倒入水(10m1)中并用EtOAc萃取兩次。將有機層用鹽水洗滌,用MgSO4干燥,過濾并在真空中濃縮。將粗物質通過柱色譜(6g硅膠(63-200A),洗脫劑:庚烷/EtOAc2:1)純化,給出標題化合物,為白色固體(120mg,74.5%)。MS(ISP):449.5([M+H]+)。

b)(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

向(S)-2-(4-(5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(120mg,268μmol,Eq:1.00)在二噁烷(0.5ml)中的溶液加入在二噁烷中的4M-HCl(1.00ml,4.01mmol,Eq:15)。將反應混合物在60℃攪拌2h。然后向混合物加入10ml的二噁烷并將懸浮物濾出,用乙醚洗滌并在高真空下干燥,給出目標化合物,為白色固體(82.3mg,79.9%)。MS(ISP):349.2([M+H]+)。

制備(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:

步驟a)(S)-2-(4-溴苯基)嗎啉:

將2.27g(RS)-2-(4-溴-苯基)-嗎啉(CAS-1131220-82-0)在Chiralpak?IA(8x32em)上使用正庚烷/乙醇(1:11)+0.1%DEA分離。

(S)-2-(4-溴-苯基)-嗎啉:收集自7.6min至9.4min。

收率0.97g(42.9%)且97.4%ee

(R)-2-(4-溴-苯基)-嗎啉:收集自9.8min至13.9min

收率0.99g(43.6%)且97.4%ee

步驟b)(S)-2-(4-溴苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯

將在THF(360ml)中的(S)-2-(4-溴-苯基)-嗎啉(36.3g,150mmol)和N,N-二異丙基乙胺(23.3g,31.4ml,180mmol)用二碳酸二叔丁酯(39.3g,180mmol)處理。將反應混合物在rt攪拌17h,真空中濃縮,用乙酸乙酯稀釋,用1M-檸檬酸(2x100ml)洗滌,用硫酸鎂干燥,過濾并在真空中濃縮。將粗物質從己烷結晶,得到47.1g(92%)(S)-2-(4-溴苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯,為灰白色固體。MS(ISP):344.1([M+H]+)。

步驟c)(S)-2-(4-(二苯基亞甲基氨基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:

在氬氣下將(S)-2-(4-溴苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(47g,137mmol),二苯基甲亞胺(29.9g,27.6m,165mmol),BINAP(6.41g,10.3mmol)和Pd2(dba)3(3.14g,3.43mmol)溶解在干燥且除氣的甲苯(940ml)中并用叔丁醇鈉(18.5g,192mmol)處理。將深褐色混合物在90℃攪拌18h。將黃色/褐色反應混合物用甲苯(700ml)稀釋,冷卻至rt并用水萃取兩次。將有機層分離,用硫酸鎂干燥并在真空中濃縮。將粗產物用300ml己烷稀釋,攪拌1h并濾出,產生橙色固體(68g),將其通過柱色譜(1.3Kg硅膠,20%乙酸乙酯/庚烷)純化。將合并且濃縮的級分懸浮在己烷中,攪拌17h,濾出并在真空中干燥,獲得54.1g(89%)黃色固體。MS(ISP):443.3([M+H]+)。

步驟d)(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯

將(S)-2-(4-(二苯基亞甲基氨基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(54.1g,122mmol),甲酸銨(116g,1.83mol)和Pd/C5%(6.5g,3.06mmol)在甲醇(930ml)中的懸浮液在60℃攪拌2h。將反應混合物過濾并濃縮。將殘余物溶解在乙酸乙酯和水中。將有機相用0.5M?HCl萃取兩次。將合并的水相用2M-NaOH堿化并用DCM萃取兩次。將有機相用硫酸鎂干燥,過濾并在真空中干燥,獲得31.95g灰白色固體。MS(ISP):279.1([M+H]+)。

實施例2

(S)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-氯-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-595610-50-7)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):383.12([M+H]+)。

實施例3

(S)-3-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-870704-22-6)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):367.15([M+H]+)。

實施例4

(S)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-甲氧基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-834868-54-1)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):379.17([M+H]+)。

實施例5

(S)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-10250-64-3)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):363.18([M+H]+)。

實施例6

(S)-4-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用4-甲基-5-苯基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-879770-33-9)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制備標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):363.5([M+H]+)。

實施例7

(S)-3-(4-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-27069-16-5)代替5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):379.4([M+H]+)。

實施例8

(S)-3-(2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(2-氟-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-859155-87-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):367.1([M+H]+)。

實施例9

(S)-3-(2-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(2-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-834868-54-1)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):379.4([M+H]+)。

實施例10

(S)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用3-(2-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-890621-13-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):383.2([M+H]+)。

實施例11

(S)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3,4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-909857-88-1)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):409.3([M+H]+)。

實施例12

(R)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-54006-63-2)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

制備(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:

步驟a)(R)-2-(4-溴苯基)嗎啉:

將2.27g(RS)-2-(4-溴-苯基)-嗎啉(CAS-1131220-82-0)在Chiralpak?IA(8x32em)上使用正庚烷/乙醇(1:11)+0.1%DEA分離。

(S)-2-(4-溴-苯基)-嗎啉:收集自7.6min至9.4min。

收率0.97g(42.9%)且97.4%ee

(R)-2-(4-溴-苯基)-嗎啉:收集自9.8min至13.9min

收率0.99g(43.6%)且97.4%ee

步驟b)(R)-2-(4-溴苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:

將在THF(60ml)中的(R)-2-(4-溴苯基)嗎啉(6g,24.8mmol)和N,N-二異丙基乙胺(3.84g,5.19ml,29.7mmol)用二碳酸二叔丁酯(6.49g,29.7mmol)處理。將反應混合物在rt攪拌17h,真空中濃縮,用乙酸乙酯稀釋,用1M-檸檬酸洗滌,用硫酸鎂干燥,過濾并在真空中濃縮。將粗物質從庚烷/乙酸乙酯結晶,得到8.48g(87%)(R)-2-(4-溴苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯,為白色固體。MS(ISP):344.1([M+H]+)。

步驟c)(R)-2-(4-(二苯基亞甲基氨基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:

在氬氣下將(R)-2-(4-溴苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(5.4g,15.8mmol),二苯基甲亞胺(3.43g,3.17ml,18.9mmol),BINAP(737mg,1.18mmol)和Pd2(dba)3(361mg,0.39mmol)溶解在干燥且除氣的甲苯(108ml)中并用叔丁醇鈉(2.12g,22.1mmol)處理。將深褐色混合物在90℃攪拌18h。將黃色/褐色反應混合物用甲苯(100ml)稀釋,冷卻至rt并用水萃取兩次。將有機層分離,用硫酸鎂干燥并在真空中濃縮。將粗產物用50ml己烷稀釋,攪拌1h并濾出,產生黃色固體(7.4g),將其通過柱色譜(50g硅膠,5%至15%乙酸乙酯/庚烷)純化。將合并且濃縮的級分懸浮在己烷中,攪拌17h,濾出并在真空中干燥,獲得6.15g(86%)黃色固體。MS(ISP):443.4([M+H]+)。

步驟d)(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:

將(R)-2-(4-(二苯基亞甲基氨基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(6g,13.6mmol),甲酸銨(12.8g,203mmol)和Pd/C5%(721mg,0.339mmol)在甲醇(103ml)中的懸浮液在60℃攪拌2h。將反應混合物過濾并濃縮。將殘余物溶解在乙酸乙酯和水中。將有機相用0.5M?HCl萃取兩次。將合并的水相用2M-NaOH堿化并用DCM萃取兩次。將有機相用硫酸鎂干燥,過濾并在真空中干燥,獲得3.04g灰白色固體。MS(ISP):279.1([M+H]+)。

實施例13

(R)-3-(2-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(實施例12中制備)代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且3-(2-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-890621-13-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

淺褐色固體。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

實施例14

(S)-3-(4-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-54006-63-2)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

實施例15

(R)-3-(3-氯苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(實施例12中制備)代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-595610-50-7)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):383.1([M+H]+)。

實施例16

(R)-3-(3-甲氧基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(實施例12中制備)代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-890591-64-7)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):379.2([M+H]+)。

實施例17

(S)-3-(3-氯苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-氯-苯基)-2-甲基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS-93618-32-7)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):397.1([M+H]+)。

實施例18

(S)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用1-甲基-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-10199-53-8)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):363.2([M+H]+)。

實施例19

(R)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(實施例12中制備)代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-10250-64-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):363.3([M+H]+)。

實施例20

(S)-5-(3-氰基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

淺褐色固體。MS(ISP):374.0([M+H]+)。

實施例21

(S)-3-(4-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

淺褐色固體。MS(ISP):388.0([M+H]+)。

制備3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

步驟a)(Z)-4-(4-氰基苯基)-2-羥基-4-氧代丁-2-烯酸乙酯:

在干燥的燒瓶中,在氬氣氛下,將鈉(317mg,13.8mmol,Eq:1.00)分份加入至乙醇(9.0ml)中。(溫度升高至60℃)。將反應混合物在0℃冷卻。然后滴加草酸二乙酯(2.01g,1.87ml,13.8mmol,Eq:1.00),接著是在乙醇(3.00ml)中的4-乙酰基芐腈(2g,13.8mmol,Eq:1.00)。出現白色固體。將反應物用機械攪拌器攪拌過夜并通過TLC監控。然后將反應混合物在真空中濃縮。將殘余物在0℃冷卻并將水加入燒瓶中。將1M?HCl加入至該溶液(pH=3),然后將溶液用EtOAc萃取兩次。將有機層用20mL鹽水洗滌三次。將所得到的有機層用MgSO4干燥,過濾并在真空中濃縮,給出灰白色固體。將該灰白色固體與乙醚在0℃混合。將懸浮液過濾,給出白色固體(2.082g,61.6%)。

步驟b)3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯:

在氬氣氛下在rt.將(Z)-4-(4-氰基苯基)-2-羥基-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(500mg,2.04mmol,Eq:1.00)溶解在乙醇(10ml)中。滴加甲基肼(95.9mg,110μl,2.04mmol,Eq:1.00)(溶液變成黃色)。將溶液在rt攪拌過夜,接著在50℃加熱6h,冷卻至rt并在真空中濃縮。將殘余物直接通過柱色譜(20g)庚烷/EtOAC:9/1純化,給出預期的吡唑(173mg,33.2%),為白色固體。

MS(ISP):256.3([M+H]+)。

步驟c)3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

向3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(70mg,274μmol,Eq:1.00)在THF(5ml)和MeOH(1.00ml)中的溶液中加入LiOH1M(548μl,548μmol,Eq:2)。將混合物在rt.攪拌約8h,然后用水和HCl1N處理(pH:3)。將混合物用乙酸乙酯萃取兩次。將所得到的有機層合并,用鹽水洗滌并用MgSO4干燥,過濾并濃縮,給出期望的化合物(55mg,88.3%),為白色固體。

MS(SP):228.2(M+1)。

實施例22

(S)-3-(4-氟苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(4-氟-苯基)-2-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-943863-70-5)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

淺褐色固體。MS(ISP):381.1([M+H]+)。

實施例23

(S)-3-(3-甲氧基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1022575-47-8)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

淺褐色固體。MS(ISP):381.1([M+H]+)。

實施例24

(S)-3-(3-氰基苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用3-(3-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

淺褐色固體。MS(ISP):388.0([M+H]+)。

制備3-(3-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

類似于3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸,實施例21中所述。

實施例25

(S)-3-(3-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用3-(3-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):402.1([M+H]+)。

制備3-(3-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸:

類似于3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸,實施例21中所述。

實施例26

(S)-3-(4-氰基苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用3-(4-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):402.1([M+H]+)。

制備3-(4-氰基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酸:

類似于3-(4-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸,實施例21中所述。

實施例27

(S)-5-(3-氰基苯基)-4-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

褐色固體。MS(ISP):388.1([M+H]+)。

制備5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸:

步驟a)(Z)-4-(3-氰基苯基)-1-乙氧基-3-甲基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸 鋰:

在氬氣氛下向在THF中的LiHMDS1M(7.94ml,7.94mmol,Eq:1.00)在Et2O(50ml)中在-78℃的機械攪拌的溶液中滴加3-丙酰基芐腈(1.264g,7.94mmol,Eq:1.00)在Et2O(10.0ml)中的溶液。在將混合物在相同溫度攪拌另外45min的時間后,滴加草酸二乙酯(1.22g,1.13ml,8.34mmol,Eq:1.05)。使反應混合物升溫至rt并攪拌3天。形成的沉淀通過過濾收集,用二乙醚洗滌,并在真空下干燥,得到所期望的鋰鹽,為黃色固體(929mg,44.1%)。

步驟b)5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯:

在rt向(Z)-4-(3-氰基苯基)-1-乙氧基-3-甲基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸鋰(400mg,1.51mmol,Eq:1.00)在乙醇(10ml)中的溶液中加入鹽酸肼(113mg,1.65mmol,Eq:1.093),給出橙色溶液。將所得到的混合物在相同溫度攪拌過夜。1天后將溶劑在減壓下除去并向混合物加入鹽水。將溶液用AcOEt萃取兩次,并將合并的有機層用MgSO4干燥,過濾并濃縮,給出期望的化合物,為黃色膠狀物(114mg,26.6%)。

MS(ISP):256.0([M+H]+)。

步驟c)3-(3-氰基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸:

向5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(100mg,392μmol,Eq:1.00)于在MeOH(1.00ml)中的THF(5ml)中的溶液中加入LiOH1M(2.35ml,2.35mmol,Eq:6)。將混合物攪拌過夜。向殘余物加入水和HCl1N(pH:1),將該水相用乙酸乙酯萃取兩次,所得到的有機層將合并并用鹽水洗滌,用MgSO4干燥,過濾并在真空中濃縮,得到所期望的化合物(52mg,52.6%),為黃色固體。

MS(ISP):228.1(M+1)。

實施例28

(S)-5-(5-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(5-氰基-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

褐色固體。MS(ISP):392.0([M+H]+)。

制備5-(5-氰基-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸:

類似于5-(3-氰基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸,實施例21中所述。

實施例29

(S)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用在THF中的1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1152535-34-6)代替在DMF中的3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):367.0([M+H]+)。

實施例30

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-苯基-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用1-苯基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS-1133-77-3)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):349.1([M+H]+)。

實施例3l

(R)-1-(4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1152535-34-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):367.0([M+H]+)。

實施例32

(S)-1-(5-氯吡啶-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例47,在步驟b)中使用2-溴-5-氯吡啶代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶獲得標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):384.2([M+H]+)。

實施例33

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例47,在步驟b)中使用2-溴-5-(三氟甲基)吡啶代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶獲得標題化合物。

白色固體。MS(ISP):418.2([M+H]+)。

實施例34

(S)-1-(4-氰基苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例47,在步驟b)中使用2-溴-芐腈代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶獲得標題化合物。

灰白色固體。MS(ISP):374.3([M+H]+)。

實施例35

(R)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1006962-72-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):418.2([M+H]+)。

實施例36

(S)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):372.0([M+H]+)。

實施例37

(R)-3-(3-氰基苯基)-N-(4-(哌啶-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):372.0([M+H]+)。

實施例38

(外消旋)3-(3-氰基苯基)-N-(4-(吡咯烷-3-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用3-(4-氨基-苯基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(CAS-908334-28-1)代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯且5-(3-氰基-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(CAS-1242427-10-6)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):357.8([M+H]+)。

實施例39

(S)-5-(3-氰基-4-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-氰基-4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(如以下:a-d所示制備)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):392.1([M+H]+)。

制備5-(3-氰基-4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-甲酸:

a)(Z)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1-乙氧基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸鋰:在-78℃向在THF中的LiHMDS1M機械攪拌的溶液(9.22ml,9.22mmol,Eq:1)中加入Et2O(31.2ml),給出黃色溶液。在氬氣氛下向該混合物滴加1-(3-溴-4-氟苯基)乙酮(2g,9.22mmol,Eq:1.00)在Et2O(15.6ml)中的溶液。然后將混合物在相同溫度攪拌另外45min的時間。然后滴加草酸二乙酯(1.41g,1.31ml,9.68mmol,Eq:1.05)。使反應混合物升溫至rt并攪拌另外2天。形成的沉淀通過過濾收集,用二乙醚洗滌,并在真空下干燥,得到所期望的鋰鹽,為淺-黃色固體(2.677g,89.9%)。

b)5-(3-溴-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯:在rt向(Z)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1-乙氧基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-酸鋰(600mg,1.86mmol,Eq:1.00)在乙醇(25ml)中的溶液中加入肼一水合物(139mg,2.03mmol,Eq:1.093),給出白色懸浮液,1h后懸浮液變成溶液。將所得到的混合物攪拌過夜。1天后反應完全。攪拌后將溶劑在減壓下除去并向混合物加入鹽水,將溶液用AcOEt萃取兩次,并將合并的有機層用Na2SO4干燥,過濾并濃縮,給出5-(3-溴-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯,為白色固體(460mg,79.1%)。MS(ISP):314.8([M+H]+)。

c)5-(3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯:將5-(3-溴-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(300mg,958μmol,Eq:1.00),氰化鋅(65.2mg,556μmol,Eq:0.58)和Pd(PPh3)4(111mg,95.8μmol,Eq:0.1)的混合物在160℃在DMF(2ml)(在分子篩上儲存)中在微波中加熱30mins。將混合物在EtOAc(40mL)和2N?NH4OH(40mL)之間分配。將有機相用2N?NH4OH萃取,用鹽水洗滌,用MgSO4干燥并在真空中濃縮。將粗混合物通過柱色譜(10g)洗脫劑:庚烷/EtOAc:95/5純化,給出所期望的腈化合物,為白色結晶固體(180mg,72.5%)。MS(ISP):260.0([M+H]+)。

d)5-(3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸:向5-(3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(180mg,694μmol,Eq:1.00)在THF(5.00ml)和MeOH(1ml)中的溶液中加入LiOH1M(4.17ml,4.17mmol,Eq:6)。將混合物攪拌過夜。在加入LiOH后溶液變成橙色。向殘余物加入水和HCl1N(pH:1),將該水相用乙酸乙酯萃取兩次;將所得到的有機層合并并用鹽水洗滌。然后用MgSO4干燥,過濾并濃縮,給出期望的化合物(45mg,22.4%),為白色固體。MS(ISP):232.4([M+H]+)。

實施例40

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例1,使用5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸(如以下:a-c所示制備)代替3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):415.2([M+H]+)。

制備5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸:

a)5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸甲酯:在rt向(Z)-4-(3-(二氟甲氧基)苯基)-2-羥基-4-氧代丁-2-烯酸甲酯(CAS-832741-03-4)(800mg,2.94mmol,Eq:1.00)在乙醇(20ml)中的溶液中加入鹽酸肼(220mg,3.21mmol,Eq:1.093),給出橙色懸浮液。將所得到的混合物在相同溫度攪拌過夜。1天后反應完全。攪拌后將溶劑在減壓下除去并向混合物加入鹽水,將溶液用AcOEt萃取兩次,并將合并的有機層用MgSO4干燥,過濾并濃縮,給出期望的化合物,為淺-褐色固體(630mg,79.9%)。MS(ISP):269.0([M+H]+)。

b)5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸:向5-(3-二氟甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸甲酯(620mg,2.31mmol,Eq:1.00)在THF(10ml)和MeOH(2.00ml)中的溶液中加入LiOH1M(13.9ml,13.9mmol,Eq:6),給出褐色溶液。將混合物攪拌過夜。在加入LiOH后溶液變成。向殘余物加入水和HCl1N(pH∶1),將該水相用乙酸乙酯萃取兩次,將所得到的有機層合并并用鹽水洗滌。然后用MgSO4干燥,過濾并濃縮,給出期望的化合物(510mg,86.8%),為淺-黃色固體。MS(ISP):255.0([M+H]+)。

實施例41

(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

a)(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:在25mL圓底燒瓶中,將3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酸(515mg,2.03mmol,Eq:1.1)(制備描述于實施例40中),(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(513mg,1.84mmol,Eq:1.00)(制備描述于實施例1中),N-甲基嗎啉(559mg,608μl,5.53mmol,Eq:3)和HBTU(1.05g,2.76mmol,Eq:1.5)與DMF(2ml)合并,給出黃色溶液。將反應混合物在60℃攪拌過夜。將混合物傾倒入水(10ml)中并用EtOAc萃取兩次。將有機層用NaHCO3,鹽水洗滌,用MgSO4干燥,過濾并在真空中濃縮,給出褐色粗混合物。將該混合物用庚烷稀釋,攪拌15分鐘并將懸浮液過濾。將所得到的固體用庚烷洗滌幾次,得到所期望的化合物,為褐色固體(550mg,58.0%)。

b)(S)-2-(4-(5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯和(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯:

向(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(70mg,136μmol,Eq:1.00)和碳酸鉀(41.4mg,299μmol,Eq:2.2)在DMF(2ml)中的混合物中加入碘代乙烷(25.5mg,13.2μl,163μmol,Eq:1.2)并在rt攪拌過夜。向所得到的混合物中加入水并將有機相用水和鹽水萃取,然后將有機層用MgSO4干燥,濾出并在真空中濃縮,給出粗化合物,為異構體的混合物,將其通過柱色譜(10g-筒)分離,給出:(S)-2-(4-(5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(17mg,23.0%)和(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(27mg,36.6%)。

c)(S)-5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽:向(S)-2-(4-(5-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(17mg)在二噁烷(40.8μl)中的溶液中加入在二噁烷中的4M-HCl(117μl,470μmol,Eq:15)。將反應混合物在60℃攪拌過夜。向混合物中加入2ml的二乙醚并在室溫攪拌15min。將混合物過濾并在高真空中濃縮,給出預期的鹽酸鹽,為白色固體(9mg,60.0%)。MS(ISP):443.1([M+H]+)。

實施例42

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

向(S)-2-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-乙基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(27mg)(實施例41,b)中制備)在二噁烷(40.8μl)中的溶液中加入在二噁烷中的4M-HCl(117μl,470μmol,Eq:15)。將反應混合物在60℃攪拌過夜。向混合物中加入2ml的二乙醚并在室溫攪拌15min。將混合物過濾并在高真空中濃縮,給出預期的鹽酸鹽,為白色固體(15mg,63%)。MS(ISP):443.1([M+H]+)。

實施例43

(S)-3-(3-氰基-2-氟苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例39,使用1-(3-溴-2-氟苯基)乙酮代替1-(3-溴-4-氟苯基)乙酮制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):392.1([M+H]+)。

實施例44

(S)-3-(3-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例42,使用甲基碘代替碘代乙烷制備標題化合物。

白色固體。MS(ISP):429.1([M+H]+)。

實施例45

(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

a)2-氯-2-(2-(4-(二氟甲氧基)苯基)肼叉)乙酸乙酯

將4-(二氟甲氧基)苯胺(796mg,5mmol)溶解在四氟硼酸(2.38g,1.7ml,13.0mmol)和水(2ml)中。在冷卻至0℃后,緩慢加入亞硝酸鈉(345mg,5.0mmol)在水(0.75ml)中的溶液。將混合物攪拌30min并將稠密的沉淀物通過過濾收集并用二乙醚(約3ml)洗滌。將淺紅色固體溶解在1.5ml的丙酮中并加入5ml的二乙醚。在冷卻下攪拌15min后,將白色固體過濾,用二乙醚洗滌并在HV干燥15min,獲得四氟硼酸4-二氟甲氧基-重氮苯。

將該重氮鹽(851mg,3.3mmol)加入到2-氯-3-氧代丁酸乙酯(494mg,420μl,3mmol)在吡啶(0.8ml)和水(0.8ml)中的溶液中。將非常濃稠的懸浮液在-5℃攪拌30min。將固體過濾,用冰冷的水洗滌并在真空中干燥,獲得橙色固體(0.67g,76%)。MS(ISP):293.1([{35Cl}M+H]+),295.2([{37Cl}M+H]+)。

b)1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯

將2-氯-2-(2-(4-(二氟甲氧基)苯基)肼叉)乙酸乙酯(585mg,2mmol)溶解在甲苯(4ml)中并加入2,5-降冰片二烯(906mg,1ml,9.83mmol)和三乙胺(587mg,808μl,5.8mmo1)。將反應混合物在70℃攪拌30min并使反應混合物在室溫攪拌過夜。將固體濾出并用甲苯洗滌。將有機部分蒸發并將獲得的殘余物溶解在二甲苯(12ml)中并回流2小時。將溶劑蒸發并將殘余物通過柱色譜(50g硅膠,二氯甲烷)純化,獲得387mg(69%)的淺黃色固體。MS(ISP):283.1([M+H]+)。

c)1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸

向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(350mg,1.24mmol)在THF(3.1ml),甲醇(1.6ml),水(1.6ml)的混合物中的溶液加入氫氧化鋰水合物(89mg,3.72mmo1)。將溶液加熱至80℃歷時2h。將大部分的有機溶劑在減壓下除去。加入碳酸氫鈉溶液和乙酸乙酯并將有機層分離。通過加入25%鹽酸水溶液使水層成酸性并將混合物用乙酸乙酯萃取2次。將有機層合并,干燥(MgSO4)并蒸發。將產物在真空中干燥并直接用于下一步驟。

d)(S)-2-(4-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4- 甲酸叔丁酯

將(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(110mg,0.39mmol),1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酸(100mg,0.39mmol),HBTU(167mg,0.44mmol)和N-甲基嗎啉(119mg,130μl,1.18mmol)與DMF(2ml)合并,給出淺黃色溶液。將反應混合物在50℃攪拌17小時。

將反應混合物傾倒入25ml的水中并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機層用鹽水洗滌,用MgSO4干燥并在真空中濃縮。將粗物質通過急驟色譜(20g硅膠,30至50%在庚烷中的乙酸乙酯)純化,獲得灰白色固體(130mg,64%)。MS(ISP):459.4(100%,[M-tBu+H]+),515.4(5%,[M+H]+)。

e)(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰 胺鹽酸鹽

將(S)-2-(4-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(130mg,0.25mmol)溶解在二噁烷(0.6m1)中并加入HCl在二噁烷中的溶液(4M,0.12ml,3.8mmol)。將反應混合物在60℃攪拌過夜。冷卻后加入乙醚,將固體濾出,用乙醚洗滌并在真空中干燥,得到(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽(90mg,79%),為灰白色固體。MS(ISP):415.4([M+H]+)。

實施例46

(R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例45,在步驟c)中使用(R)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯獲得標題化合物。灰白色固體。MS(ISP):415.4([M+H]+)。

實施例47

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

a)(S)-2-(4-(1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯

將1H-吡唑-3-甲酸(560mg,5mmol)溶解在甲醇(62ml)中并加入(S)-2-(4-氨基苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(1.39g,5mmol)。將溶液冷卻至0℃并在1小時內將溶解在5ml甲醇中的氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓(1.8g,6.5mmol)滴加至反應混合物中。將反應混合物在0℃攪拌兩小時,然后在室溫攪拌過夜。將溶劑蒸發,將殘余物溶解在二氯甲烷中并吸附在硅膠上。

將該物質通過急驟色譜(硅膠,20g,30%至50%在庚烷中的EtOAc)純化,獲得白色固體(1.61g;86%),將其用于下一步驟。

b)(S)-2-(4-(1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉 -4-甲酸叔丁酯

將(S)-2-(4-(1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(33mg,0.089mmol)和2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶(16.2mg,0.089mmol)溶解在DMSO(0.7ml)中并加入碳酸鉀(24.5mg,0.177mmol)。將反應混合物放在Büchi震動器上在120℃歷時20小時。將混合物冷卻后,加入水,接著用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機層用MgSO4干燥并蒸發。將粗物質通過急驟色譜(硅膠,5g,25%至50%在庚烷中的EtOAc)純化,獲得灰白色固體(11mg,24%)。MS(ISP):463.1(100%,[M-tBu+H]+),519.3(10%,[M+H]+)。

c)(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-4-甲酰 胺鹽酸鹽

將(S)-2-(4-(1-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(11mg,21.2μmol)溶解在二噁烷(80μL)中并加入HCl在二噁烷中的溶液(79.6μL,318μmol)并將反應混合物在60℃攪拌2小時。冷卻后,加入二乙醚并將固體過濾并用二乙醚洗滌,得到(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-4-甲酰胺鹽酸鹽(7mg,70%),為灰白色固體。MS(ISP):419.3([M+H]+)。

實施例48

(S)-1-(6-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例47,在步驟b)中使用2,6-二氯吡嗪代替2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶獲得標題化合物。黃色固體。MS(ISP):385.3([{35Cl}M+H]+),387.3([{37Cl}M+H]+)。([M+H]+)。

實施例49

(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

a)(S)-2-(4-(1-(3-氯吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸 叔丁酯

將(S)-2-(4-(1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(90mg,0.24mmol)和2,3-二氯吡嗪(43mg,0.29mmol)溶解在二甲基乙酰胺(2ml)中并加入碳酸鉀(67mg,0.48mmol)。將反應混合物放在Büchi震動器上在80℃歷時16小時。為了完成反應加入額外量的2,3-二氯吡嗪(10mg)并在120℃繼續加熱另2h。將混合物冷卻后,加入水接著用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的有機層用MgSO4干燥并蒸發。將粗物質通過急驟色譜(硅膠,10g,25%至50%在庚烷中的EtOAc)純化,獲得灰白色膠狀物(48mg,42%)。MS(ISP):429.3(100%,[M-tBu+H]+),485.4(10%,[M+H]+)。

b)(S)-1-(3-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽 酸鹽

將(S)-2-(4-(1-(3-氯吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(44mg,90.7μmol)溶解在二噁烷(0.35ml)中并加入HCl在二噁烷中的溶液(340μl,1.36mmol)并將反應混合物在60℃攪拌90min。

將溶劑蒸發并將殘余物從乙酸乙酯和乙醇的混合物重結晶,獲得淺黃色固體(27mg,70%)。MS(ISP):385.2([{35Cl}M+H]+),387.2([{37Cl}M+H]+)。([M+H]+)。

實施例50

(S)-1-(5-氯吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例49,在步驟a)中使用2,5-二氯吡嗪代替2,3-二氯吡嗪獲得標題化合物。灰白色固體。MS(ISP):385.2([{35Cl}M+H]+),387.2([{37Cl}M+H]+)。([M+H]+)。

實施例51

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例49,在步驟a)中使用4-氯-6-(三氟甲基)嘧啶代替2,3-二氯吡嗪獲得標題化合物。白色固體。MS(ISP):419.2([M+H]+)。

實施例52

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(6-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例49,在步驟a)中使用2-碘-6-(三氟甲基)吡嗪代替2,3-二氯吡嗪獲得標題化合物。淺黃色固體。MS(ISP):419.2([M+H]+)。

實施例53

(S)-1-(5-氰基吡嗪-2-基)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例49,在步驟a)中使用5-溴吡嗪-2-甲腈代替2,3-二氯吡嗪獲得標題化合物。淺黃色固體。MS(ISP):376.3([M+H]+)。

實施例54

(S)-N-(4-(嗎啉-2-基)苯基)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺鹽酸鹽

類似于實施例49,在步驟a)中使用4-氯-2-(三氟甲基)嘧啶代替2,3-二氯吡嗪獲得標題化合物。淺綠色固體。MS(ISP):419.2([M+H]+)。

式I化合物和它們的藥學上有用的加成鹽擁有有價值的藥理學特性。具體地,已經發現本發明的化合物對于痕量胺相關受體(TAAR),尤其是TAAR1具有良好的親和性。

根據在下文中給出的試驗研究這些化合物。

材料和方法

TAAR表達質粒和穩定轉染的細胞系的構造

為了構造表達質粒,基本上如Lindemann等[14]所述,由基因組DNA擴增人類、大鼠和小鼠TAAR1的編碼序列。以1.5mM?Mg2+使用擴展高保真PCR體系(Expand?High?Fidelity?PCR?System)(Roche?Diagnostics),并按照制造商的使用說明將純化的PCR產物克隆至pCR2.1-TOPO克隆載體(Invitrogen)中。將PCR產物亞克隆至pIRESneo2載體(BD?Clontech,Palo?Alto,California)中,并且在引入細胞系中之前對表達載體進行序列證實。

基本上如Lindemann等(2005)所述,培養HEK293細胞(ATCC#CRL-1573)。為了產生穩定轉染的細胞系,用含有TAAR編碼序列的pIRESneo2表達質粒(上面描述)與Lipofectamine2000(Invitrogen)根據制造商的使用說明轉染HEK293細胞,并且轉染后24小時,用1mg/ml?G418(Sigma,Buchs,瑞士)補充培養基。在約10d的培養周期之后,將克隆分離、擴增并用cAMP?Biotrak酶免疫測定(EIA)系統(Amersham),按照由制造商提供的非乙酰化EIA程序對其測定對痕量胺(所有化合物購自Sigma)的反應性。將對于15個傳代的培養周期顯示出穩定的EC50的單克隆細胞系用于所有隨后的研究。

針對大鼠TAAR1的放射性配體結合測定

膜制備和放射性配體結合

將穩定表達大鼠TAAR1的HEK-293細胞在含有胎牛血清(10%,在56℃熱滅活30min),青霉素/鏈霉素(1%),和375μg/ml遺傳霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培養基中在37℃和5%CO2保持。使用胰蛋白酶/EDTA將細胞從培養瓶中釋放,收獲,用冰-冷的PBS(不含Ca2+和Mg2+)洗滌兩次,以1’000rpm在4℃成粒5min,冰凍并保存在-80℃。將冰凍的粒狀物懸浮在20ml含有10mM?EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,并用Polytron(PT6000,Kinematica)以14’000rpm勻質化20s。勻漿以48’000x?g在4℃離心30min。之后,去除并棄去上清液,并將粒狀物重新懸浮在20ml含有0.1mM?EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,使用Polytron(以14’000rpm,20s)。重復此程序,并將最終的粒狀物重新懸浮在含有0.1mM?EDTA的HEPES-NaOH中,并使用Polytron勻質化。典型地,將2ml膜部分的等分試樣保存在-80℃。對于每個新的膜批次,通過飽和曲線確定解離常數(Kd)。TAAR1放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氫-唑-2-基胺(記述在WO2008/098857中)以與計算的Kd值相等的濃度使用,其通常為大約2.3nM,產生約0.2%的該放射性配體的結合,和占總結合的約85%的特異性結合。非特異性結合定義為在10μM的未標記配體的存在下結合的3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氫-唑-2-基胺的量。所有化合物均以寬的濃度范圍(10pM至10μM)一式兩份地進行測試。將測試化合物(20μl/孔)轉移至96深孔板(TreffLab)中,并加入180μl含有MgCl2(10mM)和CaCl2(2mM)的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)(結合緩沖液),300μl以nM計濃度為3.3xKd的放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氫-唑-2-基胺和500μl膜(以50μg蛋白/ml重新懸浮)。96深孔板在4℃溫育1hr。通過經由在聚乙烯亞胺(0.3%)中預浸1hr并用1nl冷的結合緩沖液洗滌3次的Unifilter-96板(Packard?Instrument?Company)和玻璃濾器GF/C(Perkin?Elmer)迅速過濾終止溫育。在添加45μl?Microscint40(PerkinElmer)后,將Unifilter-96板密封,并在1hr后使用TopCoum微板閃爍計數儀(Packard?Instrument?Company)計數放射活性。

針對小鼠TAAR1的放射性配體結合測定

膜制備和放射性配體結合

穩定表達小鼠TAAR1的HEK-293細胞在含有胎牛血清(10%,在56℃熱滅活30min),青霉素/鏈霉素(1%),和375μg/ml遺傳霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培養基中在37℃和5%CO2保持。使用胰蛋白酶/EDTA將細胞從培養瓶中釋放,收獲,用冰-冷的PBS(不含Ca2+和Mg2+)洗滌兩次,以1’000rpm在4℃成粒5min,冰凍并保存在-80℃。將冰凍的粒狀物懸浮在20ml含有10mM?EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,并用Polytron(PT6000,Kinematica)以14’000rpm勻質化20s。勻漿以48’000x?g在4℃離心30min。之后,去除并棄去上清液,并將粒狀物重新懸浮在20ml含有0.1mM?EDTA的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)中,使用Polytron(以14’000rpm,20s)。重復此程序,并將最終的粒狀物重新懸浮在含有0.1mM?EDTA的HEPES-NaOH中,并使用Polytron勻質化。典型地,將2ml膜部分的等分試樣保存在-80℃。對于每個新的膜批次,通過飽和曲線確定解離常數(Kd)。TAAR1放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氫-唑-2-基胺(記述在WO2008/098857中)以與計算的Kd值相等的濃度使用,其通常為大約0.7nM,產生約0.5%的該放射性配體的結合,和占總結合的約70%的特異性結合。非特異性結合定義為在10μM的未標記配體的存在下結合的3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氫-唑-2-基胺的量。所有化合物均以寬的濃度范圍(10pM至10μM)一式兩份地進行測試。將測試化合物(20μl/孔)轉移至96深孔板(TreffLab)中,并加入180μl含有MgCl2(10mM)和CaCl2(2mM)的HEPES-NaOH(20mM,pH7.4)(結合緩沖液),300μl以nM計濃度為3.3xKd的放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4,5-二氫-唑-2-基胺和500μl膜(以60μg蛋白/ml重新懸浮)。96深孔板在4℃溫育1hr。通過經由在聚乙烯亞胺(0.3%)中預浸1hr并用1ml冷的結合緩沖液洗滌3次的Unifilter-96板(Packard?Instrument?Company)和玻璃濾器GF/C(Perkin?Elmer)迅速過濾終止溫育。在添加45μl?Microscint40(PerkinEhner)后,將Unifilter-96板密封,并在1hr后使用TopCount微板閃爍計數儀(Packard?Instrument?Company)計數放射活性。

如下表中所示,化合物在小鼠或大鼠中對TAARl顯示在<0.1μM的范圍內的Ki值(μM)。

可以將式IA和IB化合物和式IA和IB化合物的藥用鹽用作藥物,例如以藥物制劑的形式。可以將藥物制劑口服給藥,例如以片劑、包衣片劑、糖錠劑、硬和軟明膠膠囊、溶液、乳劑或混懸劑的形式。然而,給藥還可以直腸給藥,例如以栓劑形式,或者腸胃外給藥,例如以注射液形式。

可以用藥學上惰性的無機或有機載體加工式IA和IB化合物用于藥物制劑的制備。例如,可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等,作為用于片劑、包衣片劑、糖錠劑和硬明膠膠囊的那些載體。用于軟明膠膠囊的合適載體為,例如,植物油、蠟、脂肪、半固體和液體多元醇等。然而,取決于活性物質的本性,在軟明膠膠囊的情況下通常不需要載體。用于制備溶液和糖漿的合適載體為,例如,水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓劑的合適載體為,例如,天然或硬化油、蠟、脂肪、半液體或液體多元醇等。

此外,藥物制劑可以含有防腐劑、增溶劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖劑、掩蔽劑或者抗氧化劑。它們還可以含有其它的治療上有價值的物質。

含有式IA和IB化合物或其藥用鹽以及治療上惰性的載體的藥物也是本發明的目的,同樣的是用于它們的制備的方法,所述方法包括將一種或多種式IA和IB化合物和/或藥用酸加成鹽以及如果需要,一種或多種其他治療上有價值的物質,與一種或多種治療上惰性的載體一起得到蓋倫制劑給藥形式。

根據本發明的最優選的適應證是包含中樞神經系統的病癥的那些,例如抑郁癥、精神病性精神障礙、帕金森病、焦慮癥和注意缺陷多動障礙(ADHD)和糖尿病的治療或預防。

劑量可以在寬限度內變化并且當然應在每個特定的情況下調整以適應個體的需求。在口服給藥的情況下,用于成人的劑量可以在以下范圍變化:每天約0.01mg至約1000mg的通式I化合物或相應量的其藥用鹽。每日的劑量可以作為單次劑量給藥或以分開的劑量給藥,并且此外,當其被認為需要時也可以超過上限。

片劑制劑(濕法制粒)

制備程序

1.將第1、2、3和4項混合,并用凈化水制粒。

2.將顆粒在50℃干燥。

3.使顆粒通過合適的研磨設備。

4.加入第5項并混合三分鐘;在合適的壓機上壓制。

膠囊制劑

制備程序

1.將第1、2和3項在合適的混合器中混合30分鐘。

2.加入第4和5項并混合3分鐘。

3.填充至合適的膠囊中。

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