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白鳳菜組織培養繁殖方法.pdf

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白鳳菜 組織培養 繁殖 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310178549.5

申請日:

20130515

公開號:

CN103229721A

公開日:

20130807

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 聊城大學
發明人: 穆紅梅,張秀省,杜秀菊
地址: 252059 山東省聊城市東昌府區湖南路1號
優先權: CN201310178549A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310178549.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了一種白鳳菜組織培養繁殖方法,以白鳳菜莖段為外植體,經滅菌、接種誘導形成愈傷組織后,再經愈傷組織增殖、芽誘導和根誘導,形成完整植株小苗,將完整小苗移栽到育苗基質中,長成正常白鳳菜植株,所用基本培養基均為以MS培養基為基礎,輔以L-脯氨酸、6-芐基腺嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、蔗糖和活性炭等成分;本發明應用組織培養克服白鳳菜育苗周期長、繁殖系數低的問題,可進行工廠化快速育苗,以適應市場對白鳳菜的需求。

權利要求書

1.一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:以白鳳菜的莖段為外植體,經滅菌處理、接種誘導形成愈傷組織后,再經愈傷組織增殖、誘導芽和生根培養,形成完整的植株小苗,將完整小苗移栽到育苗基質中,長成正常白鳳菜植株。2.根據權利要求1所述的一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:包括下列步驟:A、外植體的選擇和滅菌處理:以白鳳菜的莖段為外植體,以洗潔精浸泡,搖床100-150轉搖15-20分鐘,再用清水沖洗15-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.1%的升汞中,浸泡滅菌9-14分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,備用;B、外植體接種:將經過步驟A中準備的外植體切去兩端,切成0.5-0.8厘米長的小塊,接種在愈傷組織誘導培養基上,培養時間為28-35天,在莖切口處膨大形成愈傷組織;C、愈傷組織增殖:將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上,愈傷組織增殖25-30天,長出黃色、致密的愈傷組織;D、愈傷組織的芽的誘導:將步驟C中得到的愈傷組織接種到芽誘導培養基上,培養30-35天,出現白鳳菜叢生芽;E、生根培養:將步驟D中得到的白鳳菜叢生芽分株,轉入生根培養基中,培養20-25天,小苗基部出現白色短根并長出完整根系;F、煉苗:將步驟E中的完整小苗打開培養瓶瓶口,人工氣候室內煉苗3-5天;G、植株移栽:移栽前,對含蛭石、泥炭的育苗基質滅菌,將步驟F中得到的經過煉苗的小苗直接移栽到育苗基質,上覆保鮮膜以保持局部空氣濕度,長成正常白鳳菜植株。3.根據權利要求1或2所述的一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:所述的白鳳菜基源植物為菊科多年生草本植物白鳳菜Gynura?formosana?Kitam。4.根據權利要求2所述的一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:所述的愈傷組織誘導培養基為MS、L-脯氨酸、2,4-D5.0-1.0mg/L、NAA0.2mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸,NAA為萘乙酸。5.根據權利要求2所述的一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:所述的愈傷組織增殖培養基為:MS、L-脯氨酸0.5~2.5mg/L、2,4-D?0.5~1.0mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸。6.根據權利要求2所述的一種白鳳菜組織培養方法,其特征在于:所述的芽誘導培養基為:MS、6-BA1.5~4.5mg/L、NAA0.2~0.5mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,6-BA為6-芐基腺嘌呤,NAA為萘乙酸。7.根據權利要求所述的一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:所述的生根培養基為:1/2MS、NAA0.01mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,該常規基本培養基中的大量元素濃度減半得到1/2MS,NAA為萘乙酸。8.根據權利要求2所述的一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:所述的愈傷組織誘導培養基、愈傷組織增殖培養基和芽誘導培養基均加入0.7~1.0%的瓊脂、3%蔗糖和0.1~0.5活性炭。9.根據權利要求1或2所述的一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:所述的育苗基質的理化性質為總孔隙度為75%,有機質含量為20%。

說明書

技術領域

本發明涉及生物的培養和繁殖,特別是一種白鳳菜組織培養繁殖方法。

背景技術???

白鳳菜(Gynura?formosana?Kitam.)是菊科(Compositae)多年生藥食兩用植物,特產臺灣。"白鳳菜"別名白擔當,俗名肝炎草。白鳳菜白鳳菜營養豐富,每100公克含有蛋白質2公克、維生素A?573.3RE、維生素C?24.5毫克,以及豐富微量元素,鉀380毫克、鈣82毫克、磷42毫克、鋅0.4毫克。因其含鋅量高,又有“聰明菜”之稱,是新興的蔬菜品種,嫩莖葉為食用部位,為保健藥膳珍稀蔬菜,有“最佳保健藥膳蔬菜”之稱。近年來,成為中國各大城市蔬菜、保健、醫療市場上的新秀,受到消費者歡迎。白鳳菜全草或莖葉可入藥,清熱排毒舒筋。主入肝、肺、腎、大小腸諸經,有消炎、解熱、解毒、利尿、降血壓等功效,主治肝炎、肝硬化、肺炎、肺癌、高血壓、感冒、發燒、腎臟炎、水腫、便秘、腸炎、兒童日本腦炎,外敷刀傷、創傷、跌打損傷、毒蟲咬傷和無名腫毒。許多城市,相繼引入試種,栽培面積逐漸擴大。近年來隨著國內外對白鳳菜需求量的增加,供需矛盾日益突出,白鳳菜苗木及新品種培育勢在必行。

植物組織培養技術是根據植物細胞具有全能性的理論(個體的某個器官或組織已經分化的細胞再生成完整個體的遺傳潛力),取植物個體上的器官或細胞,原生質體等,通過無菌操作,在人工配制的培養基上,進行培養以獲得成千上萬個的完整植株。利用組培進行離體快繁具有重要意義:(1)占用空間小,不受地區、季節、氣候限制,一年四季均可繁殖;(2)偏于保持優良種性、培養脫毒種苗;(3)在保存和繁育優良突變體或優良雜種一代方面具有非常重要的意義;(4)解決有些植物產種子少或無的難題。一株具有明顯優勢的白鳳菜突變體或一個具有明顯優勢的后代經組織培養后可大面積推廣。

目前白鳳菜以扦插繁殖為主,組織培養尚未見報道。由于白鳳菜含有的化學物質較多,對外植體的選擇和滅菌方法都非常關鍵。本發明首次采用組織培養方法,開展白鳳菜種質離體繁殖工作,這為緩解白鳳菜苗木供應緊張,開展白鳳菜遺傳改良、促進白鳳菜工廠化育苗提供了一條新途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種通過組織培養進行白鳳菜種質保存和快速繁苗的方法。

本發明的技術方案是:

一種白鳳菜組織培養繁殖方法,其特征在于:以白鳳菜的莖段為外植體,經滅菌處理、接種誘導形成叢生芽,再經生根培養,長成完整的植株小苗,將完整的小苗移栽到育苗基質中,長成正常的白鳳菜植株。

所述的白鳳菜組織培養繁殖方法,包括下列步驟:

A、外植體的選擇和滅菌處理:以白鳳菜的莖段為外植體,以洗潔精浸泡,搖床100-150轉搖15-20分鐘,再用清水沖洗15-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.1%的升汞中,浸泡滅菌9-14分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,備用;

B、外植體接種:將經過步驟A中準備的外植體切去兩端,切成0.5-0.8厘米長的小塊,接種在愈傷組織誘導培養基上,培養時間為28-35天,在莖切口處膨大形成愈傷組織;

C、愈傷組織增殖:將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上,愈傷組織增殖25-30天,長出黃色、致密的愈傷組織;

D、愈傷組織的芽的誘導:將步驟C中得到的愈傷組織接種到芽誘導培養基上,培養30-35天,出現白鳳菜叢生芽;

E、生根培養:將步驟D中得到的白鳳菜叢生芽分株,轉入生根培養基中,培養20-25天,小苗基部出現白色短根并長出完整根系;

F、煉苗:將步驟E中的完整小苗打開培養瓶瓶口,人工氣候室內煉苗3-5天;

G、植株移栽:移栽前,對含蛭石、泥炭的育苗基質滅菌,將步驟F中得到的經過煉苗的小苗直接移栽到育苗基質,上覆保鮮膜以保持局部空氣濕度,長成正常白鳳菜植株。

所述的外植體滅菌處理采用0.1-0.2升汞浸泡滅菌9-14分鐘方法,無需用75%酒精浸泡。

所述的致密的愈傷組織是指非顆粒狀散在的愈傷組織。

所述的白鳳菜基源植物為菊科多年生草本植物白鳳菜Gynura?formosana?Kitam。

所述的愈傷組織誘導培養基為MS、L-脯氨酸、2,4-D?5.0-1.0mg/L、NAA?0.2mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸,NAA為萘乙酸。

所述的愈傷組織增殖培養基為:MS、L-脯氨酸0.5~2.5mg/L、2,4-D?0.5~1.0mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,?2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸。

所述的芽誘導培養基為:MS、6-BA1.5~4.5mg/L、NAA0.2~0.5mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,6-BA為6-芐基腺嘌呤,NAA為萘乙酸。

所述的生根培養基為:1/2MS和NAA0.01mg/L,其中:MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962,該常規基本培養基中的大量元素濃度減半得到1/2MS,NAA為萘乙酸。

所述的愈傷組織誘導培養基、愈傷組織增殖培養基和芽誘導培養基均加入占相應培養基總質量0.7~1.0%的瓊脂、3%蔗糖和0.1~0.5%活性炭。

所述的育苗基質的理化性質為總孔隙度為75%,有機質含量為20%。

所述的完整小苗是指完成了芽和根的分化,并已長出小葉片,可以獨立進行自養生長的幼小植株。

所述的育苗基質的理化性質為總孔隙度為75%,有機質含量為20%。

本發明的有點在于:本發明利用組織培養進行離體快速繁殖在以下四個方面具有重要意義:1)占用空間小,不受地區、季節、氣候限制,一年四季均可繁殖;(2)偏于保持優良種性、培養脫毒種苗;(3)在保存和繁育優良突變體或優良雜種一代方面具有非常重要的意義;(4)解決有些植物產種子少或無的難題。一株具有明顯優勢的白鳳菜突變體或一個具有明顯優勢的后代經組織培養后可大面積推廣。

本發明所用培養基誘發時間短、出苗快、繁殖頻率高,尤其出苗整齊,易于操作、大規模生產育苗。

本發明首次采用組織培養方法,開展白鳳菜種質離體繁殖工作,這為保護白鳳菜種質資源,開展白鳳菜遺傳改良、促進白鳳菜的工廠化育苗提供了一條新途徑,提供了一種能進行白鳳菜人工繁殖、種質資源離體保存、利用及選育藥用成分含量高的突變系的組織培養方法。

具體實施方式

下面結合實施例詳細說明本發明的技術方案,但保護范圍不被此限制。

實施例中各種原料或設備均可從市場購買。

其中,所述的MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962的簡稱(按常規為:硝酸銨(NH4NO3)1650?mg/L,硝酸鉀(KNO3)900?mg/L,硫酸鎂(MgSO4·7H2O)370?mg/L,硫酸二氫鉀(KH2PO4)170?mg/L,?氯化鈣(CaCl2·2H2O?)440?mg/L,硫酸錳(MnSO4·4H2O)22.3?mg/L,硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)8.6?mg/L,硼酸(H3BO3)6.2?mg/L,碘化鉀(KI)0.83?mg/L,鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)0.25?mg/L,硫酸銅(CuSO4·5H2O?)0.025mg/L,氯化鈷(CoCl2·6H2O)0.025?mg/L,硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)27.8?mg/L,Na2-EDTA·2H2O??37.3mg/L, 甘氨酸2?mg/L,鹽酸硫胺素(維生素B1)?0.1?mg/L,鹽酸吡哆醇(維生素B6)?0.5mg/L,IVB煙酸0.5?mg/L,?肌醇100?mg/L。),2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸,NAA為萘乙酸;實施例中所述的育苗基質的理化性質為總孔隙度為75%,有機質含量為20%。

實施例1

一種白鳳菜組織培養繁殖方法,包括下列步驟:

A、取白鳳菜Gynura?formosana?Kitam.的莖段為外植體,用流水沖洗3-5分鐘,以洗潔精浸泡,室溫下搖床100-150轉搖15-20分鐘,再用清水沖洗15-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.1%的升汞中,浸泡滅菌10分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,備用;

A、外植體的選擇和滅菌處理:以白鳳菜的莖段為外植體,以洗潔精浸泡,搖床100-150轉搖15-20分鐘,再用清水沖洗15-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.1%的升汞中,浸泡滅菌9-14分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,備用;

B、外植體接種:在超凈工作臺上,將經過步驟A的外植體切成0.5-0.8厘米長的小塊,接種在愈傷組織誘導培養基上,該培養基為:MS+L-脯氨酸?2.0?mg/L+2,4-D?0.5?mg/L?+NAA?0.2mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、3%的蔗糖和0.1%的活性炭,培養約35天后,可見在莖切口處膨大形成愈傷組織;

所述的超凈工作臺,型號為HS-1300,由蘇靜集團蘇州安泰空氣技術有限公司生產。

C、愈傷組織增殖:將步驟B中得到的俞傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上,該培養基為MS+L-脯氨酸?1.5?mg/L+2,4-D1.0?mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、3%的蔗糖和0.1%的活性炭,增殖培養約30-32天后,長出黃色、致密的愈傷組織;

D、愈傷組織的芽誘導:將步驟C中得到的愈傷組織接種到芽誘導培養基上,該培養基為MS+6-BA?3.0mg/L+NAA?0.02mg/L,?培養基中加入0.8%的瓊脂、3%的蔗糖和0.1%的活性炭,培養約30-35天后,出現叢生白鳳菜活苗;

E、生根培養:將步驟D中的白鳳菜苗長至2-3厘米時,轉入生根培養基中,該培養基為1/2MS++NAA?0.20mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、2%的蔗糖,培養20-25天,小苗基部出現白色短根并長出完整根系;

培養溫度及光照條件:溫度為21±2℃,關照強度為1600Lux,光照時間為14小時;

F、煉苗:將步驟E中的完整小苗打開培養瓶瓶口,人工氣候室內煉苗3-5天;

G、植株移栽:移栽前,對含蛭石、泥炭的育苗基質滅菌,將步驟F中得到的經過煉苗的小苗直接移栽到育苗基質,上覆保鮮膜以保持局部空氣濕度,長成正常白鳳菜植株,一般成活率在90%以上。

實施例2

一種白鳳菜組織培養繁殖方法,包括下列步驟:

A、取白鳳菜Gynura?formosana?Kitam.的莖段為外植體,用流水沖洗3-5分鐘,以洗潔精浸泡,室溫下搖床100-150轉搖10-15分鐘,再用清水沖洗20-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.1%的升汞中,浸泡滅菌11分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,最后用無菌濾紙吸干水分備用;

B、外植體接種:在超凈工作臺上,將經過步驟A的外植體切成0.3-0.5厘米長的小塊,接種在愈傷組織誘導培養基上,該培養基為:MS+L-脯氨酸?1.0?mg/L+2,4-D?0.8?mg/L?+NAA?0.4mg/L,培養基中加入0.7?%的瓊脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭,培養約30-35天后,可見在莖切口處膨大形成愈傷組織;

所述的超凈工作臺,型號為HS-1300,由蘇靜集團蘇州安泰空氣技術有限公司生產。

所述的MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962的簡稱,?2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸,NAA為萘乙酸;

C、愈傷組織增殖:將步驟B中得到的俞傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上,該培養基為MS+L-脯氨酸?1.0?mg/L+2,4-D?0.7?mg/L,培養基中加入0.7%的瓊脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭,增殖培養約30-32天后,長出黃色、致密的愈傷組織;

D、愈傷組織的芽誘導:將步驟C中得到的愈傷組織接種到芽誘導培養基上,該培養基為MS+6-BA?2.5?mg/L+NAA?0.2?mg/L,?培養基中加入0.7%的瓊脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭,培養約30-35天后,出現叢生白鳳菜活苗;

E、生根培養:將步驟D中的白鳳菜苗長至2-3厘米時,轉入生根培養基中,該培養基為1/2MS++NAA?0.4mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、2%的蔗糖,培養20-25天,小苗基部出現白色短根并長出完整根系;

培養溫度及光照條件:溫度為21±2℃,關照強度為1600Lux,光照時間為14小時;

F、煉苗:將步驟E中的完整小苗打開培養瓶瓶口,人工氣候室內煉苗3-5天;

G、植株移栽:移栽前,對含蛭石、泥炭的育苗基質滅菌,將步驟F中得到的經過煉苗的小苗直接移栽到育苗基質,上覆保鮮膜以保持局部空氣濕度,長成正常白鳳菜植株,一般成活率在90%以上。

實施例3

一種白鳳菜組織培養繁殖方法,包括下列步驟:

A、取白鳳菜Gynura?formosana?Kitam.的莖段為外植體,用流水沖洗3-5分鐘,以洗潔精浸泡,室溫下搖床100-150轉搖10-15分鐘,再用清水沖洗20-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.15%的升汞中,浸泡滅菌10分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,最后用無菌濾紙吸干水分備用;

B、外植體接種:在超凈工作臺上,將經過步驟A的外植體切成0.3-0.5厘米長的小塊,接種在愈傷組織誘導培養基上,該培養基為:MS+L-脯氨酸2.0?mg/L+2,4-D?1.0mg/L?+NAA?0.5mg/L,培養基中加入0.8?%的瓊脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭,培養約30-35天后,可見在莖切口處膨大形成愈傷組織;

所述的超凈工作臺,型號為HS-1300,由蘇靜集團蘇州安泰空氣技術有限公司生產。

所述的MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962的簡稱,?2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸,NAA為萘乙酸;

C、愈傷組織增殖:將步驟B中得到的俞傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上,該培養基為MS+L-脯氨酸2.0?mg/L+2,4-D1.0mg/L,培養基中加入0.7%的瓊脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭,增殖培養約30-32天后,長出黃色、致密的愈傷組織;

D、愈傷組織的芽誘導:將步驟C中得到的愈傷組織接種到芽誘導培養基上,該培養基為MS+6-BA2.5?mg/L+NAA?0.1?mg/L,?培養基中加入0.8%的瓊脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭,培養約30-35天后,出現叢生白鳳菜活苗;

E、生根培養:將步驟D中的白鳳菜苗長至2-3厘米時,轉入生根培養基中,該培養基為1/2MS++NAA?0.6mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、2%的蔗糖,培養20-25天,小苗基部出現白色短根并長出完整根系;

培養溫度及光照條件:溫度為21±2℃,關照強度為1600Lux,光照時間為14小時;

F、煉苗:將步驟E中的完整小苗打開培養瓶瓶口,人工氣候室內煉苗3-5天;

G、植株移栽:移栽前,對含蛭石、泥炭的育苗基質滅菌,將步驟F中得到的經過煉苗的小苗直接移栽到育苗基質,上覆保鮮膜以保持局部空氣濕度,長成正常白鳳菜植株,一般成活率在90%以上。

實施例4

一種白鳳菜組織培養繁殖方法,包括下列步驟:

A、取白鳳菜Gynura?formosana?Kitam.的莖段為外植體,用流水沖洗3-5分鐘,以洗潔精浸泡,室溫下搖床100-150轉搖10-15分鐘,再用清水沖洗20-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.15%的升汞中,浸泡滅菌12分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,最后用無菌濾紙吸干水分備用;

B、外植體接種:在超凈工作臺上,將經過步驟A的外植體切成0.3-0.5厘米長的小塊,接種在愈傷組織誘導培養基上,該培養基為:MS+L-脯氨酸1.5?mg/L+2,4-D?1.5mg/L?+NAA?0.5mg/L,培養基中加入0.9?%的瓊脂、3%的蔗糖和0.3%的活性炭,培養約30-35天后,可見在莖切口處膨大形成愈傷組織;

所述的超凈工作臺,型號為HS-1300,由蘇靜集團蘇州安泰空氣技術有限公司生產。

所述的MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962的簡稱,?2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸,NAA為萘乙酸;

C、愈傷組織增殖:將步驟B中得到的俞傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上,該培養基為MS+L-脯氨酸2.5?mg/L+2,4-D?0.9mg/L,培養基中加入0.9%的瓊脂、3%的蔗糖和0.3%的活性炭,增殖培養約25-30天后,長出黃色、致密的愈傷組織;

D、愈傷組織的芽誘導:將步驟C中得到的愈傷組織接種到芽誘導培養基上,該培養基為MS+6-BA?2.5?mg/L+NAA?0.02mg/L,?培養基中加入0.9%的瓊脂、3%的蔗糖和0.3%的活性炭,培養約30-35天后,出現叢生白鳳菜活苗;

E、生根培養:將步驟D中的白鳳菜苗長至2-3厘米時,轉入生根培養基中,該培養基為1/2MS++NAA?1.0?mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、2%的蔗糖,培養20-25天,小苗基部出現白色短根并長出完整根系;

培養溫度及光照條件:溫度為21±2℃,關照強度為1600Lux,光照時間為14小時;

F、煉苗:將步驟E中的完整小苗打開培養瓶瓶口,人工氣候室內煉苗3-5天;

G、植株移栽:移栽前,對含蛭石、泥炭的育苗基質滅菌,將步驟F中得到的經過煉苗的小苗直接移栽到育苗基質,上覆保鮮膜以保持局部空氣濕度,長成正常白鳳菜植株,一般成活率在90%以上。

所述的育苗基質的理化性質為總孔隙度為75%,有機質含量為20%。

實施例5

一種白鳳菜組織培養繁殖方法,包括下列步驟:

A、取白鳳菜Gynura?formosana?Kitam.的莖段為外植體,用流水沖洗3-5分鐘,以洗潔精浸泡,室溫下搖床100-150轉搖10-15分鐘,再用清水沖洗20-30分鐘,再將沖洗后的外植體置于濃度為0.2%的升汞中,浸泡滅菌10分鐘,無菌去離子水沖洗6-8次,最后用無菌濾紙吸干水分備用;

B、外植體接種:在超凈工作臺上,將經過步驟A的外植體切成0.3-0.5厘米長的小塊,接種在愈傷組織誘導培養基上,該培養基為:MS+L-脯氨酸0.5?mg/L+2,4-D?1.0mg/L?+NAA?0.5mg/L,培養基中加入0.8?%的瓊脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭,培養約30-35天后,可見在莖切口處膨大形成愈傷組織;

所述的超凈工作臺,型號為HS-1300,由蘇靜集團蘇州安泰空氣技術有限公司生產。

所述的MS為常規基本培養基Murashige?and?Skoog?1962的簡稱,?2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸,NAA為萘乙酸;

C、愈傷組織增殖:將步驟B中得到的俞傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上,該培養基為MS+L-脯氨酸2.0?mg/L+2,4-D?1.0?mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭,增殖培養約25-30天后,長出黃色、致密的愈傷組織;

D、愈傷組織的芽誘導:將步驟C中得到的愈傷組織接種到芽誘導培養基上,該培養基為MS+6-BA?3.0mg/L+NAA?0.1?mg/L,?培養基中加入0.8%的瓊脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭,培養約30-35天后,出現叢生白鳳菜活苗;

E、生根培養:將步驟D中的白鳳菜苗長至2-3厘米時,轉入生根培養基中,該培養基為1/2MS++NAA?0.2mg/L,培養基中加入0.8%的瓊脂、2%的蔗糖,培養20-25天,小苗基部出現白色短根并長出完整根系;

培養溫度及光照條件:溫度為21±2℃,關照強度為1600Lux,光照時間為14小時;

F、煉苗:將步驟E中的完整小苗打開培養瓶瓶口,人工氣候室內煉苗3-5天;

G、植株移栽:移栽前,對含蛭石、泥炭的育苗基質滅菌,將步驟F中得到的經過煉苗的小苗直接移栽到育苗基質,上覆保鮮膜以保持局部空氣濕度,長成正常白鳳菜植株,一般成活率在90%以上。

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本文標題:白鳳菜組織培養繁殖方法.pdf
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