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喙尾琵琶甲提取物及其制備方法和藥物用途.pdf

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琵琶 提取物 及其 制備 方法 藥物 用途
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摘要
申請專利號:

CN201310218841.5

申請日:

20130604

公開號:

CN103263442A

公開日:

20130828

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K35/64,A61P29/00,A61P25/04,A23L1/29 主分類號: A61K35/64,A61P29/00,A61P25/04,A23L1/29
申請人: 大理學院
發明人: 王瑩,巫秀美,肖懷,李兆云,施貴榮,趙昱,劉光明
地址: 671003 云南省大理白族自治州大理市古城弘圣路2號
優先權: CN201310218841A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310218841.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及喙尾琵琶甲提取物及其制備方法和藥物用途。本發明的喙尾琵琶甲提取物由鞘翅目擬步甲科琵琶甲屬昆蟲喙尾琵琶甲Blaps?rynchopetera?Fairmaire的任一部位或全蟲經醇水提取而成。喙尾琵琶甲提取物能有效延長雌性小鼠的熱板刺激痛閾值,還能明顯抑制醋酸致小鼠疼痛的扭體反應,顯示該提取物具有明顯的鎮痛功效,可以用于制備鎮痛藥物或保健品。

權利要求書

1.一種喙尾琵琶甲提取物,其特征為所述提取物由下列方法制備得到:用70%-98%醇溶劑浸泡提取經粉碎的喙尾琵琶甲3次,每次浸泡20-30小時、提取0.5-2小時;合并提取液,減壓濃縮得浸膏;其中喙尾琵琶甲是指鞘翅目擬步甲科琵琶甲屬昆蟲喙尾琵琶甲Blaps?rynchopetera?Fairmaire的任一部位或全蟲。2.根據權利要求1的喙尾琵琶甲提取物,其特征為:所用醇溶劑中的醇是指甲醇、乙醇中的一種或兩種;減壓濃縮時的溫度不超過100℃。3.根據權利要求1-2之一的喙尾琵琶甲提取物用于制備消除或緩解疼痛的鎮痛藥物的用途。4.一種藥物組合物,其為治療有效量的根據權利要求1-2之一的喙尾琵琶甲有效部位提取物和可藥用載體。5.根據權利要求4的藥物組合物,其藥物劑型是片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液、注射劑、滴丸劑、氣霧劑、透皮貼劑、栓劑、外用搽劑或軟膏劑。

說明書

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域,具體而言,本發明涉及一種喙尾琵琶甲提取物及其制備方法和藥物用途。該提取物由云南民間藥用昆蟲喙尾琵琶甲經現代提取工藝制備而成,具有明顯的鎮痛功效,可以用于制備鎮痛藥物或保健品。

背景技術

疼痛是一種因組織損傷或潛在的組織損傷而產生的痛苦感覺,常伴有不愉快的情緒或心血管、呼吸系統等方面的變化。它既是機體的一種保護性機制,提醒機體避開或處理傷害,也是臨床許多疾病的常見癥狀。臨床上常將疼痛分為以下幾種:

(1)按疼痛的神經生理機制可分為:①傷害感受性疼痛,包括由各種傷害性刺激所導致的軀體痛和內臟痛。②非傷害感受性疼痛,包括神經病理性疼痛(neuropathic?pain)和精神性或心理性疼痛(psychogenic?pain);神經病理性疼痛指神經系統本身病變所導致的疼痛。其中,疼痛發源于脊髓或腦時,稱之為中樞性疼痛(central?pain);發源于末梢神經時,則稱之為外周性疼痛(peripheral?pain)。精神性疼痛指無明確的傷害性刺激及神經性原因的疼痛。

(2)按疼痛持續時間可分為:①急性疼痛(acute?pain):如發生于創傷、胃腸道穿孔、手術后的疼痛等;②慢性疼痛(chronic?pain):如慢性腰腿痛、晚期癌癥痛等。

(3)按疼痛在軀體的解剖部位可分為:頭痛,頜面痛,頸項痛,肩、上肢痛,胸痛,腹痛,腰背痛,盆腔痛,下肢痛,肛門、會陰痛。

(4)按疼痛發生的深淺部位可分為:①淺表痛,位于體表皮膚或粘膜;②深部痛,內臟、關節、胸膜、腹膜等部位的疼痛。

(5)按疼痛的表現形式可分為:①局部痛;②放射痛;③牽涉痛等。

(6)按疼痛的性質可分為:①刺痛;②灼痛;③酸痛;④脹痛;⑤絞痛等。

疼痛,尤其是劇烈疼痛,不僅給患者帶來痛苦、緊張不安等情緒反應,還可引起機體生理功能紊亂,甚至誘發休克、死亡,因此及時地緩解疼痛是極為重要的。目前在國際上,疼痛被認為繼呼吸、脈搏、血壓、體溫之后的第五個生命體征。因此,疼痛治療(pain?management)是現代醫學的一個重要組成部分,并已逐漸發展成為疼痛治療學。疼痛治療的含義是對各種原因所致的疼痛以及某些神經血管功能障礙疾病或體征,采用藥物和(或)神經阻滯等各種綜合方法進行治療,以達到緩解或消除癥狀,提高病人生活質量的目的。其中,藥物治療是疼痛治療最基本、最常用的方法。一旦明確診斷的劇烈疼痛患者應及時應用鎮痛藥。常用的鎮痛藥可分為:

(1)阿片類鎮痛藥藥:一類主要作用于中樞神經系統,能選擇性地消除或緩解痛覺的藥物,同時又能減輕不愉快的情緒反應,但并不影響其它感覺。常用的鎮痛藥包括阿片生物堿類(嗎啡、可待因)與人工合成品(哌替啶、阿法羅定、美沙酮等)。因此對已確診的劇烈疼痛,及時應用鎮痛藥既可解除病人的痛苦,有利于疾病的恢復,又可防止休克的發生,在急救中具有重要意義。但因該類鎮痛藥大都有強成癮性,臨床上僅適用于急救、術后疼痛治療及晚期癌癥病人鎮痛。

(2)解熱鎮痛藥:一類具有退熱和減輕外周慢性鈍痛的藥物。能抑制下丘腦前部神經元中的前列腺素(PGs)的合成和釋放,除解熱和鎮痛作用外,還具有抗炎、抗風濕作用。解熱鎮痛類藥物也可選擇性作用于體溫調節中樞,降低其異常興奮性,通過神經調節使皮膚血管擴張,排汗增加,呼吸加快,增加散熱,同時穩定白細胞內的溶酶體膜,阻礙白細胞內致熱原的釋放,使體溫恢復到正常水平。一般來說,此類藥物對頭痛、牙痛、神經痛、關節痛、肌肉痛及月經痛等鈍痛效果好,但對內臟平滑肌絞痛無效。

(3)非甾體類抗炎藥(NSAIDs):非甾體類抗炎藥是與激素相對而言的,這一類藥物其化學結構中缺乏激素所具有的甾環,故而得名。它具有解熱、鎮痛和抗炎作用,是治療風濕性疾病的一線藥物。此類藥物種類很多,目前最常用的有乙酰水楊酸(即阿司匹林)、對乙酰氨基酚(撲熱息痛)、布洛芬等。盡管這—類藥都是通過減少體內前列腺素的合成起作用,但各種藥物之間還存在一些細微的差別。一般用于治療輕到中度的非癌性疼痛,如骨骼肌功能紊亂、關節炎、痛經和頭痛等。

(4)其他用于緩解神經性疼痛的非鎮痛藥:例如,抗癲癇藥可用于治療神經病理性疼痛,如三叉神經痛、幻肢痛等,常用藥物有苯妥英鈉和卡馬西平;抗抑郁藥可用于治療由緊張及焦慮等精神、心理因素導致的疼痛,以及治療慢性疼痛病人的抑郁癥狀,常用藥有氟西汀、賽樂特、左洛復、多慮平等;催眠鎮靜藥在慢性疼痛治療中多用作輔助用藥,以苯二氮草類最常用,如地西泮和硝西泮等,但該類藥物反復應用后,可引起藥物依賴和耐藥性,故不應濫用。

上述藥物雖能一定程度的緩解疼痛癥狀,然而其具有廣泛的成癮性或藥物依賴、嚴重胃腸道不良反應(潰瘍、胃炎,甚至穿孔出血等)、傷腎、誘發心血管疾病(COX-2特異性抑制劑心類鎮痛劑可引起肌梗塞、心絞痛、缺血性中風等)、過敏反應或耐藥性等毒副作用。因此,研發新型高效無毒的鎮痛藥成為現代藥物研究的熱點之一。目前對鎮痛藥物的探索研究中,中藥、天然藥已越來越凸顯其藥效良好、無成癮性、不良反應少及資源豐富等優勢,引起人們的重視。

中醫學治療痛證已有幾千年的歷史,在《黃帝內經》中就已對痛證的病因、病機、病位、證候、預后等方面進行了系統的論述。中醫理論認為“痛則不通,通則不痛”,據此為主治療各種疼痛的中藥及中藥復方在中醫臨床中應用廣泛。按其功用特點分成祛風散瘀止痛藥、活血通絡止痛藥等,麻沸散就是典型的代表。中藥鎮痛作用明確、應用靈活,且毒副作用極小,在人類醫學史上發揮著不可替代的作用,近來在各國醫藥界的引起廣泛關注。

而從天然產物或其衍生物中開發新型的鎮痛藥物的努力,也取得了較大的進展。南加州大學神經學家George?Miljanich博士所領導的研究小組在海底的一種肉食性蝸牛中發現一種稱為ω-芋螺毒素(ω-conotoxin或omega?conopeptide)的神經毒素,它可以作用于神經細胞的鈣通道,使疼痛的信號不能傳送到大腦,保持其整個神經系統運作的正常性。人工合成的ω-芋螺毒素Ziconotide的鎮痛作用比嗎啡強1000倍,且不具成癮性或藥物依賴性。但因其給藥途徑局限于髓腔給藥,因此使用非常不方便。2012年11月在英國倫敦科學博物館一個名為“減輕痛苦:未來救助”的展覽會的啟動儀式上,Venomtech公司負責人史蒂夫-特瑞姆演示了如何從狼蛛體內抽取毒液,他表示該公司供應從有毒動物體內提取的毒液給世界各國科學家以研制理想的止痛藥。

我國有豐富的天然藥用動物、植物和礦物資源,雖然中藥方劑中不乏以蟲類入藥者,然而在對天然藥物的研究中,仍是以植物藥的研究較多,對動物藥的研究長期以來并未得到重視。上述歐美科學家的經驗表明,動物將是開發新型鎮痛藥物的寶貴藥用資源。而昆蟲占整個動物數量的90%,是世界上最大的生物類群,據估計其種類可能達1000萬種,個體數量超過1018。由于藥用昆蟲資源豐富、生物活性較強,因此藥用昆蟲作為我國中醫藥的一部分,是一筆寶貴的財富。

喙尾琵琶甲(Blaps?rynchopetera?Fairmaire)俗稱臭殼子、小黑蟲、臭屁蟲、高腳蟲、高腳臭蟲、打屁蟲,臭蟲等,成蟲能分泌具有藥用價值的防御液(即臭屁)。喙尾琵琶甲是云南彝族長期廣泛使用的昆蟲藥物(彝族藥名“”,音譯為“寒齋”),用于熱證發燒、飲食積滯、小兒疳積、夜驚、乳癖、乳痰、瘡癢腫毒、濕疹、皮膚瘙癢等。據調查,彝族民間醫生在治療腫瘤、心血管等疑難病癥的處方中,80%以上都含有該昆蟲藥。2011年8月云南曲靖地區肺癌患者生吞服用臭殼蟲的新聞也被廣泛報導。該昆蟲除了藥用外,云南大部分地區還作為食用佳肴,可在農貿市場和藥材市場購買到。因此,喙尾琵琶甲是一種極具開發和利用價值的民族民間藥用昆蟲。

國內外文獻表明:目前對喙尾琵琶甲的研究主要集中在對其形態、生態分布、化學成以及抗腫瘤作用方面的探索,而對該藥的有關藥理、毒理、臨床應用、藥材標準等方面的研究報道都非常少。除本專利發明人前期對其粗提物的抗腫瘤、抗菌作用進行了初步研究,尚未見其它關于喙尾琵琶甲提取物鎮痛作用的報道。

我們在前期的工作中對喙尾琵琶甲的體內外抗腫瘤及抑菌作用進行了初步的研究,在篩選抗腫瘤、抑菌的活性部位過程中,意外發現喙尾琵琶甲提取物具有強效的鎮痛作用。若能在不易產生成癮性、依賴性、耐藥性的傳統民間昆蟲藥物喙尾琵琶甲中找到高效的鎮痛活性部位,將對治療疼痛提供全新的物質基礎。根據前期研究結果,為了能從喙尾琵琶甲中獲得高效鎮痛的活性物質,我們設計了喙尾琵琶甲提取物的富集工藝并制備了該提取物,采用熱板法和扭體法評價其鎮痛效果。以期能得到有效的活性物質,從而將其進一步開發成為鎮痛藥物,將其應用于疼痛治療。據此完成本發明。

發明內容

本發明的目的是提供一種適合于工業化生產的喙尾琵琶甲提取物,具體而言,該提取物由下列方法制備得到:

用70%-98%醇溶劑浸泡提取經粉碎的喙尾琵琶甲3次,每次浸泡20-30小時,每次提取0.5-2小時;合并提取液,減壓濃縮得浸膏。其中,所用醇溶劑中的醇是指甲醇、乙醇中的一種或兩種,優選乙醇;減壓濃縮時的溫度不超過100℃。

本發明中的喙尾琵琶甲是指鞘翅目擬步甲科琵琶甲屬昆蟲喙尾琵琶甲Blaps?rynchopetera?Fairmaire的任一部位或全蟲,優選全蟲。

本發明的另一目的是提供了喙尾琵琶甲提取物在制備治療疼痛的藥物中的應用。由喙尾琵琶甲提取物可以與藥學上常用的輔料或載體結合,制備得到具有消除或緩解疼痛功效的藥物組合物。該類藥物組合物可以采用注射劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液、氣霧劑、透皮貼劑、栓劑、滴丸劑、栓劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型。

本發明有效地富集了喙尾琵琶甲提取物,并采用藥學研究中鎮痛藥物篩選的經典實驗,熱板法和扭體法評價喙尾琵琶甲提取物的鎮痛作用。試驗結果顯示:喙尾琵琶甲提取物對中樞性疼痛和外周性疼痛都具有較強的鎮痛作用。這些結果說明喙尾琵琶甲提取物在制備鎮痛藥物的應用上有著相當的優勢,并且以往未見相關的報道,從而構成本發明。

本發明有益之處在于:首次發現彝族民間昆蟲藥物喙尾琵琶甲的醇提物具有防治疼痛方面的成藥潛力,為開發非阿片類、非甾體抗炎藥之創新型非成癮性鎮痛藥物提供了新的物質基礎,具有潛在巨大的社會效益和經濟效益。本發明再一特點為:喙尾琵琶甲提取物的制備工藝操作簡便、成本低、污染小、安全可靠,利于節能減排條件下的大規模生產。產業化前景十分明確。

具體實施方式

為了更好地理解本發明的實質,下面通過實施例進一步說明本發明。實施例給出了喙尾琵琶甲提取物的制備、熱板法和扭體法評價其鎮痛作用的試驗結果,說明其在制備鎮痛藥物中的用途。

在藥學研究中篩選鎮痛藥的常用致痛方法概括有物理法(熱、電、機械)和化學法。動物的疼痛反應常表現出嘶叫、舔足、翹尾、蹦跳及皮膚、肌肉抽搐。化學法,即將某些化學物質,如強酸、強堿、鉀離子、緩激肽等,涂布于動物的的某些敏感部位或腹腔注射。熱板法為物理致痛,借助熱的刺激使動物產生疼痛,這種刺激通過傳入神經傳給中樞,產生疼痛的感覺,使用嗎啡可以抑制痛覺向中樞的傳遞,而達到鎮痛的目的。而扭體法為化學致痛,借助致痛物質的化學刺激而產生疼痛,同進還會出現炎癥反應,非甾抗炎藥對這類疼痛有鎮痛作用。

必須說明,本發明的實施例是用于說明本發明而不是對本發明的限制。根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。

實施例1:喙尾琵琶甲提取物的制備

喙尾琵琶甲(臭殼蟲)活體,購自大理新橋農貿市場。經大理學院農業與生物科學學院楊自忠教授鑒定為喙尾琵琶甲Blaps?rynchopetera?Fairmaire。將喙尾琵琶甲用95%乙醇殺滅,自然涼干,得4.1公斤,粉碎后用95%乙醇浸泡提取3次,每次加乙醇溶液10升、浸泡24小時、提取1小時。合并提取液,室溫下減壓濃縮得喙尾琵琶甲提取物浸膏1.26公斤,放置-4℃下保存。

實施例2:以熱板法測試喙尾琵琶甲提取物的鎮痛作用

實驗原理:小鼠足底無毛,皮膚裸露,所以對刺激敏感。將雌性小鼠置于一定溫度的熱板上,熱刺激小鼠足部產生痛反應,即舔足反應。以小鼠出現舔足的時間作為痛反應指標,評價測試藥物的鎮痛效果。

1.?實驗材料:

1.1?藥物與試劑:將根據實施例1制備得到的喙尾琵琶甲提取物浸膏用生理鹽水配制成高、低濃度,分別為0.2克/毫升和0.4克/毫升;阿司匹林腸溶片,0.3克/片,湖南新匯制藥有限公司,批號:080903,以生理鹽水配制成0.04克/毫升濃度供實驗用。

1.2?動物:雌性昆明種小鼠50只,體重20±2克,由大理學院實驗動物中心提供,合格證號:SCXK。

1.3?儀器:RB-200智能熱板儀,成都泰盟科技有限公司出品;TP電子天平,梅特勒-托利多儀器上海有限公司。

2.?方法與結果:

2.1?實驗前,在55±0.5℃的熱板上測定健康的雌性昆明種小鼠之基礎痛閾值,選痛閾值范圍在5~30秒的小鼠供實驗用。

2.2?合格雌性小鼠依體重隨機分為4組,每組11只:陽性對照組按0.3毫升/20克·體重(gBW)灌胃阿司匹林;空白對照組灌服等體積生理鹽水;高劑量組按0.3毫升/20克·體重(gBW)灌胃0.4克/毫升的喙尾琵琶甲提取物;低劑量組按0.3毫升/20克·體重(gBW)灌胃0.2克/毫升的喙尾琵琶甲提取物;每日給藥1次,連續給藥5天。于最后一次給藥后30、60、90分鐘測定小鼠的痛閾值,痛閾值超過60秒者按60秒計。

2.3?結果如表1所示,喙尾琵琶甲提取物高劑量組小鼠在給藥后各時間點的痛閾值均明顯大于空白對照組,其鎮痛作用與陽性對照阿司匹林近似,給藥后90分鐘測試的痛閾值甚至高于陽性對照;低劑量組在給藥后60和90分鐘的痛閾值高于空白對照,但無統計學上的顯著性差異。

表1?喙尾琵琶甲流浸膏對小鼠熱痛閾值的影響

注:與空白對照組比較,*P?<?0.05,**P?<?0.01

3.?實驗結論:

小鼠的爪趾對熱刺激非常敏感,其表現為跳躍、縮足和舔后足。熱板法適合于評價中樞鎮痛藥物的效果。實驗結果顯示:以較高劑量(6克/公斤·體重)的喙尾琵琶甲提取物灌胃給藥后,可顯著延長熱刺激致小鼠舔后足的潛伏期,說明喙尾琵琶甲提取物能明顯提高熱板小鼠的痛閾值。在給藥后的30分鐘、60分鐘測試小鼠的痛閾值結果表明:高劑量的喙尾琵琶甲提取物的藥效與陽性對照相似,其與空白對照相比,延長的痛閾值均具統計學意義;而在末次給藥后90分鐘陽性對照阿司匹林的作用已不顯著,但高劑量喙尾琵琶甲提取物仍能顯著增加小鼠的痛閾值;低劑量的喙尾琵琶甲提取物則在給藥后90分鐘顯示一定的鎮痛效果,其痛閾值與空白對照相比雖不具有統計學意義,但與陽性對照近似。實驗表明,高劑量的喙尾琵琶甲提取物能有效提高熱板小鼠的痛閾值,即喙尾琵琶甲提取物有中樞鎮痛的功效,有可能發展成為新的具有中樞鎮痛作用的藥物。

實施例3:以扭體法測試喙尾琵琶甲提取物對醋酸致小鼠疼痛的影響

實驗原理:應用化學刺激物注入小鼠腹腔內刺激腹膜,引起深部的大面積而較久的疼痛刺激,致使小鼠產生“扭體反應”(腹部內凹、收縮成“S”形,軀干與后腿伸張、臀部高起及蠕行等)。以小鼠出現扭體的次數為痛反應指標,鎮痛藥物可以抑制動物的“扭體反應”,因此可從受試動物的扭體次數判斷藥物是否具有鎮痛作用。

1.?實驗材料:

1.1?藥物與試劑:將根據實施例1制備得到的喙尾琵琶甲提取物浸膏用生理鹽水配制成高、低濃度,分別為0.2克/毫升和0.4克/毫升;阿司匹林腸溶片,0.3克/片,湖南新匯制藥有限公司,批號:080903,以生理鹽水配制成0.04克/毫升濃度供實驗用;醋酸:分析純,廣東汕頭新寧化工廠,批號:950517,使用前配置成濃度為0.6%。

1.2?動物:昆明種小鼠50只,雌雄各半,體重20±2克,由大理學院實驗動物中心提供,合格證號:SCXK。

1.3?儀器:TP電子天平,梅特勒-托利多儀器上海有限公司。

2.?方法與結果:

2.1?合格小鼠依體重隨機分為4組,每組10只,雌雄各半:陽性對照組灌胃阿司匹林;空白對照組灌服生理鹽水;高劑量組灌胃0.4克(浸膏重量)/毫升的喙尾琵琶甲提取物;低劑量組灌胃0.2克(浸膏重量)/毫升的喙尾琵琶甲提取物;灌胃體積為每公斤·體重150毫升,即0.3毫升/20克·體重(gBW),每日給藥1次,連續給藥5天。于末次給藥后30分鐘,每只小鼠腹腔注射0.2毫升的0.6%醋酸,觀察并記錄各鼠在腹腔注射醋酸后的15分鐘內扭體次數,計算抑制率。抑制率=(空白對照組平均扭體次數-實驗組平均扭體次數)/空白對照組平均扭體次數×100%。

2.2?結果如表2所示,喙尾琵琶甲提取物低劑量組與高劑量組對醋酸所致小鼠扭體反應的抑制率分別為42%和49%,抑制作用明顯。

表2?喙尾琵琶甲流浸膏對冰醋酸所致小鼠扭體反應的影響

注:與空白對照組比較,**P?<?0.01,***P?<?0.005

3.?實驗結論:

小鼠扭體實驗是通過注射冰醋酸刺激腹膜,小鼠因疼痛而表現出扭體反應。扭體實驗適用于外周鎮痛的評價研究。扭體實驗結果證明喙尾琵琶甲提取物對醋酸所致小鼠扭體反應的抑制作用明顯,與陽性對照藥物阿司匹林的功效相近。實驗結果說明喙尾琵琶甲提取物具有較強的外周性疼痛的鎮痛功效,有可能發展成為新的鎮痛藥物。

熱板法和扭體法是藥學研究中篩選鎮痛藥物的常用方法,該二實驗敏感、簡便、重復性好。上述實施例結果證實,喙尾琵琶甲提取物具有較好的鎮痛作用,尤其是對醋酸所致外周性疼痛效果更佳,在較低劑量就表現出明顯的鎮痛作用。可以期望進一步開發成為來源于天然活性物質的毒副作用小的新型鎮痛藥物。

在上述說明書闡述本發明時,同時提供了實施例的目的是舉例說明本發明的實際操作過程和本發明的意義。在進入本發明權利要求和其等同物范圍內時,本發明的實際應用包括所有一般變化、配合,或改進。

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