鬼佬大哥大
  • / 6
  • 下載費用:30 金幣  

一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法.pdf

關 鍵 詞:
一種 蘆竹 組織 再生 植株 方法
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
摘要
申請專利號:

CN201310170243.5

申請日:

20130426

公開號:

CN103229720B

公開日:

20150401

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 湖州師范學院
發明人: 楊志紅,張麗娜,田前進,韓志萍
地址: 313000 浙江省湖州吳興區學士路1號
優先權: CN201310170243A
專利代理機構: 代理人:
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201310170243.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,包括如下步驟:(1)愈傷組織的誘導:將蘆竹無菌苗小塊接種于2,4-D?4.0~5.0mg/l培養基中,接種后暗培養3d,然后于光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養;(2)愈傷組織的繼代培養:將愈傷組織接種于含2,4-D?5.0mg/l培養基中;(3)愈傷組織植株再生:培養基以MS培養基為基本培養基,添加IBA?0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l;(4)壯芽培養;(5)生根培養:壯芽后植株接種于MS添加NAA?0~0.5mg/L的培養基中生根;(6)移栽。本發明建立了一種利用蘆竹愈傷組織再生植株的方法,有利于優良蘆竹的擴繁。

權利要求書

1.一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,其特征在于:包括如下步驟:(1)愈傷組織的誘導:將蘆竹無菌苗去掉葉片、基部組織及幼嫩上端組織后切割成小塊接種于2,4-D?4.0~5.0mg/l培養基中,基本培養基為MS培養基,培養溫度為25±1℃,接種后暗培養3d,然后于光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養,2個月后,形成愈傷組織;(2)愈傷組織的繼代培養:將愈傷組織切成小塊接種于含2,4-D?5.0mg/l培養基中,進行繼代培養,1個月重復繼代一次,繼代培養的基本培養基和培養條件與愈傷組織誘導的基本培養基和培養條件相同;(3)愈傷組織植株再生:以MS培養基為基本培養基,添加IBA?0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l,接種繼代培養2周后的愈傷組織,進行植株再生誘導培養,培養得到的植株長到1厘米左右時,進行分株壯芽培養;(4)壯芽培養:將植株轉入MS不添加任何激素的培養基中,進行壯芽培養1個月;(5)生根培養:壯芽后植株下端用鋒利的刀片平切,露出維管束組織,立即接種于MS添加NAA?0~0.5mg/L的培養基中生根;(6)移栽:生根后的植株,清洗掉附著于表面的培養基,進行移栽。2.如權利要求1所述的一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,其特征在于:所述步驟(2)中的愈傷組織為顆粒狀乳白色的愈傷組織。3.如權利要求1所述的一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,其特征在于:所述步驟(5)中的培養基為MS添加NAA0.1mg/L。

說明書

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域,具體涉及一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法。

背景技術

蘆竹(Arundo?donax?Linn.),屬于單子葉植物,是禾本科蘆竹屬中一種多年生常綠高大叢生的草本植物。蘆竹種植既可固土護堤,又可美化和保護濕地生態環境。Guo等(2011)研究表明蘆竹對污染土壤中As,Cd,Pb和Zn有一定的穩定和去除作用,Han等(2005)進行了利用蘆竹修復重金屬污染濕地的研究。

包括蘆竹在內的植物對污染的修復研究和應用是現在的一個熱點。但是,自然界很難找到超級污染修復植物。為了獲得理想的修復效果,基因工程育種改造植物使之具有超級修復能力,從而獲得良好的修復效果是一種可行的辦法。

基因工程改造單子葉植物必須具備的一個前提是組培再生體系,其中愈傷組織再生體系是理想的途徑。

Ran等(1998)報道了蘆竹組培快繁的研究,但是,愈傷組織再生體系未見相關報道及專利申請。因此,本發明為基因工程改造污染修復植物蘆竹提供了前提,為相關研究奠定了基礎。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足,提供一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,以建立起一種高效的蘆竹再生體系。

本發明解決所述技術問題的方案是:一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,其特征在于:包括如下步驟:

(1)愈傷組織的誘導:將蘆竹無菌苗去掉葉片、基部組織及幼嫩上端組織后切割成小塊接種于2,4-D?4.0~5.0mg/l培養基中,基本培養基為MS培養基,培養溫度為25±1℃,接種后暗培養3d,然后于光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養,2個月后,形成愈傷組織;愈傷組織的誘導一般是暗培養,發明人發現蘆竹愈傷組織的誘導需要光照,在暗培養3d后給予光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養,誘導效果好;

(2)愈傷組織的繼代培養:將愈傷組織切成小塊接種于含2,4-D?5.0mg/l培養基中,進行繼代培養,1個月重復繼代一次,繼代培養的基本培養基和培養條件與愈傷組織誘導的基本培養基和培養條件相同;

(3)愈傷組織植株再生:以MS培養基為基本培養基,添加IBA?0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l,接種繼代培養2周后的愈傷組織,進行植株再生誘導培養,1個月后可觀察到植株再生,培養得到的植株長到1厘米左右時,進行分株壯芽培養;

(4)壯芽培養:將植株轉入MS不添加任何激素的培養基中,進行壯芽培養1個月;

(5)生根培養:壯芽后植株下端用鋒利的刀片平切,露出維管束組織,立即接種于MS添加NAA?0~0.5mg/L的培養基中生根;

(6)移栽:生根后的植株,清洗掉附著于表面的培養基,進行移栽。

蘆竹的無菌苗可以采用2013年2月13日公開的、申請號為201210450391.8的發明創造提供的方法得到。

作為進一步改進,所述步驟(2)中的愈傷組織為顆粒狀乳白色的愈傷組織。

由步驟(1)得到的愈傷組織,呈淡黃色、乳白色、白色等顏色,顆粒狀乳白色的愈傷組織與特定的IBA和6-BA濃度配合,分化率最高,得到的植株質量最好。

作為更進一步改進,所述步驟(5)中的培養基為MS添加NAA0.1mg/L。

使用本方案的培養基,根的誘導率達90%以上,平均根長達4厘米左右。

本發明的有益效果:建立了一種利用蘆竹愈傷組織再生植株的方法,可以在短時間內實現蘆竹的高效再生,有利于優良蘆竹的擴繁,并為農桿菌介導的蘆竹基因工程提供了有效的組培體系。

具體實施方式

實施例1

一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,包括如下步驟:

(1)愈傷組織的誘導:蘆竹無菌苗去掉葉片、基部組織及幼嫩上端組織,將蘆竹無菌苗組織切割成小塊接種于2,4-D?1.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.3厘米,基本培養基為MS培養基,培養溫度為25±1℃,接種后暗培養3d,然后于光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養。在誘導前期1星期左右,筆直的莖段開始彎曲,表皮變得疏松。20d左右,莖段上長出少量顆粒狀的愈傷組織。2個月后,可以發現成堆的愈傷組織,但出愈率為30%左右;

(2)愈傷組織的繼代培養:取顆粒狀乳白色的愈傷組織,將其切成小塊接種于含2,4-D?5.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.5厘米,進行繼代培養,1個月重復繼代一次,繼代培養的基本培養基和培養條件與愈傷組織誘導的基本培養基和培養條件相同;

(3)愈傷組織植株再生:以MS培養基為基本培養基,添加IBA?0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l,接種繼代培養2周后的愈傷組織,進行植株再生誘導培養;IBA0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l使愈傷組織的分化率高,芽成簇生長,生長狀況良好。1個月后可觀察到分化出綠色嫩芽,在相同培養基上繼續培養1個月后待幼嫩植株長到1厘米左右時,進行分株壯芽培養。

(4)壯芽培養:將植株轉入MS不添加任何激素的培養基中,進行壯芽培養1個月,1個月后可觀察到植株明顯粗壯,植株平均高度在3厘米以上。

(5)生根培養:壯芽后植株下端用鋒利的刀片平切,露出維管束組織,立即接種于MS培養基中生根,不添加NAA,培養1個月左右可以觀察到根系再生,根的誘導率為70%,平均根長2.5厘米。

(6)移栽:生根后的植株,清洗掉附著于表面的培養基,進行移栽。移栽成活率接近100%。

實施例2

一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,包括如下步驟:

(1)愈傷組織的誘導:蘆竹無菌苗去掉葉片、基部組織及幼嫩上端組織,將蘆竹無菌苗組織切割成小塊接種于2,4-D?2.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.3厘米,基本培養基為MS培養基,培養溫度為25±1℃,接種后暗培養3d,然后于光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養,2個月后,形成愈傷組織,出愈率為70%左右;

(2)愈傷組織的繼代培養:取顆粒狀乳白色的愈傷組織,將其切成小塊接種于含2,4-D?5.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.5厘米,進行繼代培養,1個月重復繼代一次,繼代培養的基本培養基和培養條件與愈傷組織誘導的基本培養基和培養條件相同;

(3)愈傷組織植株再生:以MS培養基為基本培養基,添加IBA?0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l,接種繼代培養2周后的愈傷組織,進行植株再生誘導培養,1個月后可觀察到植株再生,培養得到的植株長到1厘米左右時,進行分株壯芽培養;

(4)壯芽培養:將植株轉入MS不添加任何激素的培養基中,進行壯芽培養1個月,1個月后可觀察到植株明顯粗壯,植株平均高度在3厘米以上。

(5)生根培養:壯芽后植株下端用鋒利的刀片平切,露出維管束組織,立即接種于MS添加NAA?0.1mg/L的培養基中生根,培養1個月左右可以觀察到根系再生,根的誘導率為90%,平均根長4厘米。

(6)移栽:生根后的植株,清洗掉附著于表面的培養基,進行移栽。移栽成活率接近100%。

實施例3

一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,包括如下步驟:

(1)愈傷組織的誘導:蘆竹無菌苗去掉葉片、基部組織及幼嫩上端組織,將蘆竹無菌苗組織切割成小塊接種于2,4-D?4.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.3厘米,基本培養基為MS培養基,培養溫度為25±1℃,接種后暗培養3d,然后于光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養,2個月后,形成愈傷組織,愈傷組織呈淡黃色、乳白色、白色等顏色,顆粒狀乳白色的愈傷組織占60~70%左右,出愈率為100%;

(2)愈傷組織的繼代培養:取顆粒狀乳白色的愈傷組織,將其切成小塊接種于含2,4-D?5.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.5厘米,進行繼代培養,1個月重復繼代一次,繼代培養的基本培養基和培養條件與愈傷組織誘導的基本培養基和培養條件相同;

(3)愈傷組織植株再生:以MS培養基為基本培養基,添加IBA?0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l,接種繼代培養2周后的愈傷組織,進行植株再生誘導培養,1個月后可觀察到植株再生,培養得到的植株長到1厘米左右時,進行分株壯芽培養;

(4)壯芽培養:將植株轉入MS不添加任何激素的培養基中,進行壯芽培養1個月;1個月后可觀察到植株明顯粗壯,植株平均高度在3厘米以上。

(5)生根培養:壯芽后植株下端用鋒利的刀片平切,露出維管束組織,立即接種于MS添加NAA0.3mg/L的培養基中生根,培養1個月左右可以觀察到根系再生,根的誘導率為50%,平均根長3.5厘米。

(6)移栽:生根后的植株,清洗掉附著于表面的培養基,進行移栽。移栽成活率接近100%。

實施例4

一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法,包括如下步驟:

(1)愈傷組織的誘導:蘆竹無菌苗去掉葉片、基部組織及幼嫩上端組織,將蘆竹無菌苗組織切割成小塊接種于2,4-D?5.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.3厘米,基本培養基為MS培養基,培養溫度為25±1℃,接種后暗培養3d,然后于光周期為16小時光照8小時黑暗、光照強度為2000Lx條件下培養,2個月后,形成愈傷組織,愈傷組織呈淡黃色、乳白色、白色等顏色,淡黃色、乳白色的愈傷組織占較大比例,出愈率為100%;

(2)愈傷組織的繼代培養:取顆粒狀乳白色的愈傷組織,將其切成小塊接種于含2,4-D?5.0mg/l培養基中,每小塊的長度約為0.5厘米,進行繼代培養,1個月重復繼代一次,繼代培養的基本培養基和培養條件與愈傷組織誘導的基本培養基和培養條件相同;

(3)愈傷組織植株再生:以MS培養基為基本培養基,添加IBA?0.5mg/l和6-BA?5.0mg/l,接種繼代培養2周后的愈傷組織,進行植株再生誘導培養,1個月后可觀察到植株再生,培養得到的植株長到1厘米左右時,進行分株壯芽培養;

(4)壯芽培養:將植株轉入MS不添加任何激素的培養基中,進行壯芽培養1個月;1個月后可觀察到植株明顯粗壯,植株平均高度在3厘米以上。

(5)生根培養:壯芽后植株下端用鋒利的刀片平切,露出維管束組織,立即接種于MS添加NAA?0.5mg/L的培養基中生根,培養1個月左右可以觀察到根系再生,根的誘導率為40%,平均根長4.0厘米

(6)移栽:生根后的植株,清洗掉附著于表面的培養基,進行移栽。移栽成活率接近100%。

關于本文
本文標題:一種蘆竹愈傷組織再生植株的方法.pdf
鏈接地址:http://www.wwszu.club/p-6944254.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 zhuanlichaxun.net網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
鬼佬大哥大