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一種彩色棉胚珠離體培養的方法.pdf

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一種 彩色 胚珠 培養 方法
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摘要
申請專利號:

CN201410098171.2

申請日:

20140317

公開號:

CN103931494A

公開日:

20140723

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 安徽農業大學
發明人: 孫旭,林毅,蔡永萍,錢森和,郭寧,徐淼,張雷,洪亮
地址: 230036 安徽省合肥市長江西路130號
優先權: CN201410098171A
專利代理機構: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 代理人: 余成俊
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410098171.2

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種彩色棉胚珠離體培養的方法,其步驟如下:采集綠色棉或棕色棉的當天的0-2天幼鈴,將花冠拉去,剝去花萼,保留花柄;將所取幼鈴用蒸餾水洗滌2次,于無菌條件下用75%酒精消毒5-15min后用0.1%氯化汞浸泡5-15min,再用無菌水沖洗5-8次,剝取胚珠;將所取胚珠于無菌條件下接種于含有激素ZR、GA3和IAA的BT培養基中,每瓶接種同一個子房的胚珠15-25粒,于(31±1)℃進行暗培養30-40天。優選接種綠色棉胚珠時其激素配比為GA31.0μmol/L+IAA5.0μmol/L+ZR2.5μmol/L,接種棕色棉胚珠時其激素配比為GA31.0μmol/L+IAA1.0μmol/L+ZR1.0μmol/L。本發明方法可以降低污染率,提高存活率,促進棉纖維生長和色素合成。

權利要求書

1.一種彩色棉胚珠離體培養的方法,其特征在于包括以下步驟:(1)取材:采集綠色棉或棕色棉的當天的0-2天幼鈴,將花冠拉去,剝去花萼,保留花柄;(2)消毒處理:將所取幼鈴用蒸餾水洗滌2次,于無菌條件下用75%酒精消毒5-15?min?后用0.1%氯化汞浸泡5-15?min,再用無菌水沖洗5-8次,剝取胚珠; (3)接種和培養:將所取胚珠于無菌條件下接種于含有激素ZR、GA和?IAA的BT培養基中,每瓶接種同一個子房的胚珠15-25粒,于(31±1)℃?進行暗培養30-40天。2.根據權利要求1所述的彩色棉胚珠離體培養的方法,其特征在于,所述綠色棉胚珠接種的BT培養基的激素配比為GA?0.5-3.0μmol/L+?IAA?1.0-10.0μmol/L+ZR?0.5-3.0μmol/L,優選為GA?1.0μmol/L+?IAA?5.0μmol/L+ZR?2.5μmol/L。3.根據權利要求1所述的彩色棉胚珠離體培養的方法,其特征在于,所述棕色棉胚珠接種的BT培養基的激素配比為GA?0.5-3.0μmol/L+?IAA?1.0-10.0μmol/L+ZR?0.5-3.0μmol/L,優選為GA?1.0μmol/L+?IAA?1.0μmol/L+ZR?1.0μmol/L。

說明書

技術領域

本發明涉及植物組織培養領域,特別涉及一種彩色棉胚珠離體培養的方法。

背景技術

天然彩色棉是棉纖維中含有天然色素的特殊類型的棉花。棉纖維是外珠被的表皮細胞中生毛細胞經突起、伸長以及次生壁加厚等過程形成的厚壁管狀單細胞毛;以大田植株條件下的棉纖維為研究對象,其結果往往因不明因素的影響而難以解釋。Kim和Triplett曾指出,棉纖維的離體培養讓人們能夠進行溫室和大田中不能進行的生理和生化試驗。通過棉花胚珠離體培養,可以研究營養、低溫、光照、植物生長調節劑以及其他化學物質對棉纖維細胞起始和伸長效應的影響。雖然白色棉胚珠離體培養體系較成熟,但由于棉花胚珠離體培養體系存在很明顯的品種差異,彩色棉胚珠離體培養體系還鮮見報道。從而本發明為彩棉的育種研究提供了穩定良好的研究樣本。

發明內容

為解決現有技術中存在的問題,本發明提供一種彩色棉胚珠離體培養的方法,該方法可以降低污染率,提高存活率,促進棉纖維生長和色素合成。

為解決上述技術問題,本發明采用如下技術方案:

一種彩色棉胚珠離體培養的方法,包括以下步驟:

(1)取材:采集綠色棉或棕色棉的當天的0-2天幼鈴,將花冠拉去,剝去花萼,保留花柄;

(2)消毒處理:將所取幼鈴用蒸餾水洗滌2次,于無菌條件下用75%酒精消毒5-15min后用0.1%氯化汞浸泡5-15min,再用無菌水沖洗5-8次,剝取胚珠;

(3)接種和培養:將所取胚珠于無菌條件下接種于含有激素ZR、GA3和IAA的BT培養基中,每瓶接種同一個子房的胚珠15-25粒,于(31±1)℃進行暗培養30-40天。

所述綠色棉胚珠接種的BT培養基的激素配比為GA30.5-3.0μmol/L+IAA1.0-10.0μmol/L+ZR0.5-3.0μmol/L,優選為GA31.0μmol/L+IAA5.0μmol/L+ZR2.5μmol/L。

所述棕色棉胚珠接種的BT培養基的激素配比為GA30.5-3.0μmol/L+IAA1.0-10.0μmol/L+ZR0.5-3.0μmol/L,優選為GA31.0μmol/L+IAA1.0μmol/L+ZR1.0μmol/L。

本發明與已有技術相比,其有益效果體現在:

1、本發明取材時保留花柄,保證了短時間內葉柄對幼鈴的營養供給,使得幼胚的活力得以保存、離體培養時胚珠的存活率大大提高。

2、本發明提供一種彩色棉胚珠離體培養的方法,該方法可以降低污染率、死亡率和褐化率,提高成活率,促進棉纖維生長和色素合成。在實驗室能夠實現穩定良好的批量培養。

3、本發明提供一種彩色棉胚珠離體培養的方法,避免了在大田條件下不明因素對纖維生長發育和色素合成的影響。便于后續能夠進行溫室和大田中不能進行的生理和生化試驗,從而本發明為彩棉的育種研究提供了穩定良好的研究樣本。

4、本發明BT培養基其激素配比中對胚珠鮮重和纖維伸長影響大小的順序為ZR>IAA>GA3,其中,ZR對胚珠鮮重的影響達極顯著水平,對纖維伸長的影響達顯著水平;而IAA和GA3對兩者的影響不顯著。ZR對彩色棉胚珠離體培養極其重要。

5、棕色棉胚珠在激素配比為GA31.0μmol/L+IAA1.0μmol/L+ZR1.0μmol/L的BT培養基中其30DAC(離體培養30天)棉纖維長度經多重比較分析均顯著高于其他激素配比。綠色棉胚珠在激素配比為GA31.0μmol/L+IAA5.0μmol/L+ZR2.5μmol/L的BT培養基中,其30DAC的棉纖維長度經多重比較分析均顯著高于其他激素配比。

附圖說明

圖1為實施例1不同培養方式棕色棉胚珠的生長情況,其中,a、40天暗培養,b、40天光培養。

圖2為實施例2不同培養方式綠色棉胚珠的生長情況,其中,a、40天暗培養,b、40天光培養。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細的說明:

實施例1:

一、棕色棉胚珠的離體培養

棕色棉(棕彩選1號)大田種植,常規管理。于早上9點左右對當日花掛牌。將當天采集的花后1天的幼鈴花冠拉去,并剝去花萼,僅留適當長度的花柄。并將這些幼鈴用蒸餾水洗滌2次放入超凈工作臺,用75%酒精消毒10min后再用0.1%氯化汞浸泡5min,消毒后用無菌水沖洗6次,剝取胚珠。將胚珠接種于BT培養基上,其激素配比為GA31.0μmol/L+IAA1.0μmol/L+ZR1.0μmol/L。每瓶接種同一個子房的胚珠約20粒,置于(31±1)℃條件下進行暗培養并觀察生長情況。

二、棕色棉胚珠離體培養的不同取材和消毒處理方法的比較研究

實驗總計9個處理,每處理均接20瓶左右,結果表明,取花后1天的幼鈴用75%酒精消毒10min后再用0.1%氯化汞浸泡5min可以降低污染率和提高存活率。

三、棕色棉胚珠離體培養的不同激素配比的比較研究

實驗總計9個處理,每處理均接20瓶左右,結果表明,激素配比為GA31.0μmol/L+IAA1.0μmol/L+ZR1.0μmol/L最有利于棉纖維生長,其30DAC的胚珠鮮重和纖維長度分別為0.2360g和20.16mm。

四、在棕色棉胚珠離體培養的基礎上進行光誘導實驗研究

結果表明,光培養較暗培養有利于胚珠的生長,光培養的彩色棉的胚珠鮮重均高于暗培養。光培養的纖維長度均短于暗培養。暗培養較光培養有利于色素合成。當40DAC時,棕色棉胚珠鮮重和纖維長度分別為0.2258g、0.2687g和22.67mm、19.43mm。

實施例2:

一、綠色棉胚珠的離體培養

綠色棉(綠絮棉1號)大田種植,常規管理。于早上9點左右對當日花掛牌。將當天采集的花后2天的幼鈴花冠拉去,并剝去花萼,僅留適當長度的花柄。并將這些幼鈴用蒸餾水洗滌2次放入超凈工作臺。用75%酒精消毒10min后再用0.1%氯化汞浸泡10min,消毒后用無菌水沖洗7次,在超凈工作臺中剝取胚珠,并將胚珠接種于激素配比為GA31.0μmol/L-1+IAA5.0μmol/L+ZR2.5μmol/L的BT培養基上。每瓶接種同一個子房的胚珠約20粒,每處理均接20瓶左右,置于(31±1)℃條件下進行暗培養并觀察生長情況。

二、綠色棉胚珠離體培養的不同取材和消毒處理方法的比較研究

實驗總計9個處理,每處理均接20瓶左右,結果表明,取花后2天的幼鈴用75%酒精消毒10min后再用0.1%氯化汞浸泡10min可以降低污染率和提高存活率。

三、綠色棉胚珠離體培養的不同激素配比的比較研究

實驗總計9個處理,每處理均接20瓶左右,結果表明,激素配比為GA31.0μmol/L+IAA5.0μmol/L+ZR2.5μmol/L最有利于棉纖維生長,其30DAC的胚珠鮮重和纖維長度分別為0.1923g和23.17mm。

四、在綠色棉胚珠離體培養的基礎上進行光誘導實驗研究

結果表明,光培養較暗培養有利于胚珠的生長,光培養的彩色棉的胚珠鮮重均高于暗培養。光培養的纖維長度均短于暗培養。暗培養較光培養有利于色素合成。當40DAC時,綠色棉胚珠鮮重和纖維長度分別為0.308g、0.196g和16.33mm、17.83mm。

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