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一種紅千層的組織培養快速繁殖方法.pdf

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一種 紅千層 組織培養 快速 繁殖 方法
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摘要
申請專利號:

CN201410152533.1

申請日:

20140416

公開號:

CN103931499B

公開日:

20160706

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 華中農業大學
發明人: 舒常慶,何丹,汪小冬
地址: 430070 湖北省武漢市洪山區獅子山街1號
優先權: CN201410152533A
專利代理機構: 武漢開元知識產權代理有限公司 代理人: 徐紹新
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410152533.1

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種紅千層的組織培養快速繁殖方法,屬于植物組織培養技術領域。其培養步驟為:(1)外植體選取及消毒;(2)初代培養;(3)繼代培養;(4)生根培養;(5)煉苗移栽。上述培養方法,煉苗移栽后苗木適應性較強,使得垂枝紅千層組培苗的煉苗移栽成活率達到95%以上。與常規的種子繁殖和扦插繁殖相比,采用組織培養快速繁殖方法,大大縮短了垂枝紅千層的育苗周期,能極大地提高繁殖效率,育苗周期由1年縮短到3至4個月,每年育苗批數由1批提高到4至8批,具有廣闊的市場應用前景。

權利要求書

1.一種紅千層的組織培養快速繁殖方法,其特征在于包括以下步驟:1)外植體的選擇及滅菌:以當年生半木質化的垂枝紅千層枝條為外植體,將枝條剪成2~3cm的帶腋芽莖段,剪去葉片,用流水清洗灰塵,以洗潔精溶液浸泡3min,再以流水沖洗2h;在超凈工作臺上先將莖段用70%的酒精浸泡30s,搖動25s,倒去酒精并用無菌水沖洗5遍,再用0.1%的升汞浸泡8min,每隔2min搖動一次,并用無菌水沖洗5~7遍,將其放入無菌水中浸泡備用;2)初代培養:將滅菌后外植體傷口處切掉1~2mm,將末端向下垂直插入Y1培養基中,培養3~7d后轉入到新的Y1培養基中,并繼續培養10~15d長出新芽;3)新芽伸長培養:將長出的新芽莖段基部發黑部分切除后轉移至Y2培養基中進行新芽伸長培養,20d后新芽伸長到≥3.0cm;4)繼代增殖培養:將伸長生長后的新芽切成1cm左右的小段,將其轉入Y2培養基中進行繼代增殖培養,25~30d后增殖新芽萌發并伸長到2cm以上;繼代增殖培養代數不超過4代;5)生根培養:將步驟4)長至2cm以上的新芽剪下,去掉靠近培養基基部的葉片并轉移至Y3培養基,培養15d后陸續長出新根;6)煉苗移栽:將生根的植株的組培瓶瓶蓋打開3d;取出生根苗,洗凈根部培養基,自來水栽培5d,并用聚乙烯塑料袋蓋住水杯,保持濕度;取出生根苗,移栽至裝有基質的盆里,保持溫度22~25℃,濕度85~95%,適當遮蔭,其中,所述各培養基的組分為:Y1培養基:MS基本培養基、30g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、0.1mg/L6-芐氨基腺嘌呤、0.05mg/L萘乙酸,pH為5.8;Y2培養基:MS基本培養基、30g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、1.0mg/L6-芐氨基腺嘌呤、0.2mg/L萘乙酸,pH為5.8;Y3培養基:大量元素減半的MS基本培養基、20g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、0.25mg/L吲哚丁酸、0.25mg/L萘乙酸,pH為5.8;其中,步驟2)-5)的培養條件是:溫度23-27℃,每天用1400Lx光強照射16h,然后暗箱保藏8小時。

說明書

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域,具體涉及紅千層組織培養快速繁殖方法。

背景技術

垂枝紅千層(Callistemonviminalis)原產澳大利亞,是桃金娘科(Myrtaceae)紅千層屬(Callistemon)常綠灌木或小喬木,其花形像試管刷,故又稱瓶刷樹、紅瓶刷。該植物適應性較廣,能在暖熱氣候中生長,也能適應較熱或較寒的氣候。適于栽培在濕潤、疏松的肥沃土壤中,但也能在貧瘠干旱的土壤中生長良好。該植物的萌芽力強,生長緩慢,耐修剪,抗大氣污染力強。

作為一種極具觀賞價值的花木,紅千層株形優美,小枝細長而彎垂,樹冠垂柳形,葉片有透明油腺點,揉之有芳香油氣味,花稠密生于枝頂部葉腋,花期3-5月及10月,穗狀花序獨特美麗,盛開時紅花壓枝頭,極為優雅。用于公園、風景區、居住區、道路等園林綠化,可與多種植物搭配,以孤植、叢植、片植等方式種植,營造出豐富的園林景觀。該植物還是優良的經濟樹種,具有很好的藥用價值。

種子繁殖、扦插繁殖和嫁接繁殖是樹木常用的常規繁殖方法。到目前為止,紅千層屬植物最常用的繁殖方法是種子繁殖。然而,一方面,垂枝紅千層的果實一旦成熟就會立即開裂,種子極易散落,難于采集,且其種子極細小,后熟期較長,萌發率較低;另一方面,垂枝紅千層的扦插繁殖成活率低;至于嫁接繁殖,同樣需要首先通過種子繁殖或扦插繁殖培育砧木苗。因此,對于垂枝紅千層這一特色優良園林綠化樹種,幾種常用的常規繁殖方法都不適于規模化應用。針對這一問題,為了適應市場需要,急需建立起一種新的繁殖技術體系。

組織培養快速繁殖是基于組織培養的快速繁殖苗木新方法。目前,國內外關于紅千層屬植物組織培養快速繁殖方面的研究很少,全面系統的研究更少,即使原產地國家澳大利亞也一直未建立起任何一種紅千層屬植物的組織培養快速繁殖技術體系。因此,我們以該屬的垂枝紅千層為對象進行研究,以期探索建立起其組織培養快速繁殖技術體系,為其苗木規模化、標準化、工廠化育苗提供技術支撐,滿足生產需要,對于紅千層屬植物應用具有重大的理論與實踐意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種紅千層組織培養快速繁殖方法,為紅千層規模化、標準化、工廠化、全年化育苗提供技術支撐,為進一步的遺傳育種提供理論與技術基礎,對于該植物在我國的引種和推廣利用具有重要的理論與實踐意義。

本發明目通過以下技術方案來實現。

1.一種紅千層的組織培養快速繁殖方法,包括以下步驟:

1)外植體的選擇及滅菌:以當年生半木質化的垂枝紅千層枝條為外植體,將枝條剪成2~3cm的帶腋芽莖段,剪去葉片,用流水清洗灰塵,以洗潔精溶液浸泡3min,再以流水沖洗2h;在超凈工作臺上先將莖段用70%的酒精浸泡30s,搖動25s,倒去酒精并用無菌水沖洗5遍,再用0.1%的升汞浸泡8min,每隔2min搖動一次,并用無菌水沖洗5~7遍,將其放入無菌水中浸泡備用;

2)初代培養:將滅菌后外植體傷口處切掉1~2mm,將末端向下垂直插入Y1培養基中,培養3~7d后轉入到新的Y1培養基中,并繼續培養10~15d長出新芽;

3)新芽伸長培養:將長出的新芽莖段基部發黑部分切除后轉移至Y2培養基中進行新芽伸長培養,20d后新芽伸長到≥3.0cm;

4)繼代增殖培養:將伸長生長后的新芽切成1cm左右的小段,將其轉入Y2培養基中進行繼代增殖培養,25~30d后增殖新芽萌發并伸長到2cm以上;繼代增殖培養代數不超過4代;

5)生根培養:將步驟4)長至2cm以上的新芽剪下,去掉靠近培養基基部的葉片并轉移至Y3培養基,培養15d后陸續長出新根;

6)煉苗移栽:將生根的植株的組培瓶瓶蓋打開3d;取出生根苗,洗凈根部培養基,自來水栽培5d,并用聚乙烯塑料袋蓋住水杯,保持濕度;取出生根苗,移栽至裝有基質的盆里,保持溫度22~25℃,濕度85~95%,適當遮蔭,

其中,所述各培養基的組分為:

Y1培養基:MS基本培養基(各成分用量詳見后面的MS基本培養基說明)、30g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、0.1mg/L6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)、0.05mg/L萘乙酸(NAA),pH為5.8;

Y2培養基:MS基本培養基、30g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、1.0mg/L6-BA、0.2mg/LNAA,pH為5.8;

Y3培養基:大量元素減半的MS基本培養基、20g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、0.25mg/L吲哚丁酸(IBA)、0.25mg/LNAA,pH為5.8;

其中,步驟2-5中所述的培養條件是:溫度23-27℃,每天用1400Lx光強照射16h,然后暗箱保藏8小時。

本發明的有益效果是:針對紅千層常規繁殖效率很低的問題,首次建立起該樹種的組織培養快速繁殖技術體系,使其苗木繁殖不受時間、季節、氣候及場地的限制,極大地縮短了育苗周期,極大地提高了育苗效率,育苗周期由1年縮短到3至4個月,每年育苗批數由1批提高到4至8批,為其大面積推廣應用提供一條有效途徑。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。

實施例1:

一種紅千層的組織培養快速繁殖方法,具體如下:

1)外植體的選擇及滅菌:以當年生半木質化的垂枝紅千層枝條為外植體,將枝條剪成2~3cm的莖段,剪去葉片,用流水清洗灰塵,以洗潔精溶液浸泡3min,再以流水沖洗2h;在超凈工作臺上先將莖段用70%的酒精浸泡30s,搖動25s,倒去酒精并用無菌水沖洗5遍,再用0.1%的升汞浸泡8min,每隔2min搖動一次,并用無菌水沖洗6遍,將其放入無菌水中浸泡備用;

2)初代培養:將滅菌后外植體傷口處切掉1~2mm,將末端向下垂直插入Y1培養基中,培養5d后轉入到新的Y1培養基中,并繼續培養12d長出新芽;

3)新芽伸長培養:將長出的新芽莖段基部發黑部分切除后轉移至Y2培養基中進行新芽伸長培養,20d后新芽伸長到≥3.0cm;

4)繼代增殖培養:將伸長生長后的新芽切成1cm左右的小段,將其轉入Y2培養基中進行繼代增殖培養,28d后增殖新芽萌發并伸長到2cm以上;繼代增殖培養代數為4代;

5)生根培養:將步驟4)長至2cm以上的新芽剪下,去掉靠近培養基基部的葉片并轉移至Y3培養基,培養15d后陸續長出新根;

6)煉苗移栽:將生根的紅千層植株的組培瓶瓶蓋打開3d;取出生根苗,洗凈根部培養基,自來水栽培5d,并用聚乙烯塑料袋蓋住水杯,保持濕度;取出生根苗,移栽至裝有基質的盆里,保持溫度22~25℃,濕度85~95%,適當遮蔭,成活率達95%。

其中,步驟2-5中所述的培養條件是:溫度25±2℃,每天用1400Lx光強照射16h,然后暗箱保藏8小時。

其中,所述各培養基的組分為:

Y1培養基:MS基本培養基、30g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、0.1mg/L6-芐氨基腺嘌呤、0.05mg/L萘乙酸,pH為5.8;

Y2培養基:MS基本培養基、30g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、1.0mg/L6-芐氨基腺嘌呤、0.2mg/L萘乙酸,pH為5.8;

Y3培養基:大量元素減半的MS基本培養基、20g/L蔗糖、7.5g/L瓊脂粉、0.25mg/L吲哚丁酸、0.25mg/L萘乙酸,pH為5.8;

其中的含量(g/L或mg/L)均是指各組分占總培養基的重量體積比,如Y1培養基中的30g/L蔗糖,指的是每1LY1培養基中含蔗糖30g。

所述MS基本培養基含有大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成分四大類,Y1、Y2培養基中,MS基本培養基的各組分占總培養基的含量為:大量元素為:KNO3(1900mg/L),NH4NO3(1650mg/L),MgSO4·7H2O(370mg/L),KH2PO4(170mg/L),CaCl2(440mg/L);微量元素為:KI(0.83mg/L),H3BO3(6.2mg/L),MnSO4·H2O(16.9mg/L),ZnSO4·4H2O(8.6mg/L),CuSO4·5H2O(0.025mg/L),CoCl2·6H2O(0.025mg/L),Na2MoO4·2H2O(0.25mg/L);鐵鹽為:FeSO4·7H2O(27.85mg/L),Na2EDTA(37.25mg/L);有機成分為:甘氨酸(2.0mg/L),煙酸B3(0.5mg/L),鹽酸硫胺素B1(0.1mg/L),鹽酸吡哆醇B6(0.5mg/L),肌醇(100mg/L)。

Y3培養基中的大量元素減半,即KNO3、NH4NO3、MgSO4·7H2O、KH2PO4、CaCl2的含量減半,其它成分的含量不變。

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