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雙酰化的GLP1衍生物.pdf

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雙酰化 GLP1 衍生物
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摘要
申請專利號:

CN201180054077.1

申請日:

20111109

公開號:

CN103209711A

公開日:

20130717

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K47/48,C07K14/605,A61P3/10 主分類號: A61K47/48,C07K14/605,A61P3/10
申請人: 諾沃—諾迪斯克有限公司
發明人: A.R.馬德森,B.韋喬雷克,J.科費德,J.勞,J.施佩茨勒,J.T.科德拉,L.林德羅特,P.W.加里貝,P.紹爾貝格,T.克魯澤
地址: 丹麥鮑斯韋
優先權: 10190515.6,11169276.0,61/414221,61/497123
專利代理機構: 中國專利代理(香港)有限公司 代理人: 孔青;萬雪松
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201180054077.1

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變;所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中所述延長部分選自Chem.1、Chem.2和Chem.3:Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*;Chem.2:HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*;Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-*,其中x為6-18范圍內的整數,y為3-17范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團;和所述接頭包含Chem.4:*-NH-(CH2)2-(O-(CH2)2)k-O-(CH2)n-CO-*,其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。本發明還涉及其藥物用途,例如在治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病中的藥物用途,以及涉及相應的新肽和側鏈中間體。所述衍生物適于口服給藥。

權利要求書

1.?GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)?(SEQ?ID?NO:?1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變,所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中所述延長部分選自Chem.2、Chem.1和Chem.3:Chem.2:HOOC-CH-O-(CH)-CO-*Chem.1:HOOC-(CH)-CO-*Chem.3:R-CH-(CH)-CO-*,其中x為6-18范圍內的整數,y為3-17范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,和R為摩爾質量不高于150?Da的基團;和所述接頭包含Chem.4:???????????????????????????????????????????????其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。2.?權利要求1的衍生物,其中所述延長部分選自Chem.1和Chem.2。3.?權利要求1-2中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基被命名為K。4.?權利要求3的衍生物,其中T選自19-37的范圍。5.?權利要求4的衍生物,其中T為22、26、27、30、31、34或37;優選T為26、27或31;或更優選T為26或31。6.?權利要求1-5中任一項的衍生物,其中所述類似物包含式I的GLP-1類似物:式I:Xaa-Xaa-Glu-Gly-Thr-Xaa-Thr-Ser-Asp-Xaa-Ser-Lys-Xaa-Xaa-Glu-Xaa-Xaa-Ala-Xaa-Xaa-Xaa-Phe-Ile-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa,其中Xaa為L-組氨酸、咪唑丙酰基、α-羥基-組氨酸、D-組氨酸、脫氨基-組氨酸、2-氨基-組氨酸、β-羥基-組氨酸、高組氨酸,N-乙酰基-組氨酸、N-甲酰基-組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸;Xaa為Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Thr、Ser、Lys、Aib、(1-氨基環丙基)羧酸、(1-氨基環丁基)羧酸、(1-氨基環戊基)羧酸、(1-氨基環己基)羧酸、(1-氨基環庚基)羧酸或(1-氨基環辛基)羧酸;Xaa-為Phe或Leu;Xaa為Val或Leu;Xaa為Tyr或Gln;Xaa為Leu或Met;Xaa為Gly、Glu、Lys或Aib;Xaa為Gln、Glu或Arg;Xaa為Ala或Val;Xaa為Val、His、Lys或Arg;Xaa為Glu、His、Leu或Lys;Xaa為Ala、Glu、Lys或Arg;Xaa為Trp、Lys或His;Xaa為Val或Lys;Xaa為Lys、Glu、Asn、Gly、Gln、Arg、His或不存在;Xaa為Gly、Aib或不存在;Xaa為Arg、Gly、Lys或不存在;Xaa為Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、Arg或不存在;和Xaa為Ser、Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、Arg或不存在。7.?權利要求1-6中任一項的衍生物,其中x為10、12、14或16;優選x為12或14。8.?權利要求1-6中任一項的衍生物,其中y為7、8或9;優選y為9。9.?權利要求1-8中任一項的衍生物,其中所述類似物被修飾以便包含C-末端酰胺。10.?權利要求1-8中任一項的衍生物,其中所述類似物具有C-末端羧酸。11.?化合物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述化合物選自以下:Chem.20、Chem.21、Chem.22、Chem.23、Chem.24、Chem.25、Chem.26、Chem.27、Chem.28、Chem.29、Chem.30、Chem.31、Chem.32、Chem.33、Chem.34、Chem.35、Chem.36、Chem.37、Chem.38、Chem.39、Chem.40、Chem.41、Chem.42、Chem.43、Chem.44、Chem.45、Chem.46、Chem.47、Chem.48、Chem.49、Chem.50、Chem.51、Chem.52、Chem.53、Chem.54、Chem.55、Chem.56、Chem.57、Chem.58、Chem.59、Chem.60、Chem.61、Chem.62、Chem.63、Chem.64、Chem.65、Chem.66、Chem.67、Chem.68、Chem.69、Chem.70、Chem.71、Chem.72、Chem.73、Chem.74、Chem.75、Chem.76、Chem.77、Chem.78、Chem.79、Chem.80、Chem.81、Chem.82、Chem.83、Chem.84、Chem.85、Chem.86、Chem.87、Chem.88、Chem.89、Chem.90、Chem.91、Chem.92、Chem.93、Chem.94、Chem.95、Chem.96、Chem.97、Chem.98、Chem.99、Chem.100、Chem.101、Chem.102、Chem.103、Chem.104、Chem.105、Chem.106、Chem.107、Chem.108、Chem.109、Chem.110、Chem.111、Chem.112、Chem.113、Chem.114、Chem.115、Chem.116、Chem.117、Chem.118、Chem.119、Chem.120、Chem.121、Chem.122、Chem.123、Chem.124、Chem.125、Chem.126、Chem.127、Chem.128、Chem.129、Chem.130、Chem.131、Chem.132、Chem.133、Chem.134、Chem.135、Chem.161、Chem.162、Chem.163、Chem.164、Chem.165、Chem.166、Chem.167、Chem.168、Chem.169、Chem.170、Chem.171、Chem.172、Chem.173、Chem.174、Chem.175、Chem.176、Chem.177、Chem.178、Chem.179、Chem.180、Chem.181、Chem.182、Chem.183、Chem.189、Chem.190、Chem.191、Chem.192、Chem.193、Chem.194和Chem.195。12.?權利要求1-11中任一項的衍生物,其用作藥物。13.?權利要求1-11中任一項的衍生物,其用于以下用途:用于治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展。14.?權利要求1-11中任一項的衍生物用于制備用于以下的藥物的用途:用于治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展。15.?一種方法,所述方法用于治療或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展,所述方法通過給予藥學上活性量的權利要求1-11中任一項的衍生物來進行。

說明書

技術領域

本發明涉及胰高血糖素樣肽1(GLP-1)的類似物的衍生物,更具體地,涉及在肽的K18處和在另一個K殘基處酰化的雙-酰化的GLP-1衍生物,及其藥物用途。

通過引用并入序列表

2011年6月9日創建的標題為“序列表”的序列表為627個字節,其通過引用并入本文中。

背景

WO99/43706公開了多種單-和雙-酰化的GLP-1衍生物,包括一些K18,26和K18,34衍生物。

在本申請的優先權日期之后公布的WO2011/080103公開了多種在K26,37雙-酰化的GLP-1衍生物。

WO06/097537公開了多種包括司美魯肽(Semaglutide)的GLP-1衍生物(實施例4),司美魯肽為由Novo?Nordisk?A/S開發的每周給予一次的單-酰化的GLP-1衍生物。

Angewandte?Chemie國際版本2008,第47卷,第3196-3201頁報道了一類4-(對-碘苯基)丁酸衍生物的發現和表征,其聲稱與小鼠血清白蛋白(MSA)和人血清白蛋白(HSA)二者顯示穩定的非共價結合相互作用。

概述

本發明涉及GLP-1肽的衍生物。

所述衍生物在取代18位天然絲氨酸的賴氨酸處被酰化,以及在另一個賴氨酸殘基處被酰化。所述其它賴氨酸殘基可為天然賴氨酸或取代另一個氨基酸殘基的賴氨酸。側鏈為白蛋白結合部分。它們包含延長部分,優選選自脂肪二酸,和具有末端或遠端苯基或苯氧基的脂肪酸,二者均任選被取代。脂肪酸或脂肪二酸的羧基任選經由接頭被酰化為GLP-1肽的賴氨酸殘基,優選在其ε-氨基處。GLP-1肽可為GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的類似物,與GLP-1(7-37)比較,具有總計多達12個氨基酸差異,例如一個或多個添加、一個或多個缺失和/或一個或多個取代。延長部分經由接頭與肽連接。接頭可包含一個或多個乙二醇單元,其可序貫連接在一起作為單或低聚乙二醇單元。

更具體地,本發明涉及GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變;所述衍生物包含兩個各自經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中每個延長部分選自Chem.1、Chem.2和Chem.3:

Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*

Chem.2:HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*

Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-*,其中x為6-18范圍內的整數,y為3-17范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團;和所述接頭包含

Chem.4:

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

本發明還涉及用作藥物的這類衍生物,所述衍生物特別用于治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展。

本發明另外涉及呈相應的GLP-1肽和側鏈形式的中間產物。

本發明衍生物具有生物活性。此外或備選地,它們具有延長的藥代動力學概況。此外或備選地,它們具有高的口服生物利用度。此外或備選地,它們具有良好的生物物理性質。這些性質在開發下一代用于皮下、靜脈內和/或特別是口服給予的GLP-1化合物中是重要的。

描述

下文中,可通過其符號或相應的書面名稱來表示希臘字母,例如:α=alpha;β=beta;ε=epsilon;γ=gamma;ω=omega;等等。同樣,希臘字母μ可由″u″來表示,例如在μl=ul或μM=uM中。

化學式中的星號(*)指明:i)連接點;ii)基團;和/或iii)非共享電子。

本發明涉及GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變;所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中所述延長部分選自Chem.1、Chem.2和Chem.3:

Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*

Chem.2:HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*

Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-*,

其中x為6-18范圍內的整數,y為3-17范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團;和所述接頭包含

Chem.4:

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

GLP-1類似物

本文所用術語“GLP-1類似物”或“GLP-1的類似物”,指為人胰高血糖素樣肽-1(GLP-1(7-37))變體的肽或化合物,其序列作為SEQ?ID?NO:1包括在序列表中。具有序列SEQ?ID?NO:1的肽亦可被命名為天然GLP-1。

在序列表中,將SEQ?ID?NO:1(組氨酸)的第一個氨基酸殘基指定為1號。然而,在下文中,按照本領域慣例,將該組氨酸殘基稱為7號,并相應地為隨后的氨基酸殘基編號,以37號甘氨酸結束。因此,本文任何提及GLP-1(7-37)序列的氨基酸殘基編號或位置編號,通常為以7位His開始并以37位Gly結束的序列。

本發明衍生物的GLP-1類似物可參考以下來闡述:i)對應于改變的氨基酸殘基的天然GLP-1(7-37)中氨基酸殘基的數目(即天然GLP-1的相應位置);和ii)實際改變。

本發明衍生物的GLP-1類似物包含對應于GLP-1(7-37)的18位位置的第一賴氨酸殘基。如果該類似物的氨基酸序列以另外的方式等同于天然GLP-1的序列,則這種類似物可被命名為K18-GLP-1(7-37)。該命名相應地表示其中18位的絲氨酸已被賴氨酸取代的天然GLP-1的氨基酸序列。作為添加的評述,該類似物包含在26位的第二Lys殘基,和在34位的第三Lys殘基(即GLP-1(7-37)的天然賴氨酸)。

本發明衍生物的GLP-1類似物進一步包含在另一個位置的第二賴氨酸殘基,該位置可被命名為“T”。T相應地表示18位以外的任何其它位置。

例如,T可表示26,在這種情況下,除在18位的賴氨酸以外,所述類似物還在對應于天然GLP-1中26位的位置包含賴氨酸。所述類似物仍被命名為K18-GLP-1(7-37),條件是,除了K18-取代,其氨基酸序列等同于天然GLP-1的序列。

作為另一個實例,T可表示34,在這種情況下,除在18位的賴氨酸以外,所述類似物還在對應于天然GLP-1中34位的位置包含賴氨酸。所述類似物仍被命名為K18-GLP-1(7-37),條件是,除了K18-取代,其氨基酸序列等同于天然GLP-1的序列。

但是,T也可表示除了18、26或34以外的在7-37范圍內的數字。這樣的類似物被命名為K18,KT-GLP-1(7-37),條件是,除了K18-和KT-取代,其氨基酸序列等同于天然GLP-1的序列。

當與天然GLP-1(SEQ?ID?NO:1)比較時,形成本發明衍生物的一部分的GLP-1類似物包含(優選具有)最多12個氨基酸改變,換言之,其為其中當與天然GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較時,多個氨基酸殘基已改變的GLP-1肽。這些改變可獨立表示一種或多種氨基酸取代、添加和/或缺失。

以下為適當類似物命名法的非限制性實例。

例如,類似物[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)指明GLP-1(7-37)肽,其當與天然GLP-1比較時,通過以下取代改變:8位丙氨酸被Aib(α-氨基異丁酸)取代,18位絲氨酸被賴氨酸取代,22位甘氨酸被谷氨酸取代,26位賴氨酸被精氨酸取代,34位賴氨酸被精氨酸取代,和37位甘氨酸被賴氨酸取代。該類似物也可簡要地被命名為(8Aib,18K,22E,26R,34R,37K)。

作為另一個實例,類似物[Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)指明GLP-1(7-37)肽,其當與天然GLP-1比較時,通過以下取代改變:18位絲氨酸被賴氨酸取代,22位甘氨酸被谷氨酸取代,26位賴氨酸被精氨酸取代,27位谷氨酸被賴氨酸取代,31位色氨酸被組氨酸取代,34位賴氨酸被甘氨酸取代,和在35-36-37位缺失甘氨酸-精氨酸-甘氨酸的C-末端。該類似物也可簡要地被命名為(18K,22E,26R,27K,31H,34G、Des35-37),其中暗指提及GLP-1(7-37),并且“des”表示缺失。

作為再一實例,包含Imp7和/或(Aib8或S8)的類似物指GLP-1(7-37)肽,其當與天然GLP-1比較時,包含7位組氨酸被咪唑丙酸(Imp)取代;和/或8位丙氨酸被α-氨基異丁酸(Aib)或被絲氨酸取代。與SEQ?ID?NO:1比較,該類似物可包含其它改變。

從以上實例明顯看出,可通過其全稱、其一個字母的編碼和/或其三個字母的編碼來識別氨基酸殘基。這三種方式完全等同。

可通過參考天然GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1),將表述“等同位置”或“相應位置”用于表征GLP-1序列的改變位點。可通過以下方法容易地推論出等同或相應位置:例如通過簡單手寫及目測;和/或可使用標準蛋白質或肽比對程序,例如Needleman-Wunsch比對的“比對”。在Needleman,SB.和Wunsch,C.D.,(1970),Journal?of?Molecular?Biology,48:443-453中闡述算法,由Myers和W.Miller在″Optimal?Alignments?in?Linear?Space(線性空間的最佳比對)″CABIOS(生物科學中的計算機應用)(1988)4:11-17中闡述比對程序。為了進行比對,可使用默認記分矩陣(default?scoring?matrix)BLOSUM62和默認單位矩陣,空隙中的第一個殘基罰分可設為-10(負十),空隙中另外的殘基罰分設為-0.5(負零點五)。

下文中插入所述比對的實例,其中1號序列為SEQ?ID?NO:1,2號序列為其類似物(18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37):

#1:GLP-1(7-37)

#2:GLP-1(7-37)_類似物

#矩陣:EBLOSUM62

#空隙_罰分:10.0

#延伸_罰分:0.5

#長度:31

#同一性:22/31(71.0%)

#類似性:24/31(77.4%)

#空隙:3/31(9.7%)

#記分:105.0

1??????1?HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG?31

?????????|||||||||||.|||.|||::|||.||.

2??????1?HAEGTFTSDVSKYLEEQAARKFIAHLVG---28

在非天然氨基酸例如在序列中包括Imp和/或Aib的情況下,為比對目的它們可用X置換。若需要后來可手工更正X。

例如在本發明衍生物的GLP-1類似物情境中所用術語“肽”,指包含由酰胺(或肽)鍵互相連接的一系列氨基酸的化合物。

本發明肽包含由肽鍵連接的至少五個組分氨基酸。在具體實施方案中,所述肽包含至少10個,優選至少15個,更優選至少20個,甚至更優選至少25個,或最優選至少27個氨基酸。

在具體實施方案中,所述肽由至少五個組分氨基酸組成,優選由至少10個、至少15個、至少20個、至少25個,或最優選由至少27個氨基酸組成。在再另一具體實施方案中,所述肽由至少28個,至少29個,至少30個,至少31個或至少32個氨基酸組成。

在又一具體實施方案中,所述肽由通過肽鍵互相連接的氨基酸組成。

氨基酸為含有胺基和羧酸基團并任選一個或多個另外的基團的分子,所述另外的基團通常被稱為氨基酸側鏈。

術語“氨基酸”包括成蛋白質性(proteogenic)氨基酸(由遺傳密碼編碼,包括天然氨基酸和標準氨基酸)以及非成蛋白質性氨基酸(在蛋白質中未發現和/或不能用標準遺傳密碼編碼)和合成氨基酸。因此,所述氨基酸可選自成蛋白質性氨基酸、非成蛋白質性氨基酸和/或合成氨基酸。

不是由遺傳密碼編碼的氨基酸的非限制性實例有γ-羧基谷氨酸、鳥氨酸和磷酸絲氨酸。合成氨基酸的非限制性實例為氨基酸的D-異構體,例如D-丙氨酸和D-亮氨酸、Aib(α-氨基異丁酸)、β-丙氨酸和脫氨基-組氨酸(desH,備選名稱為咪唑丙酸,縮寫為Imp)。

在下文中,應該將未闡明光學異構體的所有氨基酸理解為意指L-異構體(除非另外規定)。

本發明GLP-1衍生物和類似物具有GLP-1活性。該術語指與GLP-1受體結合并啟動信號轉導途徑從而導致促胰島素作用或本領域已知的其它生理效應的能力。例如,可用本文實施例148所述體外效能測定來適宜地測定本發明類似物和衍生物的GLP-1活性。

GLP-1衍生物

本文在GLP-1肽或類似物情境中所用術語“衍生物”,意即化學修飾的GLP-1肽或類似物,其中一個或多個取代基與所述肽共價連接。取代基亦可被稱為側鏈。

在具體實施方案中,所述側鏈能夠與白蛋白形成非共價聚集物,由此促進衍生物隨血流的循環,并亦具有延長衍生物的作用時間的作用,這是由于以下事實:GLP-1-衍生物和白蛋白的聚集物只能緩慢崩解以釋放活性藥物成分。因此,取代基或側鏈整體來看可被稱為白蛋白結合部分。

在另一具體實施方案中,白蛋白結合部分包含對白蛋白結合特別重要并藉此延長作用的部分,所述部分可因此被稱為延長部分。該延長部分可相對于其與肽的連接點位于或靠近白蛋白結合部分的相反端。

在又一具體實施方案中,白蛋白結合部分包含在延長部分和與所述肽的連接點之間的部分,所述部分可被稱為接頭、接頭部分、間隔子(spacer)等等。

在具體實施方案中,延長部分為親脂性的,和/或在生理pH(7.4)時帶負電荷。

所述白蛋白結合部分、延長部分或接頭可通過酰化與GLP-1肽的賴氨酸殘基共價連接。

在優選實施方案中,優選包含延長部分和接頭的白蛋白結合部分的活性酯在形成酰胺鍵過程(該過程被稱為酰化)中與賴氨酸殘基的氨基(優選其ε氨基)共價連接。

除非另外指出,否則當提及賴氨酸殘基的酰化時,應理解為其ε-氨基。

包含兩個經由接頭與第一和第二K殘基(例如,與K18和KT)連接的延長部分的衍生物可稱為衍生物,其在第一和第二賴氨酸殘基的ε-氨基處酰化2次、雙-酰化或雙酰化,例如分別在GLP-1肽的18位和T位。

為本目的,術語“白蛋白結合部分”、“延長部分”和“接頭”包括分子本身及其基團。從使用所述術語的情境中可明了其意指這種還是另一種形式。在優選實施方案中,這些術語指基團。所述基團優選適于形成一個或多個酰胺鍵,即與羰基和/或氨基連接的一個或兩個非共享電子(*)形成酰胺鍵。這種基團的實例為Chem.1至Chem.3,它們的結構在以下顯示。

在一個方面,每個延長部分包含獨立選自Chem.1、Chem.2和Chem.3的延長部分或由其組成:

Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*

Chem.2:HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*

Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-*,

其中x為6-18范圍內的整數,y為3-17范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團。

在一個實施方案中,*-(CH2)x-*指直鏈或支鏈亞烷基,優選直鏈亞烷基,其中x為6-18范圍內的整數。

在另一實施方案中,*-(CH2)y-*指直鏈或支鏈亞烷基,優選直鏈亞烷基,其中y為3-11范圍內的整數。

在再另一實施方案中,*-(CH2)z-*指直鏈或支鏈亞烷基,優選直鏈亞烷基,其中z為1-5范圍內的整數。

在再另一實施方案中,*-(CH2)z-*指環狀亞烷基,其中z為1-5范圍內的整數,優選3。

命名法如本領域所常用,例如,在上式中,*-COOH指羧基,*-C6H4-*指亞苯基,*-CO-*指羰基(O=C<**)。在具體實施方案中,芳族化合物例如苯氧基和亞苯基可獨立為鄰位、間位或對位。

化學物質(例如基團R2)的摩爾質量(M)是一摩爾該物質的質量。以道爾頓來引用摩爾質量,符號為Da,且定義1Da=1g/摩爾。

可根據標準原子量計算摩爾質量,其通常列入化學品目錄中。通過將形成化合物的原子的標準原子量總和乘以摩爾質量常數Mu,來得到化合物的摩爾質量,Mu等于1g/摩爾。作為一個實例,叔丁基(C4H9)的摩爾質量為M(C4H9)=([4×12.01]+[9×1.008])×1g/摩爾=57Da。

國際純粹化學與應用化學聯合會(IUPAC)發布了標準原子量,并亦在多種多樣的教科書、商業目錄、掛圖等中轉載。

為本目的,用化合物的每個組分原子的最豐富的同位素的準確質量計算化合物的摩爾質量。準確質量基于碳12標準。在計算化合物的摩爾質量之前,將每個組分原子的準確質量四舍五入為整數。

例如,對于CF3(本發明的R2取代基的一個實例),如下計算摩爾質量:四舍五入為整數的最豐富的碳同位素(C12)的準確質量為12。四舍五入為整數的最豐富的氟原子(F19)的準確質量為19。因此,CF3的摩爾質量為(12+3×19)×1g/mol=69Da。如上所解釋,本發明GLP-1衍生物為雙-酰化的,即兩個白蛋白結合部分與GLP-1肽共價連接。

在具體實施方案中,兩個白蛋白結合部分(即整個側鏈)類似,優選基本相同,或最優選相同。

在另一具體實施方案中,兩個延長部分類似,優選基本相同,或最優選相同。

在又一具體實施方案中,兩個接頭類似,優選基本相同,或最優選相同。

術語“基本相同”包括同一性的差異,這是由于形成一種或多種鹽、酯和/或酰胺;優選形成一種或多種鹽、甲基酯和簡單的酰胺;更優選形成不多于兩種鹽、甲基酯和/或簡單的酰胺;甚至更優選形成不多于一種鹽、甲基酯和/或簡單的酰胺;或最優選形成不多于一種鹽。

在化合物例如白蛋白結合部分、延長部分和接頭的情境下,可用本領域已知的任何合適的計算機程序和/或算法來測定類似性和/或同一性。

例如,兩個延長部分、兩個接頭和/或兩個整個側鏈的類似性適宜用分子指紋測定。指紋為一種表示化學結構的數學方法(參見例如Chemoinformatics:A?textbook,Johann?Gasteiger?and?Thomas?Engel(編輯),Wiley-VCH?Verlag,2003)。

合適的指紋的實例包括但不限于UNITY指紋、MDL指紋和/或ECFP指紋,例如ECFP_6指紋(ECFP代表延伸的-連通性指紋)。

在具體實施方案中,兩個延長部分、兩個接頭和/或兩個整個側鏈表示為:a)ECFP_6指紋;b)UNITY指紋;和/或c)MDL指紋。

Tanimoto系數優選用于計算兩種指紋的類似性,無論使用a)、b)或c)。

在具體實施方案中,無論使用a)、b)或c),兩個延長部分、兩個接頭和/或兩個整個側鏈分別具有至少0.5(50%)的類似性;優選至少0.6(60%);更優選至少0.7(70%)或至少0.8(80%);甚至更優選至少0.9(90%);或最優選至少0.99(99%),例如1.0(100%)的類似性。

可用程序SYBYL(可得自Tripos,1699South?Hanley?Road,St.Louis,MO63144-2319USA)計算UNITY指紋。可用程序Pipeline?Pilot(可得自Accelrys?Inc.,10188Telesis?Court,Suite100,San?Diego,CA92121,USA)計算ECFP_6和MDL指紋。

對于更多細節,參見例如J.Chem.Inf.Model.2008,48,542-549;J.Chem.Inf.Comput.Sci.2004,44,170-178;J.Med.Chem.2004,47,2743-2749;J.Chem.Inf.Model.2010,50,742-754;以及SciTegic?Pipeline?Pilot?Chemistry?Collection:Basic?Chemistry?User?Guide,2008年3月,SciTegic?Pipeline?Pilot?Data?Modeling?Collection,2008,均得自Accelrys?Software?Inc.,San?Diego,US,以及指南http://www.tripos.com/tripos_resources/fileroot/pdfs/Unity_111408.pdf和http://www.tripos.com/data/SYBYL/SYBYL_072505.pdf。

下文插入類似性計算的實例,其中將Chem.36的整個側鏈與其甲基酯(Chem36a)相比較:

Chem.36a:

用a)ECFP_6指紋類似性為0.798,用b)UNITY指紋類似性為0.957;和用MDL指紋類似性為0.905。

在兩個相同側鏈(白蛋白結合部分)的情況下,衍生物可被命名為對稱的。

本發明衍生物的兩個接頭中的每一個包含以下第一接頭元件(element):

Chem.4:

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

在具體實施方案中,當k=1和n=1時,該接頭元件可被命名為OEG或8-氨基-3,6-二氧雜辛酸,和/或其可用下式表示:

Chem.4a:*-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-CO-*。

在另一具體實施方案中,本發明衍生物的每個接頭可進一步獨立包含以下第二接頭元件:

Chem.5:

其可被包括p次,其中p為1-3范圍內的整數。該第二接頭元件也可稱為γ-Glu或簡要地gGlu,由于是氨基酸谷氨酸的γ羧基在此處用于與另一個接頭元件或與賴氨酸的ε-氨基連接的事實。Chem.5的結構包括Glu的L-形式以及D-形式。在具體實施方案中,Chem.5為a)L-形式或b)D-形式。

在另一具體實施方案中,本發明衍生物的每個接頭可進一步獨立包含以下第三接頭元件:

Chem.6:*-NH-(CH2)q-CHR3-CO-*,

其中q為2-12范圍內的整數,和R3為氫(H)。在Chem.6中,基團*-(CH2)q-*可表示直鏈或支鏈亞烷基,優選直鏈亞烷基,其中q為2-12范圍內的整數。

在再另一具體實施方案中,接頭具有a)6-41個C原子;和/或b)4-28個雜原子。雜原子的具體和非限制性實例為N-原子和O-原子。H-原子不是雜原子。

在具體實施方案中,每個接頭由Chem.5(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,因此形成的(組合的/聚集的)接頭在其游離氨基(HN-*)末端與延長部分的游離羰基(CO-*)連接,在其游離羰基(CO-*)末端分別與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

在另一具體實施方案中,每個接頭由Chem.4(兩次)和Chem.5(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,因此形成的(組合的/聚集的)接頭在其游離氨基(HN-*)末端與延長部分的游離羰基(CO-*)連接,在其游離羰基(CO-*)末端分別與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

不必說,僅為了良好順序的緣故:此處和下文中,短語“以指定次序”,指第一個-提及的接頭元件的*-NH端(此處兩次Chem.4的第一個)與延長物(protractor)的*-CO端連接,而最后-提及的接頭元件(此處Chem.5)的*-CO端與GLP-1類似物的目的K殘基的ε氨基連接。

在再另一具體實施方案中,本發明涉及:

(a)GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的26位的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,包含最多4個氨基酸改變,所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中所述延長部分為Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*,其中x為12;和所述接頭包含Chem.4:

其中k為1,和n為1。

(b)GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的26位的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,包含最多4個氨基酸改變,所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中所述延長部分為Chem.2:

HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*,其中y為9;和所述接頭包含Chem.4:其中k為1,和n為1。

(c)(a)或(b)的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

(d)(a)或(b)的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(一次)、Chem.5a(一次)和Chem.4(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

(e)(a)、(b)、(c)或(d)中任一項的衍生物,其中除K18改變以外,所述類似物還包含Q34。

(f)(a)、(b)、(c)、(d)或(e)中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Aib8。

(g)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)中任一項的衍生物,其中所述類似物包含E22。

(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)中任一項的衍生物,其中所述類似物包含(優選具有)式I:

Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Lys-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,其中

Xaa7為His或脫氨基-組氨酸(咪唑丙酰基);Xaa8為Aib;Xaa12-為Phe或Leu;Xaa16為Val;Xaa19為Tyr;Xaa20為Leu;Xaa22為Glu;Xaa23為Gln、Glu或Arg;Xaa25為Ala或Val;Xaa26為Lys;Xaa27為Glu、His、Leu或Lys;Xaa30為Ala、Glu或Lys;Xaa31為Trp、Lys或His;Xaa33為Val;Xaa34為Gln;Xaa35為Gly或不存在;Xaa36為Arg或不存在;Xaa37為Gly、Lys或不存在;和Xaa38不存在。

(i)(h)的衍生物,其中Xaa7為His;Xaa12-為Phe;Xaa16為Val;Xaa19為Tyr;Xaa20為Leu;Xaa22為Glu;Xaa23為Gln;Xaa25為Ala;Xaa26為Lys;Xaa27為Glu;Xaa30為Ala;Xaa31為Trp;Xaa33為Val;Xaa34為Gln;Xaa35為Gly;Xaa36為Arg;Xaa37為Gly;和Xaa38不存在。

(j)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)或(i)中任一項的衍生物,其中與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較,所述類似物包含(優選具有)以下氨基酸改變:8Aib,18K,22E,34Q。

(k)一種化合物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述化合物選自Chem.21、Chem.57、Chem.101、Chem.103、Chem.104、Chem.105、Chem.107和Chem.109。

(l)一種化合物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述化合物由其名稱表征并且選自實施例2、38、82、84、85、86、88和90的化合物名稱的每一個的列表。

(m)實施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)中任一項的衍生物,其具有對應于低于500pM的EC50的效能,優選低于400pM,更優選低于300pM,甚至更優選低于200pM,或最優選低于100pM;其中所述效能測定為用穩定轉染的細胞系例如BHK467-12A(tk-ts13)在含有人GLP-1受體的培養基中對cAMP形成的刺激的EC50;和其中用功能受體測定來測定cAMP,例如基于內源形成的cAMP和外源添加的生物素-標記的cAMP之間的競爭,和例如用特異性抗體來捕獲cAMP,例如AScreen?cAMP測定,例如在實施例148中描述。

(n)實施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)或(m)中任一項的衍生物,其在0.005%HSA(低白蛋白)存在時GLP-1受體結合親和力(IC50)低于10nM,優選低于8.0nM,還更優選低于6.0nM,甚至更優選低于4.0nM,或最優選低于2.00nM;其中通過125I-GLP-1從受體中的取代來測量與GLP-1受體的結合親和力,例如用SPA結合測定;和其中所述GLP-1受體用穩定轉染的幼倉鼠腎細胞系(例如BHK?tk-ts13)來制備;和其中所述IC50值測定為從受體取代50%125I-GLP-1的濃度。

(o)實施方案(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)中任一項的衍生物,其中在大鼠中i.v.給予后的終末半衰期(T1/2)為司美魯肽終末半衰期的至少3倍;其中所述半衰期在大鼠中在體內藥代動力學研究中測定,例如在實施例154中描述。

本發明衍生物可以以不同的立體異構形式存在,所述立體異構形式具有相同的分子式和鍵合原子次序,但僅在其原子的空間三維取向上不同。在實驗部分用標準命名法在名稱以及結構方面指出本發明例示性衍生物的立體異構現象。除非另外指出,否則本發明涉及要求保護的衍生物的所有立體異構形式。

可用任何合適方法測定本發明GLP-1衍生物的血漿濃度。例如,可使用LC-MS(液相色譜質譜)或免疫測定例如RIA(放射免疫測定)、ELISA(酶聯免疫吸附測定)和LOCI(光激化學發光免疫測定(Luminescence?Oxygen?Channeling?Immunoasssay))。用于合適RIA和ELISA測定的一般方案可參見例如WO09/030738第116-118頁。優選測定為在本文實施例150中所述的LOCI測定。

中間產物

本發明的一種類型的中間產物采用GLP-1類似物形式或(i)-(xxxxxxv)的任何類似物的藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較,其包含以下改變:

1):?????(i)8Aib,18K,34R;(ii)8Aib,18K,34Q;(iii)8Aib,18K,22E,34R;(iv)8Aib,18K,22E,34Q;(v)8Aib,12L,18K,34Q;(vi)7Imp,18K,22E,34Q;(vii)18K,34R;(iix)18K,34Q;(ix)18K,22E,34R;(x)18K,22E,34Q;(xi)18K,26R,31K,34R;(xii)18K,26H,31K,34R;(xiii)18K,26H,27K,34Q;(xiv)18K,22K,26R,34Q;(xv)18K,25V,26R,31K,34R;(xvi)18K,22E,26R,31K,34R;(xvii)18K,22E,26H,27K,34R;(iixx)18K,22E,26H,27K,34Q;(ixx)18K,22E,26H,27K,31H,34R;(xx)18K,22E,26H,27K,31H,34Q;(xxi)18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxii)18K,22E,25V,26R,31K,34Q;(xxiii)18K,22E,25V,26R,31K,34G;(xxiv)18K,22E,25V,26R,27K,34R;(xxv)18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(xxvi)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34R;(xxvii)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34Q;(iixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34R;(ixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34Q;(xxx)18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxi)18K,22E,25V,26R,31H,des35-37;(xxxii)18K,22E,25V,26R,30K,34G,des35-37;(xxxiii)18K,22E,25V,26R,30K,31H,34G,des35-37;(xxxiv)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37);(xxxv)18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(xxxvi)18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(xxxvii)7Imp,18K,22E,26R,34R,37K;(iixxxx)7Imp,18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxx)7Imp,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxx)7Imp,8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxi)8S,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxii)8Aib,18K,26V,27K,34R;(xxxxiii)8Aib,18K,26H,30K,34R,des36-37;(xxxxiv)8Aib,18K,25V,26R,31K,34R;(xxxxv)8Aib,18K,22E,34R,des36-37;(xxxxvi)8Aib,18K,22E,26R,34R,37K;(xxxxvii)8Aib,18K,22E,26R,31K,34R;(iixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(ixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R,des36-37;(xxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R;(xxxxxi)8Aib,18K,22E,26R,27K,31H,34R,des36-37;(xxxxxii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,des34-37;(xxxxxiii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxxxxiv)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxv)8Aib,18K,22E,25V,26R,30E,31K,34G,des35-37;(xxxxxvi)8Aib,18K,22E,25V,26R,27L,des35-37;(xxxxxvii)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(iixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27H,31K,34G,des35-37;(xxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26H,31K,34G,des35-37;(xxxxxxi)8Aib,18K,22E,23R,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxxii)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37;(xxxxxxiii)7Imp,18K,22E,26R,27K,34Q;(xxxxxxiv)34H;

和(xxxxxxv)8Aib,18K,34H。

本發明的另一種類型的中間產物采用選自Chem.137-160和Chem.184-188的白蛋白結合部分或側鏈中間體的形式,其中R和PG為保護基;或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯。

在具體實施方案中,保護基為可逆地使得化合物無反應性,并且可選擇性去掉的基團。

保護基的非限制性實例為功能化為活化酯的基團,例如但不限于OPfp、OPnp和OSuc。

其它合適的活化酯可例如按照M.Bodanszky,“Principles?of?Peptide?Synthesis”,第2版,Springer?Verlag,1993的教導選擇。

藥學上可接受的鹽、酰胺或酯

本發明衍生物可呈藥學上可接受的鹽、酰胺或酯的形式。

例如,由堿和酸之間的化學反應形成鹽,例如:2NH3+H2SO4→(NH4)2SO4。

鹽可為堿性鹽、酸性鹽,或其可既不是堿性鹽也不是酸性鹽(即中性鹽)。堿性鹽在水中產生氫氧離子而酸性鹽產生水合氫離子。

可與所添加的陽離子或陰離子形成本發明衍生物的鹽,所述添加的陽離子或陰離子分別與陰離子基團或陽離子基團反應。這些基團可位于本發明衍生物的肽部分和/或側鏈中。

本發明衍生物的陰離子基團的非限制性實例包括側鏈的游離羧基(如果有的話)以及肽部分的游離羧基。肽部分通常包括C-末端的游離羧酸基團,其亦可包括內部酸性氨基酸殘基(例如Asp和Glu)的游離羧基。

肽部分的陽離子基團的非限制性實例包括N-末端的游離氨基(如果存在的話)以及內部堿性氨基酸殘基(例如His、Arg和Lys)的任何游離氨基。

可例如讓游離羧酸基團與醇或苯酚反應來形成本發明衍生物的酯,這導致由烷氧基或芳氧基置換至少一個羥基。

酯形成可涉及肽C-末端的游離羧基和/或側鏈中的任何游離羧基。

可例如通過讓活化形式的游離羧酸基團與胺或取代的胺反應,或通過讓游離的或取代的氨基與活化形式的羧酸反應,來形成本發明衍生物的酰胺。

酰胺形成可涉及肽C-末端的游離的羧基、側鏈中的任何游離的羧基、肽N-末端的游離的氨基和/或肽和/或側鏈中的肽的任何游離的或取代的氨基。

在具體實施方案中,所述肽或衍生物呈藥學上可接受的鹽形式。在另一具體實施方案中,所述衍生物呈藥學上可接受的酰胺形式,優選含肽C-末端的酰胺基團。在又一具體實施方案中,所述肽或衍生物呈藥學上可接受的酯形式。

功能性質

在第一方面,本發明衍生物具有良好的效能。此外或備選地,在第二方面,它們具有延長的藥代動力學概況。此外或備選地,在第三方面,它們具有高的口服生物利用度。此外或備選地,在第四方面,它們具有良好的生物物理性質。

生物活性(效能)

按照第一個方面,本發明衍生物以及原樣組分GLP-1肽(例如K18-GLP-1(7-37)或其類似物)具有生物活性或有效。

在具體實施方案中,效能和/或活性指體外效能,即在功能GLP-1受體測定中的性能,更具體地指在表達克隆的人GLP-1受體的細胞系中刺激cAMP形成的能力。

可優選用以下方法測定在含有人GLP-1受體的培養基中對cAMP形成的刺激:用穩定轉染的細胞系例如BHK467-12A(tk-ts13);和/或用測定cAMP的功能受體測定,例如基于內源形成的cAMP和外源添加的生物素-標記的cAMP之間的競爭,其中測定cAMP更優選用特異性抗體來捕獲,和/或其中甚至更優選的測定為AlphaScreen?cAMP測定,最優選在實施例148中所述的測定。

術語半數最大有效濃度(EC50)通常指通過參考劑量反應曲線誘導基線和最大值之間的一半反應的濃度。將EC50用作化合物效能的量度,且EC50代表其中觀察到其最大效應的50%的濃度。

可如上文所述測定本發明衍生物的體外效能,并測定目的衍生物的EC50。EC50越低,則效能越高。

在具體實施方案中,培養基具有以下組成(測定中的最終濃度):50mM?TRIS-HCl;5mM?HEPES;10mM?MgCl2,6H2O;150mM?NaCl;0.01%吐溫;0.1%BSA;0.5mM?IBMX;1mM?ATP;1uM?GTP。第一備用培養基為:50mM?TRIS-HCl;5mM?HEPES;10mM?MgCl2,6H2O;150mM?NaCl;0.01%吐溫。第二備用培養基為:50mM?Tris-HCl、1mM?EGTA、1.5mM?MgSO4、1.7mMATP、20mM?GTP、2mM3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)、0.01%吐溫-20、pH7.4。

在又一具體實施方案中,本發明衍生物具有對應于以下EC50的體外效能:10000pM或低于10000pM,更優選低于5000pM,甚至更優選低于1000pM,或最優選低于500pM。

本發明衍生物與GLP-1受體結合的能力也可用作GLP-1活性(受體親和力)的量度。該能力可如實施例149中所述的測定。通常在低白蛋白濃度時與GLP-1受體結合應該盡可能良好,其對應于低IC50值。

在另一具體實施方案中,本發明衍生物在體內有效,其可如本領域已知在任何合適的動物模型以及在臨床試驗中測定。

糖尿病db/db小鼠是合適動物模型的一個實例,在所述小鼠體內可測定降低血糖的作用以及降低體重的作用,其例如如實施例151所述。

此外或備選地,可在豬藥效學研究中體內測定對食物攝取(food?intake)或進食量(feed?intake)的作用,其例如如實施例153所述。

延長-受體結合/低和高白蛋白

按照第二方面,本發明衍生物具有延長的作用。

可如實施例149所述分別測定在低和高濃度白蛋白存在時本發明衍生物與GLP-1受體結合的能力。

通常在低白蛋白濃度時與GLP-1受體結合應該盡可能良好,其對應于低IC50值。

高白蛋白濃度時的IC50值是白蛋白對衍生物與GLP-1受體結合的影響的量度。如已知的,GLP-1衍生物亦結合白蛋白。通常這是所期需的作用,這延長了其在血漿中的壽命。因此,高白蛋白時的IC50值通常比低白蛋白時的IC50值高,對應于與GLP-1受體的結合降低,這是由白蛋白結合與GLP-1受體結合之間的競爭引起的。

因此,可將高比率(IC50值(高白蛋白)/IC50值(低白蛋白))作為以下的指征:目的衍生物與白蛋白良好的結合(可具有長半衰期),且所述衍生物本身亦與GLP-1受體良好的結合(IC50值(高白蛋白)高和IC50值(低白蛋白)低)。在另一方面,白蛋白結合可能并不總是所期需的,或與白蛋白的結合可能太強。因此,IC50(低白蛋白)、IC50(高白蛋白)/和比率(高/低)的所期需范圍可因化合物不同而改變,這視所預期的用途及圍繞所述用途的情況并視可能感興趣的其它化合物性質而定。

作為一個實例,在一個具體實施方案中,比率(高/低),即[在2.0%人血清白蛋白(HSA)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50)除以在存在0.005%HSA時的GLP-1受體結合親和力(IC50)],為至少1,優選至少10,更優選至少20,甚至更優選至少30,或最優選至少50。

延長-小型豬體內半衰期

按照第二方面,本發明衍生物具有延長的作用。

延長可測定為在i.v.給予大鼠后作為體內終末半衰期(T1/2),如在實施例154中所述。在具體實施方案中,大鼠半衰期為至少7小時,優選至少10小時,甚至更優選至少20小時,或最優選至少30小時。

或者,延長可在另一個動物物種中測定,例如在i.v.給予小型豬后作為體內終末半衰期(T1/2)來測定,如在實施例152中所述。在具體實施方案中,終末半衰期為至少8小時,優選至少24小時,甚至更優選至少40小時,或最優選至少60小時。

意想不到地,本發明人鑒定了新類型的GLP-1衍生物,為本發明的目的,其具有高的效能,同時優選具有良好的半衰期。

口服生物利用度

按照第三方面,本發明衍生物具有高的口服生物利用度.

市售GLP-1衍生物的口服生物利用度非常低。開發中用于i.v.或s.c給予的GLP-1衍生物的口服生物利用度亦低。

因此,本領域需要已改進口服生物利用度的GLP-1衍生物。所述衍生物可為口服給藥的合適候選物,只要主要其效能總體上令人滿意,和/或只要其半衰期總體上亦令人滿意即可。

意想不到地,本發明人鑒定了新類型的GLP-1衍生物,為本發明的目的,其具有意外高的口服生物利用度,同時具有令人滿意的效能和/或半衰期。

術語生物利用度通常指給予的活性藥物成分(API)例如本發明衍生物的劑量不變地到達體循環的部分。根據定義,當靜脈內給予API時,其生物利用度為100%。然而,當經由其它途徑(例如經口)給予時,其生物利用度降低(由于不完全吸收和首過代謝)。當計算用于非靜脈內給藥途徑的劑量時,了解生物利用度是重要的。

口服絕對生物利用度比較口服給藥后API在體循環中的生物利用度(估測為曲線下面積或AUC)與靜脈內給予同一API后的生物利用度。其為與相應的靜脈內給予同一API比較,通過非靜脈內給予所吸收的API的部分。如果使用不同劑量,應該使劑量標準化來比較;因此,每一AUC都通過除以相應的給予劑量來校正。

在口服和靜脈內給予后二者用血漿API濃度對時間作圖。絕對生物利用度(F)是劑量校正的口服AUC除以靜脈內AUC。

在具體實施方案中,本發明衍生物具有高于司美魯肽的口服絕對生物利用度;優選高至少10%,更優選高至少20%,甚至更優選高至少30%,或最優選高至少40%。在另外的具體實施方案中,其口服絕對生物利用度為司美魯肽口服絕對生物利用度的至少1.5倍,優選至少2.0倍,更優選至少3.0倍,甚至更優選至少4.0倍,或最優選司美魯肽口服絕對生物利用度的至少5.0倍。

在測試口服生物利用度之前,可如促胰島素化合物的口服制劑領域所知,合適地配制本發明衍生物,其例如用WO2008/145728中所述的任何一種或多種配方。

如實施例150所述開發測試,發現所述測試給出口服生物利用度可接受的預測。按照該測試,在將GLP-1衍生物直接注射到大鼠腸腔后,測定其在血漿中的濃度(暴露),計算t=30分鐘的血漿濃度(pmol/l)除以給藥溶液的濃度(μmol/l)的比率。該比率是腸生物利用度的量度,其預期與實際口服生物利用度數據相關。

生物物理性質

按照第四方面,本發明肽/衍生物具有良好的生物物理性質。這些性質包括但不限于物理穩定性和/或溶解性。這些和其它生物物理性質可用蛋白質化學領域已知的標準方法來測量。在具體實施方案中,與天然GLP-1(SEQ?ID?NO:1)比較,這些性質得到改進。肽/衍生物的改變的寡聚性質可至少部分導致改進的生物物理性質。

本發明衍生物的另外的具體實施方案闡述于實驗部分之前標題為“具體實施方案”和“另外的具體實施方案”的部分。

生產方法

肽例如GLP-1(7-37)和GLP-1類似物的生產在本領域眾所周知。

本發明衍生物的GLP-1部分,即K18-GLP-1(7-37)或其類似物可例如通過經典的肽合成,例如用t-Boc或Fmoc化學的固相肽合成或其它充分建立的技術來產生,參見例如Greene和Wuts,“Protective?Groups?in?Organic?Synthesis”,John?Wiley&Sons,1999;Florencio?Zaragoza“Organic?Synthesis?on?solid?Phase”,Wiley-VCH?Verlag?GmbH,2000;和“Fmoc?Solid?Phase?Peptide?Synthesis”,由W.C.Chan和P.D.White編輯,Oxford?University?Press,2000。

此外或備選地,其可由重組方法產生,即通過培養含有編碼該類似物的DNA序列并能夠在允許表達該肽的條件下于合適營養培養基中表達所述肽的宿主細胞來實現。適于表達這些肽的宿主細胞的非限制性實例為大腸桿菌(Escherichia?coli)、釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)以及哺乳動物BHK或CHO細胞系。

可例如如實驗部分所述來產生包括非天然氨基酸和/或共價連接的N-末端單-或二肽模擬物的本發明的那些衍生物。或參見例如Hodgson等:“The?synthesis?of?peptides?and?proteins?containing?non-natural?amino?acids(含有非天然氨基酸的肽和蛋白質的合成)”,Chemical?Society?Reviews,第33卷,第7期(2004),第422-430頁;和標題為“Semi-recombinant?preparation?of?GLP-1analogues(GLP-1類似物的半重組制備)”的WO2009/083549A1″。

制備多種本發明衍生物的方法的具體實例包括在實驗部分。

藥物組合物

可如本領域所知制備藥物組合物,其包含本發明衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯及藥學上可接受的賦形劑。

術語“賦形劑”廣泛指活性治療成分以外的任何組分。賦形劑可為惰性物質、非活性物質和/或無醫藥活性的物質。

賦形劑可滿足不同目的,例如作為載體、溶媒、稀釋劑、片劑助劑和/或改進活性物質的給予和/或吸收。

藥物活性成分與各種賦形劑的配制為本領域已知,參見例如Remington:The?Science?and?Practice?of?Pharmacy(例如第19版(1995)和任何以后的版本)。

賦形劑的非限制性實例為:溶劑、稀釋劑、緩沖劑、防腐劑、張度調節劑、螯合劑和穩定劑。

制劑實例包括液體制劑,即水性制劑,即包含水的制劑。液體制劑可為溶液劑或混懸劑。水性制劑通常包含至少50%w/w的水或至少60%、70%、80%或甚至至少90%w/w的水。

或者,藥物組合物可為固態制劑,例如凍干或噴干組合物,其可原樣使用,或醫生或患者在臨用前向其中加入溶劑和/或稀釋劑使用。

水性制劑的pH可為pH3-pH10之間的任何值,例如約7.0-約9.5;或約3.0-約7.0。

藥物組合物可包含緩沖劑。緩沖劑可例如選自:乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鹽、甘氨酰甘氨酸、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉和三(羥甲基)-氨基甲烷、N-二(羥乙基)甘氨酸(bicine)、曲辛(tricine)、蘋果酸、琥珀酸鹽、馬來酸、富馬酸、酒石酸、天冬氨酸及其混合物。

藥物組合物可包含防腐劑。防腐劑可例如選自苯酚、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、2-苯氧基乙醇、對羥基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、芐醇、氯丁醇和硫柳汞、溴硝丙二醇(bronopol)、苯甲酸、咪脲、氯己定(chlorohexidine)、脫氫乙酸鈉、氯甲酚、對羥基苯甲酸乙酯、芐索氯銨、氯苯甘醚(chlorphenesine)(3p-氯苯氧基丙烷-1,2-二醇)及其混合物。防腐劑可以以0.1mg/ml-20mg/ml的濃度存在。

藥物組合物可包含等滲劑。等滲劑可例如選自鹽(例如氯化鈉)、糖或糖醇(sugar?alcohol)、氨基酸(例如甘氨酸、組氨酸、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸)、糖醇(aldito1)(例如丙三醇(甘油)、1,2-丙烷二醇(丙二醇)、1,3-丙烷二醇、1,3-丁烷二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)及其混合物。可使用任何糖,例如單糖、二糖或多糖或水溶性葡聚糖,包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、支鏈淀粉、糊精、環糊精、α和βHPCD、可溶淀粉、羥乙基淀粉和羧甲基纖維素-Na。糖醇(sugar?alcohol)定義為具有至少一個-OH基團的C4-C8烴,包括例如甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、衛矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。

藥物組合物可包含螯合劑。螯合劑可例如選自乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸和天冬氨酸的鹽及其混合物。

藥物組合物可包含穩定劑。穩定劑可例如為一種或多種氧化抑制劑、聚集抑制劑、表面活性劑和/或一種或多種蛋白酶抑制劑。

術語“聚集物形成”指多肽分子之間導致形成寡聚物的物理相互作用,其可保持可溶性或從溶液沉淀為可見的大聚集物。在液態藥物組合物儲存期間由多肽形成聚集物可有害影響該多肽的生物活性,導致損失藥物組合物的治療功效。此外,聚集物形成可產生其它問題,例如當將含多肽的藥物組合物用輸注系統給予時堵塞管、膜或泵。

藥物組合物可包含足以在組合物儲存期間降低肽的聚集物形成的氨基酸堿的量。術語“氨基酸堿”指一種或多種氨基酸(例如甲硫氨酸、組氨酸、咪唑、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸)或其類似物。任何氨基酸可以以其游離堿形式或以其鹽形式存在。可存在氨基酸堿的任何立體異構體(即L、D或其混合物)。

當肽為包含對下述氧化易感的至少一個甲硫氨酸殘基的多肽時,可加入甲硫氨酸(或其它含硫氨基酸或氨基酸類似物)以抑制甲硫氨酸殘基氧化為亞砜甲硫氨酸。可使用甲硫氨酸的任何立體異構體(L或D)或其組合。

藥物組合物可包含選自高分子量聚合物或低分子化合物的穩定劑。穩定劑可例如選自聚乙二醇(例如PEG3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基-/羥基纖維素或其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、環糊精、含硫物質如一硫代甘油、硫代乙醇酸和2-甲基硫代乙醇和不同的鹽(例如氯化鈉)。

藥物組合物可包含:另外的穩定劑,例如但不限于甲硫氨酸和EDTA,其保護多肽免于甲硫氨酸氧化;和非離子表面活性劑,其保護多肽免于與凍融或機械剪切相關的聚集。

藥物組合物可包含一種或多種表面活性劑,例如一種表面活性劑、至少一種表面活性劑或兩種不同的表面活性劑。術語“表面活性劑”指由水溶性(親水)部分和脂溶性(親脂)部分組成的任何分子或離子。表面活性劑可例如選自陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、非離子表面活性劑和/或兩性離子表面活性劑。

藥物組合物可包含一種或多種蛋白酶抑制劑,例如EDTA(乙二胺四乙酸)和/或芐脒HCl。

藥物組合物的另外的任選成分包括例如:濕潤劑、乳化劑、抗氧化劑、填充劑、金屬離子、油性溶媒、蛋白質(例如人血清白蛋白、明膠)和/或兩性離子(例如氨基酸例如甜菜堿、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、賴氨酸和組氨酸)。

可進一步如促胰島素化合物的口服制劑領域所知配制藥物組合物,例如用WO2008/145728中所述的任何一種或多種配方。

給予的劑量可含有0.01mg-100mg的衍生物,或0.01-50mg或0.01-20mg或0.01mg-10mg的衍生物。

可呈藥物組合物形式給予所述衍生物。可在若干位點將其給予有需要的患者,例如在局部位點,例如皮膚或粘膜位點;在旁路吸收位點,例如在動脈、靜脈或心臟中;和在涉及吸收的位點,例如在皮膚中,在皮下、在肌肉中或在腹部。

給藥途徑可例如為:經舌給藥;舌下給藥;含服給藥;經口給藥;口服給藥;經胃給藥;經腸給藥;經鼻給藥;經肺給藥,例如通過細支氣管、肺泡或其組合;胃腸外給藥、表皮給藥;皮膚給藥;透皮給藥;結膜給藥;輸尿管給藥;陰道給藥;直腸給藥;和/或經眼給藥。在具體實施方案中,給藥途徑為口服。

組合物可以以若干劑型給予,例如作為溶液劑;混懸劑;乳劑;微乳劑;復合型乳劑;泡沫劑;藥膏;糊劑;硬膏劑;軟膏劑;片劑;包衣片劑;口香糖;沖洗劑(rinse);膠囊劑,例如硬或軟明膠膠囊劑;栓劑;直腸膠囊劑;滴劑;凝膠劑;噴霧劑;粉劑;氣霧劑;吸入劑;滴眼液;眼膏劑;眼用沖洗劑(ophthalmic?rinse);陰道栓劑;陰道環;陰道軟膏劑;注射溶液劑;原位轉化溶液劑,例如原位凝膠劑、沉降劑、沉淀劑和原位結晶劑;輸注溶液劑;或作為植入劑。組合物可進一步在藥物載體或藥物遞送系統中配混(compound),例如,以便改進穩定性、生物利用度和/或溶解性。組合物可通過共價、疏水和/或靜電相互作用與所述系統連接。所述配混的目的可為例如降低有害作用、實現時間治療和/或提高患者的依從性。

組合物亦可用于控釋、持續釋放、延長釋放、延遲釋放和/或緩慢釋放藥物遞送系統的制劑中。

胃腸外給藥可通過借助注射器(任選筆式注射器)或借助輸注泵在皮下、肌肉內、腹膜內或靜脈內注射來實施。

組合物可呈溶液劑、混懸劑或粉劑形式經鼻給予;或其可呈液體或粉末噴霧劑形式經肺給予。

透皮給藥是再另一選擇,例如通過無針注射,自貼劑例如離子導入貼劑,或經由透粘膜途徑例如經含服。

組合物可為穩定制劑。術語“穩定制劑”指具有提高的物理和/或化學穩定性(優選二者都提高)的制劑。一般而言,制劑必須在使用和儲存(依從推薦的使用和儲存條件)期間穩定,直到到達其有效期。

術語“物理穩定性”指多肽因暴露于熱-機械應力和/或與去穩定界面及表面(例如疏水表面)相互作用而形成生物學非活性和/或不可溶的聚集物的趨勢。水性多肽制劑的物理穩定性可通過在不同溫度下暴露于機械/物理應力(例如攪拌)達不同時間后,借助目視檢查和/或通過濁度測量來評估。或者,可用多肽構象狀態的光譜試劑或探針例如硫黃素T或“疏水塊(hydrophobic?patch)”探針來評估物理穩定性。

術語“化學穩定性”指導致形成化學降解產物的多肽結構中的化學(尤其是共價)改變,所述降解產物與完整多肽比較可能具有降低的生物學效能和/或增加的免疫原性作用。化學穩定性可通過在暴露于不同的環境條件后于不同時間點(例如通過SEC-HPLC和/或RP-HPLC)測量化學降解產物的量來評估。

用本發明衍生物的治療亦可與一種或多種另外的藥理活性物質聯合,所述藥理活性物質例如選自抗糖尿病劑、抗肥胖劑、食欲調節劑、抗高血壓劑、用于治療和/或預防因糖尿病而產生的并發癥或與糖尿病有關的并發癥的藥劑和用于治療和/或預防因肥胖癥而產生的并發癥和病癥或與肥胖癥有關的并發癥和病癥的藥劑。這些藥理活性物質實例為:胰島素、磺酰脲、雙胍類、氯茴苯酸類、糖苷酶抑制劑、胰高血糖素拮抗劑、DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制劑、參與刺激糖異生和/或糖原分解的肝酶抑制劑、葡萄糖吸收調節劑、改變脂質代謝的化合物,例如降高血脂藥劑如HMG?CoA抑制劑(他汀類)、胃抑制性多肽(GIP類似物)、降低食物攝取的化合物、RXR激動劑和作用于β-細胞的ATP-依賴性鉀通道的藥劑;消膽胺(Cholestyramine)、考來替泊(colestipol)、氯貝丁酯(clofibrate)、吉非貝齊(gemfibrozil)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普羅布考(probucol)、右旋甲狀腺素、那格列奈(neteglinide)、瑞格列奈(repaglinide);β-阻斷劑,例如阿普洛爾(alprenolol)、阿替洛爾(atenolol)、噻嗎洛爾(timolol)、吲哚洛爾(pindolol)、普萘洛爾(propranolol)和美托洛爾(metoprolol);ACE(血管緊張素轉化酶)抑制劑,例如貝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、賴諾普利(lisinopril)、alatriopril、喹那普利(quinapril)和雷米普利(ramipril);鈣通道阻斷劑,例如硝苯地平(nifedipine)、非洛地平(felodipine)、尼卡地平(nicardipine)、伊拉地平(isradipine)、尼莫地平(nimodipine)、地爾硫卓(diltiazem)和維拉帕米(verapamil);和α-阻斷劑,例如多沙唑嗪(doxazosin)、烏拉地爾(urapidil)、哌唑嗪(prazosin)和特拉唑嗪(terazosin);CART(可卡因苯丙胺調節的轉錄物)激動劑、NPY(神經肽Y)拮抗劑、PYY激動劑、Y2受體激動劑、Y4受體激動劑、混合型Y2/Y4受體激動劑、MC4(黑皮質素4)激動劑、阿立新(orexin)拮抗劑、TNF(腫瘤壞死因子)激動劑、CRF(促腎上腺皮質激素釋放因子)激動劑、CRF?BP(促腎上腺皮質激素釋放因子結合蛋白)拮抗劑、尿皮質素(urocortin)激動劑、β3激動劑、泌酸調節肽和類似物、MSH(促黑素細胞激素)激動劑、MCH(黑素細胞濃集激素)拮抗劑、CCK(縮膽囊素)激動劑、血清素再吸收抑制劑、血清素和去甲腎上腺素再吸收抑制劑、混合的血清素和去甲腎上腺素能化合物、5HT(血清素)激動劑、鈴蟾肽激動劑、甘丙肽拮抗劑、生長激素、生長激素釋放化合物、TRH(促甲狀腺激素釋放激素)激動劑、UCP2或3(解偶聯蛋白2或3)調節劑、瘦蛋白激動劑、DA激動劑(溴隱亭(bromocriptin)、doprexin)、脂肪酶/淀粉酶抑制劑、RXR(類視黃醇x受體)調節劑、TRβ激動劑;組胺H3拮抗劑、胃抑制性多肽激動劑或拮抗劑(GIP類似物)、胃泌素和胃泌素類似物。

用本發明衍生物的治療亦可與影響葡萄糖水平和/或脂質穩態的手術聯合,所述手術例如胃囊帶術或胃旁路術。

藥物適應癥

本發明亦涉及用作藥物的本發明衍生物。

在具體實施方案中,本發明衍生物可用于以下醫藥治療,所有醫藥治療都優選以一種方式或另一種方式與糖尿病有關:

(i)預防和/或治療所有形式的糖尿病,例如高血糖癥、2型糖尿病、糖耐量減低、1型糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病、MODY(青春晚期糖尿病)、妊娠期糖尿病和/或用于降低HbA1C;

(ii)延遲或防止糖尿病進展,例如2型糖尿病進展;延遲糖耐量減低(IGT)發展為需要胰島素的2型糖尿病,和/或延遲不需要胰島素的2型糖尿病發展為需要胰島素的2型糖尿病;

(iii)改進β-細胞功能,例如降低β-細胞的細胞凋亡、增加β-細胞功能和/或β-細胞質量和/或用于恢復β-細胞對葡萄糖的敏感性;

(iv)預防和/或治療認知障礙;

(v)預防和/或治療進食障礙,例如肥胖癥,例如通過降低食物攝取、降低體重、抑制食欲、誘導飽滿感;治療或預防暴食癥(binge?eating?disorder)、神經性貪食癥和/或通過給予抗精神病藥物或類固醇誘導的肥胖癥;降低胃能動性;和/或延遲胃排空;

(vi)預防和/或治療糖尿病并發癥,例如包括外周神經病在內的神經病;腎病;或視網膜病;

(vii)改進脂質參數,例如預防和/或治療血脂障礙、降低總血清脂質;降低HDL;降低小、密LDL;降低VLDL:降低甘油三酯;降低膽固醇;增加HDL;降低人載脂蛋白a(Lp(a))的血漿水平;在體外和/或體內抑制脂蛋白a(apo(a))的產生;

(iix)預防和/或治療心血管疾病,例如:綜合征x;動脈粥樣硬化;心肌梗塞;冠心病;中風、腦缺血;早期心臟疾病或早期心血管疾病,例如左心室肥厚;冠狀動脈病;原發性高血壓;急性高血壓急癥;心肌病;心功能不全;運動耐量;慢性心力衰竭;心律失常;心律紊亂;暈厥(syncopy);動脈粥樣硬化;輕度慢性心力衰竭;心絞痛;心臟分流再封堵(cardiac?bypass?reocclusion);間歇性跛行(閉塞性動脈硬化);舒張功能障礙;和/或收縮功能障礙;

(ix)預防和/或治療胃腸疾病,例如炎性腸病綜合征;小腸綜合征或克羅恩病;消化不良;和/或胃潰瘍;

(x)預防和/或治療危重病,例如治療病危患者、重癥多發性腎病(critical?illness?poly-nephropathy,CIPNP)患者和/或潛在的CIPNP患者;預防CIPNP危重病或發展;預防、治療和/或治愈患者的全身炎癥反應綜合征(SIRS);和/或用于預防或降低患者在住院期間患菌血癥、敗血癥和/或感染性休克的可能性;和/或

(xi)預防和/或治療多囊性卵巢綜合征(PCOS)。

在具體實施方案中,適應癥選自:(i)-(iii)和(v)-(iix),例如適應癥(i)、(ii)和/或(iii);或適應癥(v)、適應癥(vi)、適應癥(vii)和/或適應癥(iix)。

在另一具體實施方案中,適應癥為(i)。在又一具體實施方案中,適應癥為(v)。在再一具體實施方案中,適應癥為(iix)。

特別優選以下適應癥:2型糖尿病和/或肥胖癥。

具體實施方案

以下為本發明具體實施方案:

1.GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,

所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變,

所述衍生物包含兩個分別與所述第一和第二K殘基連接的白蛋白結合部分,其中

所述白蛋白結合部分包含延長部分,其選自Chem.1、Chem.2和Chem.3:

Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*

Chem.2:HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*

Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-*,

其中x為6-18范圍內的整數,y為3-17范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團;

條件是,當延長部分為Chem.1時,白蛋白結合部分進一步包含式Chem.4的接頭:

Chem4:

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

2.GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,

所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變,

所述衍生物包含兩個分別與所述第一和第二K殘基連接的白蛋白結合部分,其中

所述白蛋白結合部分包含延長部分,其中

所述延長部分為Chem.2:

Chem.2:HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*

其中y為3-17范圍內的整數。

3.GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,

所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變,

所述衍生物包含兩個分別與所述第一和第二K殘基連接的白蛋白結合部分,其中

所述白蛋白結合部分包含延長部分,其中

所述延長部分為Chem.3:

Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-*,

其中z為1-5范圍內的整數,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團。

4.實施方案2-3中任一項的衍生物,其中所述白蛋白結合部分進一步包含接頭。

5.實施方案4的衍生物,其中所述接頭包含i)Glu二-基團;和/或ii)式Chem.4的接頭:

Chem4:

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

6.實施方案5的衍生物,其中所述Glu二-基團選自Chem.5a和/或Chem.5b:

Chem.5a:

Chem.5b:

優選Chem.5a。

7.GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,

所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變,

所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的白蛋白結合部分,其中所述白蛋白結合部分包含

i)式Chem.1的延長部分:

Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*

其中x為6-18范圍內的整數;和

ii)包含Chem.4的接頭:

Chem.4

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

8.GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,

所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸改變,

所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中

所述延長部分選自Chem.1、Chem.2和Chem.3:

Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-*

Chem.2:HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*

Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-*,

其中x為6-18范圍內的整數,y為3-17范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團;和

所述接頭包含

Chem.4:

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

9.實施方案1-8中任一項的衍生物,其中Chem.4為第一接頭元件。

10.實施方案9的衍生物,其中k為1。

11.實施方案9-10中任一項的衍生物,其中n為1。

12.實施方案9-11中任一項的衍生物,其中Chem.4被包括m次,其中m為1-10范圍內的整數。

13.實施方案12的衍生物,其中m為1-6范圍內的整數。

14.實施方案12-13中任一項的衍生物,其中m為1、2、4或6。

15.實施方案12-14中任一項的衍生物,其中m為1。

16.實施方案12-14中任一項的衍生物,其中m為2。

17.實施方案12-14中任一項的衍生物,其中m為4。

18.實施方案12-14中任一項的衍生物,其中m為6。

19.實施方案12-14和16-18中任一項的衍生物,其中,當m不同于1時,Chem.4元件經由酰胺鍵互相連接。

20.實施方案8-19中任一項的衍生物,其中所述接頭包含第二任選的接頭元件。

21.實施方案20的衍生物,其中所述第二接頭元件選自Chem.5a和Chem.5b:

Chem.5a:

22.實施方案20-21中任一項的衍生物,其中所述第二接頭元件為Chem.5a。

23.實施方案22的衍生物,其中Chem.5a被包括p次,其中p為0或1-3范圍內的整數。

24.實施方案23的衍生物,其中p為0。

25.實施方案23的衍生物,其中p為1。

26.實施方案23的衍生物,其中p為2。

27.實施方案23的衍生物,其中p為3。

28.實施方案21-27中任一項的衍生物,其中Chem.5a為L-Glu或D-Glu的二-基團。

29.實施方案28的衍生物,其中Chem.5a為L-Glu的二-基團。

30.實施方案23-29中任一項的衍生物,其中,當p不同于0并且不同于1時,Chem.5a元件經由酰胺鍵互相連接。

31.實施方案23-30中任一項的衍生物,其中所述接頭包含第三任選的接頭元件。

32.實施方案31的衍生物,其中所述第三接頭元件為

Chem.6:*-NH-(CH2)q-CHR3-CO-*,

其中q為2-12范圍內的整數,和R3為氫(H)。

33.實施方案32的衍生物,其中q為4。

34.實施方案32的衍生物,其中q為6。

35.實施方案32的衍生物,其中q為10。

36.實施方案32-35中任一項的衍生物,其中R3為氫(H)。

37.實施方案32-36中任一項的衍生物,其中Chem.6為氨基己酸、氨基辛酸或氨基十二烷酸的二-基團。

38.實施方案23-30中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(m次)和Chem.5a(p次)組成。

39.實施方案38的衍生物,其中(m,p)為(2,0);(2,2);(2,1);(2,3);(4,0);(4,1);(6,1);(1,1);或(1,2)。

40.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(2,0)。

41.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(2,2)。

42.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(2,1)。

43.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(2,3)。

44.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(4,0)。

45.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(4,1)。

46.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(6,1)。

47.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(1,1)。

48.實施方案38-39中任一項的衍生物,其中(m,p)為(1,2)。

49.實施方案38-39-48中任一項的衍生物,其中所述m個Chem.4元件和p個Chem.5a元件經由酰胺鍵互相連接。

50.實施方案32-37中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(m次)、Chem.5a(p次)和Chem.6組成。

51.實施方案50的衍生物,其中所述m個Chem.4元件、p個Chem.5a元件和Chem.6元件經由酰胺鍵互相連接。

52.實施方案1、4-7和8-51中任一項的衍生物,其中所述接頭和延長部分經由酰胺鍵互相連接。

53.實施方案1、4-7和8-52中任一項的衍生物,其中所述接頭和GLP-1類似物經由酰胺鍵互相連接。

54.實施方案1、4-7和8-53中任一項的衍生物,其中所述接頭與第一或第二K殘基的ε-氨基連接。

55.實施方案1、4-7和8-54中任一項的衍生物,其中所述接頭具有6-41個C-原子。

56.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有11個C-原子。

57.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有12個C-原子。

58.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有16個C-原子。

59.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有17個C-原子。

60.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有22個C-原子。

61.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有24個C-原子。

62.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有27個C-原子。

63.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有28個C-原子。

64.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有29個C-原子。

65.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有30個C-原子。

66.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有34個C-原子。

67.實施方案1、4-7和8-55中任一項的衍生物,其中所述接頭具有41個C-原子。

68.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有4-28個雜原子;優選8-28個雜原子;例如8、11、12、16、17、18、20或28個雜原子。

69.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有8個雜原子。

70.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有11個雜原子。

71.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有12個雜原子。

72.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有16個雜原子。

73.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有17個雜原子。

74.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有18個雜原子。

75.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有20個雜原子。

76.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述接頭具有28個雜原子。

77.實施方案1、4-7和8-67中任一項的衍生物,其中所述雜原子為N-原子和/或O-原子。

78.實施方案1、4-7和8-77中任一項的衍生物,其中所述接頭具有1-7個N-原子。

79.實施方案1、4-7和8-78中任一項的衍生物,其中所述接頭具有2、3、4、5或7個N-原子。

80.實施方案1、4-7和8-78中任一項的衍生物,其中所述接頭具有2個N-原子。

81.實施方案1、4-7和8-78中任一項的衍生物,其中所述接頭具有3個N-原子。

82.實施方案1、4-7和8-78中任一項的衍生物,其中所述接頭具有4個N-原子。

83.實施方案1、4-7和8-78中任一項的衍生物,其中所述接頭具有5個N-原子。

84.實施方案1、4-7和8-78中任一項的衍生物,其中所述接頭具有7個N-原子。

85.實施方案1、4-7和8-84中任一項的衍生物,其中所述接頭具有3-21個O-原子;優選6-21個O-原子;例如6、7、9、12、13、15或21個O-原子。

86.實施方案1、4-7和8-85中任一項的衍生物,其中所述接頭具有6個O-原子。

87.實施方案1、4-7和8-85中任一項的衍生物,其中所述接頭具有7個O-原子。

88.實施方案1、4-7和8-85中任一項的衍生物,其中所述接頭具有9個O-原子。

89.實施方案1、4-7和8-85中任一項的衍生物,其中所述接頭具有12個O-原子。

90.實施方案1、4-7和8-85中任一項的衍生物,其中所述接頭具有13個O-原子。

91.實施方案1、4-7和8-85中任一項的衍生物,其中所述接頭具有15個O-原子。

92.實施方案1、4-7和8-85中任一項的衍生物,其中所述接頭具有21個O-原子。

93.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-24、39-41、50、53-56、58、68-69、77-80和85-86中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

94.實施方案1、4-7、8-14、17、20-24、38-39、44、49、52-55、61、68、73、77-79、83、85和89中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(四次)組成,經由酰胺鍵互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

95.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、26、28-30、38-39、41、49、52-55、60、68、72、77-79、82和89中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(兩次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

96.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、25、28-30、38-39、48、49、52-55、59、68、71、77-79、81、85和88中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(兩次)和Chem.5a(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

97.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、27、28-30、38-39、43、49、52-55、62、68、75、77-79、83、85和91中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(三次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

98.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、25、28-30、38-39、42、49、52-55、59、68、71、77-79、81、85和88中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

99.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、26、28-30、38-39、41、49、52-55、60、68、72、77-79、82、85和89中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)、Chem.4(兩次)和Chem.5a(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

100.實施方案1、4-7、8-14、17、19、20-23、25、38-39、45、49、52-55、64、68、75、77-79、83、85和91中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)和Chem.4(四次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

101.實施方案1、4-7、8-14、18-19、20-23、25、28-29、38-39、46、49、52-55、67、68、76、77-79、84、85和92中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)和Chem.4(六次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

102.實施方案1、4-7、8-15、20-23、25、28-29、38-39、47、49、52-55、57、68-69、77-80和85-86中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)和Chem.4(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

103.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、25、28-29、38-39、42、49、52-55、59、68、71、77-79、81、85和88中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(一次)、Chem.5a(一次)和Chem.4(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

104.實施方案1、4-7、8-15、20-23、26、28-30、38-39、41、49、52-55、58、68、71、77-79、81、85和88中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)、Chem.4(一次)和Chem.5a(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

105.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、26、28-32、35-36、37、50-55、66、68、74、77-79、83、85和90中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)、Chem.6(一次)(其中q為10并且R3為H)、Chem.5a(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

106.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、26、28-33、36、37、50-55、63、68、74、77-79、83、85和90中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)、Chem.6(一次)(其中q為4并且R3為H)、Chem.5a(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

107.實施方案1、4-7、8-14、16、19、20-23、26、28-32、34、36、37、50-55、65、68、74、77-79、83、85和90中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5a(一次)、Chem.6(一次)(其中q為6并且R3為H)、Chem.5a(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其*-NH端與延長部分的*-CO端連接,在其*-CO端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

108.實施方案1、7和8-107中任一項的衍生物,其中所述延長部分為Chem.1。

109.實施方案108的衍生物,其中x為偶數。

110.實施方案108-109中任一項的衍生物,其中x為10-16范圍內的整數。

111.實施方案108-110中任一項的衍生物,其中x為10。

112.實施方案108-110中任一項的衍生物,其中x為12。

113.實施方案108-110中任一項的衍生物,其中x為14。

114.實施方案108-110中任一項的衍生物,其中x為16。

115.實施方案1-107中任一項的衍生物,其中所述延長部分為Chem.2。

116.實施方案115的衍生物,其中y為奇數。

117.實施方案115-116中任一項的衍生物,其中y為7-11范圍內的整數。

118.實施方案115-118中任一項的衍生物,其中y為7-9范圍內的整數。

119.實施方案115-118中任一項的衍生物,其中y為7。

120.實施方案115-118中任一項的衍生物,其中y為8。

121.實施方案115-118中任一項的衍生物,其中y為9。

122.實施方案1-107中任一項的衍生物,其中所述延長部分為Chem.3。

123.實施方案122的衍生物,其中z為奇數。

124.實施方案122-123中任一項的衍生物,其中z為1。

125.實施方案122-123中任一項的衍生物,其中z為3。

126.實施方案122-123中任一項的衍生物,其中z為5。

127.實施方案122-126中任一項的衍生物,其中*-(CH2)z-*指線性亞烷基。

128.實施方案122-126中任一項的衍生物,其中*-(CH2)z-*指環狀亞烷基。

129.實施方案122-128中任一項的衍生物,其中R2為摩爾質量不高于127Da的基團。

130.實施方案122-129中任一項的衍生物,其中R2為摩爾質量在1-127Da(均包括)范圍內的基團。

131.實施方案122-130中任一項的衍生物,其中R2為摩爾質量在1-111Da(均包括)范圍內的基團。

132.實施方案122-130中任一項的衍生物,其中R2為摩爾質量在1-69Da(均包括)范圍內的基團。

133.實施方案122-130中任一項的衍生物,其中R2為摩爾質量在1-46Da(均包括)范圍內的基團。

134.實施方案122-130中任一項的衍生物,其中R2為摩爾質量在1-35Da(均包括)范圍內的基團。

135.實施方案122-134中任一項的衍生物,其中R2為*-H。

136.實施方案122-133中任一項的衍生物,其中R2為*-NO2。

137.實施方案122-132中任一項的衍生物,其中R2包含鹵素原子。

138.實施方案122-132和137中任一項的衍生物,其中R2為*CF3。

139.實施方案122-131和137中任一項的衍生物,其中R2為*-O-(C6H4)-F。

140.實施方案122-131、137和139中任一項的衍生物,其中R2為4-氟苯氧基。

141.實施方案122-134和137中任一項的衍生物,其中R2為鹵素基團。

142.實施方案122-130、137和141中任一項的衍生物,其中R2為*-I。

143.實施方案122-134、137和141中任一項的衍生物,其中R2為*-Cl。

144.實施方案1、7和8-114中任一項的衍生物,其中Chem.1由Chem.1a表示:

Chem.1a:

145.實施方案1-107和115-121的衍生物,其中Chem.2由Chem.2a表示:

Chem.2a:

146.實施方案1-107和122-143中任一項的衍生物,其中Chem.3由Chem.3a表示:

Chem.3a:

147.實施方案1-146中任一項的衍生物,其中所述兩個延長部分基本相同。

148.實施方案1-147中任一項的衍生物,其中所述兩個延長部分具有至少0.5的類似性;優選至少0.6;更優選至少0.7或至少0.8;甚至更優選至少0.9;或最優選至少0.99,例如1.0的類似性。

149.實施方案1-148中任一項的衍生物,其中所述兩個接頭基本相同。

150.實施方案1-149中任一項的衍生物,其中所述兩個接頭具有至少0.5的類似性;優選至少0.6;更優選至少0.7或至少0.8;甚至更優選至少0.9;或最優選至少0.99,例如1.0的類似性。

151.實施方案1-150中任一項的衍生物,其中由延長部分和接頭組成的兩個側鏈基本相同。

152.實施方案1-151中任一項的衍生物,其中由延長部分和接頭組成的兩個側鏈具有至少0.5的類似性;優選至少0.6;更優選至少0.7或至少0.8;甚至更優選至少0.9;或最優選至少0.99,例如1.0的類似性。

153.實施方案147-152中任一項的衍生物,其中待比較的兩種化學結構用指紋表示,例如a)ECFP_6指紋;b)UNITY指紋;和/或c)MDL指紋;和其中對于a)、b)和c)中的每一種,Tanimoto系數優選用于計算兩種指紋的類似性。

154.實施方案1-153中任一項的衍生物,其中所述第一K殘基被命名為K18。

155.實施方案1-154中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基在對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的T位的位置。

156.實施方案1-155中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基被命名為KT。

157.實施方案155-156中任一項的衍生物,其中T為選自7-17范圍或19-37范圍的整數。

158.實施方案155-157中任一項的衍生物,其中T為選自12-17范圍的整數。

159.實施方案155-157中任一項的衍生物,其中T選自19-37的范圍。

160.實施方案155-157和159中任一項的衍生物,其中T選自22、26、27、30、31、34和37。

161.實施方案155-157和159-160中任一項的衍生物,其中T=22。

162.實施方案155-157和159-160中任一項的衍生物,其中T=26。

163.實施方案155-157和159-160中任一項的衍生物,其中T=27。

164.實施方案155-157和159-160中任一項的衍生物,其中T=30。

165.實施方案155-157和159-160中任一項的衍生物,其中T=31。

166.實施方案155-157和159-160中任一項的衍生物,其中T=34。

167.實施方案155-157和159-160中任一項的衍生物,其中T=37。

168.實施方案1-167中任一項的衍生物,其中通過手寫和目測確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位的位置。

169.實施方案155-168中任一項的衍生物,其中通過手寫和目測確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的T位的位置。

170.實施方案1-169中任一項的衍生物,其中通過手寫和目測確定與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較的氨基酸改變的數量。

171.實施方案1-170中任一項的衍生物,其中通過使用標準蛋白質或肽比對程序確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位的位置。

172.實施方案155-171中任一項的衍生物,其中通過使用標準蛋白質或肽比對程序確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的T位的位置。

173.實施方案1-172中任一項的衍生物,其中通過使用標準蛋白質或肽比對程序確定與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較的氨基酸改變的數量。

174.實施方案171-173中任一項的衍生物,其中所述比對程序為Needleman-Wunsch比對。

175.實施方案171-174中任一項的衍生物,其中使用默認記分矩陣和默認單位矩陣。

176.實施方案171-174中任一項的衍生物,其中所述記分矩陣為BTOSUM62。

177.實施方案171-174中任一項的衍生物,其中空隙中第一個殘基的罰分為-10(負十)。

178.實施方案171-174中任一項的衍生物,其中空隙中另外的殘基的罰分為-0.5(負零點五)。

179.實施方案1-178中任一項的衍生物,其中所述類似物不含除第一和第二K殘基以外的K殘基。

180.實施方案1-179中任一項的衍生物,其中所述最多12個氨基酸改變在對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的以下位置的一個或多個位置:7、8、12、18、22、23、25、26、27、30、31、34、35、36和37。

181.實施方案1-179中任一項的衍生物,其中所述最多12個氨基酸改變在對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的以下位置的一個或多個位置:7、8、18、22、23、25、26、27、30、31、34、35、36和37。

182.實施方案1-181中任一項的衍生物,其中所述類似物包含K18。

183.實施方案1-180和182中任一項的衍生物,其中所述類似物包含以下改變中的至少一個:Imp7,Aib8或S8,L12,K22或E22,R23或E23,V25,R26或H26或V26,K27或L27或H27,K30或E30,K31或H31,G34或R34或Q34或Des34或H34,Des35,Des36,K37或Des37。

184.實施方案1-183中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K22,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含i)選自Des34、G34、R34和Q34的改變,和ii)選自R26、H26和V26的改變。

185.實施方案1-184中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K22,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含Q34和R26改變。

186.實施方案1-183中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K26,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含選自G34、R34、H34和Q34的改變。

187.實施方案1-183和186中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K26,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34改變。

188.實施方案1-183和186中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K26,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含Q3改變4。

189.實施方案1-183和186中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K26,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含H34改變。

190.實施方案1-183中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含i)選自Des34、G34、R34和Q34的改變,和ii)選自R26、H26和V26的改變。

191.實施方案1-183和190中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含Q34和R26改變。

192.實施方案1-183和190中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和R26改變。

193.實施方案1-183和190中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含G34和R26改變。

194.實施方案1-183和190中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含Q34和H26改變。

195.實施方案1-183和190中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和H26改變。

196.實施方案1-183和190中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和V26改變。

197.實施方案1-183中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K30,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含i)選自Des34、G34、R34和Q34的改變,和ii)選自R26、H26和V26的改變。

198.實施方案1-183和197中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K30,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和R26改變。

199.實施方案1-183和197中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K30,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含G34和R26改變。

200.實施方案1-183和197中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K30,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和H26改變。

201.實施方案1-183中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含i)選自Des34、G34、R34和Q34的改變,和ii)選自R26、H26和V26的改變。

202.實施方案1-183和201中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含Des34和R26改變。

203.實施方案1-183和201中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含Q34和R26改變。

204.實施方案1-183和201中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和R26改變。

205.實施方案1-183和201中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含G34和R26改變。

206.實施方案1-183和201中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和H26改變。

207.實施方案1-183和201中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含G34和H26改變。

208.實施方案1-183中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K34,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含選自R26、H26和V26的改變。

209.實施方案1-183和208中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K34,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R26改變。

210.實施方案1-183中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K37,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含i)選自Des34、G34、R34和Q34的改變,和ii)選自R26、H26和V26的改變。

211.實施方案1-183和210中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K37,并且其中除K18改變以外,所述類似物還包含R34和R26改變。

212.實施方案1-211中任一項的衍生物,其中所述類似物包含以下改變中的至少一個:Imp7,Aib8或S8,L12,E22,R23或E23,V25,L27或H27,E30,H31,Des34,Des35,Des36或Des37。

213.實施方案1-212中任一項的衍生物,其中所述類似物包含以下改變中的至少一個:Imp7,Aib8,E22,R23或E23,V25,L27或H27,E30,H31,Des34,Des35,Des36或Des37。

214.實施方案183-213中任一項的衍生物,其中如果在對應于34位位置的氨基酸殘基缺失(Des34),則在對應于35-37位位置的氨基酸殘基也缺失(Des35,Des36和Des37)。

215.實施方案183-213中任一項的衍生物,其中如果在對應于35位位置的氨基酸殘基缺失(Des35),則在對應于36-37位位置的氨基酸殘基也缺失(Des36和Des37)。

216.實施方案183-213中任一項的衍生物,其中如果在對應于36位位置的氨基酸殘基缺失(Des36),則在對應于37位位置的氨基酸殘基也缺失(Des37)。

217.實施方案1-216中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Imp7。

218.實施方案1-217中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Aib8。

219.實施方案1-212和214-218中任一項的衍生物,其中所述類似物包含S8。

220.實施方案1-212和214-219中任一項的衍生物,其中所述類似物包含L12。

221.實施方案1-183中和187-220中任一項的衍生物,其中所述類似物包含E22。

222.實施方案1-221中任一項的衍生物,其中所述類似物包含R23。

223.實施方案1-221中任一項的衍生物,其中所述類似物包含E23。

224.實施方案1-223中任一項的衍生物,其中所述類似物包含V25。

225.實施方案1-188和197-224中任一項的衍生物,其中所述類似物包含L27。

226.實施方案1-188和197-224中任一項的衍生物,其中所述類似物包含H27。

227.實施方案1-196和201-226中任一項的衍生物,其中所述類似物包含E30。

228.實施方案1-200和208-227中任一項的衍生物,其中所述類似物包含H31。

229.實施方案1-228中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Imp7和/或(Aib8或S8)。

230.實施方案1-229中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Imp7和/或Aib8。

231.實施方案1-186、189-191、194、197、201、203、210和217-230中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Q34。

232.實施方案1-184、186-187、190、192、195-198、200-201、204、206、210-211和217-230中任一項的衍生物,其中所述類似物包含R34。

233.實施方案1-184、186、190、193、197、199、201、205、207、210和217-230中任一項的衍生物,其中所述類似物包含G34。

234.實施方案1-184、186、190、193、197、199、201、205、207、210和217-230中任一項的衍生物,其中所述類似物包含H34。

235.實施方案1-185、190-193、197-199、201-205、208-234中任一項的衍生物,其中所述類似物包含R26。

236.實施方案1-184、190、194-195、197、200、201、206-208、210和212-233中任一項的衍生物,其中所述類似物包含H26。

237.實施方案1-184、190、196-197、201、208、210和212-233中任一項的衍生物,其中所述類似物包含V26。

238.實施方案1-209和212-237中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37。

239.實施方案1-208和212-238中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37和Des36。

240.實施方案1-208和212-239中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37、Des36和Des35。

241.實施方案1-184、190、197、201-202、210和212-240中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37、Des36、Des35和Des34。

242.實施方案1-241中任一項的衍生物,其中,為了確定在類似物中的改變,將類似物的氨基酸序列與天然GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的氨基酸序列比較。

243.實施方案1-242中任一項的衍生物,其中,為了確定在對應于天然GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的特定位置的類似物中的位置,將類似物的氨基酸序列與天然GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的氨基酸序列比較。

244.實施方案1-243中任一項的衍生物,其中通過手寫和目測進行類似物的氨基酸序列與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的氨基酸序列的所述比較。

245.實施方案1-244中任一項的衍生物,其中通過使用標準蛋白質或肽比對程序進行類似物的氨基酸序列與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的氨基酸序列的所述比較。

246.實施方案245的衍生物,其中所述比對程序為Needleman-Wunsch比對。

247.實施方案245-246中任一項的衍生物,其中使用默認記分矩陣和默認單位矩陣。

248.實施方案245-246中任一項的衍生物,其中所述記分矩陣為BLOSUM62。

249.實施方案245-248中任一項的衍生物,其中空隙中第一個殘基的罰分為-10(負十)。

250.實施方案245-249中任一項的衍生物,其中空隙中另外的殘基的罰分為-0.5(負零點五)。

251.實施方案1-250中任一項的衍生物,其中通過手寫和目測確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的任何指定位置的位置。

252.實施方案1-251中任一項的衍生物,其中如對實施方案171-172和174-178中任一項的18位和T位所述,確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的任何指定位置的位置。

253.實施方案1-184、190、197、20-202、210和212-252中任一項的衍生物,其為GLP-1(7-33)(SEQ?ID?NO:1的氨基酸1-27)的衍生物。

254.實施方案1-252中任一項的衍生物,其為GLP-1(7-34)(SEQ?ID?NO:1的氨基酸1-28)的衍生物。

255.實施方案1-252中任一項的衍生物,其為GLP-1(7-35)(SEQ?ID?NO:1的氨基酸1-29)的衍生物。

256.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多11個氨基酸改變,優選最多10個氨基酸改變。

257.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多9個氨基酸改變。

258.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多8個氨基酸改變。

259.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多7個氨基酸改變。

260.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多6個氨基酸改變。

261.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多5個氨基酸改變。

262.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多4個氨基酸改變。

263.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多3個氨基酸改變。

264.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多2個氨基酸改變。

265.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少1個氨基酸修飾。

266.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少2個氨基酸改變。

267.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少3個氨基酸改變。

268.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少4個氨基酸改變。

269.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少5個氨基酸改變。

270.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少6個氨基酸改變。

271.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少7個氨基酸改變。

272.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少8個氨基酸改變。

273.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少9個氨基酸改變。

274.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少10個氨基酸改變。

275.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少11個氨基酸改變。

276.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有1個氨基酸改變。

277.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有2個氨基酸改變。

278.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有3個氨基酸改變。

279.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有4個氨基酸改變。

280.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有5個氨基酸改變。

281.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有6個氨基酸改變。

282.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有7個氨基酸改變。

283.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有8個氨基酸改變。

284.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有9個氨基酸改變。

285.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有10個氨基酸改變。

286.實施方案1-255中任一項的衍生物,其中所述類似物具有11個氨基酸改變。

287.實施方案1-286中任一項的衍生物,其中所述改變獨立為取代、添加和/或缺失。

288.實施方案1-287中任一項的衍生物,其中所述改變獨立為取代和/或缺失。

289.實施方案1-288中任一項的衍生物,其中所述改變為取代。

290.實施方案1-287中任一項的衍生物,其中所述改變為缺失。

291.實施方案1-286中任一項的衍生物,其中所述類似物a)包含式I的GLP-1類似物;和/或b)為式I的GLP-1類似物:

式I:

Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Lys-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,其中

Xaa7為L-組氨酸、咪唑丙酰基、α-羥基-組氨酸、D-組氨酸、脫氨基-組氨酸、2-氨基-組氨酸、β-羥基-組氨酸、高組氨酸,Nα-乙酰基-組氨酸、Nα-甲酰基-組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸;

Xaa8為Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Thr、Ser、Lys、Aib、(1-氨基環丙基)羧酸、(1-氨基環丁基)羧酸、(1-氨基環戊基)羧酸、(1-氨基環己基)羧酸、(1-氨基環庚基)羧酸或(1-氨基環辛基)羧酸;

Xaa12-為Phe或Leu;

Xaa16為Val或Leu;

Xaa19為Tyr或Gln;

Xaa20為Leu或Met;

Xaa22為Gly、Glu、Lys或Aib;

Xaa23為Gln、Glu或Arg;

Xaa25為Ala或Val;

Xaa26為Val、His、Lys或Arg;

Xaa27為Glu、His、Leu或Lys;

Xaa30為Ala、Glu、Lys或Arg;

Xaa31為Trp、Lys或His;

Xaa33為Val或Lys;

Xaa34為Lys、Glu、Asn、Gly、Gln、Arg、His或不存在;

Xaa35為Gly、Aib或不存在;

Xaa36為Arg、Gly、Lys或不存在;

Xaa37為Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、Arg或不存在;和

Xaa38為Ser、Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、Arg或不存在。

292.實施方案291的衍生物,其中式I的肽為GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的類似物。

293.實施方案291-292中任一項的衍生物,其中如果Xaa37不存在,則Xaa38也不存在。

294.實施方案291-293中任一項的衍生物,其中如果Xaa36不存在,則Xaa37和Xaa38也不存在。

295.實施方案291-294中任一項的衍生物,其中如果Xaa35不存在,則Xaa36、Xaa37和Xaa38也不存在。

296.實施方案291-295中任一項的衍生物,其中如果Xaa34不存在,則Xaa35、Xaa36、Xaa37和Xaa38也不存在。

297.實施方案291-296中任一項的衍生物,其中Xaa7為His或脫氨基-組氨酸(咪唑丙酰基);Xaa8為Ala、Ser或Aib;Xaa12-為Phe或Leu;Xaa16為Val;Xaa19為Tyr;Xaa20為Leu;Xaa22為Gly、Glu或Lys;Xaa23為Gln、Glu或Arg;Xaa25為Ala或Val;Xaa26為Val、His、Lys或Arg;Xaa27為Glu、His、Leu或Lys;Xaa30為Ala、Glu或Lys;Xaa31為Trp、Lys或His;Xaa33為Val;Xaa34為Lys、Gly、Gln、Arg、His或不存在;Xaa35為Gly或不存在;Xaa36為Arg或不存在;Xaa37為Gly、Lys或不存在;和Xaa38不存在。

298.實施方案291-297中任一項的衍生物,其中Xaa7為His或脫氨基-組氨酸;Xaa8為Ala或Aib;Xaa12-為Phe;Xaa16為Val;Xaa19為Tyr;Xaa20為Leu;Xaa22為Gly、Glu或Lys;Xaa23為Gln、Glu或Arg;Xaa25為Ala或Val;Xaa26為Val、His、Lys或Arg;Xaa27為Glu、His、Leu或Lys;Xaa30為Ala、Glu或Lys;Xaa31為Trp、Lys或His;Xaa33為Val;Xaa34為Lys、Gly、Gln、Arg、His或不存在;Xaa35為Gly或不存在;Xaa36為Arg或不存在;Xaa37為Gly、Lys或不存在;和Xaa38不存在。

299.實施方案291-298中任一項的衍生物,其中Xaa7為His。

300.實施方案291-298中任一項的衍生物,其中Xaa7為脫氨基-組氨酸(咪唑丙酰基)。

301.實施方案291-300中任一項的衍生物,其中Xaa8為Ala。

302.實施方案291-300中任一項的衍生物,其中Xaa8為Ser。

303.實施方案291-300中任一項的衍生物,其中Xaa8為Aib。

304.實施方案291-303中任一項的衍生物,其中Xaa12為Phe。

305.實施方案291-303中任一項的衍生物,其中Xaa12為Leu。

306.實施方案291-305中任一項的衍生物,其中Xaa16為Val。

307.實施方案291-306中任一項的衍生物,其中Xaa19為Tyr。

308.實施方案291-307中任一項的衍生物,其中Xaa20為Leu。

309.實施方案291-308中任一項的衍生物,其中Xaa22為Gly。

310.實施方案291-308中任一項的衍生物,其中Xaa22為Glu。

311.實施方案291-308中任一項的衍生物,其中Xaa22為Lys。

312.實施方案291-311中任一項的衍生物,其中Xaa23為Gln。

313.實施方案291-311中任一項的衍生物,其中Xaa23為Glu。

314.實施方案291-311中任一項的衍生物,其中Xaa23為Arg。

315.實施方案291-314中任一項的衍生物,其中Xaa25為Ala。

316.實施方案291-314中任一項的衍生物,其中Xaa25為Val。

317.實施方案291-316中任一項的衍生物,其中Xaa26為His。

318.實施方案291-316中任一項的衍生物,其中Xaa26為Lys。

319.實施方案291-316中任一項的衍生物,其中Xaa26為Arg。

320.實施方案291-319中任一項的衍生物,其中Xaa27為Glu。

321.實施方案291-319中任一項的衍生物,其中Xaa27為His。

322.實施方案291-319中任一項的衍生物,其中Xaa27為Leu。

323.實施方案291-319中任一項的衍生物,其中Xaa27為Lys。

324.實施方案291-323中任一項的衍生物,其中Xaa30為Ala。

325.實施方案291-323中任一項的衍生物,其中Xaa30為Glu。

326.實施方案291-323中任一項的衍生物,其中Xaa30為Lys。

327.實施方案291-326中任一項的衍生物,其中Xaa31為Trp。

328.實施方案291-326中任一項的衍生物,其中Xaa31為Lys。

329.實施方案291-326中任一項的衍生物,其中Xaa31為His。

330.實施方案291-329中任一項的衍生物,其中Xaa33為Val。

331.實施方案291-330中任一項的衍生物,其中Xaa34為Lys。

332.實施方案291-330中任一項的衍生物,其中Xaa34為Gly。

333.實施方案291-330中任一項的衍生物,其中Xaa34為Gln。

334.實施方案291-330中任一項的衍生物,其中Xaa34為Arg。

335.實施方案291-330中任一項的衍生物,其中Xaa34為His。

336.實施方案291-330中任一項的衍生物,其中Xaa34不存在。

337.實施方案291-336中任一項的衍生物,其中Xaa35為Gly。

338.實施方案291-336中任一項的衍生物,其中Xaa35不存在。

339.實施方案291-338中任一項的衍生物,其中Xaa36為Arg。

340.實施方案291-338中任一項的衍生物,其中Xaa36不存在。

341.實施方案291-340中任一項的衍生物,其中Xaa37為Gly。

342.實施方案291-340中任一項的衍生物,其中Xaa37為Lys。

343.實施方案291-340中任一項的衍生物,其中Xaa37不存在。

344.實施方案291-343中任一項的衍生物,其中Xaa38不存在。

345.實施方案1-183、242-252和291-298中任一項的衍生物,其中與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較,所述類似物包含以下氨基酸改變:

(i)8Aib,18K,34R;(ii)8Aib,18K,34Q;(iii)8Aib,18K,22E,34R;(iv)8Aib,18K,22E,34Q;(v)8Aib,12L,18K,34Q;(vi)7Imp,18K,22E,34Q;(vii)18K,34R;(iix)18K,34Q;(ix)18K,22E,34R;(x)18K,22E,34Q;(xi)18K,26R,31K,34R;(xii)18K,26H,31K,34R;(xiii)18K,26H,27K,34Q;(xiv)18K,22K,26R,34Q;(xv)18K,25V,26R,31K,34R;(xvi)18K,22E,26R,31K,34R;(xvii)18K,22E,26H,27K,34R;(iixx)18K,22E,26H,27K,34Q;(ixx)18K,22E,26H,27K,31H,34R;(xx)18K,22E,26H,27K,31H,34Q;(xxi)18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxii)18K,22E,25V,26R,31K,34Q;(xxiii)18K,22E,25V,26R,31K,34G;(xxiv)18K,22E,25V,26R,27K,34R;(xxv)18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(xxvi)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34R;(xxvii)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34Q;(iixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34R;(ixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34Q;(xxx)18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxi)18K,22E,25V,26R,31H,des35-37;(xxxii)18K,22E,25V,26R,30K,34G,des35-37;(xxxiii)18K,22E,25V,26R,30K,31H,34G,des35-37;(xxxiv)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37);(xxxv)18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(xxxvi)18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(xxxvii)7Imp,18K,22E,26R,34R,37K;(iixxxx)7Imp,18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxx)7Imp,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxx)7Imp,8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxi)8S,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxii)8Aib,18K,26V,27K,34R;(xxxxiii)8Aib,18K,26H,30K,34R,des36-37;(xxxxiv)8Aib,18K,25V,26R,31K,34R;(xxxxv)8Aib,18K,22E,34R,des36-37;(xxxxvi)8Aib,18K,22E,26R,34R,37K;(xxxxvii)8Aib,18K,22E,26R,31K,34R;(iixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(ixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R,des36-37;(xxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R;(xxxxxi)8Aib,18K,22E,26R,27K,31H,34R,des36-37;(xxxxxii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,des34-37;(xxxxxiii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxxxxiv)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxv)8Aib,18K,22E,25V,26R,30E,31K,34G,des35-37;(xxxxxvi)8Aib,18K,22E,25V,26R,27L,des35-37;(xxxxxvii)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(iixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27H,31K,34G,des35-37;(xxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26H,31K,34G,des35-37;(xxxxxxi)8Aib,18K,22E,23R,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxxii)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37;(xxxxxxiii)7Imp,18K,22E,26R,27K,34Q或(xxxxxxiv)8Aib,18K,34H。

346.實施方案1-183、242-252和291-298中任一項的衍生物,其中與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較,所述類似物具有以下氨基酸改變:

(i)8Aib,18K,34R;(ii)8Aib,18K,34Q;(iii)8Aib,18K,22E,34R;(iv)8Aib,18K,22E,34Q;(v)8Aib,12L,18K,34Q;(vi)7Imp,18K,22E,34Q;(vii)18K,34R;(iix)18K,34Q;(ix)18K,22E,34R;(x)18K,22E,34Q;(xi)18K,26R,31K,34R;(xii)18K,26H,31K,34R;(xiii)18K,26H,27K,34Q;(xiv)18K,22K,26R,34Q;(xv)18K,25V,26R,31K,34R;(xvi)18K,22E,26R,31K,34R;(xvii)18K,22E,26H,27K,34R;(iixx)18K,22E,26H,27K,34Q;(ixx)18K,22E,26H,27K,31H,34R;(xx)18K,22E,26H,27K,31H,34Q;(xxi)18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxii)18K,22E,25V,26R,31K,34Q;(xxiii)18K,22E,25V,26R,31K,34G;(xxiv)18K,22E,25V,26R,27K,34R;(xxv)18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(xxvi)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34R;(xxvii)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34Q;(iixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34R;(ixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34Q;(xxx)18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxi)18K,22E,25V,26R,31H,des35-37;(xxxii)18K,22E,25V,26R,30K,34G,des35-37;(xxxiii)18K,22E,25V,26R,30K,31H,34G,des35-37;(xxxiv)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37);(xxxv)18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(xxxvi)18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(xxxvii)7Imp,18K,22E,26R,34R,37K;(iixxxx)7Imp,18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxx)7Imp,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxx)7Imp,8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxi)8S,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxii)8Aib,18K,26V,27K,34R;(xxxxiii)8Aib,18K,26H,30K,34R,des36-37;(xxxxiv)8Aib,18K,25V,26R,31K,34R;(xxxxv)8Aib,18K,22E,34R,des36-37;(xxxxvi)8Aib,18K,22E,26R,34R,37K;(xxxxvii)8Aib,18K,22E,26R,31K,34R;(iixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(ixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R,des36-37;(xxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R;(xxxxxi)8Aib,18K,22E,26R,27K,31H,34R,des35-37;(xxxxxii)8Aib,18K,22E,2bV,26R,31K,des34-37;(xxxxxiii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxxxxiv)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxv)8Aib,18K,22E,25V,26R,30E,31K,34G,des35-37;(xxxxxvi)8Aib,18K,22E,25V,26R,27L,des35-37;(xxxxxvii)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(iixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27H,31K,34G,des35-37;(xxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26H,31K,34G,des35-37;(xxxxxxi)8Aib,18K,22E,23R,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxxii)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37;(xxxxxxiii)7Imp,18K,22E,26R,27K,34Q或(xxxxxxiv)8Aib,18K,34H。

347.實施方案1-346中任一項的衍生物,其中所述類似物被修飾以便包含C-末端酰胺。

348.實施方案1-347中任一項的衍生物,其中類似物的C-末端氨基酸的羧酸基團轉化為羧酸酰胺。

349.實施方案347的衍生物,其中轉化為羧酸酰胺的所述羧酸基團不在C-末端氨基酸的側鏈中。

350.實施方案1-346中任一項的衍生物,其中所述類似物具有C-末端羧酸。

351.一種化合物,優選實施方案1-350中任一項的化合物,其選自以下:Chem.20、Chem.21、Chem.22、Chem.23、Chem.24、Chem.25、Chem.26、Chem.27、Chem.28、Chem.29、Chem.30、Chem.31、Chem.32、Chem.33、Chem.34、Chem.35、Chem.36、Chem.37、Chem.38、Chem.39、Chem.40、Chem.41、Chem.42、Chem.43、Chem.44、Chem.45、Chem.46、Chem.47、Chem.48、Chem.49、Chem.50、Chem.51、Chem.52、Chem.53、Chem.54、Chem.55、Chem.56、Chem.57、Chem.58、Chem.59、Chem.60、Chem.61、Chem.62、Chem.63、Chem.64、Chem.65、Chem.66、Chem.67、Chem.68、Chem.69、Chem.70、Chem.71、Chem.72、Chem.73、Chem.74、Chem.75、Chem.76、Chem.77、Chem.78、Chem.79、Chem.80、Chem.81、Chem.82、Chem.83、Chem.84、Chem.85、Chem.86、Chem.87、Chem.88、Chem.89、Chem.90、Chem.91、Chem.92、Chem.93、Chem.94、Chem.95、Chem.96、Chem.97、Chem.98、Chem.99、Chem.100、Chem.101、Chem.102、Chem.103、Chem.104、Chem.105、Chem.106、Chem.107、Chem.108、Chem.109、Chem.110、Chem.111、Chem.112、Chem.113、Chem.114、Chem.115、Chem.116、Chem.117、Chem.118、Chem.119、Chem.120、Chem.121、Chem.122、Chem.123、Chem.124、Chem.125、Chem.126、Chem.127、Chem.128、Chem.129、Chem.130、Chem.131、Chem.132、Chem.133、Chem.134、Chem.135、Chem.161、Chem.162、Chem.163、Chem.164、Chem.165、Chem.166、Chem.167、Chem.168、Chem.169、Chem.170、Chem.171、Chem.172、Chem.173、Chem.174、Chem.175、Chem.176、Chem.177、Chem.178、Chem.179、Chem.180、Chem.181、Chem.182、Chem.183、Chem.189、Chem.190、Chem.191、Chem.192、Chem.193、Chem.194和Chem.195;或Chem.20-135、Chem.161-183和Chem.189-195中任一項的藥學上可接受的鹽、酰胺或酯。

352.一種化合物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,所述化合物由其名稱表征并且選自本文實施例1-116、118-140和141-147的化合物名稱的每一個的列表。

353.實施方案352的化合物,其為實施方案351的化合物。

354.實施方案1-353中任一項的衍生物,其具有GLP-1活性。

355.實施方案354的衍生物,其中GLP-1活性指激活人GLP-1受體的能力。

356.實施方案355的衍生物,其中激活人GLP-1受體在體外測定中作為cAMP產生的效能來測量。

357.實施方案1-356中任一項的衍生物,其具有對應于以下EC50的效能:

a)低于18000pM,優選低于10000pM,更優選低于5000pM,甚至更優選低于4000pM,或最優選低于3000pM;

b)低于2000pM,優選低于1200pM,更優選低于1000pM,甚至更優選低于800pM,或最優選低于600pM;

c)低于400pM,優選低于300pM,更優選低于200pM,甚至更優選低于150pM,或最優選低于100pM;或

d)低于80pM,優選低于60pM,更優選低于50pM,甚至更優選低于40pM,或最優選低于30pM。

358.實施方案357的衍生物,其中所述效能測定為在含有人GLP-1受體的培養基中對cAMP形成的刺激的EC50,優選用穩定轉染的細胞系例如BHK467-12A(tk-ts13)和/或用測定cAMP的功能受體測定,例如基于內源形成的cAMP和外源添加的生物素-標記的cAMP之間的競爭,其中測定cAMP更優選用特異性抗體來捕獲和/或其中甚至更優選的測定為AScreen?cAMP測定,最優選在實施例148中所述的測定。

359.實施方案1-358中任一項的衍生物,其中比率[在2.0%HSA(高白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50,以nM計)除以在0.005%HSA(低白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50,以nM計)]為:

a)至少1,優選至少10,更優選至少20,甚至更優選至少30,或最優選至少40;

b)至少50,優選至少60,更優選至少70,甚至更優選至少80,或最優選至少90;

c)至少100,優選至少200,更優選至少300,還更優選至少400,甚至更優選至少500,或最優選至少600;或

d)至少700,優選至少800,更優選至少900,還更優選至少1000,甚至更優選至少1200,或最優選至少1400。

360.實施方案1-359中任一項的衍生物,其在0.005%HSA(低白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50)為

a)低于1000nM,優選低于500nM,更優選低于100nM,或最優選低于50nM;

b)低于10nM,優選低于8.0nM,還更優選低于6.0nM,甚至更優選低于5.0nM,或最優選低于2.00nM;或

c)低于1.00nM,優選低于0.50nM,甚至更優選低于0.25nM,或最優選低于0.15nM。

361.實施方案1-360中任一項的衍生物,其在2.0%HSA(高白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50)為

a)低于1000nM;

b)低于800nM,優選低于700nM,更優選低于500nM;或

c)低于300nM,優選低于200nM,甚至更優選低于100nM,或最優選低于50nM。

362.實施方案359-361中任一項的衍生物,其中通過從受體取代125I-GLP-1來測量與GLP-1受體的結合親和力,優選用SPA結合測定。

363.實施方案362的衍生物,其中所述GLP-1受體用穩定轉染的細胞系來制備,所述細胞系優選倉鼠細胞系,更優選幼倉鼠腎細胞系,例如BHK?tk-ts13。

364.實施方案359-363中任一項的衍生物,其中所述IC50值測定為從受體取代50%125I-GLP-1的濃度。

365.實施方案1-364中任一項的衍生物,其具有口服生物利用度,優選口服絕對生物利用度,其高于司美魯肽的生物利用度。

366.實施方案1-365中任一項的衍生物,其具有口服生物利用度,優選口服絕對生物利用度,其高于利拉糖肽的生物利用度。

367.實施方案365-366中任一項的衍生物,其中在大鼠體內將口服生物利用度測量為直接注射到腸腔后在血漿中的暴露。

368.實施方案1-367中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為

a)至少20,優選至少40,更優選至少45,甚至更優選至少50,或最優選至少60;或

b)至少70,優選至少80,或最優選至少100。

369.實施方案1-367中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為至少110,優選至少120,更優選至少130,還更優選至少140,甚至更優選至少150,或最優選至少160。

370.實施方案1-367中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為至少180,優選至少190,更優選至少200,還更優選至少210,甚至更優選至少220,或最優選至少230。

371.實施方案1-367中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為至少240,優選至少250,更優選至少260,或最優選至少270。

372.實施方案368-371中任一項的衍生物,其中GLP-1衍生物以1000uM濃度在55mg/ml癸酸鈉溶液中測試。

373.實施方案368-372中任一項的衍生物,其中使用雄性Sprague?Dawley大鼠,優選體重達到大約240g。

374.實施方案368-373中任一項的衍生物,其中在實驗前讓大鼠禁食大約18小時。

375.實施方案368-374中任一項的衍生物,其中在讓大鼠禁食后并在空腸中注射衍生物之前對其施行全身麻醉。

376.實施方案368-375中任一項的衍生物,其中所述衍生物在空腸近心端(離十二指腸10cm的遠端)或中腸中(離盲腸50cm的近端)給予。

377.實施方案368-376中任一項的衍生物,其中用1ml注射器通過導管將100μl所述衍生物注入空腸腔中,隨后用另一注射器將200μl空氣推進空腸腔中,然后讓注射器與導管保持連接以防止回流到導管中。

378.實施方案368-377中任一項的衍生物,其中在所期需的時間間隔從尾靜脈采集血樣(200ul)到EDTA管中,例如在0、10、30、60、120和240分鐘的時間,并在20分鐘內以10000G于4℃離心5分鐘。

379.實施方案368-378中任一項的衍生物,其中將血漿(例如75ul)分離,立即冷凍并保持在-20℃,直到對衍生物的血漿濃度進行分析。

380.實施方案368-379中任一項的衍生物,其中用LOCI(光激化學發光免疫測定)來分析衍生物的血漿濃度。

381.實施方案1-380中任一項的衍生物,其中所述衍生物在體內有效降低db/db小鼠血糖。

382.實施方案1-380中任一項的衍生物,其中所述衍生物在體內有效降低db/db小鼠體重。

383.實施方案381-382中任一項的衍生物,其中用合適范圍的GLP-1衍生物劑量s.c處理db/db小鼠,以合適間隔來測定血糖和/或體重。

384.實施方案381-383中任一項的衍生物,其中GLP-1衍生物劑量為0.3nmol/kg、1.0nmol/kg、3.0nmol/kg、10nmol/kg、30nmol/kg和100nmol/kg,其中kg指小鼠體重。

385.實施方案381-384中任一項的衍生物,其中用溶媒s.c處理對照組,優選GLP-1衍生物溶解于其中的培養基例如具以下組成:50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH7.4。

386.實施方案381-385中任一項的衍生物,其中在-1/2h(給藥(t=0)前半小時)和1、2、4和8小時時測定血糖和/或給小鼠稱重。

387.實施方案381-386中任一項的衍生物,其中葡萄糖濃度用葡萄糖氧化酶方法來測量。

388.實施方案381-387中任一項的衍生物,其中

(i)ED50(體重(BW))計算為皮下給予所述衍生物后8小時引起對Δ(例如降低)BW的半最大效應的劑量;和/或

(ii)ED50(血糖(BG))為皮下給予所述類似物后8小時和/或24小時引起對AUC(曲線下面積)Δ(例如降低)BG的半最大效應的劑量。

389.實施方案381-388中任一項的衍生物,其中存在S形劑量-反應關系,優選具有明確定義的最大反應。

390.實施方案381-389中任一項的衍生物,其中ED50(BG)8小時低于5.0nmol/kg,優選低于4.0nmol/kg,更優選低于3.0nmol/kg,甚至更優選低于2.0nmol/kg,或最優選低于1.0nmol/kg。

391.實施方案381-390中任一項的衍生物,其中ED50(BW)8小時為

a)低于10nmol/kg,優選低于8nmol/kg,甚至更優選低于6.0nmol/kg,或最優選低于5.0nmol/kg;或

b)低于4.0nmol/kg,優選低于3.0nmol/kg,甚至更優選低于2.0nmol/kg,或最優選低于1.0nmol/kg。

392.實施方案1-391中任一項的衍生物,其具有比利拉糖肽更延長的作用概況。

393.實施方案392的衍生物,其中延長意即在相關動物物種的體內半衰期,所述動物物種例如db/db小鼠、大鼠、豬和/或優選小型豬;其中所述衍生物如下給予:i)s.c和/或ii)i.v;優選ii)i.v。

394.實施方案1-393中任一項的衍生物,其中在大鼠中i.v.給予后的終末半衰期(T1/2)高于司美魯肽的終末半衰期。

395.實施方案1-394中任一項的衍生物,其中在大鼠中i.v.給予后的終末半衰期(T1/2)為司美魯肽終末半衰期的至少2倍。

396.實施方案1-395中任一項的衍生物,其中在大鼠中i.v.給予后的終末半衰期(T1/2)為司美魯肽終末半衰期的至少3倍。

397.實施方案1-396中任一項的衍生物,其中在大鼠中i.v.給予后的終末半衰期(T1/2)為司美魯肽終末半衰期的至少4倍。

398.實施方案1-397中任一項的衍生物,其中在大鼠中i.v.給予后的終末半衰期(T1/2)為司美魯肽終末半衰期的至少5倍。

399.實施方案1-398中任一項的衍生物,其中所述半衰期在大鼠中在體內藥代動力學研究中測定,例如如實施例154中所述。

400.實施方案1-399中任一項的衍生物,其中在小型豬中i.v給予后的終末半衰期(T1/2)為

a)至少8小時,優選至少16小時,更優選至少24小時,甚至更優選至少32小時,或最優選至少40小時;或

b)至少50小時,優選至少58小時,更優選至少70小時,甚至更優選至少80小時,或最優選至少84小時。

401.實施方案393-400中任一項的衍生物,其中所述小型豬為雄性小型豬。

402.實施方案393-401中任一項的衍生物,其中所述小型豬為7-14個月齡,優選重16-35kg。

403.實施方案393-402中任一項的衍生物,其中將小型豬單獨飼養,每天一次或兩次喂食,優選用SDS小型豬飲食。

404.實施方案393-403中任一項的衍生物,其中所述衍生物在適應至少2周后i.v給藥。

405.實施方案393-404中任一項的衍生物,其中在給藥前讓動物禁食大約18小時和給藥后讓動物禁食至少4小時,在整個期間動物可隨意飲水。

406.實施方案393-405中任一項的衍生物,其中將所述GLP-1衍生物溶于50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH7.4中到合適的濃度,優選20-60nmol/ml。

407.實施方案393-406中任一項的衍生物,其中靜脈內注射衍生物以對應于1-2nmol/kg的體積來給予。

408.實施方案1-407中任一項的衍生物,其在豬中相對于對照(優選溶媒處理或不作處理)引起食物攝取減少;

任選食物攝取(0-24h)可相對于經溶媒處理的對照為90%或更低,優選80%或更低,更優選70%或更低,甚至更優選60%或更低,或最優選50%或更低;

其中食物攝取(0-24小時)指給予衍生物或溶媒后的第一個24小時。

409.實施方案408的衍生物,其中所述豬為雌性Landrace?Yorkshire?Duroc(LYD)豬。

410.實施方案408-409中任一項的衍生物,其中所述LYD豬為3個月齡,優選具有30-35kg的重量。

411.實施方案408-410中任一項的衍生物,其中讓動物在小組中適應飼養1-2周。

412.實施方案408-411中任一項的衍生物,其中在實驗期間,從星期一上午到星期五下午將動物安置在單獨的圖中用于測量單個食物攝取。

413.實施方案408-412中任一項的衍生物,其中用豬飼料(例如Svinefoder,Antonio)隨意喂養動物。

414.實施方案408-413中任一項的衍生物,其中通過每15分鐘記錄飼料重量在線監測食物攝取,優選用Mpigwin系統。

415.實施方案408-414中任一項的衍生物,其以0.3、1.0、3.0、10或30nmol/kg來給藥,優選溶于磷酸鹽緩沖液(50mM磷酸鹽、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH8),更優選以12、40、120、400或1200nmol/ml的濃度。

416.實施方案408-415中任一項的衍生物,其中將磷酸鹽緩沖液用作溶媒。

417.實施方案408-416中任一項的衍生物,其中在第1天上午給予動物單個皮下劑量的衍生物或溶媒(優選用0.025ml/kg的劑量體積),給藥后測量食物攝取達4天。

418.GLP-1類似物形式的中間產物,與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較,所述類似物包含以下改變:

(i)8Aib,18K,34R;(ii)8Aib,18K,34Q;(iii)8Aib,18K,22E,34R;(iv)8Aib,18K,22E,34Q;(v)8Aib,12L,18K,34Q;(vi)7Imp,18K,22E,34Q;(vii)18K,34R;(iix)18K,34Q;(ix)18K,22E,34R;(x)18K,22E,34Q;(xi)18K,26R,31K,34R;(xii)18K,26H,31K,34R;(xiii)18K,26H,27K,34Q;(xiv)18K,22K,26R,34Q;(xv)18K,25V,26R,31K,34R;(xvi)18K,22E,26R,31K,34R;(xvii)18K,22E,26H,27K,34R;(iixx)18K,22E,26H,27K,34Q;(ixx)18K,22E,26H,27K,31H,34R;(xx)18K,22E,26H,27K,31H,34Q;(xxi)18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxii)18K,22E,25V,26R,31K,34Q;(xxiii)18K,22E,25V,26R,31K,34G;(xxiv)18K,22E,25V,26R,27K,34R;(xxv)18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(xxvi)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34R;(xxvii)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34Q;(iixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34R;(ixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34Q;(xxx)18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxi)18K,22E,25V,26R,31H,des35-37;(xxxii)18K,22E,25V,26R,30K,34G,des35-37;(xxxiii)18K,22E,25V,26R,30K,31H,34G,des35-37;(xxxiv)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37);(xxxv)18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(xxxvi)18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(xxxvii)7Imp,18K,22E,26R,34R,37K;(iixxxx)7Imp,18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxx)7Imp,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxx)7Imp,8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxi)8S,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxii)8Aib,18K,26V,27K,34R;(xxxxiii)8Aib,18K,26H,30K,34R,des36-37;(xxxxiv)8Aib,18K,25V,26R,31K,34R;(xxxxv)8Aib,18K,22E,34R,des36-37;(xxxxvi)8Aib,18K,22E,26R,34R,37K;(xxxxvii)8Aib,18K,22E,26R,31K,34R;(iixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(ixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R,des36-37;(xxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R;(xxxxxi)8Aib,18K,22E,26R,27K,31H,34R,des36-37;(xxxxxii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,des34-37;(xxxxxiii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxxxxiv)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxv)8Aib,18K,22E,25V,26R,30E,31K,34G,des35-37;(xxxxxvi)8Aib,18K,22E,25V,26R,27L,des35-37;(xxxxxvii)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(iixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27H,31K,34G,des35-37;(xxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26H,31K,34G,des35-37;(xxxxxxi)8Aib,18K,22E,23R,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxxii)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37;(xxxxxxiii)7Imp,18K,22E,26R,27K,34Q;(xxxxxxiv)34H或(xxxxxxv)8Aib,18K,34H;或(i)-(xxxxxxv)的類似物中任一個的藥學上可接受的鹽、酰胺或酯。

419.GLP-1類似物形式的中間產物,所述GLP-1類似物選自GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的以下類似物:

(i)8Aib,18K,34R;(ii)8Aib,18K,34Q;(iii)8Aib,18K,22E,34R;(iv)8Aib,18K,22E,34Q;(v)8Aib,12L,18K,34Q;(vi)7Imp,18K,22E,34Q;(vii)18K,34R;(iix)18K,34Q;(ix)18K,22E,34R;(x)18K,22E,34Q;(xi)18K,26R,31K,34R;(xii)18K,26H,31K,34R;(xiii)18K,26H,27K,34Q;(xiv)18K,22K,26R,34Q;(xv)18K,25V,26R,31K,34R;(xvi)18K,22E,26R,31K,34R;(xvii)18K,22E,26H,27K,34R;(iixx)18K,22E,26H,27K,34Q;(ixx)18K,22E,26H,27K,31H,34R;(xx)18K,22E,26H,27K,31H,34Q;(xxi)18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxii)18K,22E,25V,26R,31K,34Q;(xxiii)18K,22E,25V,26R,31K,34G;(xxiv)18K,22E,25V,26R,27K,34R;(xxv)18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(xxvi)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34R;(xxvii)18K,22E,25V,26R,27K,31H,34Q;(iixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34R;(ixxx)18K,22E,23E,25V,26R,27K,34Q;(xxx)18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxi)18K,22E,25V,26R,31H,des35-37;(xxxii)18K,22E,25V,26R,30K,34G,des35-37;(xxxiii)18K,22E,25V,26R,30K,31H,34G,des35-37;(xxxiv)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37);(xxxv)18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(xxxvi)18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(xxxvii)7Imp,18K,22E,26R,34R,37K;(iixxxx)7Imp,18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxx)7Imp,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxx)7Imp,8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxi)8S,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxii)8Aib,18K,26V,27K,34R;(xxxxiii)8Aib,18K,26H,30K,34R,des36-37;(xxxxiv)8Aib,18K,25V,26R,31K,34R;(xxxxv)8Aib,18K,22E,34R,des36-37;(xxxxvi)8Aib,18K,22E,26R,34R,37K;(xxxxvii)8Aib,18K,22E,26R,31K,34R;(iixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,31K,34G,des35-37;(ixxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R,des36-37;(xxxxx)8Aib,18K,22E,26R,30K,34R;(xxxxxi)8Aib,18K,22E,26R,27K,31H,34R,des36-37;(xxxxxii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,des34-37;(xxxxxiii)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34R;(xxxxxiv)8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxv)8Aib,18K,22E,25V,26R,30E,31K,34G,des35-37;(xxxxxvi)8Aib,18K,22E,25V,26R,27L,des35-37;(xxxxxvii)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,34Q;(iixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,31H,34G,des35-37;(ixxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26R,27H,31K,34G,des35-37;(xxxxxx)8Aib,18K,22E,25V,26H,31K,34G,des35-37;(xxxxxxi)8Aib,18K,22E,23R,25V,26R,31K,34G,des35-37;(xxxxxxii)18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37;(xxxxxxiii)7Imp,18K,22E,26R,27K,34Q;(xxxxxxiv)34H和(xxxxxxv)8Aib,18K,34H;或(i)-(xxxxxxv)的類似物中任一個的藥學上可接受的鹽、酰胺或酯。

420.實施方案418-419中任一項的類似物,所述類似物包含C-末端酰胺。

421.實施方案418-420中任一項的類似物,其中類似物的C-末端氨基酸的羧酸基團轉化為羧酸酰胺。

422.實施方案421的類似物,其中轉化為羧酸酰胺的所述羧酸基團不在C-末端氨基酸的側鏈中。

423.實施方案418-419中任一項的類似物,所述類似物包含C-末端羧酸。

424.實施方案418-420中任一項的類似物,其中通過手寫和目測進行與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的所述比較。

425.實施方案418-424中任一項的類似物,其中通過使用標準蛋白質或肽比對程序進行與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的所述比較。

426.實施方案425的類似物,其中所述比對程序為Needleman-Wunsch比對。

427.實施方案425-426中任一項的類似物,其中使用默認記分矩陣和默認單位矩陣。

428.實施方案425-427中任一項的類似物,其中所述記分矩陣為BLOSUM62。

429.實施方案425-428中任一項的類似物,其中空隙中第一個殘基的罰分為-10(負十)。

430.實施方案425-429中任一項的類似物,其中空隙中另外的殘基的罰分為-0.5(負零點五)。

431.中間產物,其選自以下:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-氨基-4-羧基丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-氨基-4-羧基丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Val26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.137:

其中R和PG為保護基;

或Chem.137-160和Chem.184-188中任一個的藥學上可接受的鹽、酰胺或酯。

432.實施方案431的中間產物,其中R為氫、低級烷基或低級烷基的芳烷基。

433.實施方案431-432中任一項的中間產物,其中R為氫。

434.實施方案431-432中任一項的中間產物,其中R為低級烷基。

435.實施方案431-432中任一項的中間產物,其中R為低級烷基的芳烷基。

436.實施方案431-432和434-435中任一項的中間產物,其中所述低級烷基為直鏈、環狀或支鏈C1-C6烷基,優選支鏈C3-C6烷基。

437.實施方案431-432、434-436中任一項的中間產物,其中所述低級烷基為直鏈、環狀或支鏈C1-C4烷基,優選支鏈C3-C4烷基。

438.實施方案431-432和434-437中任一項的中間產物,其中所述低級烷基為甲基。

439.實施方案431-432和434-438中任一項的中間產物,其中所述芳烷基包含(優選具有)1-3個芳族基團。

440.實施方案431-432、434-439中任一項的中間產物,其中R為叔丁基、芐基或三苯甲基。

441.實施方案431-440中任一項的中間產物,其中*-CO-PG為*-CO-OH或活性酯。

442.實施方案431-441中任一項的中間產物,優選根據實施方案434-440中任一項的中間產物,其中*-CO-PG為*CO-OH。

443.實施方案431-441中任一項的中間產物,優選根據實施方案432-440中任一項的中間產物,其中*-CO-PG為活性酯。

444.實施方案441-443中任一項的中間產物,其中所述活性酯為以下物質的酯:對硝基苯酚;2,4,5-三氯苯酚;N-羥基琥珀酰亞胺;N-羥基磺基琥珀酰亞胺;3,4-二氫-3-羥基-1,2,3-苯并三嗪-4-酮;5-氯-8-羥基喹啉;N-羥基-5-降冰片烯-2,3-二羧酸酰亞胺;五氟苯酚;對磺基四氟苯酚;N-羥基鄰苯二甲酰亞胺;1-羥基苯并三唑;1-羥基-7-氮雜苯并三唑;N-羥基馬來酰亞胺;4-羥基-3-硝基苯磺酸;或本領域已知的任何其它活性酯。

445.實施方案1-417中任一項的衍生物,其用作藥物。

446.實施方案1-417中任一項的衍生物,其用于以下用途:用于治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展。

447.實施方案1-417中任一項的衍生物用于制備用于以下的藥物的用途:用于治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展。

448.一種方法,所述方法用于治療或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展,所述方法通過給予藥學上活性量的實施方案1-417中任一項的衍生物來進行。

另外的具體實施方案

以下為本發明另外的具體實施方案:

1.GLP-1類似物的衍生物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,

所述類似物包含對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位位置的第一K殘基,在另一個位置的第二K殘基,和與GLP-1(7-37)比較,所述類似物包含最多12個氨基酸修飾,

所述衍生物包含兩個經由接頭分別與所述第一和第二K殘基連接的延長部分,其中

所述延長部分選自Chem.1、Chem.2和Chem.3:

Chem.1:HOOC-(CH2)x-CO-

Chem.2:R1-CO-C6H4-O-(CH2)y-CO-

Chem.3:R2-C6H4-(CH2)z-CO-,

其中x為6-18范圍內的整數,y為3-11范圍內的整數,z為1-5范圍內的整數,R1-為-OH,和R2為摩爾質量不高于150Da的基團;和

所述接頭包含

Chem.4:

其中k為1-5范圍內的整數,和n為1-5范圍內的整數。

2.實施方案1的衍生物,其中Chem.4為第一接頭元件。

3.實施方案1-2中任一項的衍生物,其中k為1。

4.實施方案1-3中任一項的衍生物,其中n為1。

5.實施方案1-4中任一項的衍生物,其中Chem.4被包括m次,其中m為1-10范圍內的整數。

6.實施方案5的衍生物,其中m為1-6范圍內的整數;優選m為1、2、4或6;更優選m為1、2或4;甚至更優選m為1或4;或最優選m為2。

7.實施方案5-6中任一項的衍生物,其中,當m不同于1時,Chem.4元件經由酰胺鍵互相連接。

8.實施方案1-7中任一項的衍生物,其中所述接頭進一步包含第二接頭元件。

9.實施方案8的衍生物,其中所述第二接頭元件為

Chem.5:

10.實施方案9的衍生物,其中Chem.5被包括p次,其中p為1-3范圍內的整數。

11.實施方案10的衍生物,其中p為1、2或3;優選2或3,或最優選1。

12.實施方案9-11中任一項的衍生物,其中Chem.5為L-Glu或D-Glu的基團,優選L-Glu的基團。

13.實施方案10-12中任一項的衍生物,其中,當p不同于1時,Chem.5元件經由酰胺鍵互相連接。

14.實施方案1-13中任一項的衍生物,其中所述接頭進一步包含第三接頭元件。

15.實施方案的衍生物14,其中所述第三接頭元件為

Chem.6:-NH-(CH2)q-CHR3-CO-,

其中q為2-12范圍內的整數,和R3為氫(H)。

16.實施方案15的衍生物,其中q為4、6或10。

17.實施方案15-16中任一項的衍生物,其中Chem.6為氨基己酸、氨基辛酸或氨基十二烷酸的基團。

18.實施方案17的衍生物,其中所述基團化的氨基在ε位。

19.實施方案10-12中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(m次)和Chem.5(p次)組成。

20.實施方案19的衍生物,其中(m,p)為(2,2)、(2,1)、(2,3)、(4,1)、(6,1)、(1,1)或(1,2);優選(2,1)、(2,2)、(1,2)或(2,3);或最優選(2,1)。

21.實施方案19-20中任一項的衍生物,其中所述m個Chem.4元件和p個Chem.5元件經由酰胺鍵互相連接。

22.實施方案15-18中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(m次)、Chem.5(p次)和Chem.6組成。

23.實施方案22的衍生物,其中(m,p)為(2,1)或(1,1);優選(2,1)。

24.實施方案22-23中任一項的衍生物,其中所述m個Chem.4元件、p個Chem.5元件和Chem.6元件經由酰胺鍵互相連接。

25.實施方案1-24中任一項的衍生物,其中所述接頭和延長部分經由酰胺鍵互相連接。

26.實施方案1-25中任一項的衍生物,其中所述接頭和GLP-1類似物經由酰胺鍵互相連接。

27.實施方案26的衍生物,其中所述接頭與第一或第二K殘基的ε-氨基連接。

28.實施方案1-27中任一項的衍生物,其中所述接頭具有6-41個C-原子;優選11-41個C-原子;例如11、12、17、22、24、27、28、29、30、34或41個C-原子;更優選12、17、22、27或29個C-原子;或11、24、28、30、34或41個C-原子;甚至更優選12、17或22個C-原子;或最優選17個C-原子。

29.實施方案1-28中任一項的衍生物,其中所述接頭具有4-28個雜原子;優選8-28個雜原子;例如8、11、12、16、17、18、20或28個雜原子;更優選8、12、16、18或20個雜原子;甚至更優選8、16、18或20個雜原子;或最優選12個雜原子。

30.實施方案29的衍生物,其中所述雜原子為N-原子和/或O-原子。

31.實施方案28-30中任一項的衍生物,其中所述接頭具有1-7個N-原子;優選2-7個N-原子;例如2、3、4、5或7個N-原子;優選2、3、4或5個N-原子;甚至更優選3、4或5個N-原子;例如4或5個N-原子;或最優選3個N-原子。

32.實施方案28-31中任一項的衍生物,其中所述接頭具有3-21個O-原子;優選6-21個O-原子;例如6、7、9、12、13、15或21個O-原子;優選6、9、12、13或15個O-原子;例如6、12、13或15個O-原子;或最優選9個O-原子。

33.實施方案1-7中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

34.實施方案1-7中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(四次)組成,經由酰胺鍵互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

35.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(兩次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

36.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(兩次)和Chem.5(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

37.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(三次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

38.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

39.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)、Chem.4(兩次)和Chem.5(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

40.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)和Chem.4(四次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

41.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)和Chem.4(六次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

42.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)和Chem.4(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

43.實施方案9-13中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.4(一次)、Chem.5(一次)和Chem.4(一次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

44.實施方案15-18中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)、Chem.6(一次)(其中優選q為10并且R3為H)、Chem.5(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

45.實施方案15-18中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)、Chem.6(一次)(其中優選q為4并且R3為H)、Chem.5(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

46.實施方案15-18中任一項的衍生物,其中所述接頭由Chem.5(一次)、Chem.6(一次)(其中優選q為6并且R3為H)、Chem.5(一次)和Chem.4(兩次)組成,經由酰胺鍵并以指定次序互相連接,所述接頭在其游離氨基端與延長部分的游離羰基連接,在其游離羰基端與GLP-1類似物的第一或第二K殘基的ε氨基連接。

48.實施方案1-46中任一項的衍生物,其中所述延長部分為Chem.3。

49.實施方案1-46中任一項的衍生物,其中所述延長部分為Chem.1或Chem.2。

50.實施方案49的衍生物,其中所述延長部分為Chem.2。

51.實施方案49的衍生物,其中所述延長部分為Chem.1。

52.實施方案1-46、49和51中任一項的衍生物,其中x為偶數。

53.實施方案1-46、49和51-52中任一項的衍生物,其中x為10-16范圍內的整數。

54.實施方案53的衍生物,其中x為16。

55.實施方案53的衍生物,其中x為10或12。

56.實施方案55的衍生物,其中x為10。

57.實施方案55的衍生物,其中x為12。

58.實施方案1-46和49-50中任一項的衍生物,其中y為奇數。

59.實施方案1-46、49-50和58中任一項的衍生物,其中y為7-9范圍內的整數。

60.實施方案59的衍生物,其中y為7或8。

61.實施方案60的衍生物,其中y為8。

62.實施方案59的衍生物,其中y為7或9。

63.實施方案62的衍生物,其中y為7。

64.實施方案62的衍生物,其中y為9。

65.實施方案1-48中任一項的衍生物,其中z為3。

66.實施方案1-48和65中任一項的衍生物,其中R2為摩爾質量不高于127Da的基團。

67.實施方案66的衍生物,其中R2為摩爾質量在1-127Da范圍內的基團。

68.實施方案67的衍生物,其中R2為-H。

69.實施方案67的衍生物,其中R2為鹵素基團。

70.實施方案69的衍生物,其中R2為-I。

71.實施方案1-46、49和51-57中任一項的衍生物,其中Chem.1由Chem.1a表示:

Chem.1a:

其中x如實施方案1和52-57中任一項所定義。

72.實施方案1-46、49-50和58-64中任一項的衍生物,其中Chem.2由Chem.2a表示:

Chem.2a:

其中R1和y如實施方案1和58-64中任一項所定義。

73.實施方案1-48和65-70中任一項的衍生物,其中Chem.3由Chem.3a表示:

Chem.3a:

其中R2和z如實施方案1和65-70中任一項所定義。

74.實施方案1-73中任一項的衍生物,其中所述兩個延長部分基本相同。

75.實施方案1-74中任一項的衍生物,其中所述兩個延長部分具有至少0.5的類似性;優選至少0.6;更優選至少0.7或至少0.8;甚至更優選至少0.9;或最優選至少0.99,例如1.0的類似性。

76.實施方案1-75中任一項的衍生物,其中所述兩個接頭基本相同。

77.實施方案1-76中任一項的衍生物,其中所述兩個接頭具有至少0.5的類似性;優選至少0.6;更優選至少0.7或至少0.8;甚至更優選至少0.9;或最優選至少0.99,例如1.0的類似性。

78.實施方案1-77中任一項的衍生物,其中由延長部分和接頭組成的兩個側鏈基本相同。

79.實施方案1-78中任一項的衍生物,其中由延長部分和接頭組成的兩個側鏈具有至少0.5的類似性;優選至少0.6;更優選至少0.7或至少0.8;甚至更優選至少0.9;或最優選至少0.99,例如1.0的類似性。

80.實施方案75、77和79中任一項的衍生物,其中待比較的兩種化學結構用指紋表示,例如a)ECFP_6指紋;b)UNITY指紋;和/或c)MDL指紋;和其中對于a)、b)和c)中的每一種,Tanimoto系數優選用于計算兩種指紋的類似性。

81.實施方案1-80中任一項的衍生物,其中所述第一K殘基被命名為K18。

82.實施方案1-81中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基在對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的T位的位置。

83.實施方案1-82中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基被命名為KT。

84.實施方案82-83中任一項的衍生物,其中T為選自1-17范圍或19-37范圍的整數。

85.實施方案84的衍生物,其中T選自19-37的范圍。

86.實施方案85的衍生物,其中T選自26、27、30、31、34和37。

87.實施方案86的衍生物,其中T選自26、27、30和31。

88.實施方案87的衍生物,其中T選自26、27或31。

89.實施方案88的衍生物,其中T為26或27;26或31;或27或31。

90.實施方案86的衍生物,其中T=26。

91.實施方案86的衍生物,其中T=27。

92.實施方案86的衍生物,其中T=30。

93.實施方案86的衍生物,其中T=31。

94.實施方案86的衍生物,其中T=34。

95.實施方案86的衍生物,其中T=37。

96.實施方案1-95中任一項的衍生物,其中通過手寫和目測確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位的位置。

97.實施方案82-96中任一項的衍生物,其中通過手寫和目測確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的T位的位置。

98.實施方案1-95中任一項的衍生物,其中通過使用標準蛋白質或肽比對程序確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的18位的位置。

99.實施方案82-96中任一項的衍生物,其中通過使用標準蛋白質或肽比對程序確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的T位的位置。

100.實施方案98和99中任一項的衍生物,其中所述比對程序為Needleman-Wunsch比對。

101.實施方案98-100中任一項的衍生物,其中使用默認記分矩陣和默認單位矩陣。

102.實施方案101的衍生物,其中所述記分矩陣為BLOSUM62

103.實施方案98-102中任一項的衍生物,其中空隙中第一個殘基的罰分為-10(負十)。

104.實施方案98-103中任一項的衍生物,其中空隙中另外的殘基的罰分為-0.5(負零點五)。

105.實施方案1-104中任一項的衍生物,其中所述類似物不含除第一和第二K殘基以外的K殘基。

106.實施方案1-105中任一項的衍生物,其中所述最多12個氨基酸修飾在對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的以下位置的一個或多個位置:7、8、18、22、23、25、26、27、30、31、34、35、36和37。

107.實施方案106的衍生物,其中通過手寫和目測確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的任何指定位置的位置。

108.實施方案106的衍生物,其中如對實施方案98-104中任一項中的18位和T位所述確定對應于GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)的任何指定位置的位置。

109.實施方案83-90和96-108中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K26,并且其中除K18修飾以外,所述類似物還包含選自Des34、G34、Q34和R34的修飾;和更進一步,任選以下另外的修飾中的至少一個:Imp7,(Aib8或S8),E22,(E23或R23),V25,(H27或L27),E30,Des35,Des36和/或Des37,其中在包括Des35和/或Des36的情況下,它們優選包括在選自(Des35,Des36和Des37)和(Des36和Des37)的組合中。

110.實施方案83-86、94和96-108中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K34,并且其中除K18修飾以外,所述類似物還包含選自H26、R26、V26的修飾;和更進一步,任選以下另外的修飾中的至少一個:Imp7,(Aib8或S8),E22,(E23或R23),V25,(H27或L27),E30,Des35,Des36和/或Des37,其中在包括Des35和/或Des36的情況下,它們優選包括在選自(Des35,Des36和Des37)和(Des36和Des37)的組合中。

111.實施方案83-89、91和96-108中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K27,并且其中除K18修飾以外,所述類似物還包含選自H26、R26和V26的修飾,以及選自Des34、G34、Q34和R34的修飾;和更進一步,任選以下另外的修飾中的至少一個:Imp7,(Aib8或S8),E22,(E23或R23),V25,E30,Des35,Des36和/或Des37,其中在包括Des35和/或Des36的情況下,它們優選包括在選自(Des35,Des36和Des37)和(Des36和Des37)的組合中。

112.實施方案83-873、92和96-108中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K30,并且其中除K18修飾以外,所述類似物還包含選自H26、R26和V26的修飾,以及選自Des34、G34、Q34和R34的修飾;和更進一步,任選以下另外的修飾中的至少一個:Imp7,(Aib8或S8),E22,(E23或R23),V25,(H27或L27),Des35,Des36和/或Des37,其中在包括Des35和/或Des36的情況下,它們優選包括在選自(Des35,Des36和Des37)和(Des3b和Des37)的組合中。

113.實施方案83-89、93和96-108中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K31,并且其中除K18修飾以外,所述類似物還包含選自H26、R26和V26的修飾,以及選自Des34、G34、Q34和R34的修飾;和更進一步,任選以下另外的修飾中的至少一個:Imp7,(Aib8或S8),E22,(E23或R23),V25,(H27或L27),E30,Des35,Des36和/或Des37,其中在包括Des35和/或Des36的情況下,它們優選包括在選自(Des35,Des36和Des37)和(Des36和Des37)的組合中。

114.實施方案83-86、95和96-108中任一項的衍生物,其中所述第二K殘基為K37,并且其中除K18修飾以外,所述類似物還包含選自H26、R26和V26的修飾,以及選自Des34、G34、Q34和R34的修飾;和更進一步,任選以下另外的修飾中的至少一個:Imp7,(Aib8或S8),E22,(E23或R23),V25,(H27或L27),E30、Des35和/或Des36,其中在包括Des35的情況下,其優選包括在與Des36的組合中;更優選Imp7,Aib8,S8,E22,E23,R23,V25,H27,L27和/或E30。

115.實施方案1-114中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Imp7和/或(Aib8或S3)。

116.實施方案1-115中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Imp7和/或Aib8。

117.實施方案1-116中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Aib8。

118.實施方案1-117中任一項的衍生物,其中所述類似物包含E22。

119.實施方案1-118中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Q34或R34;優選R34。

120.實施方案1-119中任一項的衍生物,其中所述類似物包含V25。

121.實施方案1-120中任一項的衍生物,其中所述類似物包含R26。

122.實施方案1-121中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37。

123.實施方案1-122中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37和Des36。

124.實施方案1-123中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37、Des36和Des35。

125.實施方案1-124中任一項的衍生物,其中所述類似物包含Des37、Des36、Des35和Des34。

126.實施方案1-125中任一項的衍生物,其為GLP-1(7-33)(SEQ?ID?NO:1的氨基酸1-27)的衍生物。

127.實施方案1-126中任一項的衍生物,其為GLP-1(7-34)(SEQ?ID?NO:1的氨基酸1-28)的衍生物。

128.實施方案1-127中任一項的衍生物,其為GLP-1(7-35)(SEQ?ID?NO:1的氨基酸1-29)的衍生物。

129.實施方案1-128中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多11個氨基酸修飾。

130.實施方案1-129中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多10個氨基酸修飾。

131.實施方案1-130中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多9個氨基酸修飾。

132.實施方案1-131中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多8個氨基酸修飾。

133.實施方案1-132中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多7個氨基酸修飾。

134.實施方案1-133中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多6個氨基酸修飾。

135.實施方案1-134中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多5個氨基酸修飾。

136.實施方案1-135中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多4個氨基酸修飾。

137.實施方案1-136中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多3個氨基酸修飾。

138.實施方案1-137中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多2個氨基酸修飾。

139.實施方案1-138中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最多1個氨基酸修飾。

140.實施方案1-139中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少1個氨基酸修飾。

141.實施方案1-140中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少2個氨基酸修飾。

142.實施方案1-141中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少3個氨基酸修飾。

143.實施方案1-142中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少4個氨基酸修飾。

144.實施方案1-143中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少5個氨基酸修飾。

145.實施方案1-144中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少6個氨基酸修飾。

146.實施方案1-145中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少7個氨基酸修飾。

147.實施方案1-146中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少8個氨基酸修飾。

148.實施方案1-147中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少9個氨基酸修飾。

149.實施方案1-148中任一項的衍生物,其中所述類似物具有最少10個氨基酸修飾。

150.實施方案1-149中任一項的衍生物,其中所述類似物具有1個氨基酸修飾。

151.實施方案1-150中任一項的衍生物,其中所述類似物具有2個氨基酸修飾。

152.實施方案1-151中任一項的衍生物,其中所述類似物具有3個氨基酸修飾。

153.實施方案1-152中任一項的衍生物,其中所述類似物具有4個氨基酸修飾。

154.實施方案1-153中任一項的衍生物,其中所述類似物具有5個氨基酸修飾。

155.實施方案1-154中任一項的衍生物,其中所述類似物具有6個氨基酸修飾。

156.實施方案1-155中任一項的衍生物,其中所述類似物具有7個氨基酸修飾。

157.實施方案1-156中任一項的衍生物,其中所述類似物具有8個氨基酸修飾。

158.實施方案1-157中任一項的衍生物,其中所述類似物具有9個氨基酸修飾。

159.實施方案1-158中任一項的衍生物,其中所述類似物具有10個氨基酸修飾。

160.實施方案1-159中任一項的衍生物,其中所述類似物具有11個氨基酸修飾。

161.實施方案1-160中任一項的衍生物,其中所述修飾獨立為取代、添加和/或缺失。

162.實施方案1-161中任一項的衍生物,其中所述修飾獨立為取代和/或缺失。

163.實施方案1-162中任一項的衍生物,其中所述修飾為取代。

164.實施方案1-163中任一項的衍生物,其中所述修飾為缺失。

165.一種化合物,其選自以下:Chem.20、Chem.21、Chem.22、Chem.23、Chem.24、Chem.25、Chem.26、Chem.27、Chem.28、Chem.29、Chem.30、Chem.31、Chem.32、Chem.33、Chem.34、Chem.35、Chem.36、Chem.37、Chem.38、Chem.39、Chem.40、Chem.41、Chem.42、Chem.43、Chem.44、Chem.45、Chem.46、Chem.47、Chem.48、Chem.49、Chem.50、Chem.51、Chem.52、Chem.53、Chem.54、Chem.55、Chem.56、Chem.57、Chem.58、Chem.59、Chem.60、Chem.61、Chem.62、Chem.63、Chem.64、Chem.65、Chem.66、Chem.67、Chem.68、Chem.69、Chem.70、Chem.71、Chem.72、Chem.73、Chem.74、Chem.75、Chem.76、Chem.77、Chem.78、Chem.79、Chem.80、Chem.81、Chem.82、Chem.83、Chem.84、Chem.85、Chem.86、Chem.87、Chem.88、Chem.89、Chem.90、Chem.91、Chem.92、Chem.93、Chem.94、Chem.95、Chem.96、Chem.97、Chem.98、Chem.100、Chem.101、Chem.102、Chem.103、Chem.104、Chem.105、Chem.106、Chem.107、Chem.108、Chem.109、Chem.110、Chem.111、Chem.112、Chem.113、Chem.114、Chem.115、Chem.116、Chem.117、Chem.118、Chem.119、Chem.120、Chem.121、Chem.122、Chem.123、Chem.124、Chem.125、Chem.126、Chem.127、Chem.128、Chem.129、Chem.130、Chem.131、Chem.132、Chem.133、Chem.134和Chem.135。

166.一種化合物,其由其名稱表征并選自本文實施例1-79和81-116的化合物名稱的每一個的列表。

167.實施方案166的化合物,其為實施方案165的化合物。

168.實施方案165和166中任一項的化合物,其為實施方案1-164中任一項的衍生物。

169.實施方案1-168中任一項的衍生物,其選自以下:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.21:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.22:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽;

Chem.38:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.62:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.63:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.93:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.94:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.95:

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε26-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.101:

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε31-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.130:

170.實施方案1-169中任一項的衍生物,其具有以下效能(EC50)

a)10000pM或低于10000pM,優選低于10000pM,更優選低于5000pM,甚至更優選低于4000pM,或最優選低于3000pM;

b)低于2000pM,優選低于1000pM,更優選低于800pM,甚至更優選低于600pM,或最優選低于500pM;

c)低于400pM,優選低于300pM,更優選低于200pM,甚至更優選低于150pM,或最優選低于100pM;或

d)低于80pM,優選低于60pM,更優選低于50pM,甚至更優選低于40pM,或最優選低于30pM。

171.實施方案1-170中任一項的衍生物,其中所述效能測定為在含有人GLP-1受體的培養基中對cAMP形成的刺激,優選用穩定轉染的細胞系例如BHK467-12A(tk-ts13)和/或用測定cAN4P的功能受體測定,例如基于內源形成的cAMP和外源添加的生物素-標記的cAN4P之間的競爭,其中測定cAMP更優選用特異性抗體來捕獲,和/或其中甚至更優選的測定為AScreen?cAN4P測定,最優選在實施例148中所述的測定。

172.實施方案1-171中任一項的衍生物,其中比率[在2.0%HSA(高白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50)除以在0.005%HSA(低白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50)]為:

a)至少1,優選至少10,更優選至少20,甚至更優選至少30,或最優選至少40;

b)至少50,優選至少60,更優選至少70,甚至更優選至少80,或最優選至少90;或

c)至少100,優選至少200,更優選至少300,還更優選至少400,甚至更優選至少500,或最優選至少600。

173.實施方案1-172中任一項的衍生物,其在0.005%HSA(低白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50)為

a)低于1000.00nM,優選低于500.00nM,更優選低于100.00nM,或最優選低于50.00nM;或

b)低于10.00nM,優選低于5.00nM,或更優選低于1.00nM。

174.實施方案1-173中任一項的衍生物,其在2.0%HSA(高白蛋白)存在時的GLP-1受體結合親和力(IC50)為

a)低于1000.00nM;或

b)低于500.00nM,優選低于100.00nM,或更優選低于50.00nM。

175.實施方案172-174中任一項的衍生物,其中通過從受體取代125I-GLP-1來測量與GLP-1受體的結合親和力,優選用SPA結合測定。

176.實施方案172-175中任一項的衍生物,其中所述GLP-1受體用穩定轉染的細胞系來制備,所述細胞系優選倉鼠細胞系,更優選幼倉鼠腎細胞系,例如BHK?tk-ts13。

177.實施方案172-176中任一項的衍生物,其中所述IC50值測定為從受體取代50%125I-GLP-1的濃度。

178.實施方案1-177中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為至少40,優選至少50,更優選至少60,還更優選至少70,甚至更優選至少80,或最優選至少100。

179.實施方案1-178中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為至少110,優選至少120,更優選至少130,還更優選至少140,甚至更優選至少150,或最優選至少160。

180.實施方案1-179中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為至少180,優選至少190,更優選至少200,還更優選至少210,甚至更優選至少220,或最優選至少230。

181.實施方案1-180中任一項的衍生物,其中在大鼠空腸中注射所述衍生物溶液后30分鐘測定的衍生物的血漿濃度(pM)除以注射溶液的濃度(μM)(30分鐘時劑量校正的暴露)為至少240,優選至少250,更優選至少260,或最優選至少270。

182.實施方案178-181中任一項的衍生物,其中所述GLP-1衍生物以1000uM濃度與55mg/ml癸酸鈉混合來測定。

183.實施方案178-182中任一項的衍生物,其中使用雄性Sprague?Dawley大鼠,優選體重達到大約240g。

184.實施方案178-183中任一項的衍生物,其中在實驗前讓大鼠禁食大約18小時。

185.實施方案178-184中任一項的衍生物,其中在讓大鼠禁食后并在空腸中注射衍生物之前對其施行全身麻醉。

186.實施方案178-185中任一項的衍生物,其中所述衍生物在空腸近心端(離十二指腸10cm的遠端)或中腸中(離盲腸50cm的近端)給予。

187.實施方案178-186中任一項的衍生物,其中用1ml注射器通過導管將100μl所述衍生物注入空腸腔中,隨后用另一注射器將200μl空氣推進空腸腔中,然后讓注射器與導管保持連接以防止回流到導管中。

188.實施方案178-187中任一項的衍生物,其中在所期需的時間間隔從尾靜脈采集血樣(200u1)到EDTA管中,例如在0、10、30、60、120和240分鐘的時間,并在20分鐘內以10000G于4℃離心5分鐘。

189.實施方案178-188中任一項的衍生物,其中將血漿(75ul)分離,立即冷凍并保持在-20℃,直到對衍生物的血漿濃度進行分析。

190.實施方案178-189中任一項的衍生物,其中用LOCI(光激化學發光免疫測定)來分析衍生物的血漿濃度。

191.實施方案1-190中任一項的衍生物,其中所述衍生物在體內有效降低db/db小鼠血糖。

192.實施方案1-191中任一項的衍生物,其中所述衍生物在體內有效降低db/db小鼠體重。

193.實施方案191和192中任一項的衍生物,其中用合適范圍的GLP-1衍生物劑量s.c處理db/db小鼠,以合適間隔來測定血糖和/或體重。

194.實施方案193的衍生物,其中GLP-1衍生物劑量為0.3nmol/kg、1.0nmol/kg、3.0nmol/kg、10nmol/kg、30nmol/kg和100nmol/kg,其中kg指小鼠體重。

195.實施方案191-194中任一項的衍生物,其中用溶媒s.c處理對照組,優選GLP-1衍生物溶解于其中的培養基例如具以下組成:50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH7.4。

196.實施方案191-195中任一項的衍生物,其中在-1/2h(給藥(t=0)前半小時)和在1、2、4、8、24、48、72和96小時時測定血糖和/或給小鼠稱重。

197.實施方案191-196中任一項的衍生物,其中葡萄糖濃度用葡萄糖氧化酶方法來測量。

198.實施方案191-197中任一項的衍生物,其中

(i)ED50(體重(BW))計算為在皮下給予所述衍生物后24小時引起對Δ(例如降低)BW的半最大效應的劑量;和/或

(ii)ED50(血糖(BG))計算為在皮下給予所述類似物后8小時引起對AUC(曲線下面積)Δ(例如降低)BG的半最大效應的劑量。

199.實施方案191-198中任一項的衍生物,其中存在S形劑量-反應關系,優選具有明確定義的最大反應。

200.實施方案191-199中任一項的衍生物,其中ED50(BG)低于5.00nmol/kg,優選低于4.00nmol/kg,更優選低于3.00nmol/kg,甚至更優選低于2.00nmol/kg,或最優選低于1.00nmol/kg。

201.實施方案191-200中任一項的衍生物,其中ED50(BW)低于5.00nmol/kg,優選低于4.00nmol/kg,更優選低于3.00nmol/kg,甚至更優選低于2.00nmol/kg,或最優選低于1.00nmol/kg。

202.實施方案1-201中任一項的衍生物,其中在小型豬中i.v給予后的終末半衰期(T1/2)為

a)至少8小時,優選至少16小時,更優選至少24小時,甚至更優選至少32小時,或最優選至少40小時;或

b)至少48小時,優選至少60小時,更優選至少72小時,甚至更優選至少80小時,或最優選至少84小時。

203.實施方案202的衍生物,其中所述小型豬為雄性小型豬。

204.實施方案202-203中任一項的衍生物,其中所述小型豬為7-14個月齡,優選重16-35kg。

205.實施方案202-204中任一項的衍生物,其中將小型豬單獨飼養,每天一次或兩次喂食,優選用SDS小型豬飲食。

206.實施方案202-205中任一項的衍生物,其中所述衍生物在適應至少2周后i.v給藥。

207.實施方案202-206中任一項的衍生物,其中在給藥前讓動物禁食大約18小時和給藥后讓動物禁食至少4小時,在整個期間動物可隨意飲水。

208.實施方案202-207中任一項的衍生物,其中將所述GLP-1衍生物溶于50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH7.4中到合適的濃度,優選20-60nmol/ml。

209.實施方案202-208中任一項的衍生物,其中靜脈內注射衍生物以對應于1-2nmol/kg的體積來給予。

210.實施方案1-209中任一項的衍生物,其在小型豬內提高葡萄糖刺激的胰島素分泌。

211.實施方案210的衍生物,其中所述小型豬為雄性小型豬。

212.實施方案210-211中任一項的衍生物,其中所述小型豬為7-14個月齡。

213.實施方案210-212中任一項的衍生物,其中所述小型豬在單獨豬圈中飼養,每天一次或兩次喂食,優選用SDS小型豬飼料。

214.實施方案202-213中任一項的衍生物,其中任選在漸增劑量期間后,在耳后薄皮膚中i.v.或s.c給予單劑量。

215.實施方案202-214中任一項的衍生物,其中在給藥前讓動物禁食大約18小時。

216.實施方案202-215中任一項的衍生物,其中測試了基線組和對應于2-6個不同的血漿濃度水平的多種衍生物給藥組,其中所述基線組為a)溶媒處理或b)不處理。

217.實施方案202-216中任一項的衍生物,其中所述血漿濃度水平為3000-80000pM。

218.實施方案202-217中任一項的衍生物,其中實施1或2小時靜脈內葡萄糖耐量試驗(IVGTT)。

219.實施方案202-218中任一項的衍生物,其中經30秒時間i.v.給予0.3g/kg葡萄糖,在合適時間點采取血樣,例如以下時間點(t=0對應于葡萄糖推注):-10、-5、0、2、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120分鐘。

220.實施方案219的衍生物,其中測定衍生物、葡萄糖和胰島素的血漿濃度。

221.實施方案220的衍生物,其中所述衍生物濃度在t=0分鐘并任選在測試結束時(t=60分鐘或t=120分鐘)測量。

222.實施方案202-221中任一項的衍生物,其中葡萄糖用葡萄糖氧化酶方法分析。

223.實施方案202-222中任一項的衍生物,其中計算胰島素曲線下面積(AUC胰島素),并將其用作胰島素分泌的量度。

224.實施方案202-223中任一項的衍生物,其中對于其至少一個濃度,AUC胰島素比基線AUC胰島素高,優選至少為其110%,更優選至少為其120%,甚至更優選為其130%,或最優選為其140%。

225.實施方案1-224中任一項的衍生物,其在豬中相對于對照(優選溶媒處理或不作處理)引起進食量減少;

任選進食量(0-24小時)可相對于經溶媒處理的對照為90%或更低,優選80%或更低,更優選70%或更低,甚至更優選60%或更低,或最優選50%或更低;

其中進食量(0-24小時)指給予衍生物或溶媒后的第一個24小時。

226.實施方案225的衍生物,其中所述豬為雌性Landrace?Yorkshire?Duroc(LYD)豬。

227.實施方案226的衍生物,其中所述LYD豬為3個月齡,優選具有30-35kg的重量。

228.實施方案225-227中任一項的衍生物,其中讓動物在小組中適應飼養1-2周。

229.實施方案225-228中任一項的衍生物,其中在實驗期間,從星期一上午到星期五下午將動物安置在單獨的圖中用于測量單個食物攝取。

230.實施方案225-229中任一項的衍生物,其中用豬飼料(例如Svinefoder,Antonio)隨意喂養動物。

231.實施方案225-230中任一項的衍生物,其中通過每15分鐘記錄飼料重量在線監測食物攝取,優選用Mpigwin系統。

232.實施方案225-231中任一項的衍生物,其以0.3、1.0、3.0、10或30nmol/kg來給藥,優選將其溶于磷酸鹽緩沖液(50mM磷酸鹽、0.05%吐溫80、pH8),更優選以12、40、120、400或1200nmol/ml的濃度。

233.實施方案225-232中任一項的衍生物,其中將磷酸鹽緩沖液用作溶媒。

234.實施方案225-233中任一項的衍生物,其中在第1天上午給予動物單個皮下劑量的衍生物或溶媒(優選用0.025ml/kg的劑量體積),給藥后測量食物攝取達4天。

235.GLP-1類似物形式的中間產物,與GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO:1)比較,所述類似物包含以下修飾:

(A)?????(i)(8Aib,18K,22E,26R,34R,37K);(ii)(8Aib,18K,22E,26R,31K,34R);(iii)(7Imp,18K,22E,26R,34R,37K);(iv)(8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(v)(8Aib,18K,22E,25V,26R,30E,31K,34G,des35-37);(vi)(8Aib,18K,22E,25V,26H,31K,34G,des35-37);(vii)(8Aib,18K,22E,26R,27K,31H,34R,des36-37);(iix)(18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(ix)(18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(x)(7Imp,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xi)(8S,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xii)(18K,22E,26R,31K,34G,des35-37);(xiii)(8Aib,18K,22E,26R,31K,34G,des35-37);(xiv)(8Aib,18K,22E,23R,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xv)(8Aib,18K,22E,25V,26R,27H,31K,34G,des35-37);(xvi)(7Imp,8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xvii)(18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37);(iixx)(7Imp,18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37);(ixx)(18K,34Q);(xx)(18K,22E,26H,27K,34Q);(xxi)(8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,des34-37);(xxii)(18K,22E,34Q)(xxiii);(8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,34Q);(xxiv)(18K,22E,25V,26R,27K,34Q);(xxv)(18K,22E,25V,26R,31K,34R);(xxvi)(18K,22E,25V,26R,31K,34Q);(xxvii)(18K,22E,25V,26R,31K,34G);(iixxx)(18K,22E,25V,26R,27K,34R);(ixxx)(18K,22E,25V,26R,27K,31H,34R);(xxx)(18K,22E,25V,26R,30K,34G,des35-37);(xxxi)(8Aib,18K,22E,26R,30K,34R);(xxxii)(18K,22E,25V,26R,30K,31H,34G,des35-37);(xxxiii)(18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37);(xxxiv)(18K,22E,23E,25V,26R,27K,34R);(xxxv)(18K,22E,23E,25V,26R,27K,34Q);(xxxvi)(18K,22E,26H,27K,34R);(xxxvii)(18K,22E,26H,27K,31H,34R);(iixxxx)(8Aib,18K,22E,25V,26R,27L,des35-37);(ixxxx)(18K,22E,25V,26R,31H,des35-37);(xxxx)(18K,26H,27K,34Q);(xxxxi)(8Aib,18K,26V,27K,34R);(xxxxii)(18K,26H,31K,34R);(xxxxiii)(8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34R);(xxxxiv)(18K,25V,26R,31K,34R);(xxxxv)(18K,22E,26R,31K,34R);(xxxxvi)(8Aib,18K,26H,30K,34R,des36-37);(xxxxvii)(8Aib,18K,22E,26R,30K,34R,des36-37);(iixxxxx)(8Aib,18K,22E,34R);(ixxxx)(8Aib,18K,34Q);(xxxxx)(8Aib,18K,22E,34R)和(xxxxxi)(8Aib,18K,25V,26R,31K,34R);

其中所述類似物優選選自以下GLP-1(7-37)(SEQ?ID?NO;1)的類似物:

(B)?????(i-a)(8Aib,18K,22E,26R,34R,37K);(ii-a)(8Aib,18K,22E,26R,31K,34R);(iii-a)(7Imp,18K,22E,26R,34R,37K);(iv-a)(8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(v-a)(8Aib,18K,22E,25V,26R,30E,31K,34G,des35-37);(vi-a)(8Aib,18K,22E,25V,26H,31K,34G,des35-37);(vii-a)(8Aib,18K,22E,26R,27K,31H,34R,des36-37);(iix-a)(18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(ix-a)(18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(x-a)(7Imp,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xi-a)(8S,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xii-a)(18K,22E,26R,31K,34G,des35-37);(xiii-a)(8Aib,18K,22E,26R,31K,34G,des35-37);(xiv-a)(8Aib,18K,22E,23R,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xv-a)(8Aib,18K,22E,25V,26R,27H,31K,34G,des35-37);(xvi-a)(7Imp,8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34G,des35-37);(xvii-a)(18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37);(iixx-a)(7Imp,18K,22E,26R,27K,31H,34G,des35-37);(ixx-a)(18K,34Q);(xx-a)(18K,22E,26H,27K,34Q);(xxi-a)(8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,des34-37);(xxii-a)(18K,22E,34Q)(xxiii-a);(8Aib,18K,22E,25V,26R,27K,34Q);(xxiv-a)(18K,22E,25V,26R,27K,34Q);(xxv-a)(18K,22E,25V,26R,31K,34R);(xxvi-a)(18K,22E,25V,26R,31K,34Q);(xxvii-a)(18K,22E,25V,26R,31K,34G);(iixxx-a)(18K,22E,25V,26R,27K,34R);(ixxx-a)(18K,22E,25V,26R,27K,31H,34R);(xxx-a)(18K,22E,25V,26R,30K,34G,des35-37);(xxxi-a)(8Aib,18K,22E,26R,30K,34R);(xxxii-a)(18K,22E,25V,26R,30K,31H,34G,des35-37);(xxxiii-a)(18K,22E,25V,26R,27L,30K,34G,des35-37);(xxxiv-a)(18K,22E,23E,25V,26R,27K,34R);(xxxv-a)(18K,22E,23E,25V,26R,27K,34Q);(xxxvi-a)(18K,22E,26H,27K,34R);(xxxvii-a)(18K,22E,26H,27K,31H,34R);(iixxxx-a)(8Aib,18K,22E,25V,26R,27L,des35-37);(ixxxx-a)(18K,22E,25V,26R,31H,des35-37-a);(xxxx-a)(18K,26H,27K,34Q);(xxxxi-a)(8Aib,18K,26V,27K,34R);(xxxxii-a)(18K,26H,31K,34R);(xxxxiii-a)(8Aib,18K,22E,25V,26R,31K,34R);(xxxxiv-a)(18K,25V,26R,31K,34R);(xxxxv-a)(18K,22E,26R,31K,34R);(xxxxvi-a)(8Aib,18K,26H,30K,34R,des36-37);(xxxxvii-a)(8Aib,18K,22E,26R,30K,34R,des36-37);(iixxxxx-a)(8Aib,18K,22E,34R);(ixxxx-a)(8Aib,18K,34Q);(xxxxx-a)(8Aib,18K,22E,34R);(xxxxxi-a)(8Aib,18K,25V,26R,31K,34R);(xxxxxii-a)(8Aib,18K,34R);和(xxxxxiii-a)(18K,34R);

或(A)或(B)的類似物中任一個的藥學上可接受的鹽、酰胺或酯。

236.一種中間產物或其藥學上可接受的鹽、酰胺或酯,其選自以下:

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-氨基-4-羧基丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-氨基-4-羧基丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Val26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽;

Chem.137:

其中*表示離去基團,例如i)-OH或ii)活性酯,例如O-琥珀酰亞氨基酯(OSu)或iii)類似基團,可能后來與例如目的肽的賴氨酸殘基的氨基連接。

237.實施方案1-236中任一項的衍生物,其用作藥物。

238.實施方案1-236中任一項的衍生物,其用于以下用途:用于治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展。

239.實施方案1-236中任一項的衍生物用于制備用于以下的藥物的用途:用于治療和/或預防所有形式的糖尿病和相關疾病,例如進食障礙、心血管疾病、胃腸疾病、糖尿病并發癥、危重病和/或多囊性卵巢綜合征;和/或用于改進脂質參數、改進β-細胞功能;和/或用于延遲或防止糖尿病進展。

實施例

本實驗部分以縮寫列表開始,接著包括用于合成及表征本發明類似物和衍生物的通用方法的部分。然后是涉及制備特定GLP-1衍生物的多個實施例,最后是包括涉及這些類似物和衍生物的活性和性質的多個實施例(標題為藥理學方法的部分)。

實施例用于闡明本發明。

縮寫列表

Aib:α-氨基異丁酸

API:活性藥物成分

AUC:曲線下面積

BG:血糖

BHK:幼倉鼠腎

BW:體重

Boc:叔丁氧基羰基

Bom:芐氧基甲基

BSA:牛血清白蛋白

Bzl:芐基

CAS:化學文摘服務

Clt:2-氯三苯甲基

collidine:2,4,6-三甲基吡啶

DCM:二氯甲烷

Dde:1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代環亞環己基)乙基

DesH:脫氨基組氨酸(也可稱為咪唑丙酸,Imp)

DIC:二異丙基碳二亞胺

DIPEA:二異丙基乙胺

DMEM:Dulbecco改良Eagle氏培養基(DMEM)

EDTA:乙二胺四乙酸

EGTA:乙二醇四乙酸

FCS:胎牛血清

Fmoc:9-芴基甲氧基羰基

HATU:(O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽)

HBTU:(2-(1H-苯并三唑-1-基-)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽)

HEPES:4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸

HFIP:1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇或六氟異丙醇

HOAt:1-羥基-7-氮雜苯并三唑

HOBt:1-羥基苯并三唑

HPLC:高效液相色譜

HSA:人血清白蛋白

IBMX:3-異丁基-1-甲基黃嘌呤

Imp:咪唑丙酸(亦被稱為脫氨基組氨酸,DesH)

i.v.:靜脈內

ivDde:1-(4,4-二甲基-2,6--二氧代環亞環己基)-3-甲基丁基

IVGTT:靜脈葡萄糖耐量試驗

LCMS:液相色譜質譜

LYD:Landrace?Yorkshire?Duroc

MALDI-MS:參見MALDI-TOF?MS

MALDI-TOF?MS:基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜

MeOH:甲醇

Mmt:4-甲氧基三苯甲基

Mtt:4-甲基三苯甲基

NMP:N-甲基吡咯烷酮

OBz:苯甲酰酯

OEG:8-氨基-3,6-二氧雜辛酸

OPfp:五氟苯氧基

OPnp:對硝基苯氧基

OSu:O-琥珀酰亞氨基酯(羥基琥珀酰亞胺酯)

OtBu:叔丁酯

Pbf:2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺酰基

PBS:磷酸鹽緩沖鹽水

PD:藥效動力學

Pen/Strep:青霉素/鏈霉素

PK:藥代動力學

RP:反相

RP-HPLC:反相高效液相色譜

RT:室溫

Rt:保留時間

s.c.:皮下

SD:標準偏差

SEC-HPLC:尺寸排阻高效液相色譜

SEM:均值的標準差

SPA:閃爍鄰近測定

SPPS:固相肽合成

tBu:叔丁基

TFA:三氟乙酸

TIS:三異丙基硅烷

TLC:薄層色譜

Tos:甲苯磺酸酯(或對甲苯磺酰基)

Tris:三(羥甲基)氨基甲烷或2-氨基-2-羥基甲基-丙烷-1,3-二醇

Trt:三苯基甲基(三苯甲基)

Trx:氨甲環酸

UPLC:超高效液相色譜

材料和方法

材料

N-α,N-β-二-Fmoc-L-2,3-二氨基丙酸(CAS201473-90-7)

3,5-二-叔丁基-4-羥基苯甲酸(CAS1421-49-4)

3,5-二-叔丁基苯甲酸(CAS16225-26-6)

Fmoc-8-氨基-3,6-二氧雜辛酸(CAS166108-71-0)

17-(9-芴基甲氧基羰基-氨基)-9-氮雜-3,6,12,15-四氧雜-10-on-十七烷酸(IRIS?Biotech?GmbH)

Fmoc-L-谷氨酸1-叔丁酯(CAS84793-07-7)

2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸(CAS16024-56-9)

N-α,N-ε-雙(9-芴基甲氧基羰基)-L-賴氨酸(CAS78081-87-5)

1-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]哌啶-4-羧酸(CAS148928-15-8)

FMOC-8-氨基辛酸(CAS126631-93-4)

4-苯基丁酸(CAS1716-12-7)

4-(4-硝基苯基)丁酸(CAS5600-62-4)

4-(4-氯苯基)丁酸(CAS4619-18-5)

FMOC-6-氨基己酸(CAS88574-06-5)

FMOC-12-氨基十二烷酸(CAS128917-74-8)

4-(9-羧基-壬氧基)-苯甲酸叔丁酯(如在WO2006/082204的實施例25,步驟1和2中所述制備)

4-(8-羧基-辛氧基)-苯甲酸叔丁酯(M.p.:71-72℃。

1H?NMR(300mHz,CDCl3,δH):7.93(d,J=8.9Hz,2H);6.88(d,J=8.9Hz,2H);4.00(t,J=6.4Hz,2H);2.36(t,J=7.4Hz,2H);1.80(m,2H);1.65(m,2H);1.59(s,9H);1.53-1.30(m,8H)(如在WO2006/082204的實施例25,步驟1和2中所述制備,用9-溴壬酸乙酯(CAS28598-81-4)代替10-溴癸酸甲酯)

4-(7-羧基-庚氧基)-苯甲酸叔丁酯(1H?NMR波譜(300mHz,CDCl3,δH):7.93(d,J=9.0Hz,2H);6.88(d,J=9.0Hz,2H);4.00(t,J=6.5Hz,2H);2.37(t,J=7.4Hz,2H);1.80(m,2H);1.64(m,2H);1.59(s,9H);1.53-1.33(m,6H))(如在WO2006/082204的實施例25,步驟1和2中所述制備,用7-溴庚酸乙酯(CAS29823-18-5)代替10-溴癸酸甲酯)

化學方法

本部分分成兩部分:部分A和部分B,部分A涉及通用方法(制備(A1);和檢測和表征(A2)),在部分B中描述多種具體實施例化合物的制備和表征。

A.通用方法

A1.制備方法

本部分涉及用于固相肽合成(SPPS方法,包括用于脫去氨基酸保護的方法、用于從樹脂裂解肽及用于其純化的方法)的方法,以及用于檢測和表征得到的肽(LCMS、MALDI和UPLC方法)的方法。在某些情況下,可通過利用二-肽酰胺鍵上受保護的二-肽與在酸性條件下可被裂解的基團來改進肽的固相合成,所述酸性條件下可被裂解的基團例如但不限于2-Fmoc-氧基-4-甲氧基芐基或2,4,6-三甲氧基芐基。在其中肽中存在絲氨酸或蘇氨酸的情況下,可使用假脯氨酸二-肽(可例如自Novabiochem獲得,亦參見W.R.Sampson(1999),J.Pep.Sci.5,403)。所用的Fmoc-保護的氨基酸衍生物為由例如Anaspec、Bachem、Iris?Biotech或NovabioChem供應的推薦的標準物:Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH或Fmoc-Val-OH等。如果沒有另外指定,則使用氨基酸的天然L-形式。N-末端氨基酸在α氨基上受到Boc保護(例如用于N-末端含His的肽的Boc-His(Boc)-OH或Boc-His(Trt)-OH)。在用SPPS模塊(modular)白蛋白結合部分連接的情況下,使用以下適宜保護的結構單元,例如但不限于Fmoc-8-氨基-3,6-二氧雜辛酸、Fmoc-氨甲環酸、Fmoc-Glu-OtBu、十八烷二酸單-叔丁酯、十九烷二酸單-叔丁酯、十四烷二酸單-叔丁酯或4-(9-羧基壬氧基)苯甲酸叔丁酯。以下所述所有操作在250-μmol合成規模下實施。

1.結合樹脂的保護的肽主鏈的合成

方法:SPPS_P

在得自Protein?Technologies(Tucson,Az85714U.S.A.)的Prelude固相肽合成儀上實施SPPS_P,以250-μmol規模,相對于樹脂裝載量,用6倍過量的Fmoc-氨基酸(在NMP中300mM,具有300mM?HOAt),例如低載量Fmoc-Gly-Wang(0.35mmol/g)。用20%吡啶/NMP實施Fmoc-脫保護。用3∶3∶3∶4氨基酸/HOAt/DIC/collidine在NMP中實施偶聯。在脫保護和偶聯步驟之間實施NMP和DCM頂部洗滌(7ml,0.5分鐘,每次2×2)。偶聯時間通常為60分鐘。一些氨基酸(包括但不限于Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Aib-OH或Boc-His(Trt)-OH)為“雙偶聯”,意即在第一次偶聯(例如60分鐘)之后,耗盡樹脂并加入更多試劑(氨基酸、HOAt、DIC和collidine),讓混合物再次反應(例如60分鐘)。

方法:SPPS_L

在得自CEM?Corp.(Matthews,NC28106,U.S.A.)的基于微波的Liberty肽合成儀上實施SPPS_L,以250-μmol或100-μmol規模,相對于樹脂裝載量,用6倍過量的Fmoc-氨基酸(在NMP中300mM,具有300mM?HOAt),例如低載量Fmoc-Gly-Wang(0.35mmol/g)。用5%吡啶/NMP在高達75℃實施Fmoc-脫保護30秒,其中在樹脂耗盡并用NMP洗滌后,這次在75℃下重復Fmoc-脫保護2分鐘。用1∶1∶1氨基酸/HOAt/DIC在NMP中實施偶聯。偶聯時間和溫度通常為在高達75℃下5分鐘。對于較大規模的反應,使用較長的偶聯時間,例如10分鐘。組氨酸氨基酸在50℃時為雙偶聯,或若前面的氨基酸有空間位阻(例如Aib)為四偶聯。精氨酸氨基酸在RT偶聯25分鐘,然后加熱到75℃達5分鐘。一些氨基酸例如但不限于Aib為“雙偶聯”,意即在第一次偶聯(例如75℃時5分鐘)后,耗盡樹脂并加入更多試劑(氨基酸、HOAt和DIC),并再次加熱混合物(例如75℃時5分鐘)。在脫保護和偶聯步驟之間實施NMP洗滌(5×10ml)。

方法:SPPS_A

受保護的肽基樹脂按照Fmoc策略在Applied?Biosystems433肽合成儀上合成,以250-μmol或1000μmol規模,使用3倍或4倍過量的Fmoc-氨基酸,用制造商供應的FastMoc?UV方案,其采用在NMP中HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基-)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽)或HATU(O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽)介導的偶聯,用UV監測Fmoc保護基的脫保護,在一些情況下,使用雙偶聯,意即在第一次偶聯后,耗盡樹脂并加入更多的Fmoc-氨基酸和試劑。用于合成肽酰胺的起始樹脂為Rink-酰胺樹脂和預裝載的Wang(例如低載量Fmoc-Gly-Wang或Fmoc-Lys(Mtt)-wang)或氯三苯甲基樹脂(對于具有羧基C-末端的肽)。所用的受保護的氨基酸衍生物為標準Fmoc-氨基酸(例如由Anaspec或Novabiochem供應),其在適于ABI433A合成儀的預稱重的筒中供應,非天然氨基酸例如Fmoc-Aib-OH(Fmoc-氨基異丁酸)例外。N-末端氨基酸在α氨基上受到Boc保護(例如Boc-His(Boc)-OH或Boc-His(Trt)-OH用于N-末端含His的肽)。用Mtt、Mmt、Dde、ivDde或Boc來保護序列中賴氨酸的ε氨基,這視用于連接白蛋白結合部分和間隔子的途徑而定。在某些情況下,可通過利用二肽酰胺鍵上受保護的二肽與在酸性條件下可被裂解的基團來改進肽的合成,所述在酸性條件下可被裂解的基團例如但不限于2-Fmoc-氧基-4-甲氧基芐基或2,4,6-三甲氧基芐基。在其中肽中存在絲氨酸或蘇氨酸的情況下,可使用假脯氨酸二肽(參見例如得自Novobiochem2009/2010或更新版本的目錄或W.R.Sampson(1999),J.Pep.Sci.5,403)。

方法:SPPS_M

SPPS_M指用手動Fmoc化學合成受保護的肽基樹脂。偶聯化學為在4-10倍摩爾過量NMP中的DIC/HOAt/collidine。偶聯條件為室溫1-6小時。Fmoc-脫保護如下實施:用20-25%吡啶/NMP(3×20ml,每次10分鐘),接著NMP洗滌(4×20mL)。

2.合成側鏈

脂肪二酸單酯

在甲苯中讓C8、C10、C12、C14、C16和C18二酸與Boc-酐、DMAP和叔丁醇過夜回流,主要產生單叔丁酯。在處理(work-up)單酸、二酸和二酯混合物后收獲。通過洗滌、短柱二氧化硅過濾和結晶來純化。

合成中間體

參見實施例117。

3.側鏈與結合樹脂的受保護的肽主鏈的連接

當在賴氨酸側鏈上存在酰化時,待酰化的賴氨酸的ε氨基被Mtt、Mmt、Dde、ivDde或Boc保護,視延長部分與接頭的連接途徑而定。Dde-或ivDde-脫保護如下實施:用2%肼/NMP(2×20ml,每次10分鐘),接著NMP洗滌(4×20ml)。Mtt-或Mmt-脫保護如下實施:用DCM中的2%TFA和2-3%TIS(5×20ml,每次10分鐘),接著DCM(2×20ml)、DCM中的10%MeOH和5%DIPEA(2×20ml)和NMP(4×20ml)洗滌,或通過用六氟異丙醇/DCM(75∶25,5×20ml,每次10分鐘)處理,接著如上洗滌。在一些情況下,Mtt基團通過自動化步驟在Liberty肽合成儀上被去掉。Mtt脫保護如下實施:用六氟異丙醇或六氟異丙醇/DCM(75∶25)在室溫下30分鐘,接著用DCM(7mi×5)洗滌,接著用NMP(7ml×5)洗滌。可通過結合樹脂的肽的酰化或在未保護的肽溶液中的酰化讓延長部分和/或接頭與肽連接。在延長部分和/或接頭與受保護的肽基樹脂連接的情況下,用SPPS和合適的受保護的結構單元,所述連接可為模塊的。

方法:SC_P

如上所述去掉N-ε-賴氨酸保護基,用如上所述合適的受保護的結構單元,在Prelude肽合成儀上,通過一個或多個自動化步驟實施賴氨酸的化學修飾。如在SPPS_P中所述實施雙偶聯,每次偶聯3小時。

方法:SC_L

如上所述去掉N-ε-賴氨酸保護基,用如上所述合適的受保護的結構單元,在Liberty肽合成儀上,通過一個或多個自動化步驟實施賴氨酸的化學修飾。如在SPPS_L中所述實施雙偶聯。

方法:SC_A

如上所述去掉N-ε-賴氨酸保護基,用在SPPS_A中所述的合適的受保護的結構單元,在ABI肽合成儀上,通過一個或多個自動化步驟實施賴氨酸的化學修飾。

方法:SC_M1

如上所述去掉N-ε-賴氨酸保護基。將活化的(活性酯或對稱酸酐)延長部分或接頭例如十八烷二酸單-(2,5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(Ebashi等,EP511600,相對于結合樹脂的肽為4摩爾當量)溶于NMP(25mL)中,加到樹脂中,室溫振蕩過夜。過濾反應混合物,用NMP、DCM、2-丙醇、甲醇和二乙醚徹底洗滌樹脂。

方法:SC_M2

如上所述去掉N-ε-賴氨酸保護基。將延長部分溶于NMP/DCM(1∶1,10ml)中。加入活化試劑例如HOBt(相對于樹脂為4摩爾當量)和DIC(相對于樹脂為4摩爾當量),將溶液攪拌達15分鐘。將溶液加到樹脂中,加入DIPEA(相對于樹脂為4摩爾當量)。在室溫將樹脂振蕩2-24小時。用NMP(2×20ml)、NMP/DCM(1∶1,2×20ml)和DCM(2×20ml)洗滌樹脂。

方法:SC_M3

將活化的(活性酯或對稱酸酐)延長部分或接頭例如十八烷二酸單-(2,5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(Ebashi等,EP511600)以相對于肽為1-1.5摩爾當量溶于有機溶劑(例如乙腈、THF、DMF、DMSO)或水/有機溶劑混合物(1-2ml)中,將其連同10摩爾當量DIPEA加入到肽的水溶液(10-20ml)中。在延長部分上的保護基為例如叔丁基的情況下,過夜凍干反應混合物,此后將分離的粗肽脫保護。在叔丁基保護基情況下,通過讓肽溶解在三氟乙酸、水和三異丙基硅烷(90∶5∶5)混合物中實施脫保護。30分鐘后真空中蒸發混合物,如后所述通過制備型HPLC純化粗肽。

4.裂解含有或不含連接的側鏈的結合樹脂的肽和純化

方法:CP_M1

合成后用DCM洗滌樹脂,如下從樹脂裂解肽:通過用TFA/TIS/水(95/2.5/2.5或92.5/5/2.5)處理2-3小時,接著用二乙醚沉淀。讓肽溶于合適的溶劑(例如30%乙酸)中,通過標準RP-HPLC在C18,5μM柱上用乙腈/水/TFA純化。通過聯合UPLC、MALDI和LCMS方法來分析流分,合并合適的流分并凍干。

方法:CP_L1

合成后用DCM洗滌樹脂,通過使用CEM?Accent微波裂解系統(CEM?Corp.,North?Carolina)由樹脂裂解肽。如下實施在38℃從樹脂裂解30分鐘:用TFA/TIS/水(95/2.5/2.5)處理,接著用二乙醚沉淀。讓肽溶于合適的溶劑(例如30%乙酸)中,通過標準RP-HPLC在C18,5μM柱上用乙腈/水/TFA純化。通過聯合UPLC、MALDI和LCMS方法來分析流分,合并合適的流分并凍干。

A2.檢測和表征的通用方法

1.LC-MS方法

方法:LCMS_1

從Agilent1200series?HPLC系統洗脫后,用Agilent?Technologies?LC/MSD?TOF(G1969A)質譜儀鑒定樣品質量。用Agilent的蛋白質確認軟件計算蛋白質波譜的去卷積。洗脫液:A:0.1%三氟乙酸/水;B:0.1%三氟乙酸/乙腈。柱:zorbax5u,300SB-C3,4.8×50mm。梯度:經15分鐘25%-95%B。

方法:LCMS_2

自Perkin?Elmer?Series200HPLC系統洗脫后,用Perkin?Elmer?Sciex?API3000質譜儀鑒定樣品的質量。洗脫液:A:0.05%三氟乙酸/水;B:0.05%三氟乙酸/乙腈。柱:Waters?Xterra?MS?C-18×3mm內徑5μm。梯度:經7.5分鐘以1.5ml/分鐘5%-90%B。

方法:LCMS_3

自Waters?Alliance?HT?HPLC系統洗脫后,用Waters?Micromass?zQ質譜儀鑒定樣品的質量。洗脫液:A:0.1%三氟乙酸/水;B:0.1%三氟乙酸/乙腈。柱:Phenomenex,Jupiter?C450×4.60mm內徑5μm。梯度:經7.5分鐘以1.0ml/分鐘10%-90%B。

方法:LCMS_4

在由Waters?Acquity?UPLC系統和來自Micromass的LCT?Premier?XE質譜儀組成的裝置上實施LCMS4。洗脫液:A:0.1%蟻酸/水;B:0.1%蟻酸/乙腈。于RT通過將合適的樣品體積(優選2-10μl)注入柱來實施分析,其用A和B的梯度洗脫。UPLC條件、檢測儀設置和質譜儀設置為:柱:Waters?Acquity?UPLC?BEH,C-18,1.7μm,2.1mm×50mm。梯度:4.0分鐘(或者8.0分鐘)期間以0.4ml/分鐘線性5%-95%乙腈。檢測:214nm(從TUV(可調UV檢測儀)模擬輸出)。MS電離方式:API-ES。掃描:100-2000amu(或者500-2000amu),步長0.1amu。

方法:LCMS_AP

自由Waters2525二元梯度模塊、Waters2767樣品處理器、Waters2996光電二極管排列檢測器和Waters2420ELS檢測器組成的HPLC系統洗脫后,Micromass?Quatro?micro?API質譜儀用于鑒定樣品的質量。洗脫液:A:0.1%三氟乙酸/水;B:0.1%三氟乙酸/乙腈。柱:Phenomenex?Synergi?MAXRP,4um,75×4.6mm。梯度:經7分鐘以1.0ml/分鐘5%-95%B。

2.UPLC方法

方法:05_B5_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:0.2M?Na2SO4、0.04M?H3PO4、10%CH3CN(pH3.5);B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經8分鐘以流速0.40ml/分鐘實現60%A、40%B到30%A、70%B。

方法:05_B7_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACOUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:0.2M?Na2SO4、0.04M?H3PO4、10%CH3CN(pH3.5);B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經8分鐘以流速0.40ml/分鐘實現80%A、20%B到40%A、60%B。

方法:05_B9_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:0.2M?Na2SO4、0.04M?H3PO4、10%CH3CN(pH3.5);B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經8分鐘以流速0.40ml/分鐘實現70%A、30%B到20%A、80%B。

方法:04_A2_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:90%H2O、10%CH3CN、0.25M碳酸氫銨;B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經16分鐘以流速0.40ml/分鐘實現90%A、10%B到60%A、40%B。

方法:04_A3_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:90%H2O、10%CH3CN、0.25M碳酸氫銨;B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經16分鐘以流速0.40ml/分鐘實現75%A、25%B到45%A、55%B。

方法:04_A4_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:90%H2O、10%CH3CN、0.25M碳酸氫銨;B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經16分鐘以流速0.40ml/分鐘實現65%A、35%B到25%A、65%B。

方法:04_A6_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:10mM?TRIS、15mM硫酸銨、80%H2O、20%CH3CN、pH7.3;B:80%CH3CN、20%H2O。使用以下線性梯度:經16分鐘經以流速0.35ml/分鐘實現95%A、5%B到10%A、90%B。

方法:04_A7_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:10mM?TRIS、15mM硫酸銨、80%H2O、20%CH3CN、pH7.3;B:80%CH3CN、20%H2O。使用以下線性梯度:經16分鐘經以流速0.40ml/分鐘實現95%A、5%B到40%A、60%B。

方法:B2_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFA。使用以下線性梯度:經16分鐘經以流速0.40ml/分鐘實現95%A、5%B到40%A、60%B。

方法:B4_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFA。使用以下線性梯度:經16分鐘經以流速0.40ml/分鐘實現95%A、5%B到95%A、5%B。

方法:05_B10_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:0.2M?Na2SO4、0.04M?H3PO4、10%CH3CN(pH3.5);B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經8分鐘以流速0.40ml/分鐘實現40%A、60%B到20%A、80%B。

方法:10_B14_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH?ShieldRP18,1.7um,2.1mm×150mm柱于50℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFA。使用以下線性梯度:經12分鐘經以流速0.40ml/分鐘實現70%A、30%B到40%A、60%B。

方法:05_B8_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:0.2M?Na2SO4、0.04M?H3PO4、10%CH3CN(pH3.5);B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下線性梯度:經8分鐘以流速0.40ml/分鐘實現50%A、50%B到20%A、80%B。

方法:08_B29_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用kinetex1.7u?C18,100A2.1×150mm柱于60℃采集215nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:90%水和10%CH3CN含有0.045M(NH4)2HPO4、pH3.6,B:20%異丙醇、20%水和60%CH3CN。使用以下步進梯度:以流速0.5ml/分鐘實現經2分鐘35%B和65%A,接著經15分鐘35%B、65%A到65%B、35%A,接著經3分鐘65%B、35%A到80%B、20%A。

方法:10_B29_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用kinetex1.7u?C18,100A2.1×150mm柱于60℃采集215nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:90%水和10%CH3CN含有0.045M(NH4)2HPO4、pH3.6,B:20%異丙醇、20%水和60%CH3CN。使用以下步進梯度:以流速0.5ml/分鐘實現經2分鐘35%B和65%A,接著經15分鐘35%B、65%A到65%B、35%A,接著經3分鐘65%B、35%A到80%B、20%A。

方法:10_B31_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用kinetex1.7u?C18,100A2.1×150mm柱于60℃采集215nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:90%水和10%MeCN含有0.045M(NH4)2HPO4、pH3.6,B:20%異丙醇、20%水和60%CH3CN。使用以下步進梯度:以流速0.5ml/分鐘實現經2分鐘25%B和75%A,接著經15分鐘25%B、75%A到55%B、45%A,接著經3分鐘55%B、45%A到80%B、20%A。

方法:AP_B4_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于30℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFA。使用以下線性梯度:經16分鐘經以流速0.30ml/分鐘實現95%A、5%B到5%A、95%B。

方法:04_A9_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH?Shield?RP18,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于60℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:200mM?Na2SO4+20mM?Na2HPO4+20mM?NaH2PO4在90%H2O/10%CH3CN中、pH7.2;B:70%CH3CN、30%H2O。使用以下步進梯度:以流速0.40ml/分鐘實現經3分鐘90%A、10%B到80%A、20%B,經17分鐘80%A、20%B到50%A、50%B。

方法:B2_1

用裝配雙波段檢測儀的Waters?UPLC系統實施RP-分析。用ACQUITY?UPLC?BEH130,C18,1.7um,2.1mm×150mm柱于40℃采集214nm和254nm處的UV檢測。將UPLC系統與含有以下物質的兩個洗脫液池連接:A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFA。使用以下線性梯度:經16分鐘經以流速0.40ml/分鐘實現95%A、5%B到40%A、60%B。

3.MALDI-MS方法

方法:MALDL_MS

用基質輔助激光解吸和電離飛行時間質譜測定分子量,在Microflex或Autoflex(Bruker)上記錄。使用基質α-氰基-4-羥基肉桂酸。

B.具體實施例化合物

實施例1

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε37-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.20:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.15分鐘;m/z:5029.7;M/3:1677;M/4:1258;M/5:1006

UPLC方法:B4_1:Rt=8.45分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=8.55分鐘

實施例2

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.21:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.29分鐘,m/z:4902.3

UPLC方法:B4_1Rt=8.83分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.77分鐘

實施例3

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.22:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.18分鐘;m/z:4900.5;M/3:1634;M/4:1226;M/5:980

UPLC:方法:B4_1:Rt=7.90分鐘

UPLC:方法:04_A3_1:Rt=5.68分鐘

實施例4

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε37-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.23:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.53分鐘;m/z:5000.6;M/5:1001;M/4:1250;M/3:1667

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.56分鐘

UPLC:方法:04_A3_1,Rt=8.19分鐘

實施例5

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.24:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過方法:MALDI_MS證實4459.1Da的理論分子量:m/z:4457

UPLC方法:B4_1:Rt=9.1分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=7.3分鐘

實施例6

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Glu30,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.25:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=3.14分鐘,m/z:4516.0

UPLC方法:B2_1:Rt=14.25分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=6.20分鐘

實施例7

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,His26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.26:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.93分鐘,m/z:4439.0

UPLC方法:B2_1:Rt=13.91分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.67分鐘

實施例8

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.27:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.87分鐘;m/z:4401.8;M/3:1468.07;M/4:1101.3

UPLC方法:B4_1:Rt=8.4分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=5.3分鐘

實施例9

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Arg34]-GLP-1-(7-35)-肽

Chem.28:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.66分鐘;m/z:4594.3;M/3:1532.1;M/4:1149.33;M/5:914.9

UPLC方法:B4_1:Rt=7.9分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=5.5分鐘

實施例10

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.29:

制備方法:SPPS_L;SPPS_M;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.60分鐘;m/3:1481;m/4:1111;m/5:889

UPLC方法:B2_1:Rt=13.67分鐘

UPLC方法:04_A2_1:Rt=14.96分鐘

實施例11

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.30:

制備方法:SPPS_L;SPPS_M;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.60分鐘;m/z:m/3:1463;m/4:1097;m/5:877

UPLC方法:B2_1:Rt=12.64分鐘

UPLC方法:04_A2_1:Rt=13.65分鐘

實施例12

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.31:

制備方法:SPPS_L;SPPS_M;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.65分鐘;m/z:m/3:1476;m/4:1107;m/5:886

UPLC方法:B2_1:Rt=14.11分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=7.06分鐘

實施例13

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.32:

制備方法:SPPS_L;SPPS_M;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.53分鐘;m/3=1458;m/4=1093;m/5=874

UPLC方法:B2_1:Rt=13.01分鐘

實施例14

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Ser8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.33:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.70分鐘;m/z:m/3=1487m/4=1115m/5=892

UPLC方法:B2_1:Rt=13.92分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.88分鐘

實施例15

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.34:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.63分鐘;m/3=1472;m/4=1104;m/5=883

UPLC方法:B2_1:Rt=13.39分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.95分鐘

實施例16

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.35:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.67分鐘;m/z:m/3=1477;m/4=1107;m/5=886

UPLC方法:B2_1:Rt=13.42分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.10分鐘

實施例17

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg23,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.36:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_2:Rt=4.32分鐘;m/z:m/3=1496

UPLC方法:B4_1:Rt=8.72分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=7.96分鐘

實施例18

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,His27,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem37:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.73分鐘;m/z:M/3:1489.0;M/4:1116.8

UPLC方法:B4_1:Rt=8.69分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=7.95分鐘

實施例19

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.38:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.91分鐘,m/z:m/3=1520.0;m/4=1140.3;m/5=912.7

UPLC方法:B2_1:Rt=13.85分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=7.68分鐘

實施例20

Nε18-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.39:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.93分鐘;m/3:1389;m/4:1042;m/5:833

UPLC方法:B2_1:Rt=14.07分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=8.39分鐘

實施例21

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.40:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.80分鐘;m/3:1481;m/4:1111;m/5:888

UPLC方法:B2_1:Rt=14.32分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=8.38分鐘

實施例22

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.41:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.70分鐘;m/3=1462m/4=1097m/5=877

UPLC方法:B2_1:Rt=6.87分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=13.30分鐘

實施例23

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,G1u22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.42:

制備方法:SPPS_L;SC_L;SC_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.78分鐘;m/3:1638;m/4:1228;m/5:983

UPLC方法:B4_1:Rt=10.40分鐘

UPLC方法:04_A4_1:Rt=5.66分鐘

實施例24

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.43:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.65分鐘,m/z:m/3=1470.7m/4=1103.0m/5=882.9

UPLC方法:B2_1:Rt=12.27分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=6.50分鐘

實施例25

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Ser8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.44:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.69分鐘,m/z:1/3=1468.7;1/4=1101.8

UPLC方法:B2_1:Rt=12.80分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=5.97分鐘

實施例26

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.45:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過方法:MALDI_MS證實4467.13Da的理論分子量:m/z:4466.3

UPLC方法:B4_1:Rt=8.52分鐘

UPLC方法:04_A3_1:Rt=7.06分鐘

實施例27

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,His26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.46:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

通過MALDI-MS(α-氰基)證實4383.9Da的理論分子量;m/z:4382.6

UPLC方法:B2_1:Rt=12.8分鐘

實施例28

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.47:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_2:Rt=4.22分鐘;m/z:4166.8;M/3:1390;M/4:1043

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.81分鐘

UPLC:方法:05_B8_1:Rt=4.64分鐘

UPLC:方法:04_A3_1:Rt=8.52分鐘

實施例29

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε27-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.48:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_2:Rt=4.13分鐘;m/z:4425.0;M/3:1476;M/4:1108:

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.43分鐘

UPLC:方法:05_B8_1:Rt=4.20分鐘

實施例30

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.49:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=1.96分鐘;m/z:4525.1;M/3:1509;M/4:1132

UPLC:方法:05_B5_1:Rt=5.29分鐘

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.18分鐘

實施例31

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.50:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.17分鐘;m/z:4151.8;M/3:1385;M/4:1039

UPLC:方法:05_B8_1:Rt=4.45分鐘

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.88分鐘

UPLC:方法:04_A3_1:Rt=8.96分鐘

實施例32

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],N827-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.51:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.12分鐘;m/z:4410.0;M/3:1470;M/4:1103

UPLC:方法:05_B5_1:Rt=6.57分鐘

UPLC:方法:05_B8_1:Rt=3.81分鐘

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.59分鐘

UPLC:方法:04_A3_1:Rt=6.60分鐘

實施例33

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.52:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.04分鐘;m/z:4510.1;M/3:1504;M/4:1128

UPLC:方法:05_B5_1:Rt=5.79分鐘

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.36分鐘

UPLC:方法:04_A3_1:Rt=5.57分鐘

實施例34

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.53:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過MALDI_MS證實4816.4Da的理論分子量:m/z:4819.5

UPLC方法:B4_1:Rt=8.85分鐘

UPLC方法:05_B8_1:Rt=3.42分鐘

實施例35

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,His26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.54:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過MALDI_MS證實4896.5Da的理論分子量:m/z:4896

UPLC方法:B4_1:Rt=8.65分鐘

UPLC方法:05_B8_1:Rt=2.98分鐘

實施例36

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε31-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.55:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過MALDI_MS證實4459.1Da的理論分子量:m/z:4458.8

UPLC方法:B4_1:Rt=9.28分鐘

UPLC方法:05_B8_1:Rt=5.6分鐘

實施例37

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31]-GLP-1-(7-33)-肽酰胺

Chem.56:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過MALDI_MS證實4401.1Da的理論分子量:m/z:4401.3

UPLC方法:B4_1:Rt=8.65分鐘

UPLC方法:05_B8_1:Rt=4.47分鐘

實施例38

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.57:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.23分鐘,m/z:4888.5

UPLC方法:B2_1:Rt=13.59分鐘

UPLC方法:04_A7_1:Rt=5.03分鐘

實施例39

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.58:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.03分鐘;m/z:4744.8;m/3:1582;m/4:1187;m/5:950

UPLC方法:B2_1:Rt=12.80分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.64分鐘

實施例40

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Ne26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.59:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.03分鐘;m/3:1577;m/4:1183;m/5:946(1A)

UPLC方法:B2_1:Rt=12.76分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.54

實施例41

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.60:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.51分鐘,m/z:4957.6

UPLC方法:B2_1:Rt=13.57分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.50分鐘

實施例42

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.61:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.31分鐘,m/z:4942.3

UPLC方法:B2_1:Rt=13.53分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.34分鐘

實施例43

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.62:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.92分鐘;m/z:4815;m/3:1605;m/4:1204;m/5:963

UPLC方法:B2_1:Rt=12.32分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.28分鐘

實施例44

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.63:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.03分鐘;m/3:1595;m/4:1197;m/6:957

UPLC方法:B2_1:Rt=12.99分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.48分鐘

實施例45

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gly34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.64:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.03分鐘;m/3=1572;m/4=1179;m/5=943;

UPLC方法:B2_1:Rt=13.19分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.00分鐘

實施例46

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-l-(7-37)-肽

Chem.65:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.05分鐘;m/3:1624;m/4:1218;m/5:975;

UPLC方法:B2_1:Rt=13.08分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.32分鐘

實施例47

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,His31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.66:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.87分鐘;m/3:1608;m/4:1206;m/5:965;m/6:804

UPLC方法:B2_1:Rt=11.79分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=7.23分鐘

實施例48

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.67:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.13分鐘;m/3:1615;m/4:1211;m/5:969

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.59分鐘

UPLC方法:B2_1:Rt=13.55分鐘

實施例49

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε27-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.68:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.12分鐘;m/z:4525.1;M/3:1509;M/4:1132

UPLC:方法:05_B5_1:Rt=5.54分鐘

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.50分鐘

UPLC:方法:04_A7_1:Rt=7.02分鐘

UPLC:方法:04_A3_1:Rt=7.83分鐘

實施例50

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε30-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lysl8,Glu22,Val25,Arg26,Lys30,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.69:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過MALDI_MS證實4560.2Da的理論分子量:m/z:4559

UPLC方法:B4_1:Rt=9.89分鐘

實施例51

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε30-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Lys30,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.70:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.05分鐘;m/z:4916.5;M/3:1639;M/4:1229;M/5:983

UPLC方法:B4_1:Rt=8.38分鐘

實施例52

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],N830-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys30,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.71:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.27分鐘,m/z:4510.9

UPLC方法:B2_1:Rt=13.51分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=7.42分鐘

實施例53

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε30-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Leu27,Lys30,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.72:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.72分鐘,m/z:4544.0

UPLC方法:B4_1:Rt=10.34分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=10.24分鐘

實施例54

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.73:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.29分鐘,m/z:4788.1

UPLC方法:B4_1:Rt=8.98分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=7.94分鐘

實施例55

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε31-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.74:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.01分鐘;m/z:m/3:1605;m/4:1204;m/5:963

UPLC方法:B2_1:Rt=12.82分鐘

UPLC方法:05_B7_1:Rt=9.18分鐘

UPLC方法:05-B9_1:Rt=7.16分鐘

實施例56

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε31-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.75:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.86分鐘;m/z:4785.6;m/3:1596;m/4:1197;m/5:958

UPLC方法:B2_1:Rt=13.22分鐘

UPLC方法:04_A7_1:Rt=7.05分鐘

實施例57

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Glu23,Val25,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.76:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.06分鐘;m/3:1624;m/4:1218;m/5:974

UPLC方法:B2_1:Rt=13.12分鐘

實施例58

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Glu23,Val25,Arg26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.77:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.86分鐘;m/3:1614;m/4:1211;m/5:969

UPLC方法:B2_1:Rt=13.60分鐘

實施例59

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Ns27-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.78:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.10分鐘;m/z:4393.0;M/3:1465;M/4:1099

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.25分鐘

UPLC:方法:05_B5_1:Rt=4.28分鐘

UPLC:方法:04_A7_1:Rt=5.03分鐘

實施例60

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,His26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.79:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.00分鐘;m/3:1608;m/4:1206;m/5:965

UPLC方法B2_1:Rt=12.62分鐘

UPLC方法05_B5_1:Rt=4.61分鐘

實施例61

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,His26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.80:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.05分鐘;m/3:1598;m/4:1199;m/5:960

UPLC方法B2_1:Rt=12.98分鐘

實施例62

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,His26,Lys27,His31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.81:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.11分鐘;m/3:1592;m/4:1194;m/5:956

UPLC方法B2_1:Rt=l1.35分鐘

實施例63

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Leu27]-GLP-l-(7-34)-肽

Chem.82:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.67分鐘,m/z:4572.0

UPLC方法:B4_1:Rt=10.23分鐘

實施例64

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[9-(4-羧基苯氧基)壬酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[9-(4-羧基苯氧基)壬酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,His31,Gly34]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.83:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.01分鐘;m/z:4497.0;M/3:1500;M/4:1125

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.10分鐘

UPLC:方法:05_B5_1:Rt=4.37分鐘

UPLC:方法:04_A7_1:Rt=4.83分鐘

實施例65

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε26-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.84:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.40分鐘;m/z:4802;M/3=1601;M/4=1201

UPLC方法:B4_1:Rt=9.11分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.76分鐘

實施例66

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,His31]-GLP-1-(7-34)-肽

Chem.85:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.06分鐘,m/z:4469.3

UPLC方法:B4_1:Rt=8.07分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=6.40分鐘

實施例67

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,His26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.86:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.13分鐘,m/z:4823.8

UPLC方法:B4_1:Rt=8.41分鐘

實施例68

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-(4-碘苯基)丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-(4-碘苯基)丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Val26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.87:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.22分鐘;m/z:m/3?1597;m/4?1198;m/5?959

UPLC方法B4_1:Rt=8.96

UPLC方法:05_B5_1:Rt=6.05

實施例69

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.88:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.22分鐘,m/z:5480.9

UPLC方法:B4_1:Rt=8.64分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.22分鐘

實施例70

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.89:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.12分鐘,m/z:4714.3

UPLC方法:B4_1:Rt=8.03分鐘

UPLC方法:04_A7_1:Rt=6.61分鐘

實施例71

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.90:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.29分鐘,m/z:5224.9

UPLC方法:B4_1:Rt=8.01分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.48分鐘

實施例72

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,His26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.91:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.96分鐘,m/z:4693.9

UPLC方法:B4_1:Rt=7.88分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.90分鐘

實施例73

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.92:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.03分鐘;m/z:4800.48;m/3=1600?m/4=1200?m/5=960

UPLC方法:B2_1:Rt=12.785分鐘

實施例74

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.93:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.97分鐘;m/3:1609;m/4:1207;m/5:965

UPLC方法:B2_1:Rt=12.45分鐘

UPLC方法:04_A7_1:Rt=6.68分鐘

實施例75

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.94:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.95分鐘;m/3:1638;m/4:1228;m/5:983

UPLC方法:B2_1:Rt=12.45分鐘

UPLC方法:04_A7_1:Rt=7.3分鐘

實施例76

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.95:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.07分鐘;m/z=4928.0;m/3=1643;m/4=1232;m/5=986

UPLC方法:B2_1:Rt=12.45分鐘

實施例77

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.96:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.10分鐘,m/z:4742.5

UPLC方法:B4_1:Rt=8.18分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.57分鐘

實施例78

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.97:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=1.80分鐘,m/z:4785.9

UPLC方法:B4_1:Rt=7.90分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.31分鐘

實施例79

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[(2-苯基環丙烷羰基)氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[(2-苯基環丙烷羰基)氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.98:

制備方法:SSPS_L:SC_L,具有如方法SC_M2所述的連接的反式-2-苯基-1-環丙烷羧酸,修改之處在于使用8當量的HOBt/DIC和反式-2-苯基-1-環丙烷羧酸;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.16,m/z:m/3?1537;m/4?1152;m/5?922

UPLC方法:B4_1:Rt=8.37分鐘。

UPLC方法:05_B5_1:Rt=4.61分鐘。

實施例80

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],N826-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.99:

制備方法:SPPS_P;SC_L;CP_M1

UPLC方法:B4_1:Rt=8.917分鐘

UPLC方法:04_A9_1:Rt=9.996分鐘

LCMS方法:LCMS_2:Rt=6.99分鐘;m/3=1603,m/4=1202

實施例81

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε30-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,His26,Lys30,Arg34]-GLP-1-(7-35)-肽

Chem.100:

制備方法:SPPS_P,SC_P,CP_M1

通過MALDI-MS(α-氰基)證實4611Da的理論分子量;m/z:4610

UPLC方法:B4_1:Rt=8.7分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.7分鐘

實施例82

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε26-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.101:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.64分鐘,m/z:4902.3

UPLC方法:B4_1:Rt=8.97分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.01分鐘

實施例83

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε30-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg26,Lys30,Arg34]-GLP-1-(7-35)-肽

Chem.102:

制備方法:SPPS_P,SC_P,CP_M1

通過MALDI_MS證實4702Da的理論分子量:m/z:4701

UPLC方法:B4_1:Rt=9.0分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.6分鐘

實施例84

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.103:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

通過MALDI_MS證實理論分子量:m/z:4544

UPLC方法:B4_1:Rt=9.4分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=6.2分鐘

實施例85

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Lys26,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.104:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.33分鐘;m/z:4644:M/3=1549;M/4=1162;

UPLC方法:B4_1:Rt=9.31分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.85分鐘

實施例86

Nε18-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.105:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.27分鐘;m/z:M/3=1601;M/4=1201;

UPLC方法:B4_1:Rt=9.01分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.08分鐘

實施例87

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-(4-羧基苯氧基)辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-(4-羧基苯氧基)辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.106:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

通過MALDI_MS證實4846.4Da的理論分子量:m/z:4846.3

UPLC方法:B4_1:Rt=8.26分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=3.93分鐘

實施例88

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.107:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.03分鐘,m/z:4930.6

UPLC方法:B4_1:Rt=8.63分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.31分鐘

實施例89

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-(4-羧基苯氧基)辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-(4-羧基苯氧基)辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.108:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LC/MS_4:Rt=2.13分鐘;m/z:4832.3;M/3:1611;M/4:1209

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.23分鐘

UPLC:方法:04_A6_1:Rt=3.77分鐘

UPLC:方法:04_A7_1:Rt=4.90分鐘

實施例90

Nε18-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.109:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.32分鐘,m/z:4902.4

UPLC方法:B4_1:Rt=8.95分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.97分鐘

實施例91

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lysl8,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.110:

制備方法:SPPS_P,SC_P,CP_M1

通過MALDI_MS證實5230Da的理論分子量:m/z:5230

UPLC方法:B4_1:Rt=7.56分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=3.9分鐘

實施例92

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.111:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.29分鐘,m/z:4829.2

UPLC方法:B4_1:Rt=8.90分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.39分鐘

實施例93

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.112:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.18分鐘,m/z:4858.4

UPLC方法:B4_1:Rt=8.56分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.26分鐘

實施例94

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.113:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.17分鐘,m/z:4916.5

UPLC方法:B4_1:Rt=8.51分鐘

實施例95

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.114:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

通過MALDI-MS(α-氰基)證實4448.5Da的理論分子量:m/z:4448.9

UPLC方法:B4_1:Rt=8.53分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.73分鐘

實施例96

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.115:

制備方法:SPPS_L,SC_L,CP_M1

LCMS:方法LC-MS_4:Rt=2.23分鐘;m/z:4816.10(計算值4816.4766Da)

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.803分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.847分鐘

實施例97

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.116:

制備方法:SPPS_L,SC_L,CP_M1

LCMS_4:Rt=2.22分鐘;m/z:5073.50,

UPLC方法:B4_1:Rt=11.06分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=4.77分鐘

實施例98

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Ar34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.117:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.03分鐘;m/z:5395;M/4=1350;M/5=l080

UPLC方法:B4_1:Rt=8.08分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.59分鐘

實施例99

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.118:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.08分鐘;m/z:5975.8;M/4:1494.5;M/5:1195.6

UPLC:方法:B4_1:Rt=7.89分鐘

UPLC:方法:04_A6_1:Rt=5.51分鐘

實施例100

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],N826-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.119:

制備方法:SPPS_L:SC_L;CP_M1

LCMS_4:Rt=5.8分鐘;m/z:1610(M3+)、1208(M4+)和966(M5+)

UPLC方法:10_B14_1:Rt=6.653分鐘

UPLC方法:B4_1:Rt=8.713分鐘

實施例101

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.120:

制備方法:SPPS_P,SC_P,CP_M1

通過MALDI_MS證實5331Da的理論分子量;m/z:5330

UPLC方法:B4_1:Rt=7.8分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.03分鐘

實施例102

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.121:

制備方法:SPPS_P,SC_P,CP_M1

通過MALDI_MS證實5345Da的理論分子量:m/z:5344

UPLC方法B4_1:Rt=7.8分鐘

UPLC方法04_A6_1:Rt=4.1分鐘

實施例103

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.122:

制備方法:SPPS_A,SC_A,CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.22分鐘;m/z:5016,M/4:1254.6;M/5:1004.1

UPLC方法:10_B14_1:Rt=5.07分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.71分鐘

實施例104

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε31-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.123:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.27分鐘,m/z:4742.5

UPLC方法:B4_1:Rt=9.47分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=8.19分鐘

實施例105

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4R)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4R)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.124:

制備方法:SPPS_L,SC-L,CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.34分鐘;m/z:m/z:5060.27(計算值5060.6795)

UPLC方法:B4_1:Rt=8.811分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.237分鐘

實施例106

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε26-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.125:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.27分鐘,m/z:4843.2

UPLC方法:B4_1:Rt=8.71分鐘

實施例107

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.126:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.13分鐘,m/z:4841.6

UPLC方法:B4_1:Rt=8.42分鐘

實施例108

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.127:

制備方法:SPPS_A,SC_A,CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.10分鐘;m/z:4960.5,M/4:1240.8;M/5:992.9(1A)

UPLC方法:10_B14_1:Rt=5.07分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=4.25分鐘

實施例109

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-[[(4S)-4-羧基-4-(4-苯基丁酰基氨基)丁酰基]氨基]辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-[[(4S)-4-羧基-4-(4-苯基丁酰基氨基)丁酰基]氨基]辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.128:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.27分鐘,m/z:5154.6

UPLC:方法B4_1:Rt=10.11分鐘

UPLC:方法05_B9_1:Rt=7.04分鐘

實施例110

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[6-[[(4S)-4-羧基-4-(4-苯基丁酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[6-[[(4S)-4-羧基-4-(4-苯基丁酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.129:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.12分鐘,m/z:5039.7

UPLC方法:B4_1:Rt=9.45分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=6.53分鐘

實施例111

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε31-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.130:

制備方法:SPPS_L;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.05分鐘;m/3:1691;m/4:1268;m/5:1014

UPLC:方法:B2_1:Rt=12.26分鐘

UPLC:方法:05_B7_1:Rt=8.18分鐘

實施例112

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.131:

制備方法:SPPS_P;SC_L

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.12分鐘;m/3:1586;m/4:1189;m/5:951

UPLC方法:B2_1:Rt=14.31分鐘

UPLC方法:05_B7_1:Rt=8.82分鐘

實施例113

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[12-[[(4S)-4-羧基-4-(4-苯基丁酰基氨基)丁酰基]氨基]十二酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[12-[[(4S)-4-羧基-4-(4-苯基丁酰基氨基)丁酰基]氨基]十二酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.132:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.46分鐘,m/z:5267.0

UPLC方法:B4_1:Rt=9.10分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=8.12分鐘

實施例114

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε26-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.133:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.37分鐘,m/z:5160.6

UPLC方法:B4_1:Rt=8.74分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=8.05分鐘

實施例115

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε26-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Aib8,Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.134:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.34分鐘,m/z:4857.8

UPLC方法:B4_1:Rt=10.0分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=8.85分鐘

實施例116

Nε18-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基],Nε31-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Lys18,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.135:

制備方法:SPPS_L:SC_L:CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.13分鐘,m/z:4785.9

UPLC方法:B4_1:Rt=9.09分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=7.30分鐘

實施例117

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-氨基-4-羧基丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-氨基-4-羧基丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Val26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.136:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=l,90:m/z:m/3?1416;m/4?1062;m/5?850;m/6?708

UPLC方法:B4_1:Rt=7.19分鐘。

該化合物為制備實施例68的化合物(Chem.87)的中間產物。

實施例118

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys27,His31,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.161:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.08分鐘;m/3=1598;m/4=l199;m/5=959

UPLC方法:B2_1:Rt=12.20分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=7.50分鐘

實施例119

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,His26,Lys27,His31,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.162:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=1.87分鐘;m/3=1583;m/4=l187;m/5=949(1A)

UPLC方法:B2_1:Rt=11.74分鐘

UPLC方法:04_A7_1:Rt=5.41分鐘

實施例120

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[4-(4-氟苯氧基)苯基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε22-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[4-(4-氟苯氧基)苯基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Lys22,Arg26,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.163:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_L1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.15分鐘;m/5=959;m/4=1198;m/3=1597

UPLC方法:B4_1:Rt=8.53分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=6.50分鐘

實施例121

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-(4-氯苯基)丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-(4-氯苯基)丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.164:

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.27分鐘;m/4=1171;m3=1561

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

UPLC方法B4_1:Rt=8.37分鐘

UPLC方法05_B5_1:Rt=4.61分鐘

實施例122

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-(4-硝基苯基)丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-(4-硝基苯基)丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.165:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.17分鐘;m/5=941;m4=l176;m/3=1568

UPLC方法B4_1:Rt=8.24分鐘

UPLC方法05_B5_1:Rt=4.90分鐘

實施例123

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(6-苯基己酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(6-苯基己酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.166:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt:2.31分鐘;m/3:1557;m/4:1168;m/5:935

UPLC方法:B4_1:Rt=8.86分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.47分鐘

實施例124

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(11-羧基十一酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.167:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_AP:Rt:8.51分鐘;m/3:1587;m/4:1190

UPLC方法:AP_B4_1:Rt=8.04分鐘

實施例125

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-(三氟甲基)苯基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε22-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-(三氟甲基)苯基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Lys22,Arg26,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.168:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_L1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.01分鐘;m/5=942;m/4=1177;m/3=1570

UPLC方法:B4_1:Rt=7.94分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.27分鐘

實施例126

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε22-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Lys22,Arg26,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.169:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_L1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.20分鐘;m/5=1016;m/4=1269;m/3=1692

UPLC方法:B4_1:Rt=8.49分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=5.64分鐘

實施例127

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-[[(4S)-4-羧基-4-(6-苯基己酰基氨基)丁酰基]氨基]辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[8-[[(4S)-4-羧基-4-(6-苯基己酰基氨基)丁酰基]氨基]辛酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.170:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt:2.31分鐘;m/5=1043;m/4=1303;m/3=1737

UPLC方法:B4_1:Rt=10.84分鐘

UPLC方法:05_B9_1:Rt=7.90分鐘

實施例128

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[12-[[(4S)-4-羧基-4-[(2-苯基乙酰基)氨基]丁酰基]氨基]十二酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[12-[[(4S)-4-羧基-4-[(2-苯基乙酰基)氨基]丁酰基]氨基]十二酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.171:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.34分鐘;m/5=1043;m/4=1303;m/3=1738

UPLC方法B4_1:Rt=8.68分鐘

UPLC方法05_B9_1:Rt=7.54分鐘

實施例129

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[6-[[(4S)-4-羧基-4-(6-苯基己酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[6-[[(4S)-4-羧基-4-(6-苯基己酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys18,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.172:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

LCMS:方法:LCMS_4:Rt=2.31分鐘;m/5=1019:m/4=1274;m/3=l699

UPLC方法B4_1:Rt=9.91分鐘

UPLC方法05_B9_1:Rt=7.25分鐘

實施例130

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lysl8,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.173:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.22分鐘;m/5=1083;m/4=1353;m/3=1804

UPLC方法:B4_1:Rt=7.92分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=4.57分鐘

實施例131

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.174:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.20分鐘;m/6=999;m/5=1199;m/4=1498;m/3=1997

UPLC方法:B2_1:Rt=11.95分鐘

UPLC方法:05_B5_1:Rt=4.62分鐘

實施例132

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽酰胺

Chem.175:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

通過方法:MALDI_MS證實4901Da的理論分子量:m/z:4899

UPLC方法:B2_1:Rt=13.47分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.15分鐘

實施例133

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lysl8,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽酰胺

Chem.176:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

通過方法:MALDI_MS證實4813.5Da的理論分子量:m/z:4813

UPLC方法:B2_1:Rt=12.42分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.18分鐘

實施例134

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.177:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=3.1分鐘;m/5=1029;m/4=1286;m/3=1715

UPLC:方法:B4_1:Rt=8.7分鐘

實施例135

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽酰胺

Chem.178:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

通過方法:Maidi_MS證實5463Da的理論分子量:m/z5463

UPLC:方法:10_B29_1,Rt=10.7分鐘

UPLC:方法:04_A6_1,Rt=5.9分鐘

實施例136

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.179:

制備方法:SPPS_P;SC_M1;CP_M1

LCMS:方法LCMS_4:Rt=2.37分鐘;m/4=1219;m/3=1625

UPLC方法B4_1:Rt=9.16分鐘

UPLC方法04_A6_1:Rt=4.5分鐘

實施例137

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.180:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

通過方法:Maidi_MS證實5409Da的理論分子量:m/z5408

UPLC:方法10_B29_1:Rt=8.6分鐘

UPLC:方法04_A6_1:Rt=5.2分鐘

實施例138

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg34]-GLP-1-(7-35)-肽

Chem.181:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

通過方法:Maldi_MS證實4673Da的理論分子量:m/z4673

UPLC:方法10_B29_1:Rt=15.7分鐘

UPLC:方法04_A6_1:Rt=4.6分鐘

實施例139

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Leu12,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.182:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

通過方法:Maldi_MS證實4796Da的理論分子量:m/z4796

UPLC:方法10_B31_1:Rt=16.6分鐘

UPLC:方法04_A6_1:Rt=5.6分鐘

實施例140

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Arg34]-GLP-1-(7-35)-肽

Chem.183:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

通過方法:Maidi_MS證實4717Da的理論分子量:m/z4716

UPLC:方法10_B31_1:Rt=18.0分鐘

UPLC:方法04_A6_1:Rt=4.6分鐘

實施例141

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.189:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

UPLC方法:B2_i;Rt=13.70分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=6.23分鐘

LCMS方法:LCMS_4:Rt=3.08分鐘;m/3=1577;m/4=l183;m/5=947

實施例142

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[10-(4-羧基苯氧基)癸酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,His34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.190:

制備方法:SPPS_P;SC_P;CP_M1

UPLC方法:10_B31_1;Rt=16.5分鐘

UPLC方法:04_A6_1;Rt=5.2分鐘

通過方法:Maldi_MS證實4839Da的理論分子量:m/z4837

實施例143

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.191:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

UPLC方法:B4_l;Rt=9.56分鐘

UPLC方法:08_B29_1;Rt=9.15分鐘

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.48分鐘;m/z=4859;m/3=1620;m/4=1215;m/5=972;m/6=810;m/7=695

實施例144

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.192:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

UPLC方法:B4_l;Rt=7.78分鐘

UPLC方法:04_A6_1;Rt=5.01分鐘

UPLC方法:10_B29_1;Rt=8.31分鐘

LC-MS方法:LCMS_4;RT=2.01分鐘;m/4:1498;m/5:1199

實施例145

Nε18-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-(13-羧基十三酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.193:

制備方法:SPPS_A;SC_A;CP_M1

UPLC方法:10_B29_1:Rt=10.56分鐘

UPLC方法:B4_1:Rt=8.35分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=5.37分鐘

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.12分鐘;m/3=1611;m/4=1208;m/5=967

實施例146

Nε18-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-(15-羧基十五酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε31-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-(15-羧基十五酰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.194:

制備方法:SPPS_A;SC_A;CP_M1

UPLC方法:10_B29_1:Rt=13.63分鐘

UPLC方法:B4_1:Rt=9.02分鐘

UPLC方法:04_A9_1:Rt=13.76分鐘

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.27分鐘;m/3=1629;m/4=1222;m/5=978

實施例147

Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基],Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Imp7,Lys18,Glu22,Arg26,Lys27,Gln34]-GLP-1-(7-37)-肽

Chem.195:

制備方法:SPPS_L;SC_L;CP_M1

UPLC方法:B4_1:Rt=9.3分鐘

UPLC方法:04_A6_1:Rt=6.5分鐘

LCMS方法:LCMS_4:Rt=2.52分鐘;m/3:1619;m/4:1215

生物方法

實施例148:體外效能

本實施例的目的是測試GLP-1衍生物的體外活性或效能。

如下所述測定實施例1-79、81-116和118-146的GLP-1衍生物的效能,即在含有表達人GLP-1受體的膜的培養基中刺激環狀AMP(cAMP)的形成。

原理

用目的GLP-1衍生物刺激表達人GLP-1受體的來自穩定轉染的細胞系BHK467-12A(tk-tsl3)的純化的質膜,用來自Perkin?Elmer?Life?Sciences的AlphaScreenTM?cAMP測定試劑盒測量產生cAMP的效能。AlphaScreen測定的基本原理是內源cAMP和外源加入的生物素-cAMP之間的競爭。通過用與受體珠綴合的特異性抗體實現cAMP捕獲。

細胞培養和膜的制備

選擇穩定轉染的細胞系和高表達克隆用于篩選。讓細胞在DMEM、10%FCS、1%Pen/Strep(青霉素/鏈霉素)和1.0mg/ml的選擇標記G418中于5%CO2生長。

用PBS洗滌2次大約80%匯合的細胞,用Versene(乙二胺四乙酸四鈉鹽的水溶液)收獲,以1000rpm離心5分鐘,去掉上清液。另外的步驟都在冰上進行。通過Ultrathurax讓細胞沉淀在10ml緩沖液1(20mM?Na-HEPES、10mM?EDTA、pH=7.4)中均質化20-30秒,以20,000rpm離心15分鐘,將沉淀重懸于10ml緩沖液2(20mMNa-HEPES、0.1mM?EDTA、pH=7.4)中。讓懸浮液均質化20-30秒,以20,000rpm離心15分鐘。讓緩沖液2中的懸浮液再次重復均質化和離心,將膜重懸于緩沖液2中。測定蛋白質濃度,將膜儲存在-80℃直到使用。

在平底的1/2-面積的96-孔板(Costar目錄號:3693)中實施測定。最終體積為每孔50μl。

溶液和試劑

來自Perkin?Elmer?Life?Sciences的AlphaScreen?cAMP測定試劑盒(目錄號:6760625M);含有抗-cAMP受體珠(10U/μl)、鏈霉抗生物素供體珠(10U/μl)和生物素化的-cAMP(133U/μl)。

AlphaScreen緩沖液,pH=7.4:50mM?TRIS-HCl(Sigma,目錄號:T3253);5mM?HEPES(Sigma,目錄號:H3375);10mM?MgCl2,6H2O(Merck,目錄號:5833);150mM?NaCl(Sigma,目錄號:S9625);0.01%吐溫(Merck,目錄號:822184)。使用前將以下加入到AlphaScreen緩沖液中(指最終濃度):BSA(Sigma,目錄號:A7906):0.1%;IBMX(Sigma,目錄號:15879):0.5mM;ATP(Sigma,目錄號:A7699):1mM;GTP(Sigma,目錄號:G8877):1uM。

cAMP標準品(測定中稀釋系數=5):cAMP溶液:5μL的5mMcAMP-儲液+495μL?AlphaScreen緩沖液。

在AlphaScreen緩沖液中制備cAMP標準品以及待測GLP-1衍生物的合適的稀釋系列,例如以下8種濃度的GLP-1化合物:10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、10-13和10-14M和例如cAMP的系列10-6至3×10-11。

膜/受體珠

使用hGLP-1/BHK467-12A膜;3μg/孔對應于0.6mg/ml(每孔所用膜量可改變)。

“無膜”:AlphaScreen緩沖液中的受體珠(最終2單元/孔)

“3μg/孔膜”:AlphaScreen緩沖液中的膜+受體珠(最終2單元/孔)

加10μl“無膜”到cAMP標準品(每孔一式二份)、陽性和陰性對照中

加10μl“3μg/孔膜”到GLP-1衍生物(每孔一式二份/一式三份)中

陽性對照:10μl“無膜”+10μl?AlphaScreen緩沖液

陰性對照:10μl“無膜”+10μl?cAMP儲液(50μM)

因為珠對直接光照敏感,所以任何處理都在黑暗(盡可能黑)或在綠光中。在冰上進行所有稀釋。

程序

1.制備AlphaScreen緩沖液。

2.在AlphaScreen緩沖液中溶解并稀釋GLP-1衍生物/cAMP標準品。

3.制備供體珠溶液(通過將鏈霉抗生物素供體珠(2單元/孔)與生物素化的cAMP(1.2單元/孔)混合),并在RT在暗處孵育20-30分鐘。

4.將cAMP/GLP-1衍生物加到板中:每孔10μl。

5.制備膜/受體珠溶液,并將其加到板中:每孔10μl。

6.加入供體珠:每孔30μl。

7.用鋁箔包裹板,于RT在振蕩器中孵育3小時(極為緩慢)。

8.在AlphaScreen上計數-在AlphaScreen中計數前讓每一板預孵育3分鐘。

結果

用Graph-Pad?Prism軟件(版本5)計算EC50[nM]值。

體外證實了所有衍生物的效能。138種衍生物具有對應于2000pM或更低的EC50的體外效能;131種衍生物甚至具有低于1200pM的EC50的更有效的效能;110種衍生物還具有進一步改進的對應于500pM或更低的EC50的效能;78種衍生物具有對應于200pM或更低的EC50的非常有效的效能;和52種衍生物具有對應于100pM或更低的EC50的非常良好的效能。

為了比較,在Journal?of?Medicinal?Chemistry(2000),第43卷,第9期,第1664-669頁的表1中的化合物13(在K26,34被雙-C12-二酸酰化的GLP-1(7-37))具有對應于1200pM的EC50的體外效能。

若需要,可將與GLP-1有關的倍數改變計算為EC50(GLP-1)/EC50(類似物)-3693.2。

實施例149:GLP-1受體結合

本實驗的目的是研究與GLP-1衍生物的GLP-1受體結合,及白蛋白的存在如何潛在地影響該結合。這在體外實驗中如下所述進行。

通過其從受體取代125I-GLP-1的能力來測量實施例1-116和118-147的GLP-1衍生物與人GLP-1受體的結合親和力。為了測試所述衍生物在白蛋白存在下與受體的結合,用低濃度白蛋白(0.005%-對應于其在示蹤劑中的殘留量)以及高濃度白蛋白(加2.0%)實施測定。結合親和力IC50的改變表明目的衍生物與白蛋白結合,藉此預測在動物模型中可能延長目的衍生物的藥代動力學概況。

條件

物種(體外):倉鼠

生物學終點:受體結合

測定方法:SPA

受體:GLP-1受體

細胞系:BHK?tk-tsl3

細胞培養和膜的制備

選擇穩定轉染的細胞系和高表達克隆用于篩選。讓細胞在DMEM、10%FCS、1%Pen/Strep(青霉素/鏈霉素)和1.0mg/ml的選擇標記G418中于5%CO2生長。

用PBS洗滌2次大約80%匯合的細胞,用Versene(乙二胺四乙酸四鈉鹽的水溶液)收獲,以1000rpm離心5分鐘,去掉上清液。另外的步驟都在冰上進行。通過Ultrathurax讓細胞沉淀在合適量的緩沖液1(20mM?Na-HEPES、10mM?EDTA、pH=7.4)但例如10-20ml中均質化20-30秒,以20,000rpm離心15分鐘,將沉淀重懸于合適量的緩沖液2(20mM?Na-HEPES、0.1mM?EDTA、pH=7.4)但例如10-20ml中。將懸浮液均質化20-30秒,以20,000rpm離心15分鐘。再次重復在緩沖液2中懸浮、均質化和離心,將膜重懸于緩沖液2中。測定蛋白質濃度,將膜儲存在-80℃直到使用。

SPA結合測定:

在測定緩沖液中稀釋測試化合物、膜、SPA-顆粒和[125I]-GLP-1(7-36)NH2。將25ul(微升)測試化合物加入到Optiplate中。加入(50ul)HSA(含有2%HSA的“高白蛋白”實驗)或緩沖液(含有0.005%HSA的“低白蛋白”實驗)。加入(50ul)對應于0.1-0.2mg蛋白/ml(優選優化每一膜制品)的5-10ug蛋白質/樣品。以0.5mg/孔(50ul)的量加入SPA-顆粒(小麥胚凝集素SPA珠,Perkin?Elmer,#RPNQ0001)。用[125I]-GLP-1(7-36)NH2(對應于49.880DPM的最終濃度為0.06nM,25ul)開始孵育。用板密封劑密封板,在30℃振蕩孵育120分鐘。讓板離心(1500rpm,10分鐘),在Topcounter中計數。

測定緩沖液:

50mM?HEPES

5mM?EGTA

5mM?MgCl2

0.005%吐溫20

pH7.4

HSA為SIGMA?A1653。

計算

從曲線讀出IC50值,為從受體取代50%的125I-GLP-1的濃度,并測定[(IC50/nM)高HSA]/[(IC50/nM)低HSA]比率。

通常在低白蛋白濃度時的GLP-1受體結合應該近可能良好,其對應于低IC50值。

高白蛋白濃度時的IC50值是白蛋白對衍生物與GLP-1受體結合的影響的量度。如已知的,GLP-1衍生物亦與白蛋白結合。這通常是所期需的效果,其延長其在血漿中的壽命。因此,高白蛋白時的IC50值通常比低白蛋白時的IC50值高,這符合白蛋白結合與GLP-1受體結合競爭所引起的降低的GLP-1受體結合。

因此,高比率(IC50值(高白蛋白)/IC50值(低白蛋白))可作為以下的指示:目的衍生物良好地結合白蛋白(可具有長半衰期),其本身亦良好地與GLP-1受體結合((高白蛋白)IC50值高,(低白蛋白)IC50值低)。

結果

獲得以下結果,其中“比率”指[(IC50/nM)高HSA]/[(IC50/nM)低HSA]):

所有衍生物都具有高于1.0的比率;116種衍生物高于10;86種衍生物高于50;56種衍生物高于100;17種衍生物高于500;和7種衍生物具有高于1000的比率。

此外,關于IC50(低白蛋白),所有衍生物具有低于1000nM的IC50(低白蛋白);144種衍生物低于500nM;137種衍生物低于100nM;126種衍生物低于50nM;95種衍生物低于10nM;70種衍生物低于5.0nM;34種衍生物低于1.0nM;和21種衍生物低于0.50nM。

最后,關于IC50(高白蛋白),110種衍生物具有低于1000nM的IC50(高白蛋白);79種衍生物低于500nM;和28種衍生物低于100nM。

實施例150:估測口服生物利用度

本實驗的目的是估測GLP-1衍生物的口服生物利用度。

為此,如下所述,在大鼠體內研究在將實施例2-3、10、17、19-20、26、28-29、31、34-35、38-39、41-53、55-64、67、70、74-80、82-86、88、90、92-95、98、100、106和118-123的GLP-1衍生物直接注射到腸腔后在血漿中的暴露。

以在55mg/ml癸酸鈉溶液中1000uM的濃度測試GLP-1衍生物。

自Taconic(Denmark)獲得體重達到大約240g的32只雄性Sprague?Dawley大鼠,簡單隨機指定為不同的處理,每組4只大鼠。實驗前讓大鼠禁食大約18小時,施行全身麻醉(芬太尼(Hypnorm)/多美康(Dormicum))。

將GLP-1衍生物給予空腸近心端(離十二指腸10cm的遠端)或在中腸中(離盲腸50cm的近端)。將10cm長的PE50-導管插入到空腸中,至少1.5cm插入到空腸中,給藥前通過3/0號縫線在腸及導管周圍綁住來固定尖端末梢,以防止滲漏或導管移位。放置的導管無注射器和針頭,將2ml鹽水給予腹部,然后用創緣夾關閉切口。

通過導管用1ml注射器將100μl各個GLP-1衍生物注入空腸腔中。隨后,用另一注射器將200μl空氣推入空腸腔以“沖洗”導管。將該注射器保持與導管連接,以防止回流到導管中。

以所期需間隔(通常在0、10、30、60、120和240分鐘時間)從尾靜脈將血樣(200ul)采集到EDTA管中,在20分鐘內以10000G在4℃離心5分鐘。將血漿(75ul)分離到Micronic管中,立即冷凍并保持在-20℃,直到用LOCI(光激化學發光免疫測定)分析各個GLP-1衍生物的血漿濃度,其通常如Poulsen和Jensen在Journal?of?Biomolecular?Screening2007,第12卷,第240-247頁中用于測定胰島素所述。用鏈霉抗生物素包被供體珠,而讓受體珠與識別肽的中間-/C-末端表位的單克隆抗體綴合。使特異性針對N-末端的另一單克隆抗體生物素化。讓這三種反應物與被分析物混合在一起,形成兩位點(two?sited)免疫復合物。照射該復合物使從供體珠釋放單峰氧原子,將其引入受體珠并引發化學發光,在Envision讀板儀中測量該發光。光量與化合物濃度成比例。

血液取樣后在麻醉下處死大鼠,打開腹部以驗證導管正確放置。

測定作為時間函數的平均(n=4)血漿濃度(pmol/l)。對于每一處理,計算血漿濃度(pmol/l)除以給藥溶液濃度(μmol/l)的比率,將t=30分鐘(在空腸中注射化合物30分鐘后)的結果估測(30分鐘時劑量校正的暴露)為腸生物利用度的替代測量。預期劑量校正的暴露與實際生物利用度相關。

獲得以下結果,其中30分鐘時的劑量校正的暴露指(將化合物注射到空腸后30分鐘的血漿濃度(pM))除以(給藥溶液中的化合物濃度(μM)):

除了三種衍生物外所有的在30分鐘時都具高于45的劑量校正的暴露;64種衍生物高于50;49種衍生物高于100;25種衍生物高于150;13種衍生物高于200;和2種衍生物高于250。

為了比較,在Journal?of?Medicinal?Chemistry(2000),第43卷,第9期,第1664-669頁的表1中的化合物13(在K26,34被雙-C12-二酸酰化的GLP-1(7-37))在30分鐘時具有低于45的劑量校正的暴露,并且司美魯肽在30分鐘時具有低于45的相同范圍的劑量校正的暴露。

實施例151:對血糖和體重的作用

本研究的目的是驗證GLP-1衍生物在糖尿病環境中對血糖(BG)和體重(BW)的作用。

在肥胖糖尿病小鼠模型(db/db小鼠)的劑量反應研究中測試實施例2和5的GLP-1衍生物,其如下所述。

登記7-9周齡的從出生開始用飲食NIH31(NIH31M嚙齒動物飲食,可自Taconic?Farms,Inc.,US市購,參見www.taconic.com)喂養的50只db/db小鼠(Taconic,Denmark)用于該研究。讓小鼠自由獲得標準食物(例如Altromin1324,Brogaarden,Gentofte,Denmark)和自來水,保持在24℃。在適應1-2周后,連續兩天(即在上午9點)兩次估測基礎血糖。將具有最低血糖值的8只小鼠排除在實驗之外。基于平均血糖值選擇剩下的42只小鼠用于進一步實驗,以匹配的血糖水平分為7組(n=6)。在5天實驗期間小鼠至多使用4次。在最后一次實驗后,對小鼠實施安樂死。

7個組接受以下處理:

1:溶媒,s.c.

2:GLP-1衍生物,0.3nmol/kg,s.c.

3:GLP-1衍生物,1.0nmol/kg,s.c.

4:GLP-1衍生物,3.0nmol/kg,s.c.

5:GLP-1衍生物,10nmol/kg,s.c.

6:GLP-1衍生物,30nmol/kg,s.c.

7:GLP-1衍生物,100nmol/kg,s.c.

溶媒:50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH7.4。

讓GLP-1衍生物溶于溶媒中到0.05、0.17、0.5、1.7、5.0和17.0nmol/ml的濃度。以6ml/kg(即每50g小鼠300μl)的劑量體積對動物s.c.給藥。

在給藥當天,小鼠稱重后,在-1/2h(上午8.30)估測血糖。在大約上午9點(0時)給予GLP-1衍生物。在給藥當天的1、2、4和8小時(上午10、11點,下午1和5點)估測血糖。

在以后的日子里,于給藥后的24、48、72和96小時(即在第2、3、4、5天的上午9點)估測血糖。在每一天血糖取樣后都對小鼠稱重。

在數字秤上單獨為小鼠稱重。

自意識清醒的小鼠的尾端毛細血管獲得用于測量血糖的樣品。將10μl血液采集到肝素化的毛細管中,并轉移到500μl葡萄糖緩沖液(EKF系統溶液,Eppendorf,Germany)中。用葡萄糖氧化酶方法(葡萄糖分析儀Biosen5040,EKF?Diagnostic,GmbH,Barleben,Germany)測量葡萄糖濃度。讓樣品在室溫保持最多1小時直到分析。若必須延遲分析,則讓樣品保持在4℃最多24小時。

ED50是引起半最大效應的以nmol/kg表示的劑量。基于衍生物降低體重的能力以及降低血糖的能力計算該值,其如下所解釋。

體重ED50計算為皮下給予衍生物后24小時引起對ΔBW的半最大效應的劑量。例如,若24小時后體重降低最大值為4.0g,那么ED50體重應該為24小時后引起體重降低2.0g的以nmol/kg表示的劑量。該劑量(ED50體重)可自劑量反應曲線讀出。

血糖ED50計算為皮下給予類似物后8小時引起對AUCΔBG的半最大效應的劑量。

只有在存在合適的S形劑量反應關系且對最大反應有明確定義時才可計算ED50值。因此,如果不是這種情況,那么以不同的劑量范圍重新測試目的衍生物,直到獲得S形劑量反應關系為止。

獲得以下結果:

測試衍生物具有預期的對血糖以及體重的作用(兩種都為降低)。此外獲得S形劑量反應曲線,這使得能分別計算血糖和體重的ED50值,其如上所解釋。

實施例152:小型豬中的半衰期

本研究的目的是測定將GLP-1衍生物i.v.給予小型豬后的體內延長,即其作用時間的延長。這在藥代動力學(PK)研究中進行,其中測定目的衍生物的終末半衰期。終末半衰期通常意即某一血漿濃度減半所需的時間,其在初始分布相后測量。

本研究使用雄性小型豬(EllegaardMinipigs?A/S,Dalmose,Denmark),大約7-14個月齡,重大約16-35kg。單獨飼養小型豬,用SDS小型豬飲食(Special?Diets?Services,Essex,UK)每天一次或兩次限制性地喂養。在適應至少2周后,在每只動物的尾側腔靜脈或顱側腔靜脈中植入兩根固定的中心靜脈導管。手術后讓動物恢復1周,然后用于重復藥代動力學研究,且在給藥之間具有合適的清洗期。

在給藥前讓動物禁食大約18小時,給藥后禁食至少4小時,但在整個期間隨意飲水。

讓實施例2、10、17、20、23、28-29、43-44、74-76、82、84-86、90、92和118的GLP-1衍生物溶于50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH7.4中到通常20-60nmol/ml的濃度。通過一個導管給予靜脈內注射(體積對應于通常1-2nmol/kg)的化合物,在預定時間點取血液樣品,最多到給藥后13天(優選通過另一導管)。將血樣采集到EDTA緩沖液(8mM)中,然后在4℃以1942G離心10分鐘。將血漿用移液器吸取到干冰上的Micronic管中,保持在-20℃直到用ELISA或類似的基于抗體的測定或LC-MS來分析各個GLP-1化合物的血漿濃度。在WinNonlin5.0版本(Pharsight?Inc.,Mountain?View,CA,USA)中通過非房室模型分析單個血漿濃度-時間曲線,確定得到的終末半衰期(調和平均值)。

獲得以下結果:所有衍生物都具有高于8小時的終末半衰期;18種衍生物高于10小時;16種衍生物高于20小時;10種衍生物高于40小時;6種衍生物高于60小時;和2種衍生物高于80小時。

實施例153:對食物攝取的作用

本實驗的目的是研究GLP-1衍生物對豬食物攝取的作用。這在如下所述的藥效學(PD)研究中進行,其中在給予單劑量GLP-1衍生物后的1、2、3和4天測量與溶媒-處理對照組比較的食物攝取。

使用大約3個月齡的重大約30-35kg的雌性Landrace?Yorkshire?Duroc(LYD)豬(每組n=3-4)。動物在適應動物設備期間在小組中飼養1-2周。在實驗期間,從星期一上午到星期五下午將動物安置在單豬圈中用于測量單個食物攝取。在適應期間和實驗期間的所有時間都用豬飼料(Svinefoder,Antonio)隨意喂養動物。通過每15分鐘記錄飼料重量在線監測食物攝取。所用系統為Mpigwin(Ellegaard?Systems,Faaborg,Denmark)。

將GLP-1衍生物以對應于0.3、1、3、10或30nmol/kg劑量的12、40、120、400或1200nmol/ml濃度溶于磷酸鹽緩沖液(50mM磷酸鹽、0.05%吐溫80、pH8)中。將磷酸鹽緩沖液用作溶媒。在第1天上午將單個皮下劑量的GLP-1衍生物或溶媒(劑量體積0.025ml/kg)給予動物,給藥后測量食物攝取達4天。在每次研究的最后一天(給藥后4天)自麻醉動物的心臟采集用于測量GLP-1衍生物的血漿暴露的血樣。此后用心臟內過量的戊巴比妥讓動物安樂死。用ELISA或類似的基于抗體的測定來分析GLP-1衍生物的血漿含量。

食物攝取計算為4天中24小時食物攝取的均值±SEM。

用單向ANOVA或雙向-ANOVA重復測量,接著用Bonferroni事后檢驗,對溶媒與GLP-1衍生物組在4天中24小時食物攝取進行統計學比較。

以3nM/kg的劑量如上所述測試實施例2-3、5、43-45、48、52、66、61、74-78、80、82、86和92的衍生物。與經溶媒-處理的組相比,在第1天1(0-24小時),13種衍生物的食物攝取降低。在第2天(24-48小時),8種衍生物的食物攝取降低。在第3天(48-72小時),6種衍生物的食物攝取降低。在第4天(72-96小時),4種衍生物的食物攝取降低(那一天僅測試15種衍生物)。如預期的,在研究期間,衍生物的食物攝取降低效果一天一天地降低,這取決于衍生物的終末半衰期。

實施例154:在大鼠中的半衰期-PK大鼠

本實施例的目的是研究在大鼠中的體內半衰期。

如下所述,使用實施例5、17、20、23、28、29、34、39、43-45、47、52、55、59、61、71、74-77、80、82、84、86、90、92、101、114、118、137、143和144的GLP-1衍生物實施大鼠中的體內藥代動力學研究。

自Taconic(Denmark)獲得體重400-600g的同齡雄性Sprague?Dawley大鼠,按體重簡單隨機指定處理,每組大約3-6只大鼠,使得每組的所有動物都有相似的體重。

讓GLP-1衍生物(大約6nmol/ml)溶于50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫80、pH7.4中。通過植入右頸靜脈的導管,靜脈內注射(1.0ml/kg)給予化合物。給藥后5天從舌下靜脈采集血液樣品。將血樣(200μl)采集到EDTA緩沖液(8mM)中,然后于4℃以10000G離心5分鐘。將血漿樣品保持在-20℃,直到用于分析各個GLP-1化合物的血漿濃度。

用光激化學發光免疫測定(LOCI)來測定GLP-1化合物的血漿濃度,其通常如Poulsen和Jensen在Journal?of?Biomolecular?Screening2007,第12卷,第240-247頁中用于測定胰島素所述。用鏈霉抗生物素包被供體珠,而讓受體珠與識別肽的中間-/C-末端表位的單克隆抗體綴合。使特異性針對N-末端的另一單克隆抗體生物素化。將這三種反應物與被分析物混合,形成兩位點免疫復合物。照射該復合物使從供體珠釋放單峰氧原子,將其引入受體珠并引發化學發光,在Envision讀板儀上測量該發光。光量與化合物濃度成比例。

用WinNonlin(5.0版本,Pharsight?Inc.,Mountain?View,CA,USA)分析血漿濃度-時間曲線,用每只動物的單個血漿濃度-時間曲線計算半衰期(T1/2)。

測試的衍生物中,31種具有7小時或以上的半衰期,23種具有10小時或以上的半衰期,14種具有20小時或以上的半衰期,9種具有25小時或以上的半衰期,和3種具有30小時或以上的半衰期。

盡管本文闡明并闡述了本發明的某些特征,但本領域普通技術人員可以想到很多修改、取代、改變及等同物。因此,應該理解,所附權利要求書意欲涵蓋落入本發明真實精神內的所有這些修改和改變。

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