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一種腦蛋白水解物的制備方法.pdf

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一種 蛋白 水解 制備 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310113215.X

申請日:

20130402

公開號:

CN103191403A

公開日:

20130710

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K38/02,A61K35/30 主分類號: A61K38/02,A61K35/30
申請人: 黑龍江迪龍制藥有限公司
發明人: 董繼勝,王金富,馮文善,李永久,趙波
地址: 151400 黑龍江省綏化市安達市北四道街
優先權: CN201310113215A
專利代理機構: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 代理人: 金永煥
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310113215.X

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法律狀態公告日:

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摘要

一種腦蛋白水解物的制備方法,它涉及一種腦蛋白水解物的制備方法。本發明是要解決現有方法的生產效率低及在生產過程中使用有機物從而對人和環境產生危害的問題,制備方法為:一、腦組織勻漿;二、脫脂;三、酶解;四、超濾;五、納濾,即得到腦蛋白水解物。本發明使用純機械的物理方法來去除腦組織中的脂肪類物質,而不使用有機溶劑法,是一種非常環保的方法,同時沒有有機物在腦蛋白水解物中的殘留,也更安全,采用兩次硅藻土吸附,去除腦蛋白水解物中的殘余脂肪物質,進一步改善了藥物的穩定性。本發明應用于制藥領域。

權利要求書

1.一種腦蛋白水解物的制備方法,其特征在于腦組織勻漿腦蛋白水解物的制備方法是通過以下步驟進行的:一、腦組織勻漿:取豬腦組織,去除筋膜和血管,用純化水沖洗,然后加入3倍質量的純化水,在勻漿機中勻漿5~15min,采用超聲波破碎機以超聲頻率為25000Hz超聲處理15min,得到腦組織勻漿液;二、脫脂:將步驟一的腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節pH值為5.0~5.5,然后在0~10℃的條件下靜止4~6h,然后用乳脂分離機分離,去掉混濁液,收集清液,按收集清液總重量的0.5-1.0%向清液中加入藥用硅藻土,攪拌30min,再用板框過濾器過濾,去掉硅藻土,得到脫脂腦組織勻漿液;三、酶解:將步驟二得到的脫脂腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調pH值為1.8~2.0,按照步驟一豬腦組織的總重量的2%~3%加入胃蛋白酶,在40~42℃的溫度下水解4~6h,然后用質量百分含量為10%的氫氧化鈉調節pH值為7.0~8.0,再按照步驟一腦組織的總重量的1%~1.5%加入胰蛋白酶,在40~42℃的溫度水解4-6h,得到混合液體,然后水浴加熱至80~82℃,并保溫15min后,再通過水浴降溫至20~25℃,按混合液體重量比為1%的比例加入藥用級硅藻土,攪拌15min后用板框過濾器過濾,收集濾過液,得到酶解液;四、超濾:將步驟三得到的酶解液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節pH值為6.0~7.0,依次用截留分子量為10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器進行超濾,收集分子量小于5000道爾頓的液體,得到超濾液;五、納濾,將步驟四得到的超濾液用截留分子量為90~150道爾頓的納濾機進行納濾濃縮,直至濃縮液中的含氮量大于6mg/ml,停止濃縮,即得到腦蛋白水解物。2.根據權利要求1所述的一種腦蛋白水解物的制備方法,其特征在于步驟二中在0~4℃的條件下靜止4~6h。

說明書

技術領域

本發明涉及一種腦蛋白水解物的制備方法。

背景技術

腦蛋白水解物是一種由動物腦組織經蛋白酶水解后得到的富含多種氨基酸和小分子多肽的一種混合物,由于含有大量人腦必須的氨基酸和多種神經生長的活性肽,可以調節和改進神經元的代謝,臨床上,腦蛋白水解物主要用于治療顱腦損傷和腦血管病(如腦梗和腦出血等)后遺癥的恢復治療,加速腦部神經系統的功能恢復。

由于動物腦組織含有大量脂肪物質,所以現行的的腦蛋白水解物的制備方法主要有兩種前期處理工藝,一種是將腦組織勻漿液用丙酮法經多次提取去掉脂肪類物質,然后再用蛋白酶進行酶解,再經進一步加工得到腦蛋白水解物,這種工藝的主要缺點就是,在處理過程中使用大量的丙酮等有機物,而丙酮等有機物有一定毒性,對人的粘膜和神經系統都有一定損害,制備過程中的廢液和揮發到空氣中的有機物對水源和空氣也會造成一定的污染,具有環保方面的潛在危害,如國內公開的專利CN1110915A等;另一種工藝就是不用丙酮法去掉腦組織勻漿液中的脂肪類物質,而是直接將腦組織勻漿液進行蛋白酶水解,并通過進一步加工得到腦蛋白水解物,這種工藝的缺點就是,在腦組織勻漿液中含有大量脂肪,影響蛋白酶的水解效果,制備效率低,同時,較多的脂肪類物質會混在最后的腦蛋白水解物中,影響最終藥品的外觀和穩定性,如國內公開的專利CN1228082C、CN1129451C等。

發明內容

本發明是要解決現有方法的制備效率低及在制備過程中使用有機物從而對人和環境產生危害的問題,提供了一種腦蛋白水解物的制備方式。

本發明一種腦蛋白水解物的制備方法,是通過以下步驟進行的:一、腦組織勻漿:取豬腦組織,去除筋膜和血管,用純化水沖洗,然后加入3倍質量的純化水,在勻漿機中勻漿5~15min,采用超聲波破碎機以超聲頻率為25000Hz超聲處理15min,得到腦組織勻漿液;二、脫脂:將步驟一的腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節pH值為5.0~5.5,然后在0~10℃的條件下靜止4~6h,然后用乳脂分離機分離,去掉混濁液,收集清液,按收集清液總重量的0.5-1.0%向清液中加入藥用硅藻土,攪拌30min,再用板框過濾器過濾,去掉硅藻土,得到脫脂腦組織勻漿液;三、酶解:將步驟二得到的脫脂腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調pH值為1.8-2.0,按照步驟一豬腦組織的總重量的2%-3%加入胃蛋白酶,在40~42℃的溫度下水解4~6h,然后用質量百分含量為10%的氫氧化鈉調節pH值為7.0~8.0,再按照步驟一腦組織的總重量的1%-1.5%加入胰蛋白酶,在40~42℃的溫度水解4-6h,得到混合液體,然后水浴加熱至80-82℃,并保溫15min后,再通過水浴降溫至20-25℃,按混合液體重量比為1%的比例加入藥用級硅藻土,攪拌15min后用板框過濾器過濾,收集濾過液,得到酶解液;四、超濾:將步驟三得到的酶解液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節pH值為6.0~7.0,依次用截留分子量為10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器進行超濾,收集分子量小于5000道爾頓的液體,得到超濾液;五、納濾,將步驟四得到的超濾液用截留分子量為90~150道爾頓的納濾機進行納濾濃縮,直至濃縮液中的含氮量大于6mg/ml,停止濃縮,即得到腦蛋白水解物。

本發明使用純機械的物理方法來去除腦組織中的脂肪類物質,而不使用有機溶劑法,是一種非常環保的方法,同時沒有有機物在腦蛋白水解物中的殘留,也更安全,采用兩次硅藻土吸附,去除腦蛋白水解物中的殘余脂肪物質,進一步改善了藥物的穩定性。

附圖說明

圖1為試驗1制備的腦蛋白水解物溶液的色譜圖;

圖2為試驗1對照的腦蛋白水解物的標準色譜圖。

具體實施方式

具體實施方式一:本實施方式一種腦蛋白水解物的制備方法,是通過以下步驟進行的:一、腦組織勻漿:取豬腦組織,去除筋膜和血管,用純化水沖洗,然后加入3倍質量的純化水,在勻漿機中勻漿5~15min,采用超聲波破碎機以超聲頻率為25000Hz超聲處理15min,得到腦組織勻漿液;二、脫脂:將步驟一的腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節pH值為5.0~5.5,然后在0~10℃的條件下靜止4~6h,然后用乳脂分離機分離,去掉混濁液,收集清液,按收集清液總重量的0.5-1.0%向清液中加入藥用硅藻土,攪拌30min,再用板框過濾器過濾,去掉硅藻土,得到脫脂腦組織勻漿液;三、酶解:將步驟二得到的脫脂腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調pH值為1.8-2.0,按照步驟一豬腦組織的總重量的2%-3%加入胃蛋白酶,在40~42℃的溫度下水解4~6h,然后用質量百分含量為10%的氫氧化鈉調節pH值為7.0~8.0,再按照步驟一腦組織的總重量的1%-1.5%加入胰蛋白酶,在40~42℃的溫度水解4-6h,得到混合液體,然后水浴加熱至80-82℃,并保溫15min后,再通過水浴降溫至20-25℃,按混合液體重量比為1%的比例加入藥用級硅藻土,攪拌15min后用板框過濾器過濾,收集濾過液,得到酶解液;四、超濾:將步驟三得到的酶解液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節pH值為6.0~7.0,依次用截留分子量為10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器進行超濾,收集分子量小于5000道爾頓的液體,得到超濾液;五、納濾,將步驟四得到的超濾液用截留分子量為90~150道爾頓的納濾機進行納濾濃縮,直至濃縮液中的含氮量大于6mg/ml,停止濃縮,即得到腦蛋白水解物。

本實施方式的腦蛋白水解物溶液可以按照常規的制劑方法制得液體注射劑、凍干注射劑或固體口服制劑。

本實施方式使用純機械的物理方法來去除腦組織中的脂肪類物質,而不使用有機溶劑法,是一種非常環保的方法,同時沒有有機物在腦蛋白水解物中的殘留,也更安全,采用兩次硅藻土吸附,去除腦蛋白水解物中的殘余脂肪物質,進一步改善了藥物的穩定性。

具體實施方式二:本實施方式與具體實施方式一不同的是:步驟二中在0~4℃的條件下靜止4~6h。其他與具體實施方式一相同。

通過以下試驗驗證本發明的有益效果:

試驗1:本試驗的一種腦蛋白水解物的制備方法,是通過以下步驟進行的:一、腦組織勻漿:取經檢疫合格的豬腦組織(購自哈爾濱市呼蘭區付江動物臟器經銷部)100公斤,去除筋膜和血管,用純化水沖洗干凈,加入300公斤的水,在勻漿機中勻漿,經25000Hz的超聲波破碎機超聲處理15min,進一步破碎腦組織,得到400公斤腦組織勻漿液;二、脫脂:將400公斤腦組織勻漿液,用鹽酸調節pH值到5.0,10℃以下靜止4h,然后用乳脂分離機(牛奶行業用)分離120min,去掉富含脂肪的流出液,收集去脂肪的清液部分320公斤,將去脂肪的清液按0.5%的比例加入藥用級硅藻土1.6公斤,攪拌30min,用來吸附殘余的脂肪類物質,用板框過濾器過濾,去掉硅藻土的同時去掉了被吸附的殘余脂肪類物質,得到脫脂腦組織勻漿液315公斤;三、酶解:將步驟二得到的315公斤脫脂腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調PH值到1.8,按照腦組織的總重量的2%加入胃蛋白酶2.0公斤,在40-42℃的溫度下水解6h,然后用質量百分含量為10%的氫氧化鈉調節pH值為7.0,按照腦組織的總重量的1%的比例加入胰蛋白酶1.0公斤,在40-42℃的溫度再次水解6小時,然后通過水浴加熱至80-82℃,并保溫15min后,通過水浴降溫到20-25℃之間,加入液體總量的1%比例的藥用級硅藻土3.18公斤,攪拌15min后用板框過濾器過濾,收集濾過液,得到315公斤酶解液。四、超濾:將步驟三得到的酶解液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節pH值為6.0,依次用截留分子量為10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器進行超濾,收集分子量小于5000道爾頓的液體部分,得到260公斤超濾液;五、納濾:將步驟四所得的超濾液用截留分子量為90-150道爾頓的納濾機進行納濾濃縮,去掉多余的水分和部分無機鹽等物質,最終得到腦蛋白水解物溶液95公斤,經檢驗,含氮量為6.6mg/ml。

將本試驗制備的腦蛋白水解物溶液按照國家藥品標準WS1-XG-025-2000進行高效液相色譜法檢驗,本試驗制備的腦蛋白水解物溶液的色譜圖與對照的腦蛋白水解物的標準色譜圖一致,說明本發明方法可以制備出符合國家標準的產品,并且本試驗使用純機械的物理方法來去除腦組織中的脂肪類物質,而不使用有機溶劑法,是一種非常環保的方法,同時沒有有機物在腦蛋白水解物中的殘留。

試驗2:本試驗的一種腦蛋白水解物的制備方法,是通過以下步驟進行的:一、腦組織勻漿:取經檢疫合格的豬腦組織100公斤(購自哈爾濱市呼蘭區付江動物臟器經銷部),去除筋膜和血管,用純化水沖洗干凈,加入300公斤的水,在勻漿機中勻漿,經25000Hz的超聲波破碎機超聲處理15min,進一步破碎腦組織,得到400公斤腦組織勻漿液;二、脫脂:將400公斤腦組織勻漿液,用鹽酸調節PH值到5.0,10℃以下靜止6h,然后用乳脂分離機(牛奶行業用)分離120min,去掉富含脂肪的流出液,收集去脂肪的清液部分322公斤,將去脂肪的清液按0.5%的比例加入藥用級硅藻土1.61公斤,攪拌30min,用來吸附殘余的脂肪類物質,用板框過濾器過濾,去掉硅藻土的同時去掉了被吸附的殘余脂肪類物質,得到脫脂腦組織勻漿液316公斤;三、酶解:將步驟二得到的316公斤脫脂腦組織勻漿液,用質量百分含量為10%的鹽酸調PH值為2.0,按照腦組織的總重量的2%加入胃蛋白酶3.0公斤,在40-42℃的溫度下水解6h,然后用質量百分含量為10%的氫氧化鈉調節PH值為7.0,按照腦組織的總重量的1%的比例加入胰蛋白酶1.5公斤,在40-42℃的溫度再次水解6小時,然后通過水浴加熱至80-82℃,并保溫15min后,通過水浴降溫到20-25℃之間,加入液體總量的1%比例的藥用級硅藻土3.18公斤,攪拌15min后用半框過濾器過濾,收集濾過液,得到317公斤酶解液。四、超濾:將步驟三得到的酶解液,用質量百分含量為10%的鹽酸調節PH值為6.0,依次用截留分子量為10000道爾頓和5000道爾頓的超濾器進行超濾,收集分子量小于5000道爾頓的液體部分,得到262公斤超濾液;五、納濾:將步驟四所得的超濾液用截留分子量為90-150道爾頓的納濾機進行納濾濃縮,去掉多余的水分和部分無機鹽等物質,最終得到腦蛋白水解物溶液98公斤,經檢驗,含氮量為6.8mg/ml。

本試驗使用純機械的物理方法來去除腦組織中的脂肪類物質,而不使用有機溶劑法,是一種非常環保的方法,同時沒有有機物在腦蛋白水解物中的殘留。

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