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用于緩解尿頻的緩釋制劑及其使用方法.pdf

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用于 緩解 尿頻 制劑 及其 使用方法
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摘要
申請專利號:

CN201210159606.0

申請日:

20120521

公開號:

CN103191430A

公開日:

20130710

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K45/06,A61P13/08 主分類號: A61K45/06,A61P13/08
申請人: 韋爾斯利醫藥有限公司
發明人: 大衛·A·迪爾
地址: 美國賓夕法尼亞州
優先權: 12150405.4,13/343,349,13/423,949
專利代理機構: 北京金信立方知識產權代理有限公司 代理人: 朱梅;師楊
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210159606.0

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種緩解尿頻的方法和組合物。一種方法包括向有需求的個體施用有效量的包含配制成緩釋制劑的鎮痛劑的藥物組合物。另一種方法包括向有需求的個體施用有效量的包含多種活性成分的藥物組合物。另一種方法包括向有需求的個體施用有效量的利尿劑,然后施用包括鎮痛劑的藥物組合物。

權利要求書

1.一種緩解尿頻的方法,所述方法包括:向有需求的個體施用有效量的包含第一鎮痛劑的藥物組合物,其中,所述藥物組合物配制為緩釋制劑,且其中,所述第一鎮痛劑以每日50mg至1000mg的劑量口服施用。2.根據權利要求1所述的方法,其中,所述的緩釋制劑包括腸溶包衣。3.根據權利要求1所述的方法,其中,所述第一鎮痛劑選自阿司匹林、布洛芬、萘普生和對乙酰氨基酚,且其中,所述第一鎮痛劑以每日50mg至250mg的劑量口服施用。4.根據權利要求1所述的方法,其中,所述第一鎮痛劑選自對乙酰氨基酚,阿司匹林,布洛芬和萘普生,其中,所述第一鎮痛劑以每日250mg至1000mg的劑量口服施用。5.根據權利要求1所述的方法,其中,所述藥物組合物進一步包括:第二鎮痛劑,其選自對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生,其中,所述第二鎮痛劑與所述第一鎮痛劑不同,且所述第二鎮痛劑以每日50mg至1000mg的劑量口服施用。6.根據權利要求5所述的方法,其中,所述第二鎮痛劑以每日50mg至250mg的劑量口服施用。7.根據權利要求5所述的方法,其中,所述第二鎮痛劑以每日250mg至1000mg的劑量口服施用。8.根據權利要求1所述的方法,其中所述藥物組合物進一步包括第一抗毒蕈堿劑,所述第一抗毒蕈堿劑選自奧昔布寧、索非那、達非那新和阿托品。9.根據權利要求1所述的方法,其進一步包括:向所述個體施用利尿劑;其中,所述利尿劑在就寢前至少8小時施用,且其中,所述藥物組合物在就寢前2小時內施用。10.根據權利要求1所述的方法,其中,所述藥物組合物進一步包括一種或多種抗利尿劑。11.一種緩解尿頻的方法,所述方法包括:向有需求的個體口服施用有效量的包含多種活性成分的藥物組合物,其中,所述多種活性成分包括:(1)一種或多種鎮痛劑和(2)一種或多種抗毒蕈堿劑,其中,所述一種或多種鎮痛劑以每日50mg至1000mg的聯合劑量施用。12.根據權利要求11所述的方法,其中,所述藥物組合物配制為使所述多個活性成分的立即釋放的制劑。13.根據權利要求11所述的方法,其中,所述藥物組合物包括兩種活性成分,一種配制為立即釋放的制劑,而另一種配制為緩釋制劑。14.根據權利要求11所述的方法,其中,所述藥物組合物包括兩種活性成分,一種配制為在第一時間點緩釋的制劑,而另一種配制為在第二時間點緩釋的制劑。15.根據權利要求11所述的方法,其中,所述一種或多種鎮痛劑選自阿司匹林、布洛芬、萘普生和對乙酰氨基酚,且其中,所述一種或多種抗毒蕈堿劑選自奧昔布寧、索非那、達非那新和阿托品。16.根據權利要求11所述的方法,其中,所述多種活性成分由選自阿司匹林、布洛芬、萘普生和對乙酰氨基酚中的兩種鎮痛劑組成。17.根據權利要求11所述的方法,其中,所述多種活性成分進一步包括抗利尿劑。18.根據權利要求11所述的方法,其中,所述一種或多種抗毒蕈堿劑以每日0.01mg至25mg的聯合劑量施用。19.一種藥物組合物,其包括:一種或多種鎮痛劑,其選自阿司匹林、布洛芬、萘普生和對乙酰氨基酚;抗利尿劑;以及藥學上可接受的載體,其中,所述的一種或多種鎮痛劑中的至少一種配制為緩釋制劑。20.根據權利要求19所述的藥物組合物,其進一步包括一種或多種抗毒蕈堿劑。21.根據權利要求20所述的藥物組合物,其中,所述一種或多種抗毒蕈堿劑選自奧昔布寧、索非那、達非那新和阿托品。

說明書

技術領域

本申請要求享有在2012年3月19日提交的美國專利申請第13/423,949號、在2012年1月4日提交的美國專利申請第13/343,349號和在2012年1月6日提交的歐洲專利申請12150405.4的優先權。

本申請大致涉及用于抑制肌肉收縮的方法和組合物,具體而言,本申請涉及用于抑制膀胱平滑肌收縮的方法和組合物。

背景技術

逼尿肌是膀胱壁的一層,它是由螺旋束、縱向束和圓形束排列的平滑肌纖維形成的。當膀胱被拉伸時,這會向副交感神經系統發信號以收縮逼尿肌。從而促使膀胱通過尿道排出尿液。

為使尿液排出膀胱,自主控制(autonomically?controlled)的內括約肌和隨意控制(voluntarily?controlled)的外括約肌必須都打開。這些肌肉的問題可能會導致失禁。如果尿量達到膀胱的絕對容量的100%,隨意括約肌成為非自主的,且尿液將會立刻排出。

成人膀胱通常保存約300-350毫升的尿液(工作容積),但根據個體的不同,一個完整的成人膀胱可容納高達約1000毫升(絕對量)。隨著尿液積聚,因膀胱壁的折疊(皺褶)而引起的壟狀隆起變平,且膀胱壁隨其拉伸而變薄,從而在內部壓力不會顯著上升的情況下允許膀胱存儲更大量的尿液。

對于多數個體來說,通常在膀胱中尿液的體積達到其工作容積的約125%時產生排尿的要求。在這個階段,如果個體需要,他很容易抵制排尿沖動。隨著膀胱繼續被填充,排尿的要求變得更加強烈且更難忽略。最終,膀胱被填充到排尿沖動不可被抵抗的程度,個體將不能再忽略它。對一些個體,在膀胱相對于其工作容量小于100%被填充時就開始產生此排尿的要求。這種增加的排尿要求可能會影響正常活動,包括提供充足的不間斷的休息的睡眠能力。在某些情況下,這種增加的排尿要求可能與內科狀況有關,如男性的良性前列腺增生或前列腺癌,或女性的懷孕。然而,增加的排尿要求也發生在不被其他內科狀況影響的個體中,不論男性和女性。

因此,對于膀胱在小于相對于其工作容量的100%被填充時具有排尿要求的男性和女性個體,存在著用于治療他們的組合物和方法的需求。所述組合物和方法是用于抑制肌肉收縮的需要,從而允許所述個體在膀胱中的尿液體積超過約其工作容積的100%時開始有排尿的要求。

發明內容

本申請的一方面涉及一種緩解尿頻的方法。在一個實施方式中,該方法包括向有需求的個體施用有效量的藥物組合物,所述藥物組合物包括選自阿司匹林、布洛芬、萘普生鈉、吲哚美辛、萘丁美酮和對乙酰氨基酚中的第一鎮痛劑,其中,所述藥物組合物被制成緩釋制劑。在一個實施方式中,第一鎮痛劑以每日劑量0.1μg至5mg口服施用。

在另一個實施例中,該方法包括向有需求的個體施用有效量的藥物組合物,所述藥物組合物包括多個活性成分,其中,所述多個活性成分包括:(1)一種或多種鎮痛劑和/或(2)一種或多種的抗毒蕈堿劑。在一個實施方式中,所述一種或多種鎮痛劑以每日聯合劑量0.1μg至5mg口服施用。在一些實施方式中,所述一種或多種鎮痛劑選自阿司匹林、布洛芬、萘普生鈉和對乙酰氨基酚。所述抗毒蕈堿劑的例子包括但不限于奧昔布寧、索非那(solifenacin)、達非那新、非索羅定(fesoterodine)、托特羅定、曲司氯銨(trospium)和阿托品。

在另一個實施方式中,該方法包括向有需求的人施用包含利尿劑的第一藥物組合物;以及向其施用包含一種或多種鎮痛劑的第二藥物組合物,其中,所述第一藥物組合物被配制并調制為在施用6小時以內具有利尿效果,且其在睡前至少8小時施用,且其中,所述第二藥物組合物在睡前2小時內施用。

在另一個實施方式中,所述方法包括向有需求的個體施用一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗利尿劑。

本申請的另一個方面涉及一種藥物組合物,其包含多個活性成分和藥學上可接受的載體。在一些實施方式中,所述多個活性成分包括一種或多種鎮痛劑和抗利尿劑。在另一些實施方式中,所述多個活性成分中的至少一種被制成緩釋型。

附圖說明

圖1A和圖1B是顯示非甾體抗炎藥(NSAIDs)在無LPS(圖1A)或有LPS(圖1B)的情況下通過Raw?264巨噬細胞調節輔刺激分子表達的圖。細胞在非甾體抗炎藥單獨存在或與鼠傷寒沙門氏菌脂多糖(LPS)(0.05μg/ml)同時存在的情況下培養24小時。結果是CD40+CD80+細胞的平均相對百分比。

具體實施方式

提出以下的詳細說明以使本領域的技術人員實施和使用本發明。為了解釋的目的,以下闡述具體術語以充分理解本發明。然而,對于本領域的技術人員來說,顯然這些具體的細節并不需要在本發明中實施。提供具體應用的表述僅用作典型的實施例。本發明并不意于限于所示的實施方式,而是希望包括與在此公開的原理和特征相一致的可能的最寬范圍。

在此使用的術語“有效量”是指足以達到選定的結果的量。

在此使用的術語“鎮痛劑”是指用于緩解疼痛且包括抗炎化合物的制劑、化合物或藥物。鎮痛和/或抗炎制劑、化合物或藥物包括但不限于下列物質:水楊酸鹽、阿司匹林、水楊酸、水楊酸甲酯、二氟尼柳、雙水楊酯、奧沙拉秦、柳氮磺吡啶、對氨基苯酚的衍生物、乙酰苯胺、對乙酰氨基酚、非那西汀、滅酸酯、甲滅酸、甲氯滅酸酯、甲氯滅酸鈉、雜芳基乙酸衍生物、托美丁、酮咯酸、雙氯芬酸、丙酸衍生物、布洛芬、萘普生鈉、萘普生、非諾洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奧沙普秦、烯醇酸、昔康(苯并噻嗪類)(oxicam)衍生物、吡羅昔康、美洛昔康、替諾昔康、安吡昔康、屈噁昔康、匹伏昔康(pivoxicam)、吡唑酮衍生物、保泰松、羥基保泰松、安替比林、氨基比林、安乃近、考昔類藥物、塞來考昔、羅非考昔、萘丁美酮、阿扎丙宗、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸和異丁基苯基丙酸、魯米考昔(lumiracoxib)、艾托考昔、帕瑞考昔、伐地考昔、替拉考昔(tiracoxib)、依托度酸、達布非酮、右酮洛芬、醋氯芬酸、利克飛龍(licofelone)、溴芬酸、普拉洛芬、氯索洛芬、吡羅昔康、尼美舒利、西唑來汀、3-甲酰基氨基-7-甲基磺酰基氨基-6-苯氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮、美洛昔康、氯諾昔康、右旋吲哚布芬、莫苯唑酸、呱氨托美丁(amtolmetin)、普拉洛芬、托芬那酸、氟比洛芬、舒洛芬、奧沙普秦、扎托洛芬、阿明洛芬、噻洛芬酸,及其藥學上可接受的鹽、水合物和溶劑合物。

在此使用的術語“考昔(coxib)”和“COX抑制劑”是指能夠抑制COX2酶的活性或表達,或者能夠抑制或緩解包括疼痛和腫脹在內的嚴重的炎癥反應的嚴重程度的化合物的組合物。

膀胱有兩個重要的功能:儲存尿液和排空。儲存尿液發生在低壓力下,這意味著在填充階段逼尿肌放松。膀胱的排空需要協調的逼尿肌的收縮和尿道括約肌的松弛。儲存功能的紊亂可導致下尿路癥狀,如尿急、尿頻和欲望性尿失禁,膀胱過度活動綜合征的組成部分。膀胱過度活動綜合征,這可能是由于在儲存階段膀胱平滑肌(逼尿肌)的非自主收縮,是一種常見和被低估的問題,在最近才評估其患病率。

本申請的一方面涉及通過向需要的個體施用配制成緩釋制劑的藥物組合物,從而緩解尿頻的方法。所述藥物組合物包括一種或多種鎮痛劑,且非必須地包括一種或多種抗毒蕈堿劑。

在此使用的術語“緩釋”是指一種不會立刻在體內崩解和釋放活性成分的藥物。在一些實施方式中,術語“緩釋”參照具有緩釋曲線的藥物制劑使用,所述藥物制劑中,存在施用后的藥物釋放的預定延遲。在一些實施方式中,緩釋制劑包括腸溶包衣,這是應用于口服藥物的隔離層,以防止在藥物到達小腸之前釋放。如腸溶包衣的延遲釋放制劑可以防止對胃有刺激作用的藥物(如阿司匹林)在胃中溶解。這種包衣還用于保護對酸不穩定的藥物暴露在胃的酸性環境中,將其遞送到堿性pH環境中(腸道的pH值為5.5以上),在所述堿性環境下其不會降解,并使他們起到所需的作用。

術語“脈沖釋放”是緩釋的一種,其在此參照以下使用:在預定的延遲期間以后,在短時期內立即提供迅速且瞬時的藥物釋放的藥物制劑,從而產生在施用藥物后藥物的“脈沖”血漿分布。制劑可以被設計為在施用后預定的時間間隔下提供單脈沖釋放或多個脈沖釋放。

多數腸道包衣通過設置在較高的酸性pH條件(即胃中的條件)下穩定,但在較低的酸性pH條件(相對而言堿性更高)分解的表面而工作。因此,腸溶包衣的藥丸不溶于酸性胃液中(pH值~3),但它們會溶于小腸中存在的堿性環境(pH值7-9)。腸溶包衣材料的例子包括但不僅限于,丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、醋酸纖維素琥珀酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素醋酸酯琥珀酸酯(羥丙甲纖維素醋酸酯琥珀酸酯)、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)、甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、海藻酸鈉和硬脂酸。

在一些實施方式中,藥物組合物由不同的被設計為提供緩釋的藥物制劑口服施用。緩釋口服劑型包括,例如片劑、膠囊、錠劑,也可能包括多個可被膠囊封裝或者不被膠囊封裝的顆粒、珠、粉末或丸劑。片劑和膠囊代表最方便的口服劑型,在此情況下使用固體的藥物載體。

在緩釋制劑中,可以向丸劑、片劑或膠囊應用一個或多個隔離包衣,以助于減緩藥物在腸道中的溶解和隨之而來的釋放。通常情況下,隔離包衣包含一種或多種聚合物,在藥物組合物或活性中心周圍包圍、圍繞或形成一層或膜。

在一些實施方式中,在制劑中活性劑被遞送,從而在施用后的預定的時間提供緩釋。延遲可能高達約10分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時或更長的時間。

緩釋的組合物可包括在單次的單位劑量中施用的給定的活性劑的總劑量的100%。或者,緩釋組合物可以作為被包含在聯合的緩釋曲線制劑中的組分,其可通過藥物制劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約30至95%。例如,立即釋放組分可以通過藥物制劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約5-70%,或者約50%。在另一些實施方式中,緩釋組分通過制劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%。

緩釋制劑通常包括延緩活性成分釋放的隔離包衣。根據目標,隔離包衣可以由各種不同的材料組成。此外,制劑可包括多個隔離包衣以助于以按時方式釋放。該包衣可以是糖衣、薄膜包衣(例如,基于羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)、或基于甲基丙烯酸共聚物、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素醋酸酯琥珀酸酯、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、蟲膠,和/或乙基纖維素的包衣。此外,所述制劑可另外包括時間延遲材料,例如,單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

在一些實施方式中,緩釋制劑包括腸溶包衣,所述腸溶包衣包含有助于活性劑在胃腸道的近端或遠端區域中釋放的一種或多種聚合物。在此使用的術語“腸溶聚合物包衣”是指包含具有依賴pH或者不依賴pH值釋放曲線的一種或多種聚合物的包衣。通常情況下,包衣抵制在胃的酸性介質中的溶解,但在胃腸道的更遠端的區域,如小腸或結腸中會溶解或侵蝕。腸溶聚合物包衣通常抵制活性劑釋放,直到在給藥后延遲約3~4小時的期間在胃排空后的時段才釋放活性劑。

依賴pH值的腸溶包衣包括一種或多種依賴pH值或對pH值敏感的聚合物,其能在較低pH值的條件下(如在胃部)保持它們的結構完整,而在胃腸道更遠端的區域(如小腸)的較高pH值的環境下溶解,從而釋放出藥物內容物。對于本發明的目的,“依賴pH值”被定義為具有根據環境pH值而變化的特性(例如,溶解)。典型的依賴pH值的聚合物包括但不限于,甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(如德國Rohm公司的L100(A型)、S100(B型);甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯共聚物(如德國Rohm公司的L100-55(C型)和L30D-55共聚物分散);甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯的共聚物和甲基丙烯酸甲酯(FS);甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯和丙烯酸乙酯的三元共聚物;醋酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP);羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)(例如,日本信越化學的HP-55、HP-50、HP-55S);聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)(例如,enteric?whiteOY-P-7171);醋酸纖維素琥珀酸酯(CAS);羥丙基甲基纖維素醋酸酯琥珀酸酯(HPMCAS),例如,HPMCAS?LF級、MF級、HF級,包括LF和MF(日本信越化學);日本信越化學);蟲膠(例如,MarcoatTM125和MarcoatTM125N);羧甲基乙基纖維素(CMEC,Freund公司,日本)、醋酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)(例如,);乙酸-1,2,4-苯三酸纖維素(CAT);以及重量比在約2∶1至約5∶1的其兩種或多種的混合物,例如,重量比為約3∶1至約2∶1的L?100-55和S?100的混合物,或重量比為約3∶1至約5∶1的L?30D-55和FS的混合物。

依賴pH值的聚合物通常顯示出對于溶解的最優的特征pH值。在一些實施方式中,依賴pH的聚合物顯示出約5.0和5.5之間、約5.5和6.0之間、約6.0和6.5之間或約6.5和7.0之間的最優pH值。在另一些的實施方式中,依賴pH的聚合物顯示出≥5.0、≥5.5、≥6.0、≥6.5或≥7.0的最優pH值。

在另一些實施方式中,腸溶包衣可包含一種或多種不依賴pH值的聚合物。這些聚合物提供了不依賴于pH值的一定時間以后的藥物釋放。對于本發明的目的而言,“不依賴pH值”被定義為具有本質上不受pH值影響的特性(例如,溶解)。不依賴pH值的聚合物通常是指“時間控制”或“依賴于時間”的釋放曲線的情況。

不依賴pH值的聚合物可以是不溶于水或溶于水的。不溶于水的不依賴pH值的聚合物的例子包括但不限于,具有小部分氯化三甲基銨基乙基甲基丙烯酸酯的中性的甲基丙烯酸酯(例如,RS和RL;無任何官能團的中性酯分散,(例如,NE30D和NE30);纖維質聚合物,如乙基纖維素、羥乙基纖維素、醋酸纖維素或混合物;以及其他不依賴pH值的包衣產品。溶于水的不依賴pH值的聚合物的例子包括amb。

在一些實施方式中,不依賴pH值的聚合物包含一種或多種多糖,其能夠抵抗胃和腸道的侵蝕。這種聚合物只能在包含了大量的微生物的結腸中降解,所述微生物含有可生物降解酶,所述可生物降解酶使例如多糖包衣降解,從而以可控的依賴時間的方式釋放藥物內容物。

在一些實施方式中,包衣方法采用一種或多種依賴pH值和一種或多種不依賴pH值的聚合物的混合。一旦可溶性聚合物到達了溶解的最優pH值,依賴pH值和不依賴pH值的聚合物的混合可以減少活性成分的釋放速率。

在一些實施方式中,“時間控制的”或“依賴時間的”釋放曲線可以使用包含一種或多種活性劑的不溶于水的膠囊本體獲得,其中,所述膠囊本體在其一端以不溶的、但可滲透的且可膨脹的水凝膠塞封閉。當與消化道液體或溶解介質接觸時,所述塞膨脹,將其自身推出膠囊,并在預定的延遲時間(該時間可通過,例如,塞的位置和尺寸控制)以后釋放藥物。所述膠囊本體可以進一步由外部的依賴pH值的腸溶包衣包覆,從而保持膠囊完整,直到其到達小腸。合適的塞的材料包括,例如,聚甲基丙烯酸酯類、侵蝕壓縮聚合物(例如,HPMC,聚乙烯醇)、凝結的熔融聚合物(如甘油單油酸酯)和酶控制的侵蝕聚合物(例如,多糖,如直鏈淀粉、阿拉伯半乳聚糖、殼聚糖、硫酸軟骨素、環糊精、葡聚糖、瓜爾豆膠、果膠和木聚糖)。

在另一些的實施方式中,膠囊或雙層片可配制為包括含有藥物的核心,其由膨脹層以及外部不溶但可半滲透的聚合物包衣或膜覆蓋。在破裂前的延遲時間可通過聚合物包衣的滲透和機械性能,以及膨脹層的膨脹行為所控制。通常,膨脹層包括一種或多種膨脹劑,如膨脹且在其結構中保留水分的可膨脹的親水聚合物。

示例性的可水膨脹材料包括但不限于,聚環氧乙烷(平均分子量為1,000,000至7,000,000,例如,如)、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素;重均分子量為100,000至6,000,000的聚亞烷基氧化物,包括但不限于聚亞甲基氧化物、聚亞丁基氧化物;分子量為25,000至5,000,000的聚(甲基丙烯酸羥烷基酯);與乙二醛、甲醛或戊二醛交聯,聚合度為200至30,000,且具有較低縮醛殘基的聚乙烯醇;甲基纖維素、交聯瓊脂和羧甲基纖維素的混合物;形成水凝膠的共聚物,其通過以下制備:形成極細的馬來酸酐與苯乙烯、乙烯、丙烯、丁烯或異丁烯共聚且在該共聚物中以每摩爾馬來酸酐0.001至0.5摩爾的飽和交聯劑交聯的共聚物的分散體;分子量為450,000至4,000,000的酸性羧基聚合物;聚丙烯酰胺;交聯的可水膨脹的茚馬來酸酐聚合物;分子量為80,000至200,000的聚丙烯酸;淀粉接枝共聚物;由濃縮葡萄糖單元(如二酯交聯的聚葡聚糖)組成的AQUA-丙烯酸酯聚合物多糖;0.5%至1%w/v水溶液下粘度為3,000至60,000mPa的卡波姆;纖維素醚,如25℃,1%w/w水溶液下粘度約1,000至7,000mPa的羥丙基纖維素;2%w/v水溶液下粘度為約1000以上、優選2,500以上、最高至25,000mPa的羥丙基甲基纖維素;在20℃,10%w/v水溶液下粘度為約300至700mPa的聚乙烯吡咯烷酮;以及它們的混合物。

腸溶層可進一步包括抗粘著劑,如滑石粉或甘油單硬脂酸酯和/或增塑劑等。腸溶層可進一步包括一種或多種增塑劑,所述增塑劑包括但不僅限于,檸檬酸三乙酯、乙酰基檸檬酸三乙酯、乙酰基檸檬酸三丁酯、聚乙二醇乙酰化甘油一酯、甘油、三醋酸甘油酯、丙二醇、鄰苯二甲酸酯(如鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯)、二氧化鈦、氧化鐵、蓖麻油、山梨醇和癸二酸二丁酯。

在另一個實施方式中,緩釋制劑采用了透水但不溶的薄膜包衣(包裹活性成分),以及滲透劑以實現包裹。隨著水從腸道通過薄膜慢慢擴散進入核心,核心膨脹直到膜破裂,從而釋放出活性成分。可以調整膜包衣,以獲得不同速率的水滲透或釋放時間。

或者,藥物的釋放時間可通過解體延遲時間控制,所述解體延遲時間取決于水不溶性聚合物膜(如乙基纖維素,EC)的耐受性和厚度之間的平衡,所述水不溶性聚合物膜包含在主體底部的預設的微孔,以及一定量的可膨脹賦形劑,如低取代的羥丙基纖維素(L-HPC)和乙醇酸鈉。口服給藥后,胃腸液滲透通過微孔,造成可膨脹賦形劑的膨脹,從而產生使膠囊部分解體的內部壓力,所述膠囊部分包括含有可膨脹材料的第一膠囊體、含有藥物的第二膠囊體和附著在第一膠囊體上的外蓋。

在另一些的實施方式中,藥物可以通過滲透機制釋放。例如,膠囊可制成單滲透單元,或者其可包含2、3、4、5或6個封裝在硬明膠膠囊內的推拉單元,藉此,每個雙層推拉單元包含滲透推動層和藥物層,且兩者都被半透膜包圍。在與藥物層相鄰的膜上鉆通一個或多個孔。這層膜可另外被依賴pH值的腸溶包衣覆蓋,以防止釋放,直到胃排空后。所述明膠膠囊在攝入后立即溶解。隨著推拉單元進入小腸,腸溶包衣分解,然后其使液體流過半透膜,使滲透推動單元膨脹,從而迫使藥物以一定速率通過小孔,所述速率由水通過半透膜的速率而精確控制。藥物的釋放可以以恒定速率進行長達24小時以上。

滲透推動層包括一種或多種產生用于使水通過半透膜進入遞送載體的核心的驅動力的滲透劑。一類滲透劑包括水可膨脹的親水性聚合物,也被稱為“滲透聚合物(osmopolymers)”和“水凝膠”,其包括但不限于,親水性乙烯基和丙烯酸聚合物、如海藻酸鈣的多糖、聚氧化乙烯(PEO)、聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、交聯聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇(PVA)、PVA/PVP共聚物、具有如甲基丙烯酸甲酯和醋酸乙烯酯的疏水單體的PVA/PVP共聚物、含有大PEO嵌段的親水性聚氨酯、交聯甲羧纖維素鈉、角叉藻聚糖、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素(CMC)和羧乙基纖維素(CEC)、海藻酸鈉、聚卡波非、明膠、黃胞膠和淀粉羥乙酸鈉。

另一類滲透劑包括酶原,其能夠吸取水分以實現穿過半透膜的滲透壓梯度。酶原的例子包括但不限于,無機鹽,如硫酸鎂、氯化鎂、氯化鈣、氯化鈉、氯化鋰、硫酸鉀、磷酸鉀、碳酸鈉、亞硫酸鈉、硫酸鋰、氯化鉀和硫酸鈉;糖,如右旋糖(dextrose)、果糖、葡萄糖、肌醇、乳糖、麥芽糖、甘露醇、棉子糖、山梨醇、蔗糖、海藻糖和木糖醇;有機酸,如抗壞血酸、苯甲酸、富馬酸、檸檬酸、馬來酸、癸二酸、山梨酸、己二酸、依地酸、谷氨酸、對甲苯磺酸、琥珀酸和酒石酸;尿素;以及它們的混合物。

有助于形成半透膜的材料包括不同級別的丙烯酸樹脂、乙烯樹脂、醚類樹脂、聚酰胺類樹脂、聚酯類樹脂和纖維素質衍生物,這些材料在生理相關的pH值下透水且不溶于水,或者,這些材料易于通過化學改變,例如交聯而呈現不溶于水的性能。

在另一個實施方式中,緩釋制劑采用了不透水的片狀包衣,藉此,水通過可控的孔隙進入包衣,直到核心崩解。當片劑崩解時,藥物內容物立即釋放,或者經過較長的時間釋放。可修改這些和其他技術,以在藥物開始釋放前允許形成預定的延遲期間。

不同的包衣技術可應用于含有活性劑的顆粒、珠、粉末或丸劑、片劑、膠囊或其結合,以產生不同的和區別的釋放曲線。在一些實施方式中,藥物組合物是包含單包衣層的片劑或膠囊的形式。在另一些實施方式中,藥物組合物是包含多包衣層的片劑或膠囊的形式。

在一些實施方式中,藥物組合包括多個活性成分。在另一個實施方式中,藥物組合物包括兩種配制為大約在同時緩釋的活性成分(例如,兩種鎮痛劑,或一種鎮痛劑和一種抗毒蕈堿劑)。在另一個實施方式中,藥物組合物包括兩種活性成分,一種配制為立即釋放組分且另一種配制為緩釋組分。在另一個實施方式中,藥物組合物包括兩種配制為緩釋組分的活性成分,其各自設置有不同的緩釋曲線。例如,第一種緩釋組分在第一時間點釋放出第一活性成分,且第二種緩釋組分在第二時間點釋放出第二活性成分。

在此使用的術語“立即釋放”是指不含有溶解速率控制材料的藥物制劑。在施用立即釋放的制劑以后,活性劑的釋放基本沒有延遲。立即釋放的包衣可包括施用后立即溶解從而釋放其中的藥物內容物的合適的材料。立即釋放的包衣材料的例子包括明膠、聚乙烯醇聚乙二醇(PVA-PEG)共聚物(如)和本領域技術人員公知的各種其他材料。

立即釋放的組合物可包括在單位劑量中施用的給定的活性劑的總劑量的100%。或者,立即釋放組分可以在聯合的釋放曲線制劑中作為一個組分而包含于其中,所述聯合的釋放曲線制劑可以通過藥物制劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約1%至約50%。例如,立即釋放組分可以通過制劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的至少約5%、或者約10%至約30%,或者約45%至約50%。其余的活性劑可以在緩釋制劑中遞送。在另一些實施方式中,立即釋放組分通過制劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約10、15、20、25、30、35、40、45或50%。緩釋組分通過制劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約90、85、80、75、70、65、60、55或50%。

在一些實施方式中,立即釋放或緩釋制劑包括活性核心,所述活性核心包含一種或多種惰性粒子,各自以珠、丸劑、藥丸、顆粒粒子、微膠囊、微球、微顆粒、納米膠囊或納米球的形式,在其表面由藥物以,例如,含藥物的成膜組合物的形式使用,例如,流化床技術或本領域的技術人員公知的其他方法形成。所述惰性粒子可以是不同大小的,只要其足以保持不易溶解的尺寸即可。或者,活性核心可以通過含有藥物成分的聚合物組合物的造粒和碾磨和/或通過擠出和滾圓來制備。

在核心中的藥物量將取決于所需要的劑量,且通常從約5至90wt%變化。通常,基于包衣粒子的重量,根據所需的延遲時間和釋放曲線的類型和/或所選擇的聚合物和包衣溶劑,在活性核心上的聚合物包衣為1至50%。本領域的技術人員能夠選擇合適量的藥物用以包衣,或者并入核心以實現所需的劑量。在一個實施方式中,無活性的核心可以是糖球或緩沖晶體或封裝緩沖晶體,如碳酸鈣、碳酸氫鈉、富馬酸、酒石酸等,它們改變藥物的微環境以促進其釋放。

在一些實施方式中,緩釋制劑是通過以不溶于水的聚合物和腸溶聚合物的混合物包覆水溶解/分散的含藥物的顆粒(如珠),其中,不溶于水的聚合物和腸溶聚合物可以4∶1至1∶1的重量比存在,且基于包覆的珠的總重量,包衣的總重量為10至60wt%。藥物分層的珠可非必須地包括控制內溶出率的乙基纖維素膜。優化了外層的組合物,以及聚合物膜的內層和外層的單獨的重量,以對于給定的活性實現理想的晝夜節律釋放曲線,這基于體外/體內的相關性而預計得到。

在另一些實施方式中,所述制劑包括含有立即釋放藥物的顆粒和緩釋珠的混合物從而提供雙脈沖釋放曲線,其中,所述含有立即釋放藥物的顆粒不具有控制溶出速率的聚合物膜,所述緩釋珠顯示出例如在口服施藥以后2至4小時的延遲時間,。在另一些實施方式中,所述制劑包括兩種類型的緩釋珠的混合物:顯示出1至3小時延遲時間的第一種類型和顯示出4至6小時延遲時間的第二種類型。

在一些實施方式中,活性核心由一種或多種控制溶出速率的聚合物層包覆,從而獲得理想的釋放曲線(有或沒有延遲時間)。內層膜可以在吸收水或體液進入核心后在很大程度上控制藥物釋放速率,而外層膜可以提供所需的延遲時間(在吸收水或體液進入核心后沒有或很少的藥物釋放的時期)。內層膜可包括水不溶性聚合物,或水不溶性和水溶性聚合物的混合物。

如上所述,在很大程度上控制延遲時間最長達6小時的適合于外膜的聚合物包括腸溶聚合物,以及10至50wt%的水不溶性聚合物。水不溶性聚合物與腸溶聚合物的比可從4∶1至1∶2變化,優選所述聚合物以約1∶1的比例存在。通常使用的水不溶性聚合物為乙基纖維素。

水不溶性聚合物的例子包括乙基纖維素、聚醋酸乙烯酯(來自BASF的Kollicoat?SR#0D)、基于丙烯酸乙酯和甲基丙烯酸甲酯的中性共聚物、具有季銨基團的丙烯酸和甲基丙烯酸酯的共聚物(如NE、RS和RS30D、RL或RL30D等)。水溶性聚合物的例子包括低分子量的HPMC、HPC、甲基纖維素、聚乙二醇(分子量>3000的PEG),根據在水和溶劑中的活性溶解度,或者基于所使用的包覆制劑的乳液懸浮液,其范圍從1wt%高至10wt%。水不溶性聚合物比水溶性聚合物通常從95∶5至60∶40,優選從80∶20至65∶35變化。

優選地,制劑設計為這樣的釋放曲線:能夠限制其對安靜睡眠的干擾,其中,所述制劑在個體通常被排尿沖動驚醒時釋放藥物。例如,考慮到通常在晚上11點開始睡眠且在凌晨12:30、凌晨3:00和清晨6:00被驚醒排尿的個體。緩釋載體能夠在凌晨12:15遞送藥物,藉此推遲排尿需求約2至3小時。

藥物組合物可每日施用或根據需要的主藥使用。在一些實施方式中,所述藥物組合物在就寢前施用于患者。在一些實施方式中,所述藥物組合物在即將就寢前施用于患者。在一些實施方式中,藥物組合物在就寢前約兩個小時內,優選在就寢前約一小時內施用。在另一個實施方式中,所述藥物組合物在就寢前約兩小時施用。在另一個實施方式中,所述藥物組合物在就寢前至少兩小時施用。在另一個實施方式中,所述藥物組合物在就寢前約一小時施用。在另一個實施方式中,所述藥物組合物在就寢前至少一小時施用。在另一個實施方式中,所述藥物組合物在就寢前不到一小時施用。在另一個實施方式中,所述藥物組合物在即將就寢前施用于患者。優選地,所述藥物組合物口服施用。

在立即釋放組分或緩釋組分中的活性劑的合適的劑量(“治療有效量”),將取決于例如病情的嚴重程度和進程、施藥方式、特別制劑的生物利用度、病人的年齡和體重、病人的臨床病史和對活性劑的反應、醫囑,等等。

通常建議,在立即釋放組分或緩釋組分中的活性劑的治療有效量為:通過一次或多次施用,以約1ng/kg體重/劑量至約100mg/kg體重/劑量。在特別的實施方式中,各活性劑使用的范圍為約1ng/kg體重/劑量至約1μg/kg體重/劑量、1ng/kg體重/劑量至約100ng/kg體重/劑量、1ng/kg體重/劑量至約10ng/kg體重/劑量、10ng/kg體重/劑量至約1μg/kg體重/劑量、10ng/kg體重/劑量至約100ng/kg體重/劑量、100ng/kg體重/劑量至約1μg/kg體重/劑量、100ng/kg體重/劑量至約10μg/kg體重/劑量、1μg/kg體重/劑量至約10μg/kg體重/劑量、1μg/kg體重/劑量至約100μg/kg體重/劑量、10μg/kg體重/劑量至約100μg/kg體重/劑量、10μg/kg體重/劑量至約1mg/kg體重/劑量、10μg/kg體重/劑量至約10mg/kg體重/劑量、100μg/kg體重/劑量至約10mg/kg體重/劑量、100μg/kg體重/劑量至約1mg/kg體重/劑量、約500μg/kg體重/劑量至約50mg/kg體重/劑量、約500μg/kg體重/劑量至約5mg/kg體重/劑量、1mg/kg體重/劑量至約100mg/kg體重/劑量、1mg/kg體重/劑量至約50mg/kg體重/劑量、1mg/kg體重/劑量至約10mg/kg體重/劑量、5mg/kg體重/劑量至約50mg/kg體重/劑量、以及10mg/kg體重/劑量至約100mg/kg體重/劑量。

在此所述的活性劑可包括在用于每日以單活性劑量或聯合活性劑量口服施用的立即釋放的組分或緩釋組分中,所述的劑量范圍為1ng至100ng、1ng至10ng、10ng至100ng、0.1μg至5mg、0.1μg至1mg、0.1μg至100μg、0.1μg至10μg、0.1μg至1μg、1μg至5mg、1μg至1mg、1μg至100μg、1μg至10μg、10μg至25mg、10μg至5mg、10μg至1mg、10μg至100μg、50μg至5mg、50μg至1mg、0.1mg至5mg、0.1mg至1mg、1mg至10mg、1mg至5mg、5mg至100mg、10mg至100mg、50mg至1000mg、500mg至5000mg、200mg至2000mg、或400mg至1000mg、或500mg至5000mg。在另一些實施方式中,各個制劑以約0.0006mg/劑量、0.001mg/劑量、0.003mg/劑量、0.006mg/劑量、0.01mg/劑量、0.03mg/劑量、0.06mg/劑量、0.1mg/劑量、0.3mg/劑量、0.6mg/劑量、1mg/劑量、3mg/劑量、6mg/劑量、10mg/劑量、30mg/劑量、60mg/劑量、100mg/劑量、300mg/劑量、600mg/劑量、1000mg/劑量、2000mg/劑量、5000mg/劑量、或者10,000mg/劑量施用。正如所料,所述劑量將取決于患者的病情、尺寸、年齡和病情。

在一些實施方式中,所述藥物組合物包括單一鎮痛劑。在一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是阿司匹林。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是布洛芬。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是萘普生鈉。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是吲哚美辛。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是萘丁美酮。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是對乙酰氨基酚。

在一些實施方式中,所述單一鎮痛劑以每日劑量0.1μg至1000mg施用。在某些實施方式中,藥物組合物包括阿司匹林、布洛芬、吲哚美辛、萘普生鈉、萘丁美酮或對乙酰氨基酚作為單一鎮痛劑,且所述鎮痛劑以每日口服劑量0.1μg至50mg、0.1μg至5mg、1μg至1mg、1μg至10mg、1至100ng、0.1至10μg、0.1至100μg、1至100μg、0.05至5mg、0.1至10mg、0.1至0.5mg、0.5至2.5mg、2.5至10mg、10至50mg、50至250mg或250至1000mg的范圍內給藥。

在另一些實施方式中,所述藥物組合物包括一對鎮痛劑。這種配對的鎮痛劑的例子包括但不限于,阿司匹林和布洛芬、阿司匹林和萘普生鈉、阿司匹林和萘丁美酮、阿司匹林和對乙酰氨基酚、阿司匹林和吲哚美辛、布洛芬和萘普生鈉、布洛芬和萘丁美酮、布洛芬和對乙酰氨基酚、布洛芬和吲哚美辛、萘普生鈉和萘丁美酮、萘普生鈉和對乙酰氨基酚、萘普生鈉和吲哚美辛、萘丁美酮和對乙酰氨基酚、萘丁美酮和吲哚美辛、以及對乙酰氨基酚和吲哚美辛。所述配對的鎮痛劑以0.3∶1至3∶1的重量比混合,且混合每日口服劑量為1至100ng、0.1至10μg、0.1至100μg、0.1μg至5mg、1μg至1mg、1至100μg、0.05至5mg、0.1至10mg、0.1至0.5mg、0.5至2.5mg、2.5至10mg、10至50mg、50至250mg的范圍內。在一個實施方式中,所述配對的鎮痛劑以1∶1的重量比混合。

在另一些的實施方式中,本申請的所述藥物組合物進一步包括一種或多種抗毒蕈堿劑。所述抗毒蕈堿劑的例子包括但不限于奧昔布寧、索非那、達非那新、非索羅定、托特羅定、曲司氯銨和阿托品。在某些實施方式中,藥物組合物包括選自十六烷基水楊酸、布洛芬、萘普生鈉、萘丁美酮、對乙酰氨基酚和吲哚美辛中的鎮痛劑,以及選自奧昔布寧、索非那、達非那新和阿托品中的抗毒蕈堿劑。鎮痛劑的聯合每日劑量在1ng至1000mg、0.1μg至50mg、0.1μg至5mg、1μg至1mg、1至100ng、0.1至10μg、0.1至100μg、1至100μg、0.05至5mg、0.1至10mg、0.1至0.5mg、0.5至2.5mg、2.5至10mg、10至50mg、50至250mg、250至1000mg、0.1至1mg、1至10mg、10至100mg或100至1000mg的范圍內。在某些實施方式中,上述劑量是每日口服劑量。抗毒蕈堿劑的聯合每日劑量在0.01至25mg、0.01至0.05mg、0.05至0.25mg、0.25至1mg、1至5mg、5至25mg、0.01至0.1mg、0.1至1mg、1至10mg和10至25mg。

本申請的另一方面涉及通過向需要的個體施用配制為立即釋放制劑的藥物組合物,從而緩解尿頻的方法。在一些實施方式中,所述藥物組合物包括一種或多種鎮痛劑,以及一種或多種抗毒蕈堿劑。在另一些實施方式中,所述藥物組合物包括一種或多種鎮痛劑,以及一種或多種抗利尿劑。在另一些實施方式中,所述藥物組合物包括一種或多種鎮痛劑,一種或多種抗毒蕈堿劑,以及一種或多種抗利尿劑。

在一些實施方式中,所述藥物組合物包括兩種或多種鎮痛劑。在另一些實施方式中,所述藥物組合物包括一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗毒蕈堿劑和/或抗利尿劑。所述藥物組合物可配制成片劑、膠囊、錠劑、粉劑、顆粒、液體、凝膠或乳液形式。所述液體、凝膠或乳液可由患者以直接形式或者包含在膠囊中的形式攝入。

在一些實施方式中,所述鎮痛劑選自以下物質:對乙酰氨基酚、水楊酸鹽、阿司匹林、水楊酸、水楊酸甲酯、二氟尼柳、雙水楊酯、奧沙拉秦、柳氮磺吡啶、對氨基苯酚的衍生物、乙酰苯胺、非那西汀、滅酸酯、甲滅酸、甲氯滅酸酯、甲氯滅酸鈉、雜芳基乙酸衍生物、托美丁、酮咯酸、雙氯芬酸、丙酸衍生物、布洛芬、萘普生鈉、萘普生、非諾洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奧沙普秦、烯醇酸、昔康(苯并噻嗪類)衍生物、吡羅昔康、美洛昔康、替諾昔康、安吡昔康、屈噁昔康、匹伏昔康、吡唑酮衍生物、保泰松、羥布宗、安替比林、氨基比林、安乃近、考昔類藥物、塞來考昔、羅非考昔、萘丁美酮、阿扎丙宗、尼美舒利、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸和異丁基苯基丙酸。所述抗毒蕈堿劑選自奧昔布寧、索非那、達非那新和阿托品。

在一些實施方式中,所述藥物組合物包括單一鎮痛劑和單一抗毒蕈堿劑。在一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是阿司匹林。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是布洛芬。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是萘普生鈉。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是吲哚美辛。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是萘丁美酮。在另一個實施方式中,所述單一鎮痛劑是對乙酰氨基酚。所述鎮痛劑和抗毒蕈堿劑可以以上述范圍內的劑量給藥。

本申請的另一方面涉及一種通過向有需求的個體施用(1)一種或多種鎮痛劑和(2)一種或多種抗利尿劑而治療夜尿癥的方法。在某些實施方式中,所述抗利尿劑用于:(1)增加血管加壓素(抗利尿激素)的分泌;(2)增加血管加壓素受體激活;(3)減少心房利鈉肽(ANP)或C型利鈉肽(CNP)的分泌;或(4)減少ANP和/或CNP的受體激活。

抗利尿劑的例子包括但不限于,抗利尿激素(ADH)、血管緊張素Ⅱ、醛固酮、血管加壓素、血管加壓素類似物(例如,去氨加壓素精氨加壓素、賴氨加壓素、苯賴加壓素、鳥氨加壓素、特利加壓素);血管加壓素受體激動劑、心房利鈉肽(ANP)和C型利鈉肽(CNP)受體(即,NPR1、NPR2、NPR3)拮抗劑(例如,HS-142-1、靛紅、[Asu7,23′]b-ANP-(7-28)]、安南汀(anantin)、來自天藍色鏈霉菌(Streptomyces?coerulescens)的環肽,以及3G12單克隆抗體);促生長素抑制素2型受體拮抗劑(如,促生長素抑制素)及其藥學上可接受的衍生物、類似物、鹽、水合物和溶劑合物。

在一些實施方式中,所述一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗利尿劑配制為緩釋型。

本申請的另一個方面涉及一種通過向需要的個體施用包含利尿劑的第一藥物組合物,然后施用包含一種或多種鎮痛劑的第二藥物組合物以治療夜尿癥的方法。第一藥物組合物的劑量和配方設置為在施用6小時以內具有利尿效果,且其施用在就寢之前至少8小時。所述第二藥物組合物在就寢前2小時內施用。

利尿劑的例子包括但不限于,致酸鹽,如氯化鈣和氯化銨;精氨酸加壓素受體2拮抗劑,如兩性霉素B和枸椽酸鋰;促水排泄藥,如黃花(Goldenrod)和杜松(Junipe);Na-H交換拮抗劑,如多巴胺;碳酸酐酶抑制劑,如乙酰唑胺和多佐胺;髓袢利尿劑,如布美他尼、依他尼酸、呋塞米和托塞米;滲壓性利尿劑,如葡萄糖和甘露醇;保鉀利尿劑,如阿米洛利、螺旋內酯固醇、氨苯蝶啶、烯睪丙酸鉀;噻嗪類,如芐氟噻嗪和氫氯噻嗪;以及黃嘌呤,如咖啡因、茶堿和可可堿。

在一些實施方式中,所述第二藥物組合物進一步包括一種或多種抗毒蕈堿劑。所述抗毒蕈堿劑的例子包括但不限于奧昔布寧、索非那、達非那新、非索羅定、托特羅定、曲司氯銨和阿托品。所述第二藥物組合物可以配制為立即釋放的配方或緩釋配方。在一個實施方式中,所述第一藥物組合物配制為立即釋放,且所述第二藥物組合物配制為緩釋。

在一些實施方式中,所述第二藥物組合物進一步包括一種或多種抗利尿劑。

本申請的另一個方面涉及一種藥物組合物,其包含多個活性成分和藥學上可接受的載體。在一些實施方式中,所述多個活性成分包括兩種或多種鎮痛劑。在另一些實施方式中,所述多個活性成分包括一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗毒蕈堿劑。在另一些實施方式中,所述多個活性成分包括一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗利尿劑。在另一些實施方式中,所述多個活性成分包括一種或多種鎮痛劑,一種或多種抗利尿劑,以及一種或多種抗毒蕈堿劑。在另一些實施方式中,至少一種所述的多個活性成分被配制緩釋型。

在一些實施方式中,所述藥物組合物包括選自十六烷基水楊酸、布洛芬、萘普生鈉、萘丁美酮、對乙酰氨基酚和吲哚美辛中的兩種鎮痛劑。在另一些實施方式中,所述藥物組合物包括選自十六烷基水楊酸、布洛芬、萘普生鈉、萘丁美酮、對乙酰氨基酚和吲哚美辛中的一種或多種鎮痛劑,以及選自奧昔布寧、索非那、達非那新和阿托品中的抗毒蕈堿劑。

在此使用的“藥學上可接受的載體”包括所有的、任意的溶劑、分散介質、包覆、抗菌和抗真菌劑、等滲和吸收延緩劑、甜味劑等。所述藥學上可接受的載體可由較寬范圍的材料制備,包括但不限于,調味劑、甜味劑、雜類材料,如可能為了制備特別的治療組合物的緩沖液和吸收劑。這種具有藥學活性物質的介質和試劑的使用是本領域公知的。除了與活性成分不相容的常規介質或試劑以外,使用其他在治療組合物中所包括的物質都在考慮范圍內。

本申請的另一方面涉及一種通過向需要的個體可選擇地施用兩種或多種鎮痛劑來防止發生耐藥性以緩解尿頻的方法。在一個實施方式中,該方法包括施用第一種鎮痛劑持續第一時間段,然后施用第二種鎮痛劑持續第二時間段。在另一個實施方式中,該方法進一步包括施用第三種鎮痛劑持續第三時間段。所述第一、第二和第三鎮痛劑彼此不同,且可以選自以下物質:對乙酰氨基酚、水楊酸鹽、阿司匹林、水楊酸、水楊酸甲酯、二氟尼柳、雙水楊酯、奧沙拉秦、柳氮磺吡啶、對氨基苯酚的衍生物、乙酰苯胺、非那西汀、滅酸酯、甲滅酸、甲氯滅酸酯、甲氯滅酸鈉、雜芳基乙酸衍生物、托美丁、酮咯酸、雙氯芬酸、丙酸衍生物、布洛芬、萘普生鈉、萘普生、非諾洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奧沙普秦、烯醇酸、昔康(苯并噻嗪類)衍生物、吡羅昔康、美洛昔康、替諾昔康、安吡昔康、屈噁昔康、匹伏昔康、吡唑酮衍生物、保泰松、羥布宗、安替比林、氨基比林、安乃近、考昔類藥物、塞來考昔、羅非考昔、萘丁美酮、阿扎丙宗、尼美舒利、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸和異丁基苯基丙酸。

在一個實施方式中,所述第一鎮痛劑是對乙酰氨基酚,所述第二鎮痛劑是布洛芬且所述第三鎮痛劑是萘普生鈉。各個時間段的長度取決于患者對的各個鎮痛劑的反應可能會有所不同。在一些實施方式中,每個時間段持續時間從三天至三周。在另一個實施方式中,一種或多種第一、第二和第三鎮痛劑被配制為緩釋的。

本發明將通過以下的非限制性實施例進一步說明。在本申請中引用的所有參考文件、專利和公開的專利申請的內容都通過引用方式并入本申請。

實施例1:排尿沖動的抑制

招收男女都參加的20名志愿受試者,他們各自都經歷過排尿沖動或排尿需求,這干擾了他們足以感到充分休息的長時間睡眠的能力。每個患者在就寢前以單劑量攝入400至800mg的布洛芬。至少有14個患者報告說,因為沒有被頻繁的排尿沖動驚醒,他們能夠更好地休息。

有幾名患者報告說,在夜間使用布洛芬幾個星期以后,不再能實現排尿沖動減少的裨益。然而,所有這些患者都進一步報告說,在放棄服用藥劑幾天以后,又獲得了這樣的裨益。

實施例2:鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈堿劑對炎癥和非炎癥性 刺激的巨噬細胞反應的影響

實驗設計

本研究旨在確定鎮痛劑和抗毒蕈堿劑在控制對由Cox-2和前列腺素(PGE、PGH等)介導的炎癥和非炎癥性刺激的巨噬細胞反應中的劑量和體外效力。它建立了對膀胱細胞中炎癥和非炎癥性效應物的基線(劑量和動力學)的反應。簡言之,在不存在或存在各種效應物的情況下,將培養細胞暴露于鎮痛劑和/或抗毒蕈堿劑藥物。

所述效應物包括:脂多糖(LPS)、抗炎劑和COX2誘導物,作為炎癥性刺激物;卡巴膽堿或乙酰膽堿、平滑肌收縮刺激物,作為非炎癥性刺激物;肉毒桿菌神經毒素A,一種已知的乙酰膽堿的釋放抑制劑,作為陽性對照;花生四烯酸(AA)、伽瑪亞麻酸(DGLA)或二十碳五烯酸(EPA),作為前列腺素的前體,他們是通過環氧合酶(COX1和COX-2)和終端前列腺素合成酶在細胞內依次氧化AA、DGLA或EPA制備的。

所述鎮痛劑包括:水楊酸鹽,如阿司匹林;異丁基丙酚醛酸衍生物(布洛芬),如雅維(Advil)、布洛芬制劑(Motrin)、磺胺二甲噁唑(Nuprin)和Medipren;萘普生鈉,如萘普生鈉(Aleve)、萘普生制劑(Anaprox)、Antalgin、Feminax?Ultra、萘普生(Flanax)、Inza、Midol?Extended?Relief(擴展釋放)、Nalgesin、Naposin、萘普生緩釋片劑(Naprelan)、Naprogesic、萘普生(Naprosyn)、萘普生(Naprosyn)混懸液、EC-萘普生(EC-Naprosyn)、Narocin、萘普生(Proxen)、Synflex和Xenobid;醋酸衍生物,如吲哚美辛(Indocin);1-萘乙酸衍生物,如萘丁美酮或瑞力芬;N-乙酰基對氨基苯酚(APAP)衍生物,如對乙酰氨基酚或撲熱息痛(泰諾林)和塞來考昔。

所述抗毒蕈堿劑包括:奧昔布寧、索非那、達非那新和阿托品。

巨噬細胞受到以下物質的短期(1-2小時)或長期(24-48小時)刺激:

(1)不同劑量的每種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(3)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的每種抗毒蕈堿劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(11)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

然后分析細胞,以表征PGH2、PGE、PGE2、前列腺環素、血栓烷、IL-1β、IL-6、TNF-α的釋放,COX2活性,cAMP和cGMP的產生,IL-1β、IL-6、TNF-α和COX2?mRNA的產生,以及CD80、CD86和MHC?II類分子的表面表達。

材料和方法

巨噬細胞

在此研究中使用小鼠RAW264.7或J774巨噬細胞(由ATCC獲得)。將細胞保持在含有RPMI?1640的培養基中,并補充有10%胎牛血清(FBS)、15mM?HEPES、2mM左旋谷酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml的鏈霉素。將細胞在37℃,5%的CO2氣氛下培養,且每星期分裂(傳代)一次。

巨噬細胞以NSAIDs的體外治療

將RAW264.7巨噬細胞以1.5x105個細胞/孔(100μl培養基)的密度接種在96孔板中。將細胞用以下物質處理:(1)不同濃度的NSAID(對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬或萘普生),(2)不同濃度的脂多糖(LPS),它是對巨噬細胞的炎癥性刺激的效應物,(3)不同濃度的卡巴膽堿或乙酰膽堿,它是非炎癥性刺激的效應物,(4)NSAID和LPS或(5)NSAID和卡巴膽堿或乙酰膽堿。簡言之,將NSAIDs溶解在無FBS的培養基中(即,RPMI?1640,補充有15mM?HEPES、2mM左旋谷酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml的鏈霉素),并通過用相同介質的連續稀釋稀釋到所需濃度。對于在沒有LPS存在的情況下以NSAID處理的細胞,向每個孔中加入50μl的NSAID溶液和50μl的無FBS的培養基。對于在有LPS存在的情況下以NSAID處理的細胞,向每個孔中加入50μl的NSAID溶液和在無FBS的培養基中的50μl的LPS(從鼠傷寒沙門氏菌)。所有的條件重復測試兩次。

在培養24或48小時后,收集150μl的培養上清液,在4℃,8,000rpm下旋轉2分鐘以除去細胞和碎片,并在-70℃儲存以用于通過ELISA分析細胞因子的反應。收集細胞并通過在500μl的磷酸鹽緩沖液(PBS)中離心(在4℃,1,500rpm下5分鐘)洗滌。然后將一半的細胞在液氮中快速凍結,并在-70℃下儲存。將剩余的細胞用熒光單克隆抗體染色并通過流式細胞計分析。

輔刺激分子表達的流式細胞計分析

流式細胞計分析,將巨噬細胞在100μl的FACS緩沖液(具有2%的牛血清白蛋白(BSA)和0.01%?NaN3的磷酸鹽緩沖液(PBS))中稀釋,并通過添加FITC-結合的抗CD40、PE-結合的抗CD80、PE-結合的抗-CD86抗體、抗MHC?II類(I-Ad)PE(BD生物科學)而在4℃下染色30分鐘。然后將細胞通過在300μl的FACS緩沖液中離心(在4℃,1,500rpm下5分鐘)清洗。在第二次洗滌后,細胞重新懸浮在200μl的FACS緩沖液中,且通過Accuri?C6流式細胞計(BD生物科學)的幫助分析表達給定標記(單陽性)或者標記的組合(雙陽性)的細胞的百分比。

通過ELISA分析細胞因子的反應

將培養上清液用特定的細胞因子ELISA處理,以確定在用NSAID、LPS單獨處理或者LPS和NSAID結合處理的巨噬細胞的培養基中的IL-1β,IL-6和TNF-α反應。這些化驗是在0.1M的碳酸氫鈉緩沖液(pH?9.5)中由100μl的抗鼠IL-6、TNF-α?mAbs(BD生物科學)或IL-1β?mAb(R&D系統)涂覆過夜的Nunc?MaxiSorp?Immunoplates(Nunc)上進行的。在用PBS(每孔200μl)清洗兩次以后,向每個孔(塊)中添加200μl的PBS?3%?BSA,且在室溫下孵育板2小時。通過每孔添加200μl,再次清洗板兩次,重復添加100μl的細胞因子的標準和培養上清液的連續稀釋,并將該板在4℃下孵育過夜。最后,將該板清洗兩次,并用100μl的二次生物素化的抗鼠IL-6、TNFα?mAbs(BD生物科學)或IL-1β(R&D系統),隨后用過氧化物酶標記的羊抗生物素mAb(Vector實驗室)培育。比色反應是通過添加2,2′-連氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)底物和H2O2(Sigma)而進行的,且吸光度使用V多標記微孔板檢測儀(PerkinElmer)在415nm處測量。

COX2的活性測定和cAMP和cGMP的生成

在培養的巨噬細胞中COX2的活性通過COX2的活性化驗確定。cAMP和cGMP的生成通過cAMP化驗和cGMP化驗確定。這些化驗在本領域中是通常進行的。

結果

表1總結了由Raw?264巨噬細胞株進行的實驗,并主要發現NSAIDs對輔刺激分子CD40和CD80的細胞表面表達方面的影響。這些分子的表達是通過COX2和炎癥信號刺激,且因此評估這些分子的表達以確定COX2的抑制的功能后果。

如表2所示,對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生在所有的測試劑量(即,5x105nM、5x104nM、5x103nM、5x102nM、50nM和5nM)下通過巨噬細胞抑制輔刺激分子CD40和CD80的基礎表達,除了最高劑量(即,5x106nM)以外,此時,其表現出增強,而不是抑制輔刺激分子的表達。如圖1A和1B所示,NSAID劑量在低至0.05nM(即,0.00005μM)時觀察到在CD40和CD50表達上的這樣的抑制效果。這一發現支持了這樣的觀點:小劑量的NSAID的控制釋放比大劑量的急性遞送更優選。實驗還表明,對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生對于LPS誘導的CD40和CD80的表達具有類似的抑制效果。

表1.實驗總結

表2.主要發現總結

*ND:未進行(毒性)

表3總結了一些研究結果,這些研究測量了成人在口服藥劑后的NSAID的血清水平。如表3中所示,在口服藥劑后NSAID的最大血清水平在104至105nM范圍內。因此,在表2中的體外測試的NSAID劑量覆蓋了人體內可實現的濃度范圍。

表3.口服藥劑后人血液中的NSAID的血清水平

實施例3:鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈堿劑對炎癥和非炎癥性 刺激的膀胱平滑肌細胞反應的影響

實驗設計

本研究旨在說明在實施例2中確定的NSAID的最優劑量如何在細胞培養或組織培養中影響膀胱平滑肌細胞,并論述不同類的NSAIDs是否能夠協同以更有效地抑制COX2和PGE2反應。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈堿劑。

小鼠膀胱平滑肌細胞的原代培養受到以下物質的短期(1-2小時)或長期(24-48小時)刺激:

(1)不同劑量的每種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(3)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的每種抗毒蕈堿劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(11)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

然后分析細胞,以表征PGH2、PGE、PGE2、前列腺環素、血栓烷、IL-1β、IL-6、TNF-α的釋放,COX2活性,cAMP和cGMP的產生,IL-1β、IL-6、TNF-α和COX2?mRNA的產生,以及CD80、CD86和MHC?II類分子的表面表達。

材料和方法

小鼠膀胱細胞的分離和純化

從被安樂死的動物C57BL/6小鼠(8-12周齡)去除膀胱細胞,且將細胞通過酶消化分離,隨后用Percoll梯度純化。簡言之,將從10只小鼠得到的膀胱用剪刀切碎為在10ml的消化緩沖液(RPMI?1640、2%胎牛血清、0.5mg/ml膠原酶、30μg/ml的DNA酶)中的精制漿液。將膀胱漿液在37℃下酶消化30分鐘。將未消化的碎片通過細胞訓練器(cell-trainer)進一步分散。將細胞混懸液制粒,并加入到不連續的20%、40%和75%Percoll梯度以純化單核細胞。每個實驗使用50-60膀胱。

在用RPMI?1640清洗后,將膀胱細胞再懸浮到補充有10%胎牛血清、15mM?HEPES、2mM左旋谷酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml的鏈霉素的RPMI?1640中,并以3x104個細胞/孔(100μl)的細胞密度接種到澄清底部的黑色96孔細胞培養微培養平板中,。將細胞在37℃,5%的CO2氣氛下培養。

細胞以NSAIDs的體外治療

將膀胱細胞用NSAID溶液(50μl/孔)單獨或者與卡巴膽堿(10摩爾,50μl/孔)共同處理作為非炎癥性刺激物的例子,或者用鼠傷寒沙門氏菌的脂多糖(LPS)(1μg/ml,50μl/孔)處理作為非炎癥性刺激物的例子。當沒有其他的效應物加入細胞中時,向孔中加入50μl的無胎牛血清的RPMI?1640以調整最終體積為200μl。

在培養24小時后,收集150μl的培養上清液,在4℃,8,000rpm下旋轉2分鐘以除去細胞和碎片,并在-70℃儲存以用于通過ELISA分析前列腺素E2(PGE2)的反應。將細胞固定、透化并封閉以使用熒光底物檢測環氧合酶-2(COX-2)。在選定的實驗中,細胞在體外刺激12小時以用于COX2反應的分析。

COX2反應分析

COX2反應通過基于細胞的ELISA使用人/鼠總COX2免疫測定法(R&D系統)分析,所述分析根據制造商的說明書進行。簡言之,在細胞固定和透化以后,向澄清底部的黑色96孔細胞培養微培養平板的孔中加入小鼠抗總COX2和兔抗總GAPDH。經過培育和清洗后,向孔中加入HRP結合的抗鼠IgG和AP結合的抗兔IgG。在另一個培育和清洗后,加入的HRP-和AP-熒光底物。最后,使用V多標記微孔板檢測儀(PerkinElmer)讀取在600nm(COX2熒光)和450nm(GAPDH熒光)處發出的熒光。結果表示為總COX2的相對水平,其通過相對熒光單位(RFUs)確定,并標準化為管家蛋白GAPDH。

PGE2反應分析

前列腺素E2的反應通過順序競爭ELISA(R&D系統)分析。具體而言,向由羊抗鼠多克隆抗體包覆的96孔聚苯乙烯微孔板的孔中加入培養上清液或PGE2標準樣。在微孔板振蕩器上培育一小時后,加入HRP結合的PGE2,并將板在室溫下額外培育兩小時。然后清洗板,并向每個孔中加入HRP底物溶液。容許顯色30分鐘,并通過在450nm(在570nm處校正波長)處讀取板之前加入硫酸以停止反應。結果表示為PGE2平均pg/ml。

其他化驗

PGH2、PGE、前列腺環素(Prostacydin)、血栓烷、IL-1β、IL-6和TNF-α的釋放,cAMP和cGMP的產生,IL-1β、IL-6、TNF-α和COX2?mRNA的產生,以及CD80、CD86和MHC?II類分子的表面表達采用如實施例2中所述的方法確定。

NSAIDs抑制小鼠膀胱細胞對炎癥性刺激的COX2反應

對幾種NSAIDs(對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生)在5μM或50μM的濃度下對小鼠膀胱細胞進行測試,以確定NSAIDs是否能誘發COX2反應。24小時培養的分析表明,沒有測試的NSAIDs在體外小鼠膀胱細胞中顯示出誘導COX2反應。

還測試了這些NSAIDs對體外的小鼠膀胱細胞對卡巴膽堿或LPS刺激的反應。如表1所示,測試的卡巴膽堿的劑量對于小鼠膀胱細胞中的COX-2水平沒有顯著影響。另一方面,LPS顯著增加總COX2水平。值得注意的是,對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生均能抑制LPS對COX-2水平的影響。當這些藥物在5μM或50μM(表4)測試時,可以看出NSAID的抑制效果。

表4.在體外刺激和NSAIDs處理后通過小鼠膀胱細胞的COX2表達

NSAIDs抑制小鼠膀胱細胞對炎癥性刺激的PGE2反應

測量在小鼠膀胱細胞培養上清液中的PGE2的分泌量,以確定因NSAIDs的小鼠膀胱細胞COX2水平改變的生物學意義。如表5所示,在未刺激的膀胱細胞或在卡巴膽堿的存在下培養的膀胱細胞的培養上清液中未檢測到PGE2。與上述的COX2反應相一致的,LPS對小鼠膀胱細胞的刺激誘導了PGE2的高水平分泌。NSAIDs對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生的添加抑制了LPS對PGE2分泌的影響,且在5或50μM劑量的NSAID處理的細胞反應之間并未觀察到區別。

表5.在體外刺激和NSAIDs處理后通過小鼠膀胱細胞的PGE2分泌

總之,這些數據表明僅用NSAIDs在5μm或50μm下不會誘導小鼠膀胱細胞中的COX2和PGE2反應。然而,在5μM或50μM下,NSAIDs顯著抑制體外由LPS(1μg/ml)刺激的小鼠膀胱細胞的COX2和PGE2反應。未觀察到NSAIDs對由卡巴膽堿(1mM)刺激的小鼠膀胱細胞的COX2和PGE2反應的顯著影響。

實施例4:鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈堿劑對膀胱平滑肌細胞 收縮的影響

實驗設計

將培養的小鼠或大鼠膀胱平滑肌細胞和小鼠或大鼠的膀胱平滑肌組織在不同濃度的鎮痛劑和/或抗毒蕈堿劑的存在下暴露于炎癥性刺激物和非炎癥性刺激物。測量刺激誘導的肌肉收縮以評估鎮痛劑和/或抗毒蕈堿劑的抑制效果。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈堿劑。

小鼠膀胱平滑肌細胞的原代培養受到以下物質的短期(1-2小時)或長期(24-48小時)刺激:

(1)不同劑量的每種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(3)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的每種抗毒蕈堿劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(11)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

材料和方法

如實施例3所述分離原代小鼠膀胱細胞。在選定的實驗中,使用膀胱組織培養。使用Grass多道記錄儀(美國Quincy?Mass)記錄膀胱平滑肌細胞收縮。

實施例5:口服鎮痛劑和抗毒蕈堿劑對膀胱平滑肌細胞對COX2和PGE2反應的影響。

實驗設計:

對正常小鼠和膀胱過度活躍綜合征的小鼠給予口服劑量的阿司匹林、萘普生鈉、布洛芬、吲哚美辛、萘丁美酮、泰諾林、塞來考昔、奧昔布寧、索非那、達非那新、阿托品及其組合。對照組包括未處理的正常小鼠和未處理的無膀胱過度活躍綜合征的OAB小鼠。最后劑量30分鐘后,收集膀胱并用卡巴膽堿或乙酰膽堿離體刺激。在選定的實驗中,膀胱在用卡巴膽堿刺激之前用肉毒桿菌神經毒素A處理。將動物保留在代謝籠中,并評估排尿頻率(和體積)。通過監測水攝取和籠窩重(cage?litter?weight)確定膀胱排出量。通過ELISA測定血清PGH2、PGE、PGE2、前列腺環素、血栓烷、IL-1β、IL-6、TNF-α、cAMP和cGMP水平。在全血細胞中的CD80、CD86、MHC?II類的表達通過流式細胞計檢測。

在實驗結束后,將動物安樂處死并用Grass多道記錄儀記錄離體膀胱收縮。將膀胱部分固定在福爾馬林中,且通過免疫組織化學分析COX2反應。

實施例6:鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈堿劑對炎癥和非炎癥性 刺激的人膀胱平滑肌細胞反應的影響

實驗設計

設計本研究以表征在實施例1至5中確定的NSAID的最優劑量如何在細胞培養或組織培養中影響人膀胱平滑肌細胞,并論述不同類的NSAIDs是否能夠協同以更有效地抑制COX2和PGE2反應。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈堿劑。

人膀胱平滑肌細胞受到以下物質的短期(1-2小時)或長期(24-48小時)刺激:

(1)不同劑量的每種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(3)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的每種抗毒蕈堿劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(11)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

然后分析細胞,以表征PGH2、PGE、PGE2、前列腺環素、血栓烷、IL-1β、IL-6、TNF-α的釋放,COX2活性,cAMP和cGMP的產生,IL-1β、IL-6、TNF-α和COX2?mRNA的產生,以及CD80、CD86和MHC?II類分子的表面表達。

實施例7:鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈堿劑對人膀胱平滑肌細 胞收縮的影響

實驗設計

將培養的人膀胱平滑肌細胞在不同濃度的鎮痛劑和/或抗毒蕈堿劑的存在下暴露于炎癥性刺激物和非炎癥性刺激物。測量刺激誘導的肌肉收縮以評估鎮痛劑和/或抗毒蕈堿劑的抑制效果。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈堿劑。

人膀胱平滑肌細胞受到以下物質的短期(1-2小時)或長期(24-48小時)刺激:

(1)不同劑量的每種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(3)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的每種抗毒蕈堿劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(11)在卡巴膽堿或乙酰膽堿存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的每種抗毒蕈堿劑。

使用Grass多道記錄儀(美國Quincy?Mass)記錄膀胱平滑肌細胞收縮。

實施例8:鎮痛劑對炎癥和非炎癥性信號的正常人膀胱平滑肌細胞反應 的影響

實驗設計:

正常的人膀胱平滑肌細胞的培養

將正常的人膀胱平滑肌細胞通過酶消化從人膀胱的宏觀正常部分分離。將細胞在體外通過在37℃下在5%CO2的氣氛中在補充有10%胎牛血清、15mM?HEPES、2mM左旋谷酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml的鏈霉素的RPMI?1640中培養而耗盡,并通過用胰蛋白酶處理以分離細胞每星期傳代一次,隨后通過在新的培養瓶中再接種。培養第一星期,培養基補充有0.5ng/ml表皮生長因子、2ng/ml成纖維細胞生長因子和5μg/ml胰島素。

體外正常的人膀胱平滑肌細胞的NSAIDs處理

將受胰蛋白酶作用的,并在微培養平板中以3x104個細胞/孔(100μl)的細胞密度接種的膀胱平滑肌細胞用NSAID溶液(50μl/孔)單獨或者與卡巴膽堿(10摩爾,50μl/孔)共同處理,以作為非炎癥性刺激物的例子,或者用鼠傷寒沙門氏菌的脂多糖(LPS)(1μg/ml,50μl/孔)處理,以作為非炎癥性刺激物的例子。當沒有其他的效應物加入細胞中時,向孔中加入50μl的無胎牛血清的RPMI?1640以調整最終體積為200μl。在培養24小時后,收集150μl的培養上清液,在4℃,8,000rpm下旋轉2分鐘以除去細胞和碎片,并在-70℃儲存以用于通過ELISA分析前列腺素E2(PGE2)的反應。將細胞固定、透化并封閉以使用熒光底物檢測COX-2。在選定的實驗中,細胞在體外刺激12小時以用于COX2、PGE2和細胞因子反應的分析。

COX2、PGE2和細胞因子反應分析

如在實施例3中所述,分析COX2和PGE2反應。如在實施例2中所述,分析細胞因子反應。

結果

NSAIDs抑制正常的人膀胱平滑肌細胞對炎癥性和非炎癥性刺激物的COX2反應-在培養24小時以后,細胞和培養上清液的分析表明,在正常的人膀胱平滑肌細胞中,并無測試的NSAIDs單獨誘導COX2反應。然而,如表6所總結的,卡巴膽堿對正常的人膀胱平滑肌細胞中誘導較低的,但是重要的COX-2反應。另一方面,LPS處理導致在正常的人膀胱平滑肌細胞中較高水平的COX2反應。對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生均能抑制卡巴膽堿和LPS對COX-2水平的影響。當這些藥物在5μM或50μM測試時,可以看出NSAIDs對LPS誘導的反應的抑制效果。

表6.在體外由炎癥性和非炎癥性刺激物刺激和NSAID處理后通過正常的人膀胱平滑肌細胞的COX2表達

#數據以重復兩次的平均值表達

NSAIDs抑制正常的人膀胱平滑肌細胞對炎癥性和非炎癥性刺激物的PGE2反應-與上述的對COX2反應的誘導相一致,卡巴膽堿和LPS通過正常的人膀胱平滑肌細胞誘導PGE2的產生。還發現對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生也在5μM或50μM下抑制LPS誘導的PGE2反應(表7)。

表7.在體外由炎癥性和非炎癥性刺激物刺激和NSAID處理后通過正常的人膀胱平滑肌細胞的PGE2分泌

#數據以重復兩次的平均值表達

NSAIDs抑制正常的人膀胱細胞對炎癥性刺激物的細胞因子反應-在培養24小時以后,細胞和培養上清液的分析表明,在正常的人膀胱平滑肌細胞中,并無測試的NSAIDs單獨誘導IL-6或TNFα的分泌。如表8和9中所示,測試的卡巴膽堿的劑量對正常的人膀胱平滑肌細胞中誘導較低的,但是重要的TNFα和IL-6反應。另一方面,LPS處理導致這些促炎癥反應細胞因子的大量誘導。對乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬和萘普生均能抑制卡巴膽堿和LPS對TNFα和IL-6反應的影響。當這些藥物在5μM或50μM測試時,可以看出NSAID對LPS誘導的反應的抑制效果。

表8.在體外由炎癥性和非炎癥性刺激物刺激和NSAID處理后通過正常的人膀胱平滑肌細胞的TNFα分泌

#數據以重復兩次的平均值表達。

表9.在體外由炎癥性和非炎癥性刺激物刺激和NSAID處理后通過正常的人膀胱平滑肌細胞的IL-6分泌

#數據以重復兩次的平均值表達

分離原代的正常的人膀胱平滑肌細胞,在非炎癥性(卡巴膽堿)和炎癥性(LPS)刺激物的存在下培養和評估其對NSAIDs的反應。此研究的目的是確定正常的人膀胱平滑肌細胞是否能重現前述由小鼠膀胱細胞得到的現象。

以緩釋或延長釋放制劑、或者緩釋并延長釋放制劑中的鎮痛劑和/或抗毒蕈堿劑重復上述實驗。

上述說明書是用于教導本領域的普通技術人員如何實踐本發明目的,其并不意欲詳細描述對于本領域的普通技術人員來說閱讀了說明書以后能顯而易見的那些明顯的修改和變化。但是,意欲將所有的明顯的修改和變化包括在本發明的范圍內,這將通過以下權利要求定義。除非文中有明確的相反指示,權利要求意圖覆蓋以任何順序的能夠有效實現其所需目的的所要求的組分和步驟。

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