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制備人體或動物脫細胞組織的方法.pdf

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制備 人體 動物 細胞 組織 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310128402.5

申請日:

20130415

公開號:

CN103191466B

公開日:

20140723

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61L27/36,A61L15/40,C12N5/00 主分類號: A61L27/36,A61L15/40,C12N5/00
申請人: 潘華倩
發明人: 潘華倩
地址: 200052 上海市長寧區延安西路1030弄40號4B室
優先權: CN201310128402A
專利代理機構: 南通市永通專利事務所 代理人: 葛雷
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310128402.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種制備人體或動物脫細胞組織的制備方法,該方法是將人類或動物的組織如:皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜、血管、神經、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱等,用病毒滅活、脫脂、脫細胞等工藝處理后得到的脫細胞組織,為一種無細胞的三維網狀結構組織,保留細胞外基質成分。該方法制備的組織,可以作為人體植入性的修復材料,也可以作為組織工程細胞培養的支架材料。皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜等也可作為創面覆蓋材料。

權利要求書

1.一種制備人體或動物脫細胞組織的方法,其特征是:包括下列步驟:(一)組織初加工:將人體或動物的組織用機械方法去除表面脂肪,按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀;(二)病毒滅活、脫脂、脫細胞:依次經下列步驟處理:(1)將經過初加工的人體或動物組織,用第一滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理10~30分鐘;所述第一滅活、脫脂液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉溶液、0.5~2%的表面活性劑及余量的水組成;?(2)將經上述步驟處理的人體或動物組織用第二滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理10~30分鐘;所述第二滅活、脫脂液由1%-4%的燒堿、0.5%-2%的表面活性劑及余量的水組成;(3)將經上述步驟處理的人體或動物組織用滅活、脫細胞液進行病毒滅活和脫細胞處理10~30分鐘;所述滅活、脫細胞液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉溶液、0.5~2%的表面活性劑、0.2%~2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成,并用0.1%-4%的純堿調pH值為5~7,處理溫度為30℃-40℃;(4)循環操作:根據組織的不同,將上述步驟(1)、(2)、(3)循環操作2~7次;?(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中,用PE或PVC材質的密封袋保存,根據需要保存1~12個月;所述保存液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉及余量的水組成,并用0.1%-4%的純堿調pH值為5~7;(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產品低溫冷凍干燥,成型包裝、再經γ射線輻照或環氧乙烷消毒滅菌,即為成品。2.根據權利要求1所述的制備人體或動物脫細胞組織的方法,其特征是:第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。3.?根據權利要求1所述的制備人體或動物脫細胞組織的方法,其特征是:第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。4.?根據權利要求1、2或3所述的制備人體或動物脫細胞組織的方法,其特征是:滅活、脫細胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。5.?根據權利要求1、2或3所述的制備人體或動物脫細胞組織的方法,其特征是:步驟(4)循環操作時,皮膚組織循環操作2~3次;胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜組織循環操作1~2次;血管、神經、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱組織循環操作3~7次。

說明書

技術領域

本發明涉及一種制備人體或動物脫細胞組織的方法。

背景技術

現有的人體或動物脫細胞組織的制備,由于工藝、處理劑等原因,處理時間長,效率低,易造成組織結構的破壞,影響產品質量。

發明內容

本發明的目的在于提供一種生產效率高,產品質量好的制備人體或動物脫細胞組織的方法。

本發明的技術解決方案是:

一種制備人體或動物脫細胞組織的方法,其特征是:包括下列步驟:

(一)組織初加工:將人體或動物的組織用機械方法去除表面脂肪,按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀;

(二)病毒滅活、脫脂、脫細胞:

依次經下列步驟處理:

(1)將經過初加工的人體或動物組織,用第一滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理10~30分鐘;所述第一滅活、脫脂液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉溶液、0.5~2%的表面活性劑及余量的水組成;?

(2)將經上述步驟處理的人體或動物組織用第二滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理10~30分鐘;所述第二滅活、脫脂液由1%-4%的燒堿、0.5%-2%的表面活性劑及余量的水組成;

(3)將經上述步驟處理的人體或動物組織用滅活、脫細胞液進行病毒滅活和脫細胞處理10~30分鐘;所述滅活、脫細胞液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉溶液、0.5~2%的表面活性劑、0.2%~2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成,并用0.1%-4%的純堿調pH值為5~7,處理溫度為30℃-40℃;

(4)循環操作:根據組織的不同,將上述步驟(1)、(2)、(3)循環操作2~7次;?

(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中,用PE或PVC材質的密封袋保存,根據需要保存1~12個月;所述保存液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉及余量的水組成,并用0.1%-4%的純堿調pH值為5~7;

(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產品低溫冷凍干燥,成型包裝、再經γ射線輻照或環氧乙烷消毒滅菌,即為成品。

第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。

滅活、脫細胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

步驟(4)循環操作時,皮膚組織循環操作2~3次;胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜組織循環操作1~2次;血管、神經、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱組織循環操作3~7次。

本發明生產效率高,產品質量好;將人類或動物的組織如:皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜、血管、神經、心臟瓣膜、骨、軟骨、肌腱等,用病毒滅活、脫脂、脫細胞等工藝處理后得到脫細胞組織,為一種無細胞的三維網狀結構組織,保留細胞外基質成分。該方法制備的組織,可以作為人體植入性的修復材料,也可以作為組織工程細胞培養的支架材料。皮膚、胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜、心包膜等也可作為創面覆蓋材料。

下面結合實施例對本發明作進一步說明。

實施例1:

一種制備人體或動物脫細胞組織的方法,包括下列步驟:

(一)組織初加工:將人體或動物的組織(本實施例為:胸腹膜、食道黏膜、小腸黏膜或心包膜組織)用機械方法去除表面脂肪,按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀;

(二)病毒滅活、脫脂、脫細胞:

依次經下列步驟處理:

(1)將經過初加工的人體或動物組織,用第一滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理30分鐘;所述第一滅活、脫脂液由2%的過氧乙酸、1的氯化鈉溶液、2%的表面活性劑及余量的水組成;用過氧乙酸和氯化鈉溶液進行滅活,同時加入表面活性劑進行脫脂,在病毒滅活的同時又達到脫脂的效果,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(2)將經上述步驟處理的人體或動物組織用第二滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理20分鐘;所述第二滅活、脫脂液由4%的燒堿、1%的表面活性劑及余量的水組成;用2%的燒堿進行病毒滅活,同時加入0.5%%的表面活性劑進行脫脂,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(3)將經上述步驟處理的人體或動物組織用滅活、脫細胞液進行病毒滅活和脫細胞處理30分鐘;所述滅活、脫細胞液由2%的過氧乙酸、1%的氯化鈉溶液、0.5%的表面活性劑、0.2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成,并用0.1%%的純堿調pH值為5,處理溫度為30℃℃;在病毒滅活的同時,進行脫脂和脫細胞,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(4)循環操作:將上述步驟(1)、(2)、(3)循環操作1~2次;循環操作具有病毒滅活徹底,脫脂、脫細胞時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。一般情況下,在24小時內完成組織脫細胞過程。

(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中,用PE或PVC材質的密封袋保存,根據需要保存1~12個月;所述保存液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉及余量的水組成,并用0.1%-4%的純堿調pH值為5~7;保存液的配方合理,保存工藝有利于進行大規模生產,降低原料采購成本和生產成本。

(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產品低溫冷凍干燥,成型包裝、再經γ射線輻照或環氧乙烷消毒滅菌,即為成品。

第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。

滅活、脫細胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

實施例2:

一種制備人體或動物脫細胞組織的方法,包括下列步驟:

(一)組織初加工:將人體或動物的組織(皮膚組織)用機械方法去除表面脂肪,按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀;

(二)病毒滅活、脫脂、脫細胞:

依次經下列步驟處理:

(1)將經過初加工的人體或動物的皮膚組織,用第一滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理10分鐘;所述第一滅活、脫脂液由0.1%的過氧乙酸、3%的氯化鈉溶液、1%的表面活性劑及余量的水組成;用過氧乙酸和氯化鈉溶液進行滅活,同時加入表面活性劑進行脫脂,在病毒滅活的同時又達到脫脂的效果,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(2)將經上述步驟處理的人體或動物的皮膚組織用第二滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理30分鐘;所述第二滅活、脫脂液由1%%的燒堿、2%的表面活性劑及余量的水組成;用4%的燒堿進行病毒滅活,同時加入1%的表面活性劑進行脫脂,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(3)將經上述步驟處理的人體或動物的皮膚組織用滅活、脫細胞液進行病毒滅活和脫細胞處理20分鐘;所述滅活、脫細胞液由1%的過氧乙酸、3%的氯化鈉溶液、2%的表面活性劑、1%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成,并用0.1%的純堿調pH值為67,處理溫度為35℃;在病毒滅活的同時,進行脫脂和脫細胞,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(4)循環操作:將上述步驟(1)、(2)、(3)循環操作2~3次;循環操作具有病毒滅活徹底,脫脂、脫細胞時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。一般情況下,在24小時內完成組織脫細胞過程。

(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中,用PE或PVC材質的密封袋保存,根據需要保存1~12個月;所述保存液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉及余量的水組成,并用0.1%-4%的純堿調pH值為5~7;保存液的配方合理,保存工藝有利于進行大規模生產,降低原料采購成本和生產成本。

(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產品低溫冷凍干燥,成型包裝、再經γ射線輻照或環氧乙烷消毒滅菌,即為成品。

第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。

滅活、脫細胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

實施例3:

一種制備人體或動物脫細胞組織的方法,包括下列步驟:

(一)組織初加工:將人體或動物的組織(本實施例為血管、神經、心臟瓣膜、骨、軟骨或肌腱組織)用機械方法去除表面脂肪,按臨床用途制備成臨床所需的各種形狀;

(二)病毒滅活、脫脂、脫細胞:

依次經下列步驟處理:

(1)將經過初加工的人體或動物組織,用第一滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理20分鐘;所述第一滅活、脫脂液由1%的過氧乙酸、5%的氯化鈉溶液、0.5%的表面活性劑及余量的水組成;用過氧乙酸和氯化鈉溶液進行滅活,同時加入表面活性劑進行脫脂,在病毒滅活的同時又達到脫脂的效果,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(2)將經上述步驟處理的人體或動物組織用第二滅活、脫脂液進行病毒滅活和脫脂處理10分鐘;所述第二滅活、脫脂液由2%的燒堿、0.5%%的表面活性劑及余量的水組成;用1%%的燒堿進行病毒滅活,同時加入2%的表面活性劑進行脫脂,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(3)將經上述步驟處理的人體或動物組織用滅活、脫細胞液進行病毒滅活和脫細胞處理10分鐘;所述滅活、脫細胞液由2%的過氧乙酸、1%的氯化鈉溶液、0.5%的表面活性劑、2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水組成,并用4%的純堿調pH值為7,處理溫度為40℃;在病毒滅活的同時,進行脫脂和脫細胞,具有脫脂時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。

(4)循環操作:將上述步驟(1)、(2)、(3)循環操作3~7次;循環操作具有病毒滅活徹底,脫脂、脫細胞時間短、效率高、對組織結構的保護作用強的特點。一般情況下,在24小時內完成組織脫細胞過程。

(5)組織保存:將制備好的組織浸泡于保存液中,用PE或PVC材質的密封袋保存,根據需要保存1~12個月;所述保存液由0.1%~2%的過氧乙酸、1%~5%的氯化鈉及余量的水組成,并用0.1%-4%的純堿調pH值為5~7;保存液的配方合理,保存工藝有利于進行大規模生產,降低原料采購成本和生產成本。

(6)凍干、包裝、輻照消毒:將產品低溫冷凍干燥,成型包裝、再經γ射線輻照或環氧乙烷消毒滅菌,即為成品。

第一滅活、脫脂液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

第二滅活、脫脂液中的表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。

滅活、脫細胞液中的表面活性劑為十二烷基磺酸鈉或曲拉酮。

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