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脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用.pdf

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脆弱 桿菌 制備 促進 乳酸 生長 組合 中的 應用
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摘要
申請專利號:

CN201310085702.X

申請日:

20130318

公開號:

CN103156887A

公開日:

20130619

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K35/74,A23C9/152,A23C9/127,A23C19/00,A23G9/36,A23L1/105,A23L1/30,A23K1/00,A61P1/00 主分類號: A61K35/74,A23C9/152,A23C9/127,A23C19/00,A23G9/36,A23L1/105,A23L1/30,A23K1/00,A61P1/00
申請人: 廣州知光生物科技有限公司
發明人: 智發朝,白楊,劉洋洋
地址: 510515 廣東省廣州市白云區云景路云嘉街3號301房
優先權: CN201310085702A
專利代理機構: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 代理人: 劉媖
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310085702.X

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及脆弱擬桿菌的應用技術領域,具體涉及脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用,本發明發掘了脆弱擬桿菌新的用途,開拓了一個新的應用領域。本發明通過實驗證明,脆弱擬桿菌安全無毒,對于促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長具有很好的效果,從而預示了脆弱擬桿菌具有很好的食用和藥用前景。脆弱擬桿菌作為一種益生菌,可用于制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的食品或藥物組合物,為臨床提供一種適合人體服食的保健和預防良品。

權利要求書

1.?脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用。2.?根據權利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用,其特征在于:所述組合物為至少含有能促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的脆弱擬桿菌的食品或藥物組合物。3.?根據權利要求2所述的脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用,其特征在于:所述組合物選自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基發酵食品、發酵谷類食品、嬰兒食品或寵物食品中的任意一種。4.?根據權利要求2所述的脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用,其特征在于:所述組合物為丸劑、片劑、顆粒制劑、膠囊、口服液或者管飼制劑。5.?根據權利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用,其特征在于:所述組合物為含有所述脆弱擬桿菌的液體細菌懸浮液。6.?根據權利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用,其特征在于:所述脆弱擬桿菌在所述組合物中的含量為10~10cfu?/ml。

說明書

技術領域

????本發明涉及脆弱擬桿菌的應用技術領域,具體涉及脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用。?

背景技術

益生菌是一類對宿主有益的活性微生物,是定植于人體腸道、生殖系統內,能產生確切健康功效從而改善宿主微生態平衡、發揮有益作用的活性有益微生物的總稱,其具有緩解乳糖不耐癥、調整腸道微生態、增強自身免疫力等多種功效,目前越來越多的研究人員聚焦于益生菌,逐漸意識到它們的巨大功效。?

在益生菌中,受到廣泛關注的雙歧桿菌和乳酸菌,在攝入人和動物體內后,它們的特定菌株能夠在腸粘膜上定居,在腸道內建群并且防止有害微生物在其上粘附,能通過保持腸內自然微生物區系,促進生物個體健康的可生長的微生物制劑,幫助維持人和動物的健康。?

脆弱擬桿菌(Bacteroides?fragilis)作為一種革蘭氏染色陰性、桿狀、兩端鈍圓而濃染,有莢膜、無芽胞、無動力的專性厭氧細菌,其分為產腸毒素型和非產腸毒素型。脆弱擬桿菌作為人及動物腸道正常菌群的一部分,主要存于結腸中,此外,呼吸道、胃腸道及泌尿生殖道粘膜也可定植生長。目前,研究較多的是脆弱擬桿菌作為一種條件致病菌,當宿主粘膜受損時,可侵犯粘膜下層,引起感染,也可經血液流動,引起身體其它器官如腸道、腹腔、肝、肺、腦組織化膿性感染并伴發膿腫和引起急慢性腹瀉等癥狀;此外,脆弱擬桿菌對結腸、直腸癌的發生也有促進作用。?

然而,脆弱擬桿菌并非只是一種條件致病菌。1991年,張季階發表了《一種無毒脆弱擬桿菌的分離鑒定》,其報導了關于1983年9月從一個發育良好的嬰兒糞便中分離出量大而又較純的細菌,經過一系列的鑒定、基礎試驗和臨床應用觀察,該細菌屬于脆弱擬桿菌群中的一株無毒菌,是人體的益生菌,并定名為BF839菌株。由此,研究發現了,脆弱擬桿菌也是一種益生菌。但是,脆弱擬桿菌作為一種益生菌,并且在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物的相關應用,目前尚未有報道。?

發明內容

本發明的目的在于提供脆弱擬桿菌在促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用。?

為了解決上述問題,本發明所采用的技術方案是:?

提供脆弱擬桿菌在制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的組合物中的應用,所述的脆弱擬桿菌保藏單位名稱為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號,保藏日期為2013年3月12日,保藏編號為CGMCC?NO.7280,分類命名為Bacteroides?fragilis。

其中,所述組合物為至少含有能促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的脆弱擬桿菌的食品或藥物組合物。?

其中,所述組合物選自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基發酵食品、發酵谷類食品、嬰兒食品或寵物食品中的任意一種。?

其中,所述組合物為丸劑、片劑、顆粒制劑、膠囊、口服液或者管飼制劑。?

其中,所述組合物為含有所述脆弱擬桿菌的液體細菌懸浮液。?

其中,所述脆弱擬桿菌在所述組合物中的含量為108~1010cfu?/ml。?

本發明的有益效果是:

本發明發掘了脆弱擬桿菌新的用途,開拓了一個新的應用領域。本發明通過實驗證明,脆弱擬桿菌安全無毒,對于促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長具有很好的效果,從而預示了脆弱擬桿菌具有很好的食用和藥用前景。脆弱擬桿菌作為一種益生菌,可用于制備促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的食品或藥物組合物,進而為臨床提供一種適合人體服食的保健和預防良品。

具體實施方式

下面通過實施例對本發明做進一步詳細說明,這些實施例僅用來說明本發明,并不限制本發明的范圍。?

實施例1?脆弱擬桿菌菌液的制備

????(1)由嬰兒糞便中分離脆弱擬桿菌

按“正常菌群檢查法”稱取0.5克大便,置于先裝有4.5ml生理鹽水的試管中,以此連續稀釋成10-1~10-6,由高稀積度向低稀積度滴到Bd培養基平板上,置于厭氧產氣盒中加厭氧產氣袋進行厭氧培養。置37℃,2~7天后開罐檢查。選取單一菌落進行純培養、染色鏡檢、培養特性、生理生化檢測。

(2)脆弱擬桿菌的增菌培養及菌液制備?

選取純化后的單個菌落接種于改良的胰蛋白胨肉湯中進行增菌培養,所得菌液離心沉淀,轉速3000r/min,離心15min,去上清,沉淀物用生理鹽水洗滌后,沉淀物用生理鹽水稀釋,用麥氏比濁管做菌數測定,稀釋至108?cfu?/ml,109?cfu?/ml,1010?cfu?/ml,保存備用。

實施例2?脆弱擬桿菌的毒力實驗

采用實施例1制備的脆弱擬桿菌菌液進行以下實驗:

(1)小鼠急性毒力實驗??

取體重22±2克C57BR/C小鼠(雌雄各半)60只,分成高劑量組、低劑量組和對照組,各組20只。高劑量組每只小鼠每天灌胃1012?cfu?/ml菌液0.5ml,低劑量組每天灌胃109?cfu?/ml菌液0.5ml,對照組每天灌胃0.5ml生理鹽水。連續觀察14天。

實驗結果:小鼠正常生長,未見死亡,LD50測不出。?

(2)大鼠毒力實驗?

取150±20克SD大鼠30只(雌雄各半),分為3組:高低劑量組和對照組。高劑量組每只大鼠每天灌胃1012cfu/ml菌液2ml,低劑量組每天灌胃109cfu/ml菌液2ml,對照組每天灌胃2ml生理鹽水。連續觀察14天,14天后抽靜脈血測血象、肝腎功。取胃腸肝脾組織做病理切片電鏡觀察。

實驗結果:均未見明顯異常。?

(3)恒河猴毒力實驗?

取恒河猴10只(雌雄各半),分為2組:高低劑量組和對照組。高劑量組每只恒河猴每天口服1012cfu/ml菌液100ml,低劑量組每天口服109cfu/ml菌液100ml。連續觀察60天。14天、30天、45天、60天后分別抽靜脈血測血象、肝腎功,測心電圖。取胃腸肝脾組織做病理切片電鏡觀察。

實驗結果:均未見明顯異常。?

實施例3?脆弱擬桿菌促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的實驗

采用實施例1制備的脆弱擬桿菌菌液進行以下分組實驗:

A組:106cfu/ml的脆弱擬桿菌菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上,用涂布棒涂布均勻;

B組:106cfu/ml的雙歧桿菌菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上,用涂布棒涂布均勻;

C組:106cfu/ml的乳酸桿菌菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上,用涂布棒涂布均勻;

D組:106cfu/ml的雙歧桿菌菌液100μL+106cfu/ml的脆弱擬桿菌菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上,用涂布棒涂布均勻;

E組:106cfu/ml的乳酸桿菌菌液100μL+106cfu/ml的脆弱擬桿菌菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上,用涂布棒涂布均勻;

將所有平板放入厭氧培養罐,厭氧培養48小時開罐做菌落計數。

實驗結果:D組中的雙歧桿菌明顯多于B組,E組中的乳酸桿菌明顯多于C組,A、D、E組中的脆弱擬桿菌無明顯差異。?

實驗結果證明,脆弱擬桿菌能夠促進雙歧桿菌以及乳酸桿菌的生長。?

實施例4?脆弱擬桿菌促進雙歧桿菌及乳酸桿菌生長的實驗

采用實施例1制備的脆弱擬桿菌菌液進行以下實驗:

(1)造模前動物禁食給水,隨后用氨芐青霉素鈉?(加生理氯化鈉溶液配制)0.2g,灌胃,每只0.5ml,Bid,引起小鼠腹瀉,排水樣或糊狀便。

給藥組:將腹瀉小鼠分別用108?cfu?/ml、109?cfu?/ml、1010?cfu?/ml的菌液灌胃,每次0.5ml,Bid;?

空白對照組:給等體積的生理鹽水灌胃,Bid;

每組各20只小鼠;

(2)造模前取10只小鼠的新鮮大便作糞便菌群分析,治療后第5天,各組活殺10只小鼠,取盲腸內容物作菌群分析,結果見表1:

表1.?腸道菌群分析?Lg?g-1,?n=10

*和空白對照組相比P<0.05。

實驗結果說明,雙歧桿菌、乳酸桿菌在脆弱擬桿菌的作用下數量顯著增加,脆弱擬桿菌能夠促進雙歧桿菌及乳酸桿菌的生長。?

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